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森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的构建及差异基因的分析
目的 构建森林革蜱(Dermacentor silvarum)半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,分析差异基因.方法 以森林革蜱半饱血雄蜱为实验组(tester),未吸血雄蜱为对照组(driver),分别提取总RNA,SMARTER PCR合成双链cDNA,RsaⅠ酶切后连接接头并进行抑制消减杂交.巢式PCR扩增杂交产物,经柱纯化后连接至PMD-18T中,转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,进行蓝白斑筛选,并计算文库滴度和重组率.随机挑选阳性克隆,反向Northern 杂交(Northern blotting)和RT-PCR法检测抑制消减杂交cDNA文库的消减效率.随机选取差异基因阳性克隆送测序,利用Blastn和Blastx对测序结果进行核酸种类同源性分析和蛋白种类同源性的比对和功能预测.结果 电泳结果显示,森林革蜱半饱血雄蜱和未吸血雄蜱的ds cDNA均呈弥散拖影,大小在500 bp以上,经RsaⅠ酶切后,大小在100～1000 bp;接头连接效率大于25％.巢式PCR结果显示,消减的ds cDNA呈聚集条带,大小在250～500 bp.构建的森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库的滴度为700 000 pfu/ml,重组率为88.5％ (239/270).反向Northern blotting检测结果显示,当以森林革蜱半饱血雄蜱单链cDNA为探针时,消减文库信号较强;以未吸血雄蜱单链cDNA为探针时,消减文库信号较弱.RT-PCR结果显示,随机选取的8个阳性克隆中,有5个在半饱血状态下表达上扬,抑制消减杂交cDNA文库消减效果较好.115个阳性克隆测序得到87个差异表达序列标签(ESTs),大小为200～800 bp.Blastn分析结果显示,87个序列中,与其他蜱基因有同源性的53个,同源性为70％～98％,与库蚊、甲虫和果蝇等其他昆虫基因有同源性的34个,同源性为32％～65％.Blastx预测结果显示,序列中片段表达的蛋白包括参与吸血和血液消化的不同酶类,主要功能为能量代谢、信号传导和转录调节等. 结论 建立了森林革蜱半饱血雄蜱抑制消减杂交cDNA文库,差异基因的功能预测与蜱的吸血和血液消化等有关.
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甲状腺乳头状癌差异基因筛选的初步研究
目的:初步探讨甲状腺乳头状癌病人肿瘤组织和甲状腺正常组织间,及淋巴结转移组和未转移组间的基因差异表达.方法:收集12例甲状腺乳头状癌病人的肿瘤组织及对侧甲状腺正常组织,根据肿瘤和正常组织,淋巴结是否转移进行分组,抽提总RNA,质检合格后利用基因芯片技术初步分析各组间的差异基因表达.结果:通过DiffGene算法筛选出肿瘤组和对照组,淋巴结转移组和未转移组间表达有显著差异的基因.肿瘤组和对照组间显著差异表达基因2 028条,上调1 022条,下调1006条.结论:差异基因的筛选为进一步研究甲状腺乳头状癌发生发展的分子机制提供了研究方向和实验基础.
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前列腺癌差异表达基因的筛选及相互作用的生物信息学分析
背景与目的:基因芯片技术是利用杂交测序方法,可大规模高通量地检测不同组织、细胞中的基因表达水平的技术.该研究采用基因芯片技术筛选前列腺癌及前列腺炎症穿刺组织中差异表达的基因并对其进行生物学信息分析.方法:采用美国Affymetrix Human U133 plus 2.0基因表达谱芯片,按一步法分别抽提恶性程度较高的前列腺癌及前列腺炎症组织的总RNA,并分离纯化这两种组织的mRNA.经逆转录合成掺入生物素标记的cDNA合成探针,与芯片杂交和严格洗片后,用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像.用生物信息学方法分析前列腺癌及前列腺炎症组织中差异表达基因.结果:按照表达差异倍数大于等于2,P<0.05的筛选条件,筛选出差异基因1819条,其中上调表达基因1025条和下调表达基因794条.采用GO富集分析发现这些差异基因主要涉及细胞周期、分子代谢等分子功能以及生物学过程;KEGG信号通路分析发现,这些差异基因主要涉及嘌呤核苷酸代谢等代谢通路.STING在线工具分析对差异基因编码的蛋白质间的相互作用进行分析,结果发现这些基因编码的蛋白间的相互作用主要集中在TPX2、ANLN、NUSAP1、MELK、DLGAP5、KIF11、TOP2A及RRM2等20个关键节点基因.后对重要节点基因进行文献挖掘,发现CEP55和ANLN基因可能与前列腺癌的发生和转移有关.结论:在前列腺癌的发生、发展中,促使细胞进入增殖周期的相关基因的活化、代谢相关酶类基因活性的异常、细胞黏附功能相关基因的抑制以及细胞移行相关基因的激活等因素发挥了重要的作用.系统的分析这些基因发现,CEP55和ANLN基因与前列腺癌的发生和预后关系密切,为下一步研究实验提供有价值的线索.进一步研究相关差异基因将有望发现新的早期诊断指标,为建立个体化治疗方案和预后评估系统提供帮助.
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肺腺癌相关基因的生物信息学分析
目的:通过生物信息学分析基因表达谱,获取肺腺癌相关基因及信号通路.方法:从GEO数据库下载GSE40791、GSE68571、GSE43458和GSE18842表达数据,将4个微阵列数据集整合获得肺腺癌相关差异表达基因,利用STRING数据库为差异表达基因构建肺腺癌蛋白-蛋白互相作用网络,并挖掘肺腺癌网络中基因模块及关键基因.通过DAVID对各基因模块进行基因富集分析,发掘基因模块在肺腺癌细胞中所执行的调控功能及模块中关键基因与患者的预后关系.结果:初步筛查获得肺腺癌相关37个上调基因、120个下调基因,并成功构建蛋白-蛋白相互作用网络,通过MCODE算法在蛋白-蛋白相互作用网络中构建基因模块以及计算关键基因(KIF14,SEPP1,SPP1,RBP4),终获得的4个模块分别参与细胞周期、血凝变化、细胞黏附和细胞代谢的调控.经验证4个关键基因在肺腺癌和正常组织中有明显表达差异(P＜0.05).生存分析显示KIF14的表达对肺腺癌的预后有显著影响(P＜0.01),SEPP1、SPP1对患者生存率有显著影响(P＜0.05),RBP4对患者的生存率影响无统计学意义(P＞0.05).结论:通过生物信息方法分析肺腺癌和癌旁正常组织的差异基因表达,终筛选出3个差异表达非常显著且对患者预后影响明显的基因,对肺腺癌的诊断和预后治疗提供了新思路,提高肺腺癌机制的研究效率.
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胶质细胞源性神经营养因子对胶质瘤促增殖作用的基因表达谱研究
目的 研究胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)促进胶质瘤增殖的差异表达基因.方法 体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞分为3组,正常对照组(对照组)和实验组(GDNF 70μg·L-1干预6 h组和GDNF 70μg·L-1干预12 h组).利用全基因组表达谱芯片技术进行分析,实时定量PCR验证芯片结果,并对差异基因进行聚类分析和信号转导通路分析等.结果 与对照组比较,GDNF干预6 h组和GDNF干预12 h组分别上调772和664个基因,下调282和259个基因.其中,显著的上调基因为NTN1、SLC7A5、NDST1、CD24、NFIC、KDM4A、CEACAM1、SOCS2.下调基因主要有Sctr、C4-2、GNAL、HSD3B1、Stfa2l1等.基于KEGG数据库进行生物学通路分析显示上调基因主要参与葡糖胺聚糖半乳糖基转移酶-硫酸盐肝素的生物合成、细胞的黏附连接、癌症的转录失活、JAK-STAT信号通路等.选取8个差异基因(CD24,CEACAM1、Synpo、Ndst1、Nfic、Ntn1、Socs2、Ccdc6)进行RT-PCR验证,GDNF干预12 h组与对照组比较,CEACAM1、Nfic、Socs2、Ccdc6基因表达倍数显著增加(P<0.05).提示差异基因的mRNA变化趋势与表达谱结果一致.结论 应用全基因组表达谱芯片并结合生物信息学软件分析差异表达基因,为GDNF促进胶质瘤细胞增殖的分子生物学机制的研究提供了依据.
关键词： 胶质细胞源性神经营养因子 大鼠C6胶质瘤细胞 全基因表达谱 细胞增殖 差异基因 -
抑制性消减杂交技术及其在细菌研究中的应用
近年来,随着PCR技术的出现.涌现了许多基于PCR的分离有差别表达基因的新方法.较常用的有:差异显示PCR(differential display PCR,DDRT-PCR),代表性差异分析PCR(representational difference analysis PCR,RDA-PCR),抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH),互补脱氧核酸扩增片段长度多态性技术(DNA amplified fragmentlength polymorphism,cDNA-AFLP),限制性酶切片段差异显示(restriction fragment differential display PCR,RFDD-PCR).
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胎儿宫内发育迟缓孕妇胎盘组织中差异表达基因及相关信号通路分析
目的 筛选胎儿宫内发育迟缓(IUGR)孕妇胎盘中异常表达的基因和可能参与该疾病的信号通路.方法 从GEO数据库中下载GSE35574芯片数据,包含35例IUGR孕妇胎盘和40例正常孕妇胎盘组织样本的表达谱数据.选取两组间P值＜0.05的差异基因,进行GO功能注释和信号通路分析,揭示IUGR相关的信号通路.结果 芯片数据分析显示,在IUGR的胎盘中,差异倍数1.2以上(P＜0.05)的基因有108条;其中,表达上调的基因61条,表达下调的基因47条.对IUGR胎盘组织中差异基因进行基因功能注释.GO功能注释分析结果显示,上调基因相关的基因功能注释有232条,下调基因相关的基因功能注释有151条.信号通路分析结果显示,上调基因相关的有显著差异的信号通路有43条,下调基因相关的有显著差异的信号通路有34条.GO功能注释和信号通路分析的结果共同表明IUGR有可能与代谢、免疫事件有关.结论 本研究比较系统地揭示了IUGR胎盘中差异基因的表达谱特征和所涉及的重要信号通路.代谢、免疫事件相关的差异基因可能与IUGR有关.
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利用基因芯片筛查主动脉夹层外周血白细胞差异基因
目的 主动脉夹层(aortic dissection,AD)发病后血液内环境发生的病理改变会造成全身性损伤,外周血白细胞基因表达谱的改变是病理改变的基础.文中筛选AD外周血白细胞差异表达基因.方法 提取AD和主动脉瘤患者外周血白细胞总RNA,以RNA为模板逆转录获取cDNA,用生物素标记cRNA,纯化后用Agilent基因芯片扫描分析基因表达谱的变化,获得差异表达基因.结果 筛选出515个差异表达基因,其中上调基因238个,下调基因277个,功能未知者占40%.功能已知者主要涉及炎症反应、免疫反应、细胞骨架和胶原调节、氧化应激、代谢、凝血、细胞凋亡等相关基因.结论 AD发生伴有白细胞差异基因表达,应用基因芯片筛查差异基因,对阐明AD发病过程中病理生理机制和寻找标志基因有重要意义.
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基于GEO数据库的HPV阳性口咽癌特征基因生物信息学研究
目的 通过分析HPV阳性与阴性口咽癌患者基因芯片数据,寻找差异基因及其关键通路,区分不同HPV感染状态下口咽癌的分子表达特征基因谱.方法 利用GEO数据库中高通量基因芯片数据库筛选出口咽癌患者具有HPV感染状态信息的芯片.采用GO基因功能注释和KEGG通路富集分析,筛选出可表征不同HPV感染状态口咽癌生物特性的特征基因簇和通路,并进行蛋白质相互作用网络可视化分析.结果 经差异基因分析后,发现HPV感染状态可影响口咽癌的生物学特征,并显著改变一些重要的肿瘤信号通路,如Wnt信号通路和PI3K-Akt信号通路等.结论 本研究利用生物信息学方法,从多种角度定义了口咽癌不同HPV感染状态下的分子表达特征,为口咽癌的精准治疗提供理论依据.
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基于生物信息学的未分化甲状腺癌恶性机制研究
目的 阐明未分化甲状腺癌(anaplastic thyroid carcinoma,ATC)与分化型甲状腺癌的分子通路差异,揭示ATC的恶性机制.方法 利用GEO数据库联合R语言分析ATC与乳头状甲状腺癌(papillary thyroid cancer,PTC)肿瘤组织的基因表达差异,以及ATC、PTC与正常甲状腺组织的共有差异基因;基于STRING数据库及Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,分析其关键网络节点和基因簇,并利用KEGG、DAVID数据库及ClueGO插件进行基因功能富集及注释.后,利用RT-PCR检测关键节点在不同甲状腺癌细胞株中的表达差异.结果 和正常甲状腺组织相比,ATC和PTC存在775个共同差异基因,通路富集于PI3K-Akt信号通路、p53通路、肿瘤通路、细胞周期等与调控肿瘤发生发展相关的经典通路,以及炎症反应、胞外基质重塑、免疫反应、血管新生等肿瘤微环境相关通路改变.进一步筛选ATC和PTC差异基因发现,与PTC相比,ATC组织中p53通路、PI3K-Akt信号通路、胞外基质-受体相互作用、细胞周期、蛋白消化及吸收、吞噬体、补体途径等肿瘤关键通路显著激活.研究通过构建PPI网络并分析出3个关键基因簇,其功能主要与细胞周期、双链修复、细胞趋化、蛋白泛素化等重要生物进程相关.其中,TOP2A、IL8、UBE2S是各基因簇的关键节点,并与甲状腺恶性演进潜在相关.结论 研究利用生物信息学发现ATC发生发展的潜在分子机制网络,并揭示该网络中的关键基因簇及节点,为ATC的恶性机制及潜在治疗靶点提供理论依据.
关键词： 未分化甲状腺癌 生物信息学 信号通路 蛋白-蛋白相互作用网络 差异基因 -
参麦注射液对小鼠结肠腺癌26恶病质相关基因表达谱影响的实验研究
[目的]寻找参麦注射液抗癌症恶病质的表达差异基因.[方法]建立结肠腺癌26荷瘤鼠癌症恶病质模型,随机分为两组后分别予等剂量的生理盐水、参麦注射液治疗.观察饮食量、体重、瘤体积变化等.第16d处死小鼠后取瘤.分别抽取各组瘤组织总RNA,应用Illiumina全基因组表达谱芯片(Mouse-6 BeadChip),对差异表达基因进行分析探讨.[结果]参麦组恶病质小鼠去瘤体重明显重于空白对照组(P<0.01);饮食量下降速度明显低于空白对照组(P<0.01);与空白对照组对比,筛选得到参麦组差异表达基因共68条,其中56条呈上调趋势,12条下调,这些基因多数是小鼠肌cDNA文库中的基因,部分与代谢、免疫功能相关基因相关.[结论]参麦注射液有一定改善癌症恶病质的作用.其干预作用可能主要是通过调控小鼠肌肉组织以及与代谢、免疫功能等相关基因表达来实现的.
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综合基因表达谱分析与人类肝胰岛素抵抗相关蛋白分子表达研究
目的 分析糖尿病患者与正常人肝组织之间的差异表达基因(DEGs),筛选出肝组织中与可能产生胰岛素抵抗相关作用的蛋白分子.方法 从GEO数据库下载基因芯片数据集GSE23343(包括10例2型糖尿病和7例正常人肝组织的基因表达值),通过DEGs表达谱分析和功能通路富集分析,构建DEGs对应的蛋白质-蛋白质相互作用网络.结果 分析得到928个显著上调的DEGs(P<0.01),发现DEGs主要富集在细胞和代谢生物过程中,KEGG通路富集显示DEGs主要集中于信号转导和肿瘤相关通路.经蛋白质相互作用网络构建,筛选出5个关键蛋白分子MDM2、PCNA、CAV1、PIK3R1、NR3C1.结论 系统地筛选出人类肝组织中可能与胰岛素抵抗形成相关的蛋白分子,为进一步实验研究肝胰岛素抵抗产生机制和新的降血糖药物作用靶点提供基础.
关键词： 非酒精性脂肪性肝病 胰岛素抵抗 差异基因 蛋白质-蛋白质相互作用网路 -
基于GEO数据库的近端与远端结肠癌特征基因生物信息学研究
目的:通过分析近端与远端结直肠癌的差异基因集和其集中的关键通路,区分不同部位结肠癌的分子表达特征基因谱.方法:利用GEO数据库中高通量基因芯片数据筛选出具有结肠癌患者肿瘤部位近远端信息的芯片.采用GO基因功能注释和KEGG通路富集分析,筛选出可表征远端与近端结肠癌生物特性的特征基因簇和通路,并进行蛋白质相互作用网络可视化分析.结果:经差异基因分析后,发现不同部位结肠癌基因表达具有显著差异,且主要存在于一些重要的肿瘤相关信号通路,如Wnt信号通路,细胞外基质相关通路和免疫调控通路等.结论:本文利用生物信息学方法,从多种角度定义了近端和远端结肠癌的差异分子表达特征,为结肠癌的精准治疗提供理论依据.
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不同发育阶段胎儿表皮干细胞差异表达基因的研究
目的 采用基因芯片技术筛选早期胎儿与晚期胎儿表皮干细胞差异表达基因,分析不同发育阶段胎儿表皮干细胞基因表达变化特征及其可能的生物学意义,为进一步寻找表皮干细胞特异性发育调控基因提供新线索.方法 收集胎龄8～12周人胎儿正常皮肤(早期胎儿组)及28～32周人胎儿正常皮肤(晚期胎儿组),采用胰蛋白酶和EDTA联合消化法分离表皮,Ⅳ型胶原快速黏附法分离、纯化人表皮干细胞,分别提取各组细胞总RNA,用基因芯片技术检测2组胎儿表皮干细胞基因表达并筛选差异表达基因.结果 基因芯片高通量地揭示了早期胎儿组与晚期胎儿组表皮干细胞的遗传信息.晚期胎儿组与早期胎儿组相比,DNA复制均与表皮干细胞的发育进程密切相关.差异表达基因有805个,其中表达下调的基因有389个,主要是GTP结合蛋白基因、序列特异性DNA结合蛋白基因、MAKP活性蛋白基因等与细胞增殖分化相关基因；表达上调的基因有416个,主要是与细胞成熟相关的细胞骨架结构蛋白基因等.结论 体外培养的早期胎儿与晚期胎儿表皮干细胞基因表达谱有明显的不同,其差异可能与不同发育阶段人表皮干细胞的增殖分化能力及皮肤创伤修复能力不同密切相关.
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基因芯片在筛查儿童过敏性紫癜差异基因中的研究
目的：应用基因表达谱芯片技术筛选过敏性紫癜患儿疾病发生及肾损伤相关基因，以期从分子水平探讨儿童过敏性紫癜发生发展及肾损伤发生机制。方法选取2010年1月至2010年12月在江西省儿童医院住院的无血缘关系的中国汉族过敏性紫癜患儿6例，根据有无肾脏损害分为单纯过敏性紫癜组3例(HSP组)和紫癜性肾炎组3例(HSPN组)，另外选取同期在本院门诊体检且与HSP组和HSPN组性别、年龄相匹配的无血缘关系的中国汉族健康儿童3例作为对照组，分别检测各组患儿外周血基因表达谱情况，用相关生物信息学分析方法对不同实验组间基因表达谱进行差异分析。结果⑴单纯过敏性紫癜组与对照组间共有1064条差异表达基因，其中上调基因661条，下调基因403条，2倍以上差异基因225条，3倍以上6条；⑵紫癜性肾炎组与对照组间共有1326条差异表达基因，其中上调基因397条，下调基因929条，其中2倍以上差异基因619条，3倍以上103条；3、紫癜性肾炎组与单纯过敏性紫癜组间共有830条差异表达基因，其中上调基因445条，下调基因385条，2倍以上差异基因283条，3倍以上51条。4、2倍以上差异表达基因经GO分析，发现主要涉及炎症/免疫、细胞结构/功能、物质/能量代谢、信号转导/传递、转录/翻译等生物学过程。结论基因芯片能筛查出过敏性紫癜差异表达基因，为深入研究这些差异表达基因在过敏性紫癜中的作用提供了基础研究。
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淋病奈瑟菌耐药性的分子基础初探
目的:研究染色体介导淋病奈瑟菌耐药的机制.方法:应用抑制性消减杂交技术构建和筛选耐药淋病奈瑟菌差异DNA消减文库.结果:从削减文库中随机挑取的96个克隆,发现其中有47个克隆仪能与tester DNA探针杂交,而不能与driver DNA探针杂交.结论:这些克隆中载有特异基因片段,它们为RSM292C4基因组DNA所特有,可能代表某些淋病奈瑟菌新基因.
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基因芯片技术分析胎盘血管病变中差异基因的表达
目的 利用基因芯片技术分析胎盘血管病变差异基因的表达,为深入探讨胎盘血管病变的发生机制提供新的线索.方法 应用22K人类基因组寡核苷酸芯片,筛选了胎盘血管病变患者(实验组)和正常妊娠者(对照组)胎盘组织中的差异表达基因,应用定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白印记分析(Western-blot)验证部分差异基因的表达.结果 实验组与对照组比较,存在10个表达水平显著改变的基因,其中9个在胎盘血管病变中上调,1个下调.经验证部分差异基因的表达与芯片结果一致.结论 胎盘血管病变是一种具有血管壁内皮细胞激活和免疫应答的炎性疾病.这些差异表达基因可能通过多种信号转导途径参与了内皮激活与炎症应答,并导致了胎盘血管病变的发生和发展.
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PDCD4转染卵巢癌细胞系基因表达谱的变化
目的 探讨卵巢癌细胞系SKOV3稳定表达程序性细胞死亡4(PDCD4)基因后基因表达谱的变化.方法 将pDsRed2-N1-PDCD4真核表达载体和pDsRed2-N1空载体分别转染至SKOV3并获得稳定细胞系,应用基因芯片技术分析PDCD4基因转染后基因表达的变化,RT-PCR检测基因的表达以验证芯片结果.结果 PDCD4转染SKOV3后引起大量基因表达的变化,表达明显差异基因共有467个,其中上调255个,下调212个;RT-PCR验证选取的5个基因的表达差异和芯片显示的结果一致.结论 成功筛选出PDCD4基因转染卵巢癌细胞系SKOV3后的差异表达基因,为进一步研究PDCD4的抑癌作用机制提供了实验依据.
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超抗原SEB诱导大鼠高危角膜移植免疫耐受淋巴细胞差异表达基因的研究
目的 应用基因芯片研究高危角膜移植中产生免疫耐受和发生排斥反应的受体大鼠淋巴细胞的差异基因.方法 供体和受体分别为Fisher 344和Lewis大鼠.受体大鼠随机分为2组,治疗组术前腹腔注射0.2 ml SEB(75μg/kg),每次间隔4 d,共3次.对照组注射生理盐水.缝线法建立高危角膜移植动物模型.术后研究受体植片存活时间、免疫状态和淋巴细胞差异基因.结果 对照组植片平均存活时间为(7.30±0.67)d,治疗组为(12.50±1.41)d,(P＜0.05).治疗组淋巴细胞对ConA和供体淋巴细胞抗原的增生反应明显降低,DTH反应强度也明显降低.基因芯片显示两组淋巴细胞存在23个差异基因,与神经系统、肿瘤生长以及编码酶类有关.结论 SEB可诱导高危角膜移植免疫耐受,相关淋巴细胞差异基因的作用需进一步研究.
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重症肌无力患者胸腺组织抑制性消减cDNA文库的构建及分析
目的:构建重症肌无力(MG)患者胸腺组织抑制性消减cDNA文库,分析MG胸腺差异表达基因.方法:分别从6例正常和6例MG患者胸腺组织中分离出mRNA,逆转录合成cDNA,行抑制性消减杂交,将得到的差异表达基因进行T-A克隆,构建cDNA文库,并进行序列分析.应用实时荧光定量PCR检测20例MG患者、10例正常对照胸腺组织中GSTM3和KPNA5 mRNA的表达.结果:共获得125个阳性克隆;Blast同源性检索共得到27个差异表达基因;MG患者GSTM3、KPNA5基因表达量(0.671±0.097和0.712±0.080)高于正常对照胸腺(0.582±0.047和0.571±0.018),差异有统计学意义(tGSTM3=5.458,P<0.001;tKPNA5=2.755,P=0.010),与消减文库结果一致.结论:成功建立了MG胸腺组织抑制性消减cDNA文库.
