宫颈癌组织中miRNA-34c的表达水平分析及其靶基因PLK4的鉴定
摘要： 目的:分析miRNA-34c在宫颈癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因.方法:利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测甘肃省妇幼保健医院34例宫颈癌和癌旁正常组织中miRNA-34c表达水平.利用miRNA靶基因预测数据库预测miRNA-34c新的靶基因Polo样激酶4(PLK4).将含有PLK4的3'UTR片段荧光素酶载体分别与miRNA-34c模拟物或阴性对照共转染HEK293T细胞,并检测其荧光素酶活性.在人宫颈癌细胞SiHa细胞中分别转染miRNA-34c模拟物或阴性对照,利用qRT-PCR法和Western blot法分别检测靶基因的mRNA和蛋白质的表达水平.结果:与癌旁正常组织相比,miRNA-34c在宫颈癌组织中表达下调.在HEK293T细胞中,miRNA-34c模拟物显著抑制荧光素酶的活性(P<0.01).miRNA-34c模拟物显著下调SiHa细胞中PLK4的mRNA和蛋白质的表达(P<0.01).结论:miRNA-34c在人宫颈癌组织中表达下调,且能与PLK4的3'UTR结合并下调其mRNA和蛋白质的表达.
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siRNA对恶性黑色素瘤A375细胞中HOXB7基因的干涉作用研究
目的:观察靶向siRNA抑制恶性黑色素瘤细胞株A375同源盒基因HOXB7表达后,对相应生长因子bFGF表达水平及A375细胞生物学特性的影响.方法:根据HOXB7基因设计3条序列特异性的siRNA(si-HOXB7-1,si-HOXB7-2,si-HOXB7-3),在脂质体Lipofectamine2000的介导下转染A375细胞,采用RT-PCR和FCM法来观察HOXB7及bFGF的基因沉默效应.MTF法检测A375细胞体外增殖活性.结果:3条siRNA均能不同程度地下调A375细胞HOXB7表达水平,第3条序列能更有效地封闭HOXB7基因,而空转组与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:靶向HOXB7基因的siRNA可有效沉默HOXB7基因及其调控的基因bFGF的表达,并控制恶性黑色素瘤细胞的生长.
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30例Ⅲ期非小细胞肺癌交替治疗的疗效观察
目的:观察化疗+放疗+化疗的交替治疗方式,在Ⅲ期非小细胞肺癌中的临床疗效方法:57例Ⅲ期非小细胞肺癌随机分为交替活疗组与单纯放疗组.交替治疗采用顺铂为主的联合化疗,至少完成2个周期.放疗采用常规方式,总量55～65Gv/5～6周.治疗第4周和治疗结束4～8周内复查胸片、CT结果:交替治疗组CR 36 7%(11/30)、PR 43.3%(13/30)、NR 16.7%(5/30)、PD3.3%(1/30)单纯放疗组CR 22.2%(6/27)、PR 29.6%(8/27)、NC40 7%(11/27)、PD7.4%(2/27).交替治疗组有效率(CR+PR)为80.0%,显著优于单纯放疗组51.9%(χ2=5.067,P=0.02)1、2、3年生存率,交替治疗组为67.3%、18.6%、14.1%,放疗组为48.2%、14.7%、4.1%.交替治疗组3年生存率显著优于单纯放疗组(P＜0.01).交替治疗中位生存期16个月、较单纯放疗中位生存期11个月提高5个月.交替治疗与常规放疗的骨髓抑制分别为73.3%(22/30,其中Ⅲ级36.2%)、37.0%(10/27),交替治疗组的骨髓抑制显著高于单纯放疗组(P＜0.05).结论:交替治疗对Ⅲ期非小细胞肺癌有效,不良反应轻,多数患者可以耐受,在改善生存质量同时,部分提高了生存时间.
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直肠癌中β-catenin和survivin的表达意义及其相互关系
目的:探讨直肠癌中β-catenin和snrvivin的表达意义及相互关系.方法:应用免疫组化SP法检测60例直肠组织和20例癌旁正常粘膜组织中β-catenin和survivin的表达.结果:在20例正常组织中β-catenin均呈正常表达,survivin均呈阴性表达.直肠癌中β-catenin的异常表达率为66.7%,survivin的阳性表达率为61.7%.β-catenin的异常表达与性别、年龄、直肠癌的分化程度、5年生存率无关(P＞0.05),与淋巴结转移显著相关(P＜0.01).survivin的表达与性别、年龄、直肠癌的分化程度、淋巴结转移无关(P＞0.05),与五年生存率显著相关(P＜0.05),β-catenin的异常表达与survivin的表达在直肠癌中有显著的正相关性(P＜0.01,r=0.388).结论:β-catenin异常表达可能是survivin激活的原因之一,并且在直肠癌的发生、发展过程中起着重要的作用.
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细胞凋亡及其相关基因与乳腺癌预后关系的研究
目的:分析乳腺癌中凋亡细胞数量、凋亡相关基因-bcl-2、p53的表达、细胞增殖标志物PCNA(增殖细胞核抗原)的表达,与影响乳腺癌预后的因素(肿瘤大小,TNM分期,淋巴结转移情况,雌孕激素受体情况等)之间的关系及其对预后的影响.方法:凋亡细胞的检测采用原位DNA缺口末端标记TUNEL法,bcl-2、p53、PCNA、ER(雌激素受体)及PR(孕激素受体)检测采用免疫组化LSAB法.结果:本组200例乳腺癌中,bcl-2阳性率为51%,bcl-2高表达及ER、PR阳性,肿瘤体积小,肿瘤增殖活性低,p53阴性,与ER、PR阴性,肿瘤体积大,肿瘤增殖活性高及p53阳性者相比,差异具有显著性(P＜0.01).bcl-2高表达者无瘤生存率及总生存率均明显高于bcl-2低表达者.差异具有显著性(P＜0.001).本组乳腺癌的平均AI为1.89%(范围0～14.8%).PI为18.37%±7.51%,通过相关性分析显示,AI与PI呈显著性正相关,(r=0.89,P＜0.001).结论:本研究显示,在乳腺癌组织中,bcl-2表达抑制bcl-2表达抑制凋亡的发生,突变型p53蛋白的表达抑制bcl-2的表达,调亡率随增殖率的增加而增加,bcl-2高表达、凋亡率低的乳腺癌患者其预后多好于bcl-2低表达而凋亡率高者.
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TrkA基因的表达抑制神经母细胞瘤血管生成的实验研究
目的:探讨TrkA基因通过抑制神经母细胞瘤(NB)血管生成而阻止其生长、转移的可行性.方法:常规培养对照组SY5Y细胞、TrkA基因高表达的实验组细胞(SY5Y-TrkA)和表达载体基因的空载体组细胞(SY5Y-Vec);比较三组细胞的裸鼠皮下致瘤性:通过RT-PCR、免疫组织化学、微血管面积计算检测并比较三种细胞所致的肿瘤瘤体内血管生成情况.结果:SY5Y-Trk A细胞在裸鼠皮下的致瘤性和其所致肿瘤的血管生成能力明显下降.肿瘤终体积:对照组1.736±0.485cm3,空载体组1.803±0.751cm3,实验组0.3945±0.015cm3(P＜0.01);对照组与实验组相比,血管内皮生长因子(VEGF)的表达差别显著(P＜0.01);微血管密度(MVD):对照组27.2l±14.58,空载体组27.76±14.15,实验组4.08±4.72(P＜0.01).结论:TrkA基因能有效抑制神经母细胞瘤的血管生成和肿瘤生长,为应用基因抗血管治疗神经母细胞瘤提供理论依据.
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食管鳞癌细胞系中STAT3的激活及VEGF和Bcl-2的表达
目的:探讨信号转导子及转录活化子3(STAT3)在食管鳞癌细胞系中的激活情况以及STAT3与其下游靶基因产物VEGF和Bcl-2的表达情况.方法:采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞系中STAT3及p-Stat 3(STAT3蛋白的活化形式),VEGF和Bcl-2蛋白的表达情况,并采用凝胶电泳迁移率(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)法检测两株食管鳞癌细胞核中STAT3与DNA的结合活性.结果:食管鳞癌细胞中存在激活的STAT3信号传导通路,通路蛋白STAT3、p-STAT3及其下游靶基因产物VEGF,Bcl-2在细胞中均有表达,蛋白在细胞核中具有较高的DNA结合活性.结论:两种食管鳞癌细胞系中均有组成性激活的STAT3信号通路,提示STAT3信号通路可能在食管鳞癌发生、发展中起重要作用.
关键词： 食管鳞癌 信号转导子及转录活化子3 血管内皮生长因子 Bcl-2 -
持续滴注诺维本联合异环磷酰胺治疗铂类耐药的非小细胞肺癌的临床研究
目的:临床研究持续性静脉滴注诺维本(Navelbine,NVB)联合异环磷酰胺(Ifosfamide, IFO) 治疗铂类耐药的非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效与毒副反应。方法:入组非小细胞肺癌27例,临床予持续性静脉滴注NVB联合IFO化疗,至少两个疗程,疗效及毒性判定按照WHO标准。结果:有效率为18.5%。在毒副反应方面,表现不同程度的白细胞下降、血小板下降。结论:本项研究提示持续性静脉滴注NVB联合IFO方案治疗铂类耐药的非小细胞肺癌有较高疗效,并较为安全,患者可接受。
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氨溴索在肺癌放疗时对放射性肺损伤保护作用的观察
目的:对氨溴索在局部晚期肺癌放疗时减少急、慢性放射性肺损伤的发生率进行评价.方法:139例局部晚期肺癌患者接受常规放疗.随机分为单纯放疗组(RT)68例和放疗加氨溴索组(RT+A)7l例.放疗方法:1次/d,1.8～2.0Gy/次,5次/W,平均总剂量为60Gy.氨溴索用法为2～3mg/kg/d,分3次口服,放疗第一天开始,连用3个月.放射性肺损伤的诊断根据RTOG标准分0～4级,以≥2级者和影像学变化为观察指标.结果:109例患者治疗后3个月,RT+A组放射性肺炎≥2级者占23.3%,RT组为50.0%;两组比较有显著性差异.6、12和18个月时,肺纤维化的发生率RT+A组分别为27.3%、25.8%、22.6%,RT组分别为54.1%、51.5%、50.0%,两组比较差异有显著性意义.结论:氨溴索在局部晚期肺癌放射治疗时能够减少急、慢性放射性肺损伤的发生率而不影响其放射治疗效果.
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胸部肿瘤的立体定向放射治疗
目的:胸部肿瘤立体定向放疗的应用研究.方法:1999年11月至2001年1月期间共治疗41例患者45栽个病灶.进行分次立体定向适形放疗.射野一般4～8个,每日1次,连续照射,共5～12次,每次治疗时根据85%～95%剂量曲线确定处方剂量:4～7Gy,总量为25～60Gy.结果:41例45个病灶根据CT复查肿瘤消退情况确定CR为37.8%,PR为37.8%,总有效率为75.6%.结论:立体定向放疗治疗胸部较小的原发肺癌和孤立转移瘤是一种局部控制好、疗程短、疗效显著、无痛苦的新疗法;是常规大野放疗后局部追加剂量的好方式;对于肺癌术后或放疗后复发,是减少肿瘤周围正常组织接受剂量,避免损伤,提高肿瘤局部控制率的有效手段.后期不良反应及远期疗效有待进一步观察.
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血管内皮生长因子和微血管密度在食管癌中的临床意义
目的:探讨VEGF表达和MVD与食管癌临床病理指标和预后的相关关系.方法:用免疫纽化法检测43例食管癌VEGF蛋白表达和MVD,应用等级相关检验研究VEGF和MVD与食管癌临床病理指标、局控率、总体生存率及无瘤生存率的相关关系.结果:VEGF表达与食管癌T分期呈正相关;MVD与病灶部位、组织学分化相关.多因素分析显示切缘阳性是影响局控率的预后因素;病灶部位、切缘阳性、T分期和VEGF表达是影响总体生存率和无瘤生存率的预后因素;MVD与预后无显著相关.结论:VEGF可能反映食管癌病变进展情况,并有助于预后判断,值得今后扩大样本量进一步研究.
