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针刺对神经干细胞海马内移植痴呆大鼠学习记忆和海马胆碱能系统的影响
目的:观察针刺对神经干细胞(NSCs)海马内移植老年性痴呆(AD)大鼠学习记忆和海马胆碱能系统的影响,探讨针刺治疗老年性痴呆的机制.方法:采用β-淀粉样蛋白(β-AP)向海马CA1区定向注射制做AD模型,将大鼠分为五组:正常组、模型组、移植组、针刺组和移植针刺组,每组各12只.针刺选取百会、大椎、人中三个穴位,并接通电针仪.大鼠跳台检测行为学指标;酶免法检测海马组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AchE)含量.结果:移植针刺组大鼠跳台潜伏期比模型组增加(P＜0.05),错误次数比模型组减少(P＜0.05);海马组织ChAT含量比模型组提高(P＜0.05),AchE含量比模型组降低(P＜0.05);移植针刺组与移植组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:针刺对大鼠海马胆碱能系统的改善是治疗AD的作用机制之一,针刺结合神经干细胞移植治疗效果更佳.
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酸柏栀油软胶囊对小鼠学习记忆及脑中NO、Ach的影响
目的:观察酸柏栀油软胶囊对小鼠的促学习记忆作用并初步探讨其机制.方法:采用Morris水迷宫法观察酸柏栀油软胶囊对小鼠的学习记忆影响,并测定小鼠脑内NOS、ChaE、AChE的含量.结果:酸柏栀油软胶囊1.25～5ml/kg能缩短小鼠登台潜伏期,增加穿越原平台次数,以中剂量作用强;且登台潜伏期随训练时间的延长,各组作用均逐渐增强,d20的作用尤为明显.酸柏栀油软胶囊尚能增加小鼠脑内NOS、ChaE活性,降低AChE活性,也以中剂量作用为佳.结论:酸柏栀油软胶囊对小鼠学习记忆有促进作用,该作用可能与其富含不饱和脂肪酸,增加脑内NO、Ach的含量有关.
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远志皂苷对AD小鼠学习记忆能力及中枢胆碱能系统标志酶活性的影响
目的:建立能模拟人类Alzheimer病(AD)的小鼠病理模型,并观察远志皂苷对AD小鼠学习记忆及胆碱能系统标志酶活性的影响.方法:小鼠单侧海马区注射凝聚态Aβ1-40制备AD小鼠模型,运用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力,采用生化法检测各组小鼠脑组织匀浆中AchE活性变化,采用HE染色观察小鼠脑组织的病理变化,采用免疫组织化学方法观察小鼠脑组织ChAT表达的变化.结果:与模型组相比,中、高剂量(74 mg/kg、148 mg/kg)远志皂苷干预治疗组小鼠逃逸潜伏期明显缩短,穿越平台次数明显增多,海马、皮层神经细胞凋亡减少,同时脑内AchE活性降低,ChAT阳性表达增加.结论:远志皂苷能改善AD小鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与保护中枢胆碱能系统功能有关.
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大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元——免疫组织化学法研究
应用ABC免疫组织化学技术对大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元进行了研究,发现大鼠心脏心房后壁神经节内存在着胆碱乙酰转移酶(Ch AT)免疫阳性神经元.材料与方法,成年大鼠10只,雌雄不限,体重150克左右,0 .4%戊巴比妥纳腹腔麻醉,经左心室0.9%Nacl灌洗,4%多聚甲醛300ml( pH7.2磷酸缓冲液),灌注固定.取心房后壁,后固定12hr,常规石蜡包埋,切片厚5μm,切片脱蜡至水,用SABC法免疫组织化学反应:切片于3%H2O210 min,D》W洗3次×2min,0.01M枸橼酸缓冲液(pH6.0)微波修复(1 00℃)10min,冷却后抗原修复液10min,D》W洗3次×2min,ABB封闭1hr,D》W洗3次×2min,牛血清(1:50)30min,ChAT一抗(1 :2000)4℃18h,PBS洗3次×2min,生物素化绵羊IgG(1:1000 )37℃20min,PBS洗3次×2min,亲合素辣根过氧化物酶(1:200)3 7℃20min,PBS洗4×5min,DAB呈色(苏木素轻度复染).结果显示:在心房后壁心外膜下的心房肌层或/和心内神经节有ChAT阳性神经元.其形态多为椭圆形或圆形,中等大小,个别大于40μm,核大偏位.用牛血清和PBS分别代替ChAT一抗 ,结果均为阴性反应.讨论:在胆碱能神经的研究中,AChE一直作为一种重要的组织化学显示方法,但由于AChE显示胆碱能神经的特异性不强,因此,尽管用AchE显示心内神经节中胆碱能神经元的研究已有许多报道,但对这些AchE阳性神经元是否即是胆碱能神经元,至今尚存争议.而用胆碱乙酰转移酶(ChAT)显示胆碱能神经元在心内神经节的研究至今未见报道.业已证实ChAT只能在胞浆内合成,是神经递质ACh的标志酶 .本实验用免疫组织化学的方法,发现心内副交感神经节有ChAT阳性的神经元,表明该类型心内神经细胞存在胆碱乙酰转移酶,因此是合成ACh的神经元.本实验为研究心内胆碱能神经元提供了更为直接的证据.
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不同类型脑震荡对基底前脑胆碱能神经元的影响
目的通过免疫组织化学的方法,观察不同类型脑震荡大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响,初步探讨脑震荡认知障碍的机制.方法成年SD大鼠36只,复制不同损伤程度的脑震荡模型,用胆碱乙酰转移酶(ChAT)标记基底前脑的胆碱能神经细胞,光镜下计数,并检测反映ChAT活性的灰度值.结果单纯型、复杂型脑震荡与对照组相比,复杂型脑震荡组与单纯性脑震荡组相比,大鼠基底前脑内侧隔核、斜角带核垂直支ChAT阳性表达细胞数减少,ChAT活性降低,差异具有显著性.结论不同类型的脑震荡基底前脑胆碱能神经元变化程度不同,这种变化可能是脑震荡后不同程度认知障碍的病理学基础.
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盐酸甲氯芬酯对血管性痴呆大鼠学习记忆及ChAT表达的影响
目的 探讨盐酸甲氯芬酯对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆的影响及可能机制.方法 采用改良Pulsinelli's四血管阻断法建立血管性痴呆大鼠模型;给予盐酸甲氯芬酯治疗后,用Morris水迷宫检测学习记忆能力及免疫组化观测海马ChAT表达的变化.结果 经盐酸甲氯芬酯治疗后,VD大鼠学习记忆能力提高,海马齿状回ChAT表达明显增加.结论 盐酸甲氯芬酯改善VD大鼠学习记忆能力,可能与它保护神经细胞、增强ChAT表达有关.
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七氟醚处理对老龄小鼠基底前脑胆碱能系统和认知功能的影响
目的:探讨七氟醚对基底前脑胆碱能系统和认知功能的影响.方法:老年C57小鼠吸入七氟醚建立全身麻醉动物模型,利用Morris水迷宫检测认知功能,免疫荧光检测Meynert基底核中胆碱能神经元计数,West-ern Blot检测额叶皮层胆碱乙酰转移酶及高亲和力胆碱转运体的蛋白水平,ELISA测定额叶皮层胆碱乙酰转移酶的活性.结果:与对照组相比,七氟醚组小鼠平台潜伏期延长,平台穿越次数减少(2.1±0.4 vs 5.6 ±0.5,P＜0.05),原平台所在象限停留时间缩短[(21.5±2.4)％ vs (48.6±2.8)％,P＜0.05].此外,七氟醚组小鼠Meynert基底核胆碱能神经元计数减少(3748±248 vs 5942 ±315,P＜0.05),额叶皮层胆碱乙酰转移酶及高亲和力胆碱转运体表达下降,伴有胆碱乙酰转移酶活性降低[(31.4±1.1)μmol/(g.h)vs (55.8 ±1.3) μmol/(g.h),P＜0.05].结论:七氟醚可损害老龄鼠基底前脑胆碱能系统并诱导认知功能损害.
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孕烯醇酮对大鼠空间学习记忆能力和ChAT蛋白表达的影响
目的:研究孕烯醇酮(Pregnenolone,PREG)干预对老年雄性SD大鼠空间学习记忆能力的影响,探讨PREG的潜在神经保护作用及其机制.方法:24月龄雄性SD大鼠40只,随机分为对照组(A组)、溶剂对照组(B组)、低剂量PREG(0.5mg/kg)干预组(C组)、高剂量PREG(2.0mg/kg)干预组(D组),隔日腹腔注射一个月,利用Y迷宫训练评估PREG对实验大鼠空间学习记忆能力的影响,运用免疫荧光技术和Western Blot检测分析大鼠记忆相关脑区ChAT蛋白表达的变化.结果:Y迷宫训练结果显示D组大鼠平均连续正确反应次数为7.5±1.35,明显多于其他各组;免疫荧光检测结果显示D组大鼠前额叶、颞叶、海马内ChAT免疫阳性的细胞数量相应是26.8±2.6、19.8±2.6、25.8±2.4,明显多于其他处理组;Western Blot检测显示D组大鼠前额叶、颞叶、海马皮层组织ChAT蛋白的表达明显高于其他各组(P＜0.05).结论:PREG有助于改善老年雄性SD大鼠空间学习记忆能力,其作用机制可能是促进了大鼠记忆相关脑区ChAT的表达上调,提高了胆碱能神经元细胞的功能活性.
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CXCL12通过PI3K/AKT信号通路对大鼠海马培养细胞乙酰胆碱分泌的影响
目的:观察CXCL12通过PI3K/AKT信号通路对体外培养的海马神经细胞乙酰胆碱合成和分泌的影响.方法:通过Western Blot方法观察CXCL12对培养的海马神经元PI3K/AKT信号通路和胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达量的影响；ELISA方法分别检测CXCL12对海马神经细胞乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性和乙酰胆碱分泌的影响,以及PI3K/AKT阻断剂(LY2940002)阻断海马培养神经元PI3K/AKT信号通路后乙酰胆碱的分泌和AChE活性的变化.结果:在海马神经细胞体外培养过程中,采用50ng/ml的CXCL12作用于海马神经细胞后,AKT磷酸化水平升高,ChAT蛋白表达增多,AChE活性减少.随着培养时间的延长(1,3,5,7d),乙酰胆碱的分泌逐渐增加；通过LY2940002阻断PI3K/AKT信号通路,AKT磷酸化水平降低,ChAT蛋白表达减少,AChE活性增加,乙酰胆碱分泌减少.结论:CXCL12可能通过PI3K/AKT信号通路引起乙酰胆碱合成和分泌增加,表明CXCL12可以作为一种重要的神经生长因子刺激乙酰胆碱的合成和分泌.
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大鼠多重脑震荡后多巴胺能与胆碱能神经元的变化
目的:观察大鼠多重脑震荡(MCC)后中枢神经系统内多巴胺能神经纤维与胆碱能神经元的变化.方法:用金属单摆打击装置复制MCC大鼠模型,随机分为对照组和伤后1、2、4、8、16、24d多个损伤组,用免疫组织化学双标技术检测大鼠脑内多巴胺能神经纤维中酪氨酸羟化酶(TH)和胆碱能神经元中胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达变化.结果:TH阳性表达在伤后1d开始上升,8d达高峰,24d组基本恢复；ChAT阳性表达在MCC后均呈现下调改变.结论:多重脑震荡后多巴胺能神经纤维和胆碱能神经元的变化可能与中枢神经系统的认知功能障碍有关.
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StAR在雌性SD大鼠海马、基底前脑及前额叶皮层中的表达与ChAT正相关
目的:探讨基底前脑胆碱能系统(basal forebrain cholinergic system,BFCS)中是否存在神经甾体的合成及局部合成的神经甾体与BFCS功能之间的关系.方法:利用免疫荧光及Western Blot方法检测甾体合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)及胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)在1月龄、6月龄及24月龄雌性SD大鼠海马、基底前脑及前额叶皮层中的表达情况,并对StAR与相应脑区中ChAT的表达量进行相关性分析.结果:海马、基底前脑及前额叶皮层多种形态的细胞中均存在StAR的表达.StAR与ChAT在1月龄及24月龄组的表达量均显著低于6月龄组(P<0.05),24月龄组的表达量均略低于1月龄组(P>0.05),且StAR的表达量均与相应脑区中ChAT的表达量正相关.结论:BFCS中存在神经甾体的合成,且局部合成的神经甾体与BFCS功能状态密切相关.
关键词： 甾体合成急性调节蛋白 胆碱乙酰转移酶 海马 基底前脑 前额叶皮层 -
出生前后胆碱乙酰转移酶在大鼠脑内定位的研究
为探讨大鼠胚胎及生后发育期间脑内胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)的变化规律,本研究采用免疫组织化学方法,观察了胚胎和生后大鼠脑内ChAT 样(ChAT-like immunoreactive ,ChAT-LI)神经元表达的数量和灰度值.结果显示:ChAT-LI产物主要表达在细胞体、纤维及其末梢.ChAT-LI神经元先在胚胎第12d(embryonic day 12,E12),出现于端脑;E14时可见于隔核和中缝核;E16时内嗅区出现ChAT-LI 神经元;E18时出现于视前区节细胞层;E20时,海马内部可见部分ChAT-LI纤维;生后第0d(postnatal day0,P0),少量带有生长锥的ChAT-LI纤维出现于海马;P5时,海马内出现ChAT-LI神经元,且ChAT-LI纤维进一步增加;P10时,海马、内嗅区和穹隆等结构中都可见ChAT-LI神经元胞体及纤维.上述结果提示:胆碱能神经元在出生前后的大鼠脑内,尤其是在海马记忆回路的发育过程中存在一定的变化规律,它们可能是学习记忆等功能的结构基础.
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氨甲酰胆碱引起的促钠排泄反应和下丘脑室旁核胆碱乙酰转移酶免疫阳性反应变化
本研究选用清醒SD雄性大鼠,通过在体实验和免疫组化方法,观察大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱(carbachol)0.5μg后,肾钠排泄量变化与室旁核胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达的变化.结果显示:侧脑室注射氨甲酰胆碱后40min,肾钠排泄量显著增加,室旁核的ChAT免疫反应阳性神经元数目明显增多(P＜0.05),免疫染色强度明显增强(P＜0.05);阿托品预处理后钠排泄量显著减少,下丘脑室旁核的ChAT免疫阳性反应(ChAT-IR)明显下降(P＜0.05).上述结果提示,侧脑室注射氨甲酰胆碱后,促钠排泄反应增强,下丘脑室旁核胆碱能神经元活性增强,阻断胆碱能受体后可下调氨甲酰胆碱诱导的上述变化.
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大鼠面神经切断及修复后面神经核内胆碱乙酰转移酶的变化
为了研究面神经核胆碱乙酰转移酶在神经损伤及修复后的动态变化,用免疫组织化学方法,观察了成年大鼠面神经外周切断和即刻端端吻合后面神经核胆碱乙酰转移酶阳性神经元的数量和免疫反应强度的时程变化.结果证明,面神经切断后,损伤侧面神经核胆碱乙酰转移酶阳性神经元的数量和免疫反应强度均明显下降,术后第7 d下降至低.面神经切断后立即行端端吻合,术后7d内手术侧面神经核胆碱乙酰转移酶阳性神经元的数量和免疫反应强度的下降规律与面神经单纯切断组相同.面神经吻合后,术侧面神经核胆碱乙酰转移酶阳性神经元的数量和免疫反应强度的回升早出现在吻合后第14 d,术后35 d手术侧面神经核胆碱乙酰转移酶阳性神经元的数量恢复至正常.上述结果提示,面神经吻合并不能阻止损伤侧面神经核胆碱乙酰转移酶免疫阳性产物的下降;伴随着面神经再支配的发生,面神经核胆碱乙酰转移酶免疫阳性产物逐渐恢复正常.
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基底前脑神经元移植到海马后ChAT、NGFR和NOS的表达变化
为了比较基底前脑神经元移植至海马后胆碱乙酰转移酶、神经生长因子受体和一氧化氮合酶神经元的变化规律.选用雄性SD大鼠35只,在单侧穹隆海马伞损伤后一周,将胚胎基底前脑神经元植入损伤侧海马.在移植术后存活5 d@7 d,1 4 d,30d,60 d,90d,和1 80 d共分为7个时间组灌注取材,进行ChAT和NGFR的免疫组织化学反应及NOS反应,观察其神经元的变化.结果证明,ChAT神经元在移植后301方出现阳性反应:NGFR神经元在移植后7 d可见淡染的胞体,随后逐渐增强:NOS神经元在移植后7d时呈明显的阳性反应,而且数量多.三种神经元直到180 d时均尚呈阳性反应.提示移植物内NOS神经元出现早且数量多,NGFR神经元出现的也较早,ChAT神经元出现晚.这三种物质在细胞内出现的时间和数量差异与它们在细胞内发挥的功能有关.
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尼古丁对胆碱乙酰转移酶在人牙周膜成纤维细胞中表达的影响
目的:检测人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLF)中胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)的表达,并观察尼古丁对其表达的影响,以探讨ChAT在吸烟与牙周炎发生发展过程中的可能作用.方法:体外培养hPDLF,免疫组化和RT-PCR方法检测hPDLF中ChAT表达,并观察尼古丁(10～12 mol/L)作用于hPDLF 24 h后ChAT表达的变化.结果:免疫组化染色hPDLF胞浆中ChAT表达阳性;RT-PCR检测hPDLF中ChAT mRNA阳性表达.尼古丁作用后ChAT蛋白和mRNA表达均明显上调与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:hPDLF中存在非神经元型胆碱能系统物质ChAT的表达,尼古丁可上调其表达.
关键词： 非神经元型胆碱能系统 胆碱乙酰转移酶 人牙周膜细胞 牙周炎 尼古丁 -
糖尿病大鼠海马胆碱乙酰转移酶表达与认知功能的相关性
目的:观察糖尿病人鼠海马胆碱乙酰转移酶(ChAT)mRNA和蛋白表达及其与认知功能的关系,探讨糖尿病脑病的发病机制.方法:38只sD雄性大鼠随机分为正常对照组(C组)和糖尿病组(D组),腹腔注射链脲佐菌素建市糖尿病大鼠模型.建模成功后11 wk用Moms水迷宫测试大鼠学习和记忆能力;RT-PCR,原位杂交法检测ChAT mRNA表达;免疫组化,Western Blot法检测ChAT蛋白表达.结果:D组大鼠学习和记忆能力明显减退,其逃避潜伏期时间延长;c组40.90 4±10.90与D组77.56±27.86相比较,差异具有统计学意义(P<0.05).穿越目标区域次数c组(3.93±0.44)次与D组(1.37±0.85)次相比较明显减少(P<0.05);中心区域停留时间百分率c组(5.41±0.97)%与D组(2.20±1.28)%相比较明显下降(P<0.05).海马ChAT mRNA和ChAT蛋白表达c组0.48 4+0.03,0.55 4±0.02与D组0.37 4±0.01,0.33 4±0.01相比较均明显降低(P<0.05).结论:糖尿病大鼠海马ChAT mRNA和蛋白低水平表达可能是糖尿病脑病的发病机制之一.
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加兰他敏对痴呆大鼠治疗机制的探讨
目的观察加兰他敏对痴呆模型大鼠学习记忆功能及皮层、海马胆碱能神经元的影响,进而探讨胆碱酯酶抑制剂改善阿尔茨海默病(AD)患者认知功能的作用机制.方法将β-淀粉样蛋白(Aβ)注入Meynert核制作大鼠痴呆模型,并用加兰他敏进行干预.行为学方法测定各组大鼠学习记忆功能,免疫组织化学方法测定各组大鼠脑组织胆碱乙酰转移酶(ChAT)的变化.结果加兰他敏可明显提高痴呆模型大鼠在行为学测试中的成绩,使皮层、海马ChAT免疫阳性神经元数目增多.结论加兰他敏可明显改善痴呆大鼠学习记忆能力,提高大鼠脑内胆碱能神经元存活能力可能是其重要的作用机制之一.
