松萝酸脂质体的制备及质量评价

目的:制备松萝酸脂质体,并对其质量进行初步评价.方法:采用机械分散挤压法制备松萝酸脂质体.采用Sephadex G-25微型凝胶柱分离脂质体和游离药物,HPLC法测定脂质体中松萝酸的含量,测定松萝酸脂质体的包封率.结果:用蛋黄卵磷脂-胆固醇(70:30)为辅料制成了松萝酸脂质体,粒径为(130±20)nm,包封率达90%以上,稳定性好.结论:采用该方法可以制备质量稳定的脂质体,建立的包封率测定方法稳定可靠.

卡德沙星代谢物的合成、结构确证及其体外抗菌活性

目的:合成并确证卡德沙星两种代谢产物,初步研究其抗菌活性.方法:大鼠灌胃卡德沙星(9 mg/kg)后,通过LC-MS分析,在胆汁和尿液中发现有m/z 385.90的成分(M-1),在尿液中发现有m/z 329.1的成分(M-2).参考类似物的代谢方式,推测其结构分别为1-环丙基-6-氟-8-二氟甲氧基-1,4-二氢-7-(2-氨基-丙胺基)-4-氧代-3-喹啉羧酸和1-环丙基-6-氟-8-二氟甲氧基-1,4-二氢-7-氨基-4-氧代-3-喹啉羧酸.化学合成这两种物质,与卡德沙星的代谢产物进行对比,并研究体外抗菌活性.结果与结论:本文对卡德沙星代谢物的结构推断正确,它们的体外抗菌活性很弱.M-1和M-2均未见文献报道.

藤黄酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的基因表达谱的影响

目的:研究藤黄酸对人肝癌细胞株SMMC-7721基因表达图谱的影响.方法:使用cDNA基因芯片及RT-PCR的方法检测基因表达情况.结果:与对照组相比,给于藤黄酸24 h后,有31个基因改变,给予藤黄酸48 h后有56个基因改变.结论:藤黄酸的抗肿瘤作用机制可能与凋亡、转移以及影响细胞周期有关.

新型AT1受体拮抗剂Ⅰb对异丙肾上腺素诱发大鼠心肌肥厚的作用

目的:考察AT1受体拮抗剂Ⅰ b对异丙肾上腺素诱发大鼠心肌肥厚的作用.方法:异丙肾上腺素连续每日以20,10和5 mg/kg的剂量递减皮下注射,再以3mg/kg的剂量维持皮下注射7 d,第7天开始尾静脉注射化合物Ⅰ b.观察心脏重量系数、心肌组织丙二醛(MDA)含量、心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活力、血清乳酸脱氢酶(LDH)活力以及组织学变化.结果:3 mg/kg组可以逆转异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚,心脏重量系数明显改善,心肌组织MDA含量降低,SOD活力升高,血清LDH活力下降.电镜结果显示心肌组织线粒体和肌纤维结构改善.结论:化合物Ⅰb可抑制异丙肾上腺素引起的大鼠心肌肥厚,明显改善心肌肥厚的各种指征.

β-榄香烯单取代胺衍生物的合成及体外抗肿瘤活性

目的:设计合成β-榄香烯单取代胺类衍生物,并探讨该类衍生物的体外抗肿瘤活性.方法:通过亲核取代反应合成β-榄香烯单取代胺类衍生物,采用WST-1法对它们的体外抗肿瘤活性进行评价.结果:合成得到了8个目标化合物(均未见文献报道),并利用1H NMR,MS,IR对其结构进行了表征.细胞试验表明:β-榄香烯单取代胺类衍生物对人白血病细胞(K562细胞)及人宫颈癌细胞(HeLa细胞)的体外抗增殖活性与β-榄香烯相比有了明显提高.结论:β-榄香烯单取代胺衍生物的抗肿瘤活性较β-榄香烯明显提高.

重组人锰超氧化物歧化酶高密度发酵培养条件研究

目的:研究发酵罐中采用乳糖诱导高效表达重组人锰超氧化物歧化酶(rhMn-SOD)的务件.方法:通过摇瓶和发酵罐培养研究了培养基、乳糖浓度、诱导时机、表达时间、溶氧条件、补料碳源种类对rhMn-SOD表达的影响.结果:乳糖诱导浓度为0.25%,溶氧浓度为40%～60%,用葡萄糖作为补料碳源进行高密度发酵,菌体密度A600达到28.98,菌体湿重达到60 g/L,Mn-SOD活性达到18 222.22 U/g,比活为1 057.5 U/mg,实现了rhMn-SOD的高效表达.结论:对培养基配方和发酵条件进行了优化,为rhMn-SOD大规模生产奠定了基础.

曲尼司特对小鼠变应性接触性皮炎的体外研究

目的:研究曲尼司特对变应性接触性皮炎的抑制作用,并探讨其作用机制.方法:建立小鼠变应性接触性皮炎(allergic contact dermatitis,ACD)模型,体外法测定曲尼司特各剂量对小鼠脾细胞培养上清液中白介素-2(IL2)、干扰素-γ(IFN-γ)水平的影响.结果:曲尼司特给药浓度大于等于30 μg/ml各组可剂量依赖性抑制上清液中IL2、IFN-γ水平,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:曲尼司特可能通过抑制IL2、IEN-γ水平在变应性接触性皮炎治疗中发挥作用.

高效毛细管电泳法同时测定人血浆D,L-乳酸对映体

目的:用高效毛细管电泳法测定血浆中D,L-乳酸对映体.方法:以2-羟丙基-β-环糊精(2-HP-β-CD)作为手性选择剂,采用阳离子表面活性剂十四烷基三甲基溴化铵(TTAB)改变电渗流的方向,应用未涂层毛细管分离测定D,L-乳酸对映体.生物样品的处理为乙腈沉淀蛋白后干燥浓缩,超纯水25 μL溶解进样.结果:乳酸对映体约42 min分离结束,其分辨率≥1.25.不经过浓缩处理直接进样的D,L-乳酸标准溶液的检测限分别为80 μmol/L和50 μmol/L(S/N=3),在空白血浆中加入D,L-乳酸,经样品浓缩步骤处理,其检测限分别为20 μmol/L和15 μmol/L(S/N=3).D-乳酸标准工作液浓度范围为0.025～2.50 mmol/L,相关系数0.996 9;L-乳酸标准工作液浓度范围为0.025～5.0 mmol/L,相关系数0.995 2.D,L-乳酸峰面积及迁移时间的相对标准偏差(RSD)小于6.27%,样品回收率大于68.2%.结论:该法适合临床样品检测,结果令人满意.

柴胡提取物对慢性应激抑郁大鼠脂质过氧化及淋巴细胞增殖的影响

目的:研究柴胡(Bupleurum chinense DC.,BCDC)醇提液、正丁醇提取部位(DC-Bu)和水提取部位(DC-Aq)时抑郁模型大鼠脂质过氧化及免疫功能的影响.方法:将42只雄性SD大鼠随机分为7组,分别为正常组、模型组、DC-Bu高低剂量组(200、100 mg/kg)、DC-Aq高低剂量组(200、100 mg/kg)及氟西汀组(20 mg/kg).除正常组,均接受21 d慢性应激,造成大鼠抑郁模型,每次应激前1 h灌胃给药,正常组及模型组给予等量的含0.01%吐温80的蒸馏水.给药22 d后,测定大鼠血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.给予正常小鼠DC-Bu或DC-Aq,采用MTT法检测含药血清对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.结果:DC-Bu及DC-Aq各剂量组均可提高慢性应激抑郁大鼠血清GSH-Px、CAT、T-SOD活力,降低慢性应激抑郁大鼠血清MDA含量,含20%DC-Bu血清和含10%,20%DC-Aq血清对小鼠脾淋巴细胞有增殖作用.结论:DC-Bu和DC-Aq的抗抑郁作用可能与增强慢性应激抑郁大鼠的抗氧化功能有关;其含药血清具有增强免疫功能的作用.

尖吻蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化及氨基酸序列测定

目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析.方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex 75 PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶.结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25 kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYMEIVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW.结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础.

灯盏花素冰片注射液对实验性脑缺血的保护作用

目的:研究灯盏花素冰片注射液(SBI)对大鼠局灶性脑缺血和小鼠缺血缺氧性损伤的保护作用.方法:采用大鼠急性不完全性脑缺血实验,以大脑皮层含水量为指标初步筛选组方剂量.采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型(MCAO)对模型大鼠进行神经症状和行为学评分,测定大脑皮层含水量,计算脑梗死区百分比,组织病理切片观察海马损伤程度,并测定脑组织内总抗氧化能力(T-AOC),丙二醛(MDA)和乳酸(LD)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、总ATP酶(T-ATP)活力等生化指标;采用小鼠急性不完全性脑缺血实验和小鼠常压耐缺氧实验,测定其存活时及对耐缺氧能力的影响.结果:灯盏花素12 mg/kg与冰片0.48 mg/kg配伍对模型大鼠降低其脑含水量作用为显著.与模型对照组比较,SBI组尾静脉注射能使动物的神经行为学评分,脑梗死率和脑含水量显著降低,能显著改善海马区神经元的形态,同时还能明显增强MCAO后大鼠脑组织内T-AOC能力,增加脑组织SOD,显著减少脑组织内MDA含量,同时对于脑组织内CK活力、LDH活力也有显著的增加作用,还能显著减少MCAO后大鼠脑组织LD含量,显著增加Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶及T-ATP酶活力.结论:SBI高剂量组可以极显著延长急性不完全性脑缺血小鼠存活时间和耐缺氧能力.结论:SBI对实验性脑缺血具有保护作用.

淫羊藿苷对大鼠离体心脏的作用及对血液流变学的影响

目的:考察淫羊藿苷(ICA)对大鼠离体心脏的作用及对血液流变学的影响.方法:通过大鼠离体心脏缺血/再灌注实验,观察ICA对冠脉的作用以及对心肌收缩力的影响;用高分子右旋糖酐制备大鼠急性血瘀模型,观察其对血液流变学指标的影响.结果:与模型组或溶媒组相比,ICA(2.0 mg/L,4.0 mg/L)能明显增加缺血/再灌注后大鼠离体心脏冠脉流量,减弱心肌收缩力;ICA(12 mg/kg,6 mg/kg)能有效预防急性血瘀模型大鼠的全血黏度(高、中、低切变率)、血浆黏度、红细胞压积以及纤维蛋白原含量的升高.结论:淫羊藿苷对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤有一定的保护作用,能改善急性血瘀模型大鼠的血液流变学.

缬沙坦对Smad4、Smad7在慢性GVHD狼疮肾炎模型小鼠肾组织中表达的影响

目的:探讨Smad4、Smad7在慢性移植物抗宿主病(GVHD)小鼠狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)发生发展中的作用以及缬沙坦通过调节Smad4、Smad7表达对狼疮肾炎的作用.方法:通过亲代淋巴细胞移植构建慢性GVHD狼疮肾炎模型,随机分为正常对照组、模型组、缬沙坦中、高剂量组(22.8,45.6 mg/k),每日灌胃治疗.每周收集24h尿液,12周后处死,用双缩脲比色法测定尿蛋白量,采用RT-PCR研究各组Smad4、Smad7 tmRNA表达水平,应用免疫组织化学方法检测Smad4、Smad7蛋白表达.结果:与正常对照组相比,模型组小鼠24 h尿蛋白量、Smad4和Smad7 mRNA及蛋白质表达均明显增加(P＜0.05),缬沙坦中、高剂量组较模型组上述指标均明显减轻(P＜0.05).结论:Smad信号通路可能参与LN的发生发展,缬沙坦可能通过影响Smad4、Smad7的表达从而延缓LN肾脏纤维化的进程.

北极刺参多糖、皂苷和胶原蛋白多肽对血管内皮细胞的保护作用

目的:研究北极刺参多糖、皂苷和胶原蛋白多肽对血管内皮细胞的保护作用.方法:采用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)损伤模型.MTT法测定血管内皮细胞的增殖活性,硝酸还原酶法测定血管内皮细胞一氧化氮合酶(NOS)活力和NO释放量,TBA法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,DNA-Ladder法检测血管内皮细胞的凋亡.结果:不同浓度的北极刺参多糖和胶原蛋白多肽均能显著抑制ox-LDL对血管内皮细胞的氧化损伤,促进血管内皮细胞增殖(P＜0.05,P＜0.01),降低细胞内MDA含量(P＜0.05,P＜0.01),促进血管内皮细胞NO释放量(P＜0.05,P＜0.01),提高细胞NOS活力(P＜0.05,P＜0.01),拮抗ox-LDL引起的血管内皮细胞凋亡.刺参皂苷具有显著的细胞毒性作用,仅能降低ox-LDL氧化损伤细胞内MDA含量(P＜1.05,P＜0.01),而无其他上述作用.结论:北极刺参多糖和胶原蛋白多肽对血管内皮细胞的脂质过氧化物损伤均具有显著的保护作用.

人源结缔组织生长因子单链可变区抗体片段的筛选

目的:从人源单链可变区片段(ScFv)文库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆,获得ScFv氨基酸序列.方法:以重组硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白为靶目标,用差异吸附法,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取8个克隆,提取DNA后测序;测序阳性的DNA转化E.coli HB2151,IPTG诱导后用间接ELISA方法检测培养上清单链抗体的活性.MTT法测定单链抗体对CTGF促人近曲肾小管上皮HK-2细胞增殖作用的影响.结果:从8个克隆中获得7个完全一致的DNA序列(W0616);另有1个克隆丢失了重链,且轻链框架区(FR)和互补决定区(CDR)序列与W0616不一致;阳性克隆经诱导后,培养上清用间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P＜0.001).同时,该单链抗体片段能明显抑制CTGF引起的HK-2细胞的增殖.结论:成功获得与CTGF特异结合的人源单链抗体可变区序列,为CTGF抑制剂的研究奠定基础.

原子力显微镜研究阳离子脂质基因载体的结构表征

目的:通过原子力显微镜观察阳离子脂质基因载体(lipid-mu peptide-DNA,LMD)和经过肿瘤靶向肽修饰的LMD(targeted-LMD,tLMD)的结构表征.方法:将腺病毒DNA包装肽mu与质粒DNA混合制备纳米粒子mu peptide-DNA(MD),再将MD与空白脂质体混合孵育制备LMD.将LMD与修饰有靶向配体分子的脂质分子胶束溶液共同孵育得到tLMD.将样品母液按一定比例稀释后滴在云母片上,完全干燥后使用原子力显微镜观察样品粒子的外观.结果:多肽mu可以高效地中和浓缩质粒DNA,形成的MD粒子分布均匀,平均粒径为(95±10)nm.MD粒子与空白脂质体混合继而可以得到圆润紧实、分布均匀、粒径为(140±15)nm的阳离子脂质基因载体LMD.LMD粒子与靶向肽脂质分子共同孵育后,tLMD粒子在保持结构上完整性的同时表面光滑度较LMD减小.结论:原子力显微镜可快速有效地观测到各种脂质基因载体的粒子大小、外观等,为分析脂质基因载体的物理化学性质提供了一种研究方法.

钆(Ⅲ)-氧氟沙星配合物与DNA的相互作用

目的:研究钆(Ⅲ)-氧氟沙星配合物与DNA的相互作用.方法:通过荧光光谱、黏度测定、溴化乙锭(EB)竞争实验、盐效应以及凝胶电泳实验研究钆(Ⅲ)-氧氟沙星配合物与DNA的相互作用.结果:DNA能使该配合物的荧光产生猝灭,其猝灭常数Ksv为5.21 × 104 L/mol,猝灭机理为静态猝灭;同时,该配合物可使DNA的黏度降低,说明该配合物主要以部分嵌插的作用方式与DNA结合;另外通过溴化乙锭(EB)竞争实验进一步证实了配合物与DNA是以嵌插的作用方式相结合的;盐效应则说明配合物与DNA之间不存在静电引力;凝胶电泳实验表明该配合物能造成质粒DNA的断裂.结论:钆(Ⅲ)-氧氟沙星配合物与DNA相互作用的方式以嵌插方式为主,凝胶电泳实验的结果说明该配合物对DNA有切割作用,具有一定的生理活性.

HPLC测定普罗雌醚原料药及其有关物质的含量

目的:用HPLC法测定普罗雌醚原料药的含量及其有关物质,为普罗雌醚原料药及其有关物质测定提供检测方法.方法:采用Waters Nova-Pak C18柱,磷酸盐缓冲液(含0.01 mol/L的磷酸氢二铵和0.01 mol/L氢氧化四甲基铵,pH 3.0)-甲醇(2:98)为流动相;检测波长为280 nm;柱温30 ℃;流速1.0 mL/min.结果:主峰能与相邻杂质峰较好分离,普罗雌醚的浓度在2.0～200 g/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.999 9.结论:该法简便、准确、专属性好,可以用于普罗雌醚原料药的含量及其有关物质的测定.

黄芪甲苷对异丙肾上腺素所致小鼠心肌肥厚的保护作用

目的:考察黄芪甲苷对异丙肾上腺素所致小鼠心肌肥厚的保护作用并探讨其机制.方法:皮下注射异丙肾上腺素致小鼠心肌肥厚模型,以黄芪甲苷(40,80 mg/kg)和阳性对照普萘洛尔(40 mg/kg)灌胃给药,测量小鼠心脏重量指数和心肌羟脯氨酸(Hyp)含量,血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活力,心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;RT-PCR法检测心肌肌浆网钙泵(SERCA2a)和受磷蛋白(PLB)的mRNA表达.结果:与正常对照组相比,异丙肾上腺素组心脏重量指数、心肌Hyp含量、血清LDH和CK水平显著升高,心肌SOD活性下降,心肌MDA含量增加,SERCA2amRNA表达显著减少,PLB mRNA表达无明显变化.与异丙肾上腺素组相比,黄芪甲苷降低心脏重量指数和心肌Hyp含量,降低血清LDH和CK水平,增加心肌SOD活性,降低心肌MDA含量,上调SERCA2amRNA表达.结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌肥厚具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基,增加SERCA2amRNA表达有关.

高速逆流色谱在天然产物活性成分分离制备中的应用

高速逆流色谱(HSCCC)是一种新型的液-液分配色谱技术,由于其克服了传统固相载体对样品的死吸附作用而被广泛用于天然产物的分离与制备中.本文从HSCCC样品制备、分离条件优化、技术进展以及近几年HSCCC在天然产物有效成分分离制备中的应用等方面进行了综述.

丙磺舒对多药耐药相关蛋白的逆转作用及其对药代动力学的影响与应用

多药耐药相关蛋白(MRP)载体在药物的体内处置过程中发挥了重要的作用,丙磺舒对MRP有较好的抑制作用.本文对MRP的表达及其对药物体内过程的影响,丙磺舒对MRP的逆转作用及其对并用药物药代动力学的影响与应用作一综述.

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中药:在美国的地位和FDA政策

在美国,中药在补充替代疗法中应用不断增长.为了发挥中药独特的疗效,鼓励中药研发,保护大众健康,美国FDA颁布了植物药的新法规,并于近期批准了第一个植物药.这些举措将对美国制药业产生深远影响,中药必然发挥出更大的作用,并为人类的健康事业作出贡献.本文介绍了西方主流社会对中药的接受过程,目前中药在美国的地位,以及中药的成功案例,并对FDA在植物药方面的新旧规定及新的指导性文件进行阐述.

治疗失眠药物研究新进展