芪仙颗粒对ISO大鼠心肌Gsα/Giα-PIP2-IP3-Ca2+信号通路的影响
摘要： 目的 通过观察芪仙颗粒对缺血性心肌病模型大鼠心肌鸟核苷耦联激活性蛋白α亚基(Gsα)和抑制性蛋白α亚基(Giα)含量及磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PIP2)-1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)-Ca2+-钙调神经磷酸酶(CAN)信号通路的影响,探讨其抗缺血性心肌重构的机制.方法 以异丙肾上腺素(ISO)腹腔注射构建缺血性心肌病模型,随机分为对照组、ISO模型组、芪仙颗粒低剂量组和芪仙颗粒高剂量组.酶联免疫吸附法测定心肌组织匀浆CaN、PIP2、IP3含量,超声心动图观察心肌结构,苏木素-伊红染色观察心肌组织病理学结构变化,RT-PCR法检测心肌组织Gsα、Giα、IP3、1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)、CaN mRNA表达,WesternBlot检测左室心肌组织Gsα、Giα蛋白的表达.结果 芪仙颗粒可抑制ISO诱导的大鼠心肌组织匀浆PIP2、IP3、CaN升高(P＜0.05);病理结果显示,芪仙颗粒可减轻ISO诱导的心肌坏死、纤维化和炎性细胞浸润的程度和范围;超声心动图结果显示,芪仙颗粒大剂量组左心室舒张末期直径(LVEDD)和左心室收缩末期直径(LVESD)明显降低(P＜0.05);RT-PCR结果显示,芪仙颗粒较ISO组大鼠心肌组织Gsα、IP3、IP3R、CaNmRNA水平均有显著降低(P＜0.01),Gio表达水平升高(P＜0.05);Western Blot结果显示,芪仙颗粒可明显增加Giα蛋白的表达、减少Gsα蛋白的表达(P＜0.05).结论 ISO诱导的心肌重构机制与心肌G蛋白偶联相关的Cd+信号通路传导紊乱有关,抑制G蛋白-PIP2-IP3-Ca2+信号途径可能是芪仙颗粒抗缺血性心肌重构的分子生物学机制之一.
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芪仙颗粒对ISO大鼠心肌Gsα/Giα-PIP2-IP3-Ca2+信号通路的影响
目的 通过观察芪仙颗粒对缺血性心肌病模型大鼠心肌鸟核苷耦联激活性蛋白α亚基(Gsα)和抑制性蛋白α亚基(Giα)含量及磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PIP2)-1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)-Ca2+-钙调神经磷酸酶(CAN)信号通路的影响,探讨其抗缺血性心肌重构的机制.方法 以异丙肾上腺素(ISO)腹腔注射构建缺血性心肌病模型,随机分为对照组、ISO模型组、芪仙颗粒低剂量组和芪仙颗粒高剂量组.酶联免疫吸附法测定心肌组织匀浆CaN、PIP2、IP3含量,超声心动图观察心肌结构,苏木素-伊红染色观察心肌组织病理学结构变化,RT-PCR法检测心肌组织Gsα、Giα、IP3、1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)、CaN mRNA表达,WesternBlot检测左室心肌组织Gsα、Giα蛋白的表达.结果 芪仙颗粒可抑制ISO诱导的大鼠心肌组织匀浆PIP2、IP3、CaN升高(P＜0.05);病理结果显示,芪仙颗粒可减轻ISO诱导的心肌坏死、纤维化和炎性细胞浸润的程度和范围;超声心动图结果显示,芪仙颗粒大剂量组左心室舒张末期直径(LVEDD)和左心室收缩末期直径(LVESD)明显降低(P＜0.05);RT-PCR结果显示,芪仙颗粒较ISO组大鼠心肌组织Gsα、IP3、IP3R、CaNmRNA水平均有显著降低(P＜0.01),Gio表达水平升高(P＜0.05);Western Blot结果显示,芪仙颗粒可明显增加Giα蛋白的表达、减少Gsα蛋白的表达(P＜0.05).结论 ISO诱导的心肌重构机制与心肌G蛋白偶联相关的Cd+信号通路传导紊乱有关,抑制G蛋白-PIP2-IP3-Ca2+信号途径可能是芪仙颗粒抗缺血性心肌重构的分子生物学机制之一.
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逍遥散对慢性应激下AD复合模型大鼠行为学和海马组织的干预作用
目的 研究慢性应激对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的影响,并探讨逍遥散对慢性应激下AD模型的干预作用.方法 将大鼠随机分组,除空白组(K)外,假手术组(J)海马区注射PBS溶液,AD组在海马区注射NaN3复制AD模型,慢性应激组(M)采用多种慢性应激刺激制备模型,而复合模型组(F)、逍遥散组(XYS)则采用慢性刺激加海马区注射NaN3复制慢性应激下AD模型.观测行为学指标,检测血清皮质酮含量并观察各组海马组织CA1区形态学变化.结果 与K组比较,M、F组自由活动受到显著影响(P＜0.01),J组和AD组无统计学差异;与F组比较,逍遥散可显著改善复合模型的记忆损伤与自由活动情况(P＜O.01,P＜O.05).与K组比较,F、M和AD组皮质酮含量显著升高(P＜0.01);与F组比较,XYS组皮质酮含量显著降低(P＜0.01).HE染色结果显示,与K组比较,AD、M与F组的海马组织均出现了病理变化;与F组比较,逍遥散可显著改善其病理变化.结论 慢性应激与NaN3均可损伤大鼠的记忆功能,并且慢性应激能显著加重AD的记忆损伤,而逍遥散可能通过降低皮质酮含量与改善海马组织的损伤来缓解慢性应激下AD的记忆障碍.
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基于网络药理学的枳术汤活性成分-靶点-通路研究
目的 运用网络药理学研究枳术汤活性成分-靶点-通路,明确其药理机制.方法 利用中药分子机制生物信息学分析平台获取枳术汤活性成分及对应靶点;利用STRING数据库构建PPI网络,依据度值和介数筛选关键靶蛋白;利用BiNGO和MCODE插件对靶基因进行GO生物过程富集和聚类分析;利用DAVID数据库分析靶点的KEGG信号通路.结果 获得辛弗林、N-甲基酪胺、白术内酯Ⅲ等16个主要活性成分及127个靶点,发现了MAPK1、DRD2、ADRB1、CHRM2、HTR、MAOB、DBH等30个关键靶点.聚类分析809个GO生物过程得到内环境、神经递质、中枢神经、心血管系统、炎症、激素、蛋白质代谢、核酸代谢等28个子簇.KEGG信号通路富集主要涉及神经递质、内分泌、信号转导、物质代谢及其他等5大类17条信号通路.结论 枳术汤活性成分作用于乙酰胆碱、多巴胺、5-羟色胺、肾上腺素等神经递质的受体及代谢酶,参与神经递质调节、心肌信号转导、内分泌等信号通路和生物过程,主治胃肠动力障碍性疾病,对心血管、神经系统疾病也具有一定药理作用.
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黄芪散有效部位群对Ⅱ型糖尿病大鼠肝脏AMPK/SREBP-1c通路的影响
目的 观察黄芪散有效部位群(HQS)对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏单磷酸腺苷活化蛋白激酶/固醇调控元件结合蛋白-1c(AMPK/SREBP-1c)通路的影响.方法 采用低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射联合高脂饲料喂养建立T2DM大鼠模型,造模同时给予HQS (2.4 g·kg-1)灌胃给药,连续16周.测定大鼠血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)及肝脏TC、TG含量;HE、油红O染色法观察肝脏病理变化;Western Blot法检测肝组织中AMPK(Thr172)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1) (Ser79)、SREBP-1c(Ser372)、胰岛素受体底物-2(IRS-2) (Ser731)、蛋白激酶B(Akt) (Ser473)磷酸化蛋白以及AMPKα、SREBP-1c核蛋白(nSREBP-1c)、ACC1、脂肪酸合成酶(FAS)、IRS-2、Akt蛋白的表达;qPCR法检测肝组织中SREBP-1c、ACC1、FAS、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)、IRS-2、Akt mRNA的表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平均显著升高(P＜0.05);肝组织存在明显的脂肪变性;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白的表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著降低(P＜0.05,P＜0.01),AMPKα、nSREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著升高(P＜0.05,P＜0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显上调(P＜0.05,P＜0.01),IRS-2、Akt mRNA表达下降(P＜0.05).与模型组比较,HQS组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平显著降低(P＜0.05);肝组织脂肪变性明显减轻;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著升高(P＜0.05,P＜0.01),nSREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著降低(P＜0.05,P＜0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),IRS-2 mRNA表达显著上调(P＜0.05).结论 HQS可能通过调节AMPK/SREBP-1c通路,减少脂质合成,改善T2DM大鼠肝脏胰岛素抵抗.
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基于JAK通路探讨汉防己甲素改善佐剂性关节炎大鼠滑膜血管新生的机制
目的 探讨汉防己甲素对佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis,AA)大鼠滑膜血管新生的作用及对非受体型酪氨酸激酶(JAK)通路干预机制.方法 将40只SD大鼠随机分为正常对照组(NC组),模型组(M组)、甲氨蝶呤组(MTX组)、汉防己甲素组(TET组),每组10只.NC组左后足跖皮内注射0.15 mL蒸馏水,其余3组左后足跖皮内注射0.15 mL弗氏完全佐剂,复制佐剂关节炎大鼠模型.NC组和M组灌胃2 mL生理盐水,每天1次;MTX组灌胃甲氨蝶呤片水溶液0.45 mg·kg1,每3d1次;TET组灌胃汉防己甲素片水溶液10.8mg·kg-1,每天1次.每组大鼠连续给药4周.每组大鼠在给药前后检测大鼠足肿胀度;实验结束后,观察滑膜病理,检测血清血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)含量,检测滑膜微血管密度(MVD)计数,免疫组化法观察血管内皮生长细胞因子(VEGF)表达,Western blot法测定JAK2、磷酸化非受体型酪氨酸激酶2(p-JAK2)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)蛋白表达.结果 与NC组相比,M组足肿胀度明显升高,病理滑膜细胞有大量炎性浸润和血管新生,血清VEGF-A、MMP-3水平明显升高,免疫组化MVD计数和VEGF表达增加,Western Blot法滑膜JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达增加,具有统计学意义(P＜0.01).与M组相比,TET组和MTX组上述指标明显降低或减少,具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论 汉防己甲素能够改善滑膜血管新生,其作用机制可能与抑制JAK通路激活有关.
关键词： 佐剂性关节炎 汉防己甲素 血管新生 非受体型酪氨酸激酶通路 -
肺康颗粒通过TLR4/NF-κB信号通路干预COPD大鼠炎症的相关机制
目的 观察肺康颗粒对Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其干预慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症的机制.方法 将60只SD大鼠随机分成6组:正常组,模型组,肺康颗粒低、中、高剂量组(10.11,20.22,40.44 g·kg-1,以生药量计),地塞米松组(1 mg·kg-１).采用持续熏烟(20周)联合气管滴注脂多糖(LPS)法建立大鼠COPD模型.第5周开始,灌胃给予肺康颗粒进行干预,连续给药16周.采用苏木素-伊红(HE)染色观察COPD模型大鼠肺脏组织病理变化;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及其种类;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠BALF中炎症细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-17含量;qRT-PCR法检测肺组织中TNF-α、IL-6、TLR4 mRNA表达;Western Blot法检测肺组织细胞胞浆蛋白TLR4、p-IκB、IκB及胞核蛋白NF-κB p65的蛋白表达.结果 与模型组比较,肺康颗粒各剂量组治疗后肺泡结构均有所恢复;肺康颗粒中、高剂量组的IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17含量明显降低(P＜0.01);肺康颗粒各剂量组的白细胞总数明显降低(P＜0.01),肺康颗粒中、高剂量组的中性粒细胞及高剂量组的淋巴细胞亦明显减少(P＜ 0.05,P＜0.01);肺康颗粒中、高剂量组肺组织中TNF-α、IL-6 mRNA的表达量均明显下调(P＜0.05,P＜0.01),而TLR4 mRNA表达则明显上调(P＜0.01);肺康颗粒各剂量组的TLR4、IκB蛋白表达明显上调(P＜ 0.05,P＜0.01),胞核蛋白p65的表达明显下调(P＜0.01),肺康颗粒高剂量组的p-IκB蛋白表达亦显著下调(P＜0.01).结论 肺康颗粒可能通过TLR4/NF-κB信号转导通路干预炎症基因的表达,减轻COPD大鼠的炎症反应.
关键词： 肺康颗粒 慢性阻塞性肺疾病 TLR4/NF-κB信号通路 炎症 细胞因子 -
龟羚帕安丸对PD大鼠神经干细胞移植及中脑黑质Nurr1、Shh表达的影响
目的 观察龟羚帕安丸对帕金森病(PD)大鼠神经干细胞(NSCs)移植后中脑黑质的细胞存活数以及核受体相关因子1 (Nurr1)、音猥因子(Shh)蛋白表达的影响.方法 采用6-羟基多巴(6-OHDA)注射法建立PD大鼠模型,将60只造模成功大鼠随机分为空白对照组,移植对照组,美多芭组(10 mg·kg-1)和中药低、中、高剂量组(龟羚帕安丸1,2,4 g·kg-1);各组给予右侧纹状体注射移植5μL NSCs悬液,空白对照组注射5μLPBS;灌胃给药,每日2次,连续28 d.免疫组化法检测PD大鼠中脑黑质的NSCs存活数以及Nurr1、Shh蛋白表达情况.结果 与空白对照组比较,移植对照组的NSCs存活数、Nurr1及Shh蛋白表达水平明显升高(P＜0.01).与移植对照组比较,各治疗组的中脑黑质NSCs存活数以及Nurr1、Shh蛋白表达明显升高(P＜0.05,P＜ 0.01).结论 龟羚帕安丸能够促进PD大鼠NSCs移植后的细胞存活,可能与其上调大鼠中脑黑质Nurr1、Shh蛋白表达水平有关.
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基于AMPK-mt TFA-PINK1信号探讨参葵通脉颗粒改善慢性心衰心肌线粒体损伤的机制
目的 探讨参葵通脉颗粒治疗慢性心衰的可能作用机制.方法 采用腹主动脉缩窄法制备慢性心衰大鼠模型,随机分为模型组,参葵通脉低、中、高剂量组,阳性药组,另以10只不缩窄腹主动脉的大鼠为假手术组.根据分组给予相应药物,模型组和假手术组给予等容积蒸馏水灌胃,每天1次,各组均干预4周.生理多导仪检测大鼠血流动力学指标变化;电镜检测心肌超微结构的变化;分光光度法检测Ca2+-ATP酶与Na+-K+-ATP酶活性;Western Blot检测p-AMPKα、AMPKα、NRF-1、mt TFA、PINK1、p-parkin、parkin的表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD显著升高,LVEF、FS显著降低(P＜0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒各组LVEDD、LVESD显著降低,LVEF、FS显著升高(P＜0.05),提示参葵通脉颗粒对慢性心衰具有良好的改善作用.与假手术组比较,模型组大鼠心肌超微结构损伤,线粒体出现空泡等变化,给药干预组损伤明显减轻(P＜0.05).与假手术组比较,模型组大鼠Ca2+-ATP酶与Na+-K+-ATP酶显著下降(P＜0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒各组Ca2+-ATP酶与Na+-K+-ATP酶显著上升(P＜0.05).与正常组相比,模型组NRF-1、mt TFA显著降低(P＜0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒3个剂量组NRF-1、mt TFA显著增加(P＜0.05).与正常组相比,模型组p-AMPKα/AMPKα、PINK1、p-parkin/parkin有一定增加;与模型组比较,参葵通脉颗粒可促进p-AMPKα/AMPKα、PINK1、p-parkin/parkin的进一步增加(P＜0.05).结论 参葵通脉颗粒对慢性心衰模型大鼠具有良好的治疗作用.慢性心衰模型大鼠心肌线粒体损伤明显增加,参葵通脉颗粒可以调控AMPK-mt TFA-PINK1信号轴,改善心肌细胞线粒体自噬,促进线粒体生成.
关键词： 慢性心衰 参葵通脉颗粒 超微结构 AMPK-mt TFA-PINK1 -
铁皮石斛中性多糖分离纯化及其体内免疫调节作用研究
目的 分离鉴定铁皮石斛中的中性多糖,探讨铁皮石斛中性多糖(DOP-1)对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠免疫功能的影响.方法 水提醇沉法提取铁皮石斛粗多糖、酶-Sevage法脱蛋白;DEAE-纤维素52离子交换层析法分离纯化粗多糖;红外扫描和柱前衍生化HPLC法分析多糖组分及构型;选用BALB/c雄性小鼠,采用环磷酰胺建立免疫抑制小鼠动物模型,实验设正常组,模型组,左旋咪唑阳性组,DOP-1高、低剂量组,铁皮石斛全茎高、低剂量组.观察比较各小鼠脾脏和胸腺指数、血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和干扰素-γ(IFN-γ)含量及血清溶血素水平.结果 铁皮石斛粗多糖经柱层析分离纯化后得到中性多糖(DOP-1),DOP-1主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成,其摩尔比分别为3.8∶0.25∶1.5∶3.8∶2.1∶1.3.动物实验表明:与模型组比较,DOP-1及全茎可显著增加胸腺指数,显著下调血清中IL-6 (P＜ 0.05)和IL-10(P＜ 0.05)的含量,DOP-1调节作用优于全茎和阳性组;DOP-1高剂量组的IFN-γ水平也有显著性降低(P＜0.01),并能增强免疫抑制小鼠血清溶血素水平(P＜0.01).结论 铁皮石斛中性多糖可缓解环磷酰胺对小鼠的免疫抑制作用.
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复方芪麻胶囊对兔颈动脉粥样硬化的影响及相关机制
目的 探讨复方芪麻胶囊对兔颈动脉粥样硬化(CAS)的影响及相关机制.方法 采用高脂饲料喂养结合耳缘静脉注射牛血清白蛋白的方法建立兔CAS模型.将30只新西兰兔随机分为对照组,模型组,阿托伐他汀组(2.5 mg·kg-1),复方芪麻胶囊高、低剂量组(1.5,3.0 g·kg-1),每组6只.连续灌胃给药6周后,观察各组兔颈动脉病理形态改变;检测血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清脂联素(APN)等生化指标含量;ELISA法测定颈动脉组织中血管内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血小板内皮细胞黏附分子-1(PECAM-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、隐热蛋白(NLRP3)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等相关炎症因子表达水平.结果 与对照组比较,模型组的兔颈动脉表现出内膜增厚、缺损、管腔表面不光滑等典型动脉粥样硬化病理学变化,血清TG、TC、LDL-C含量均显著升高(P＜ 0.05,P＜0.01),APN水平显著降低(P＜0.01),CAS相关炎症因子表达量均显著升高(P＜0.01).与模型组比较,复方芪麻胶囊组的兔颈动脉内膜增厚程度降低,血清TG、TC、LDL-C含量均明显降低(P＜ 0.05,P＜0.01),APN含量均明显升高(P＜ 0.05,P＜0.01),颈动脉组织中相关炎症因子表达量均显著降低(P＜0.01).结论 复方芪麻胶囊具有一定的抗CAS作用,其作用机制可能与降脂、保护血管内皮功能和抑制炎症因子表达有关.
