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复方茸血胶囊鹿茸多肽的含量测定及提取工艺研究
目的:制定复方茸血胶囊中鹿茸多肽含量测定方法及制备工艺的研究.方法:采用正交实验设计,以出膏率为指标,优选杜仲、枸杞、当归、熟地黄提取佳工艺中的溶媒用量、提取时间及提取次数.采用福林酚法测定复方茸血胶囊中鹿茸多肽含量.结果:佳提取工艺第一次加水十倍量,煎煮2.0h,第二次煎煮时间1.5h,加水8倍量.鹿茸多胩线性范围:0.214 2 ～0.499 8μg.样品含量测定数据:不得少于36.8 mg.结论:本法简便、准确,可用于复方茸血胶囊的含量测定.经过优化后制备的复方茸血胶囊各项指标符合规定,工艺重复性好,适于规模化生产.
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鹿茸多肽干预膝骨性关节炎软骨细胞的增殖
背景:软骨细胞体外培养实验证实,鹿茸多肽其具有显著的促细胞有丝分裂活性,可刺激软骨细胞的增殖.目的:观察鹿茸多肽对实验性骨性关节炎相关细胞因子的调节作用和对软骨细胞增殖的影响.方法:将新西兰大白兔随机分成正常组,假手术组和模型组.正常组不予任何处理,假手术组左膝关节内侧皮肤切开后缝合,模型组建立左膝骨性关节炎模型.模型组建模成功后再将随机分为2 组,鹿茸多肽组给予鹿茸多肽针剂生理盐水稀释液关节腔注射干预,生理盐水组给予生理盐水关节腔注射作为对照,干预后第1,7,15,30 天分别观察鹿茸多肽组和生理盐水组关节软骨形态学变化和软骨细胞结构变化;酶联免疫吸附法检测关节液中白细胞介素1β,肿瘤坏死因子α和转化生长因子β1的水平,免疫组织化学法检测关节软骨增殖细胞核抗原表达并计算细胞增殖指数.结果与结论:在相同时间段内,与生理盐水组相比,鹿茸多肽组关节软骨增殖细胞核抗原表达,细胞增殖指数及关节液中转化生长因子β1 含量均增高(P < 0.05),关节液中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平明显降低 (P < 0.05).结果证实鹿茸多肽可降低实验性骨性关节炎过程中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平,提高转化生长因子β1 水平,并可促进关节软骨细胞的增殖.
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鹿茸多肽诱导骨髓间充质干细胞体外向软骨表型的分化
背景:实验证实鹿茸多肽可以促进体外培养软骨细胞的增殖和细胞外基质糖胺多糖、Ⅱ型胶原、Aggrecan蛋白的表达.目的:通过对体外培养的兔骨髓间充质干细胞在特定培养液作用下向软骨细胞表型分化的研究,探讨鹿茸多肽对其软骨分化的影响.方法:将第3代兔骨髓间充质干细胞随机分为空白对照组、诱导组、鹿茸多肽组,分别采用普通培养液、诱导培养液、含10 mg/L鹿茸多肽的诱导培养液于离心管内进行培养;并取兔的关节软骨细胞作为关节软骨组.分别于1,2,3周后取材,通过组织学、生物化学和RT-PCR技术,对离心管内构建的软骨组织进行形态学和细胞功能状态的观察.结果与结论:空白对照组培养2周后,细胞团块逐渐崩解,无法进行苏木精-伊红染色.诱导组、鹿茸多肽组细胞团块除有轻度收缩外,呈白色半透明状;苏木精-伊红染色发现部分细胞为圆形或卵圆形,表层细胞密度大;诱导组、鹿茸多肽组糖胺多糖含量及Ⅱ型胶原mRNA表达随培养时间延长而增多,各时间点诱导组、鹿茸多肽组含量均高于空白对照组(P < 0.05);各时间点鹿茸多肽组糖胺多糖含量及Ⅱ型胶原mRNA表达均高于诱导组,但低于关节软骨组 (P < 0.05).提示骨髓间充质干细胞在特定培养条件下能向软骨细胞表型分化,且鹿茸多肽对其定向软骨分化有明显促进作用.虽然在体外可以构建出软骨组织,但其与关节软骨质量相比仍有很大差距.
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响应面法优化超声提取梅花鹿鹿茸多肽工艺
目的:采用响应面法优化梅花鹿鹿茸多肽的提取工艺.方法:以鹿茸多肽含量为评价指标,通过单因素试验分别考察粉碎粒度、液料比和提取时间3个因素对多肽含量的影响,采用Box-Behnken的中心组合实验设计原理优化梅花鹿鹿茸多肽的提取工艺.结果:佳提取工艺:粉碎粒度为80～100目,液料比为12,提取时间为40 min.结论:响应面法优化梅花鹿茸多肽提取工艺合理,具有较好的应用价值.
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鹿茸多肽治疗骨质疏松症的临床观察
笔者2005年3月～2005年11月采用鹿茸多肽治疗骨质疏松症30例,收到了较好的效果,现报道如下:
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鹿茸多肽诱导心肌干细胞分化作用及对心肌细胞特征性MHC基因表达的影响
目的 从新生大鼠心脏中分离得到心肌干细胞,体外培养,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察鹿茸多肽诱导前后心肌细胞特征性基因α-心肌肌球蛋白重链(α-MHC)和β心肌肌球蛋白重链(β-MHC)的表达,探讨鹿茸多肽对心肌干细胞分化的促进作用.方法 胰酶消化法分离心肌干细胞(CSCs),并进行传代培养,流式细胞法及免疫组化染色鉴定,于第3代CSCs培养液中加入不同浓度的(50,100,200,400,800,l 600 μg/mL)鹿茸多肽进行体外诱导,3周后,用细胞刷收集细胞,利用RT-PCR技术观察心肌细胞特征性基因MHC的表达情况.结果 鹿茸多肽对CSCs的MHC基因表达有促进作用,在一定范围内存在量效关系,并随着鹿茸多肽浓度的增加,α-MHC和β-MHC基因的表达均有所增加.结论 鹿茸多肽对心肌干细胞分化心肌细胞有促进作用,表明其在心肌损伤性疾病的康复中有潜在的治疗价值,值得进一步全面深入的研究.
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鹿茸多肽对缺血动物模型心肌细胞线粒体凋亡相关基因蛋白Bcl-2/Bax的影响
目的:探讨鹿茸多肽对心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达蛋白的影响.方法:采用冠状动脉左前降支结扎法建立大鼠心肌缺血模型.随机分为假手术组,模型组,维生素c阳性对照组和鹿茸多肽高、中、低剂量组,每组10只.造模后灌胃给药21 d,用Bcl-2及Bax表达蛋白包被的酶联免疫试剂盒测定大鼠心肌细胞线粒体中Bcl-2、Bax蛋白的表达量.结果:鹿茸多肽组与模型组比较,Bcl-2蛋白的表达量增加,而Bax蛋白的表达量减少,Bcl-2/Bax比值升高.结论:鹿茸多肽对心肌缺血大鼠有一定的保护作用,其抗心肌凋亡机制可能与上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白的表达有关.
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超声破碎法及匀浆法提取鹿茸多肽的比较研究
目的 探讨从鹿茸中提取鹿茸多肽的佳提取方法.方法 分别采用匀浆法和超声破碎法在新鲜鹿茸中提取鹿茸多肽(velvet antler polypeptiddes,VAP),对提取时间及提取后鹿茸多肽的蛋白质浓度进行比较分析.结果采用胶体磨匀浆法所得数据为:当匀浆6h后,提取得到的鹿茸多肽蛋白质浓度为0.42 mg/mL;采用超声破碎的方法时,当超声40min时,鹿茸多肽蛋白质浓度为1.61 mg/mL,其蛋白质浓度是应用匀浆法提取时的4倍.结论 2种方法相比,采用超声破碎的方法提取鹿茸多肽,不仅可以节约时间,而且提高了鹿茸多肽的提取量,是较为理想的鹿茸多肽的提取方式.
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鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响
目的 观察鹿茸多肽对人胶质瘤细胞生长抑制率及细胞周期的影响,探讨鹿茸多肽抑制肿瘤细胞的增殖及调节细胞周期作用的机制.方法 在体外传代的培养人胶质瘤细胞(U251)细胞株中加入不同浓度(50、100、200、400、800μg/mL)的鹿茸多肽,诱导培养48 h,镜下观察细胞的形态学变化,MTT法检测鹿茸多肽对肿瘤细胞增殖情况,计算抑制率;流式细胞术(FCM)分析鹿茸多肽,诱导培养肿瘤细胞48 h后,细胞周期变化情况.结果 形态学观察表明,与对照组相比,随着药物剂量的增加,实验组细胞密度逐渐降低,细胞间隙逐渐增宽,细胞体积逐渐缩小,细胞内颗粒逐渐增多.MTT法检测结果表明,鹿茸多肽对肿瘤细胞的增殖抑制作用明显,细胞生长抑制率随着剂量增加抑制率逐渐增加,呈现出良好的剂量依赖性.FCM检测表明,肿瘤细胞G0/G1期与S期所占百分比逐渐减少,G2/M期阻滞.48 h均出现凋亡峰,及凋亡细胞群.结论 鹿茸多肽对体外培养的人胶质瘤细胞的增殖有抑制作用,并具有量效关系.可使肿瘤细胞阻滞在细胞周期的G2/M期,继而引起的细胞周期阻滞和诱导其凋亡.
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鹿茸多肽成分及其药理作用研究
鹿茸是我国传统的滋补强壮药,鹿茸多肽是其主要的生物活性成分,鹿茸多肽主要由氨基酸组成,鹿茸多肽对皮肤创伤有促进皮肤愈合的作用,能提高机体的免疫功能,鹿茸多肽可以抑制软骨细胞的凋亡,还通过影响与细胞老化的相关因子的表达来延缓软骨细胞老化,从而防止软骨退变.鹿茸多肽对神经系统有保护作用,能促进骨髓间质干细胞的增殖,并且对心肌细胞也有保护作用,还有治疗阳痿等性功能障碍的作用.
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鹿茸多肽对辐射诱导大鼠腹部脊髓神经细胞凋亡后caspase-3表达的影响
目的 探讨鹿茸多肽对辐射诱导大鼠腹部脊髓神经细胞凋亡后caspase-3表达的影响.方法 将大鼠腹部脊髓神经细胞进行下列分组实验:对照组(A组),辐射(2 Gy)组(B组),辐射(2 Gy)+ NGF(20 ng/ml)组(C组),辐射(2 Gy)+鹿茸多肽(400 mg/ml)组(D组).应用2 Gy辐射诱导大鼠腹部脊髓神经细胞凋亡后,通过RT-PCR和Western印迹观察caspase-3表达情况.结果 B组caspase-3表达上调,D组表达量降低,D组和C组均接近A组的表达量.结论 鹿茸多肽使辐射诱导大鼠腹部脊髓神经细胞凋亡后caspase-3表达下降,说明鹿茸多肽具有抑制辐射诱导大鼠腹部脊髓神经元凋亡的作用.
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鹿茸多肽对神经细胞损伤修复的研究进展
由于神经细胞属于高度分化的细胞,一旦损伤,其修复过程十分复杂.作为“东北三宝”之一的鹿茸,对于Bcl-2、Bax蛋白、Caspase-3、超氧化物歧化酶(SOD)、雌激素等影响神经细胞损伤因素以及能增殖分化成神经细胞的神经干细胞(NSCs)的损伤修复以及增殖分化均有很好的作用,除此之外,还能够为促进神经损伤修复提供所需要的微环境等.
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鹿茸多肽介导心肌干细胞分化对终末心肌分化基因ANP和MLC-2v表达的影响
目的:探讨鹿茸多肽介导心肌干细胞(CSC)分化对终末心肌分化基因心房钠尿肽(ANP)和心肌肌凝蛋白轻链2(MLC-2v)表达的影响,阐明其修复受损心肌的作用机制.方法:选取出生2 d的雄性 Wistar大鼠,提取CSC,免疫荧光鉴定CSC表面标志物c-Kit,流式细胞术鉴定CSC纯度.以培养皿为实验单位,分为空白对照组(加等量缓冲液)、5-氮胞苷组(终浓度3 μmol·L-1)、鹿茸多肽组(终浓度800 mg·L-1)和联合组(3 μmol·L-15-氮胞苷+800 mg·L-1鹿茸多肽),于37℃、5% CO2培养箱中培养48 h.ELISA法检测各组细胞上清液中 ANP 和 MLC-2v 表达水平,RT-PCR 法检测各组细胞中 ANP 和 MLC-2v mRNA 表达水平.结果:获得纯度>95%的CSC.ELISA法检测,与空白对照组比较,5-氮胞苷组、鹿茸多肽组和联合组细胞上清中 ANP和 MLC-2v表达水平明显升高(P<0.05);联合组 ANP和 MLC-2v表达水平高于5-氮胞苷组和鹿茸多肽组,但差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR法检测,与空白对照组比较,5-氮胞苷组、鹿茸多肽组和联合组 ANP和 MLC-2v mRNA表达水平明显升高(P<0.05).结论:鹿茸多肽可以通过增强心肌分化基因ANP和 MLC-2v表达介导CSC分化为心肌细胞,且在一定程度上减轻5-氮胞苷所致的细胞毒性.
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鹿茸多肽对冈田酸致大鼠海马神经元损伤时Tau、Bcl-2和Caspase-3表达的影响
目的:观察冈田酸诱导大鼠海马神经元(HT22细胞)损伤时神经元微管相关蛋白(Tau蛋白)和凋亡相关因子的变化,探讨鹿茸多肽对神经细胞损伤的保护作用,阐明其相关作用机制.方法:大鼠HT22细胞体外传代培养,冈田酸诱导HT22细胞损伤.HT22细胞分为正常对照组、DMSO对照组、冈田酸损伤模型组和不同浓度鹿茸多肽组(终浓度分别为50、500及1 000 mg·L-1),37℃、5％CO2孵育24 h.采用免疫细胞化学染色法、Western blotting法和RT-PCR法检测各组细胞中Tau蛋白磷酸化水平及凋亡相关因子Bcl-2和Caspase-3的表达.结果:免疫细胞化学染色法染色,磷酸化Tau蛋白的表达呈棕黄色颗粒,与正常对照组比较,冈田酸损伤模型组细胞中棕黄色颗粒明显增多;与冈田酸损伤模型组比较,500和1 000mg·L-1鹿茸多肽组细胞中棕黄色颗粒明显减少.Western blotting法检测,与冈田酸损伤模型组比较,各浓度鹿茸多肽组细胞中Tau蛋白表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01),1 000 mg·L-1鹿茸多肽组细胞中Bcl-2表达水平明显升高(P＜0.05),各浓度鹿茸多肽组细胞中Caspase-3表达水平均无明显变化(P＞0.05).RT-PCR法检测,与冈田酸损伤模型组比较,各浓度鹿茸多肽组细胞中Tau mRNA表达水平明显降低、Bcl-2 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05或P＜0.01),500和1 000 mg·L-1鹿茸多肽组细胞中Caspase-3 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:鹿茸多肽可能通过抑制Tau过度磷酸化及抑制细胞凋亡调控机制,对冈田酸诱导的神经细胞损伤起到保护作用.
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聚丙交酯-乙交酯微球搭载鹿茸多肽联合骨髓间充质干细胞对大鼠坐骨神经损伤的修复作用及其机制
目的:观察聚丙交酯-乙交酯(PLGA)微球搭载的鹿茸多肽(VAP)联合骨髓间充质干细胞(BMMSCs)对大鼠坐骨神经损伤的修复作用,探讨其相关作用机制.方法:横断法复制大鼠外周神经损伤模型.60只大鼠随机分为坐骨神经横断对照组(对照组)、VAP微球组(VAP组)、BMMSCs移植组(BMC组)和VAP微球联合BMMSCs移植组(VAP-BMC组),每组15只.造模7 d后,对照组大鼠在横断坐骨神经区域注射PBS溶液,VAP组大鼠在相同位置注射含有载药PLGA微球的PBS溶液,BMC组大鼠注射含有BMMSCs的PBS溶液,VAP-BMC组大鼠注射含有载药PLGA微球和BMMSCs的PBS溶液.3个月后采用Basso、Breattie和Bresnahan(BBB)运动评级量表评估各组大鼠的神经功能,HE染色检测各组大鼠坐骨神经组织形态表现,Western blotting法检测各组大鼠坐骨神经组织中二硫键异构酶(PDI)、葡萄糖调节蛋白78(GRP-78)和半胱胺酸蛋白酶12(Caspase-12)蛋白表达水平.结果:BBB运动评级量表评估,与对照组比较,VAP组、BMC组和VAP-BMC组大鼠BBB评分升高(P<0.01),以VAP-BMC组大鼠BBB评分升高明显.H E染色,与对照组比较,VAP组、BMC组和VAP-BMC组大鼠坐骨神经纤维更粗,轴突直径更长(P<0.01).Western blotting法检测,与对照组比较,VAP组、BMC组和VAP-BMC组大鼠坐骨神经组织中PDI和Caspase-12蛋白表达水平明显降低(P<0.01),VAP-BMC组大鼠坐骨神经组织中GRP-78蛋白表达水平明显升高(P<0.01).结论:PLGA微球搭载VAP联合BMMSCs可促进受损坐骨神经的修复,其作用机制可能与抑制内质网应激有关联.
关键词： 聚丙交酯-乙交酯微球 鹿茸多肽 坐骨神经 内质网应激 骨髓间充质干细胞 -
鹿茸多肽联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对人骨髓间质干细胞体外增殖的影响
目的:探讨鹿茸多肽(PAP)联合胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的雪旺细胞对人骨髓间质干细胞(BMSCs)体外增殖的影响.方法:按常规方法抽取10 mL健康志愿者骨髓,接种于培养瓶中进行培养,原代培养细胞完全融合前进行传代,传至第3代时收获BMSCs,调整细胞浓度为5×106 mL-1备用.加入4μL GDNF基因修饰的雪旺细胞为GDNF组,加入4μL(10 mg·L-1)PAP联合GDNF基因修饰的雪旺细胞作为联合组,对照组未加入任何药物仅加入等量的培养基.采用酶联免疫检测法检测各组细胞细胞增殖活力,ELISA法检测各组BMSCs中增殖细胞核抗原(PCNA)水平,AnnexinⅤ-FIFC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率.结果:原代培养48 h后大部分细胞贴壁,形态转变为多角形,少数呈梭形.传代细胞几乎呈梭形,为BMSCs,且均为非造血干细胞.与对照组比较,GDNF组和联合组细胞增殖活力和BMSCs中PCNA水平升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05);与GDNF组比较,联合组细胞增殖活力和BMSCs中PCNA水平升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05).结论:PAP联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对人BMSCs体外增殖具有明显的促进作用.
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鹿茸多肽联合GDNF基因修饰的雪旺细胞对Aβ25-35诱导脊髓神经元凋亡的保护作用
目的:探讨鹿茸多肽(VAP)联合胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因修饰的雪旺细胞(SCs)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导的脊髓神经元凋亡的保护作用,阐明其作用机制.方法:制备胎鼠脊髓细胞,取对数生长期的脊髓神经元,采用Aβ25-35诱导脊髓神经元凋亡,将脊髓神经元分为正常细胞组(正常脊髓神经元)、诱导凋亡组(Aβ25-35诱导凋亡后的脊髓神经元)、SCs组(Aβ25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+SCs)、GDNF组(Aβ25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF)、SCs+GDNF组(Aβ25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+GDNF转染的SCs)和VAP联合组(Aβ25-35诱导凋亡后的脊髓神经元+VAP联合GDNF转染的SCs).流式细胞术检测各组脊髓神经元凋亡率,免疫组织化学染色检测各组脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数.结果:胎鼠脊髓神经元悬液接种后初始脊髓神经元大多为圆形.流式细胞术检测,与诱导凋亡组比较,SCs组、GDNF组、SCs+GDNF组和VAP联合组脊髓神经元凋亡率降低(P<0.05);与SCs+GDNF组比较,VAP联合组脊髓神经元凋亡率明显降低(P<0.05).免疫组织化学检测,各组脊髓神经元中均有caspase-3表达,SCs组、GDNF组和SCs+GDNF组细胞着色差异不明显,脊髓神经元中caspase-3阳性细胞数差异不大,但与诱导凋亡组比较明显减少(P<0.05).结论:VAP联合GDNF转染的SCs对脊髓神经元凋亡有保护作用,该作用通过下调脊髓神经元中caspase-3表达来实现.
关键词： 鹿茸多肽 胶质细胞源性神经营养因子 雪旺细胞 脊髓神经元 -
鹿茸多肽对实验性骨折的治疗作用及机理研究
目的:探讨鹿茸多肽(PAP)治疗骨折的作用机理.方法:离体观察鹿茸多肽对3H-TdR掺入家兔肋软骨、人胚关节软骨及鸡胚头盖骨成骨样细胞的影响;整体利用大鼠完全缺损性挠骨骨折模型,观察鹿茸多肽10和20 mg.kg-1剂量对骨痂的形成、骨折的愈合以及骨痂内羟脯氨酸和钙含量的影响.结果:离体试验表明,鹿茸多肽10～50 mg.L-1对家兔和人胚软骨细胞以及鸡胚头盖骨成骨样细胞都有促进有丝分裂作用,提示鹿茸多肽的细胞增殖作用无种属特异性.整体鹿茸多肽能明显加速骨痂的形成及骨折的愈合,明显增加骨痂内羟脯氨酸和钙含量.结论:鹿茸多肽通过促进骨、软骨细胞增殖及促进骨痂内骨胶原的积累和钙盐沉积而加速骨折愈合.
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鹿茸活性成分现代药理研究进展
通过查询2000年以后的文献对鹿茸及其活性成分的现代药理做了归纳总结,主要从鹿茸多肽、鹿茸多胺、鹿茸多糖、鹿茸精及鹿茸醇提物等几个方面进行综述.
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鹿茸多肽诱导心肌干细胞分化为心肌细胞研究进展
研究表明，由心肌细胞损伤、衰老或坏死所引起的各种心脏疾病是现今影响人类健康的主要原因。人体的心脏组织拥有自我更新能力强且能够特异性分化为心肌细胞的心肌干细胞，其在一定条件下可以分化为内皮细胞等与心脏相关的结构细胞，是目前被认为有希望用于干细胞移植术来治疗各类心脏疾病的干细胞类型。研究证实，鹿茸多肽作为诱导剂，对心肌细胞凋亡蛋白表达有调节作用，并可通过抑制心肌细胞凋亡的途径减轻心肌损伤，具有诱导心肌干细胞分化为心肌细胞的增殖作用。
