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甲氧化三丁基锡通过线粒体途径诱导Jurkat T淋巴瘤细胞凋亡
目的 研究甲氧化三丁基锡(tributyltin methoxide,TBTMO)通过线粒体途径诱导Jurkat T淋巴瘤细胞凋亡.方法 使用不同剂量(0、0.4、0.6、0.8和1.0 μmol/L)的TBTMO处理细胞,分别于不同时间点收获细胞后,采用流式细胞仪对磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻、线粒体Apo2.7蛋白和线粒体膜电位等分子生物学标志和指标进行检测和分析.结果 TBTMO诱导后Jurkat T淋巴瘤细胞的PS外翻,可见有凋亡小体、细胞核凝聚、细胞核碎裂等许多凋亡的典型变化特征.TBTMO诱导后线粒体膜蛋白Apo2.7分子增加、膜电位快速降低并维持这种低电位至濒临死亡.结论 TBTMO可通过线粒体途径诱导Jurkat人淋巴瘤细胞凋亡.
关键词： 线粒体途径 甲氧化三丁基锡 Jurkat T细胞 细胞凋亡 -
白藜芦醇与三氧化二砷联合处理诱导肺腺癌细胞凋亡及其机制探讨
目的 探讨白藜芦醇(RES)与三氧化二砷(As2O3)联合处理诱导肺癌细胞凋亡的作用及机制.方法 以人肺腺癌A549细胞为研究对象,按处理方式分为对照组、单独RES或As2O3处理组及二者联合组,观察RES和As2O3联合处理对细胞存活率、集落形成率、活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、线粒体膜电位、细胞凋亡等的影响;同时,加入谷胱甘肽合成酶抑制剂L-丁硫氨酸亚砜胺(L-BSO),观察RES是否通过GSH耗竭导致细胞内ROS蓄积,进而增强As2O3诱导的细胞凋亡.结果 RES单独作用于细胞时,在浓度大于20μmol/L时,A549细胞存活率随浓度的增加而下降.与As2O3单独处理相比,加入60 μmol/L RES组的集落形成率、细胞凋亡率、ROS水平、GSH含量、线粒体膜电位的变化及细胞色素c和Cas-3水平的差异均有统计学意义(P＜0.05).经谷胱甘肽合成酶抑制剂BSO预处理后,RES和As2O3诱导的细胞凋亡由30.0％增加至77.7％,同时细胞内GSH含量锐减而ROS大量蓄积.结论 RES与As2O3联合处理与RES和As2O3单独处理相比,可诱导更多的A549细胞凋亡,其机制可能是RES和As2O3联合处理可降低GSH含量,诱导ROS产生与蓄积,使线粒体膜电位下降和细胞色素c释放入细胞质,活化Cas-3,终诱导细胞凋亡.
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CORM-2通过激活Caspase依赖性线粒体途径诱导神经细胞凋亡及醒脑静对其干预作用的机制研究
目的：探讨外源性一氧化碳释放剂（CORM-2）诱导大鼠神经细胞凋亡及醒脑静注射液对其干预作用的机制。方法：在光学显微镜下观察CORM-2对神经细胞形态的影响；通过MTT法检测CORM-2对细胞存活率的影响；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率；以Western Blotting检测相关蛋白的表达。同时观察醒脑静注射液对神经细胞形态，细胞存活率及相关蛋白表达的影响。结果：CORM-2影响神经细胞存活率呈时间依赖性和剂量依赖性；100、200、400、800μmol·L-1 CORM-2作用于神经细胞24 h后，可使细胞存活率逐渐降低；可以诱导神经细胞凋亡及Caspase依赖性线粒体途经相关蛋白Caspase-3、Caspase-9及Cytochrome C（Cyt C）的活化，且呈剂量依赖性。选择200μmol·L-1 CORM-2对皮层神经细胞进行诱导损伤，经醒脑静注射液孵育神经细胞20 h后，10 mL·L-1及20 mL·L-1醒脑静注射液可明显降低细胞早期凋亡率，细胞Caspase-3、Caspase-9与Cyt C的表达逐渐降低。结论：CORM-2可能通过激活Caspase依赖性线粒体途径诱导神经细胞凋亡，醒脑静注射液可抑制细胞凋亡的线粒体途径从而干预CORM-2诱导的神经细胞凋亡。
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益气养阴方及其拆方对急性髓系白血病细胞细胞凋亡及Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo,AIF表达的影响
目的:研究益气养阴方及其拆方后的扶正方、祛邪方对人急性髓系白血病细胞凋亡及细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C),凋亡蛋白酶活化因子(apoptotic protease activating factor 1,Apaf-1),第二个线粒体衍生的半胱天冬蛋白酶激活因子(the second mitochondria-derived activator of caspase/direct IAP-blinding protein with low PI,Smac/Diablo),凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factors,AIF)表达的影响,探讨益气养阴方治疗白血病的可能作用机制.方法:采用NOD/SCID小鼠,以KG-1a细胞株建立人急性髓系白血病模型,随机分为全方组、祛邪组、扶正组和空白组,取NOD/SCID小鼠脾细胞制成细胞悬液,应用流式细胞术检测NOD/SCID小鼠细胞凋亡率;采用免疫组化法检测NOD/SCID小鼠骨髓中线粒体相关凋亡因子Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo和AIF的表达.结果:用药后,用药组小鼠生存时间较空白组显著延长(P＜0.01),全方组小鼠生存时间较扶正组与祛邪组显著延长(P＜0.01),祛邪组小鼠生存时间较扶正组显著延长(P＜0.01).用药组细胞凋亡率较空白组明显升高(P＜0.01),全方组较扶正组与祛邪组显著升高(P＜0.01),祛邪组较扶正组显著升高(P＜0.01).用药组小鼠骨髓中Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo,AIF的表达较空白组显著升高(P＜0.05),其中Cyt-C与Apaf-1表达显著升高(P＜0.01);全方组均高于扶正组与祛邪组(P＜0.01);祛邪组较扶正组均升高(P＜0.05),Cyt-C,Apaf-1和Smac/Diablo表达显著升高(P＜0.01).其中对于各指标的影响全方组均优于扶正组与祛邪组,祛邪组均优于扶正组.结论:益气养阴方能够提高NOD/SCID小鼠的细胞凋亡率,上调线粒体相关凋亡因子Cyt-C,Apaf-1,Smac/Diablo,AIF的表达,并诱导其凋亡,抑制白血病细胞增殖,其机制可能与线粒体凋亡通路有关.
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左归丸通过线粒体途径抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡
目的:观察左归丸对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的保护效应,探讨其作用机制是否与其干预线粒体途径有关.方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)成骨细胞MC3T3-E1氧化应激模型,实验分为空白组,t-BHP组,左归丸+t-BHP组,补佳乐+t-BHP组.孵育24,48,72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对t-BHP诱导MC3T3-E1细胞存活的影响;孵育48 h后,采用吖啶橙溴乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡,采用Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化,采用罗丹明123荧光染色法观察线粒体膜电位的改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法分析线粒体蛋白家族B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平.结果:与空白组比较,t-BHP组显著抑制细胞增殖(P ＜0.05,P＜0.01),细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显下调(P＜0.01);与t-BHP组比较,左归丸加t-BHP组促进暴露于t-BHP诱导的MC3T3-E1氧化损伤细胞的存活(P＜0.01),48 h者尤佳,逆转细胞凋亡情况,提高细胞线粒体膜电位,上调Bcl-2蛋白表达(P＜0.05),抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P＜0.01).结论:左归丸含药血清能够抗t-BHP诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,其作用机制可能与其干预线粒体途径有关.
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黄芪多糖对结肠癌SW620细胞增殖及凋亡作用的影响
目的:研究黄芪多糖对结肠癌细胞SW620增殖的影响,探讨其抗肿瘤机制.方法:体外培养的SW620细胞,分别给予黄芪多糖(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 g·L-1),培养48 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测黄芪多糖对人结肠癌细胞SW620增殖的影响;用1.0 g·L-1黄芪多糖,体外培养SW620细胞48 h后,碘化丙啶(PI)单染检测药物处理后的肿瘤细胞周期,Annexin V/PI双染检测药物处理后的肿瘤细胞凋亡率;分别加入0.25,0.5,1.0 g·L-1黄芪多糖,体外培养SW620细胞48 h后,通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3,Caspase-9和细胞色素C的表达.结果:黄芪多糖能够抑制人结肠癌细胞SW620的增殖(P ＜0.05,P＜0.01),且呈浓度依赖效应;与空白组比较,黄芪多糖1.0 g·L-1处理组G2/M期比例增加,早期凋亡率增加,并且晚期凋亡率和总凋亡率均增加(P＜0.05,P＜0.01);与空白组比较,黄芪多糖0.25,0.5,1.0 g·L-1组Caspase-3,Caspase-9,细胞色素C和促凋亡基因Bax表达量增加,Caspase-9前体和抗凋亡基因Bcl-2表达降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:黄芪多糖对结肠癌细胞SW620具有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用,其诱导凋亡机制可能是通过线粒体凋亡通路实现的.
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复方仙草颗粒通过线粒体途径抑制肾足细胞凋亡的研究
目的:研究复方仙草颗粒对人肾足细胞凋亡的抑制作用及其作用机制.方法:采用阿霉素诱导肾足细胞凋亡,实验细胞分为5组:PBS组,阿霉素组,复方仙草颗粒低、中、高剂量组.采用MTT法检测复方仙草颗粒对肾足细胞增殖影响的量效性和时效性.实验细胞分为3组:PBS组、阿霉素组、复方仙草颗粒(高剂量)组(20％).采用倒置相差显微镜观察细胞结构、形态变化,FACS检测细胞凋亡率,Caspase-3活性分光光度法检测细胞内Caspase-3活性,Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达情况.结果:经阿霉素处理的人肾足细胞,凋亡明显增多,而复方仙草颗粒干预后,细胞凋亡率显著下降,其抑制作用具有一定的时效性和量效性.细胞形态学观察到复方仙草颗粒组的人肾足细胞形态相对完整;与阿霉素组比较,复方仙草颗粒组的Caspase剪切小体(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)、cleaved PARP、Bax、Bid的表达受到抑制;而Caspase前体蛋白(Pro-Caspase-3,Pro-Caspase-9)、Bcl-2,Bcl-XL的表达明显增强.与此同时,细胞色素C向细胞浆的外漏现象明显受到抑制.结论:复方仙草颗粒有效抑制人肾足细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡有关.
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益气解毒方调节线粒体途径阻断气虚染毒大鼠鼻咽上皮细胞癌变发生
目的 探讨益气解毒方通过调节线粒体途径阻断气虚染毒大鼠鼻咽癌变的发生.方法 72只SD大鼠随机分为模型组、益气解毒方组和维甲酸组.腹腔注射二亚硝基哌嗪(DNP)和佛波醇酯(TPA),同时进行力竭游泳,建立大鼠鼻咽癌变模型,益气解毒方组和维甲酸组分别给予相应药物进行干预治疗,定期分批处死大鼠,取鼻咽组织做病理检测,免疫组织化学SABC法检测蛋白表达,RT-PCR检测mRNA的表达.结果 在诱发性鼻咽癌变进程的单纯性增生阶段,与模型组比较,益气解毒方组和维甲酸组大鼠鼻咽上皮细胞的Bc1-2、Bax、Cytochrome-C和Caspase-3蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05).而在异型增生阶段,益气解毒方组鼻咽上皮细胞的Bc1-2蛋白表达活性显著低于模型组(P<0.05),Cytochrome-C和Caspase-3又分别显著高于模型组(P<0.05);Bax蛋白表达活性虽然高于模型组,但比较分析结果表明,组间差异却无统计学意义(P>0.05).在同一病理阶段,各组鼻咽上皮细胞的Bax和Bc1-2mRNA转录活性与各自蛋白的表达活性呈现平行趋势.结论 益气解毒方能够有效阻逆大鼠鼻咽上皮细胞癌变进程,其作用与其有效调节线粒体途径关键基因的表达密切相关.
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姜黄挥发油对皮肤鳞癌A431细胞增殖及凋亡的影响
为研究姜黄挥发油(turmeric volatile oil,TVO)对皮肤鳞癌(CSCC) A431(以下简称A431)细胞增殖及凋亡的影响并探讨其机制,该实验采用不同质量浓度(5 ～80 mg·L-1)TVO体外作用于A431细胞,利用细胞增殖/毒性检测试剂盒(celcounting kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖活性;倒置显微镜观察细胞形态变化;吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染色荧光显微镜观察A431细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)表达量.结果显示,随TVO质量浓度的增加对A431细胞生长具有显著的抑制增殖作用,呈剂量依赖关系,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,不同质量浓度TVO组均出现细胞皱缩及细胞破碎现象,细胞凋亡率增加,并呈剂量依赖性,caspase-3,caspase-9的相对表达量上调,各组间差异有统计学意义(P＜0.05),提示了TVO能抑制皮肤鳞癌A431细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调caspase-3,caspase-9的表达有关.
关键词： 姜黄挥发油 A431细胞 细胞凋亡 线粒体途径 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 -
瑞香狼毒提取物体外诱导肿瘤细胞凋亡作用比较研究
目的:体外比较瑞香狼毒提取物ESC,ESC-1,ESC-2对NCI-H157细胞的凋亡诱导作用.方法:采用流式细胞仪检测凋亡率；采用分光光度法检测caspase-3,8,9的活性；采用ELISA法观察凋亡通路Fas,Fas-L,TNF-α,TRAIL-R,Cyto-C,Smac/DIABLO蛋白的表达.结果:与对照组相比,ESC,ESC-1,ESC-2可明显提高NCI-H157细胞的凋亡率；ESc可明显提高NCI-H157细胞caspase-3,8酶的活力,ESC-2可明显提高NCI-HI57细胞caspase-3,8,9酶的活力；ESC,ESC-1,ESC-2可显著上调NCI-HI57细胞Fas蛋白的表达,ESC可明显增高Fas/Fas-L；ESC,ESC-1,ESC-2可显著上调NCI-H157细胞TNF-α蛋白的表达.ESC-1可显著下调NCI-H157细胞TRAIL-R的表达.ESC,ESC-1,ESC-2对NCI-H157细胞Cyto-C蛋白表达无显著性影响.ESC-1,ESC-2可显著下调NCI-H157细胞Smac蛋白的表达.结论:瑞香狼毒提取物诱导肿瘤细胞凋亡可能与调控死亡受体途径通路蛋白有关.瑞香狼毒提取物诱导肿瘤细胞机制复杂,可能存在双向调节的作用,其诱导凋亡是综合调控的结果.
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氧化型胆固醇诱导血管细胞凋亡的机制
氧化型胆固醇(Ch-Ox)能诱导血管细胞凋亡,它是氧化低密度脂蛋白诱导细胞凋亡的主要活性成分之一,在动脉粥样硬化的形成过程中起重要作用.本文综合目前Ch-Ox的细胞毒性作用的研究进展,讨论了Ch-Ox诱导细胞凋亡的可能机制,并对凋亡的两种可能途径及信号转导进行分析,认为Ch-Ox通过线粒体途径诱导细胞凋亡已得到大量研究结果的证明;而通过死亡受体途径的可能性仍有待于进一步研究;胞内钙离子浓度的升高是Ch-Ox诱导细胞凋亡的早期信号转导事件;活性氧在Ch-Ox诱导细胞凋亡过程中也可能作为第二信使发挥重要作用.
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异土木香内酯通过caspase依赖凋亡途径抑制K562/A02细胞增殖
目的:探讨异土木香内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02增殖抑制及凋亡诱导作用.方法:选用异土木香内酯0、6.25、12.5、25、50和100 μmol/L分别处理K562/A02细胞12、24和48 h,用CCK-8法测定异土木香内酯对K562/A02细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测异土木香内酯对K562/A02细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)、活性氧(reactive oxygen species)及细胞凋亡(apoptosis)的影响;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达.结果:异土木香内酯能够明显抑制K562/A02细胞增殖,其作用24 h的IC5o值约为(15±1.42)μmol/L(P＜0.05);流式细胞术检测结果显示,0、10、15、20 μmol/L异土木香内酯作用24 h后,细胞凋亡率分别为(1.35±0.52)％、(18.07±4.03)％、(27.53±3.01)％和(34.99±4.91)％(P＜0.05),同时线粒体膜电位逐渐降低,分别为(96.42±3.59)％、(74.25±6.91)％、(60.97±5.69)％和(31.28±4.95)％;此外,也伴随着细胞内活性氧的增加,分别为(5.03±1.43)％、(17.55±3.85)％、(32.09±3.23)％和(44.38±5.92)％.异土木香内酯能够明显下调BCL-2的表达,上调BAX、cytochrome C、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP的表达.结论:异土木香内酯对K562/A02细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用可能是通过caspase依赖的线粒体途径诱导细胞凋亡而实现的.
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线粒体途径在慢性髓系白血病信号转导中的作用
本研究旨在探讨线粒体途径在慢性髓系白血病(CML)信号转导中的作用.用脂质体转染法将bcr3/abl2反义寡核苷酸(ASO)导入CML细胞系K562细胞中;用MTT法检测bcr3/abl2 ASO对K562细胞活力的影响;流式细胞术(FCM)分析测定细胞凋亡率;荧光染料罗丹明123染色分析细胞线粒体跨膜电位(△ψm)的变化;Westernblot检测线粒体凋亡信号转导通路相关蛋白细胞色素C(CytC)的表达.结果表明,2 μmol/L bcr3/abl2 ASO与K562细胞作用24小时后,可明显抑制K562细胞活力,其抑制率为65.7%;可诱导细胞凋亡,凋亡率为16.9%;可下调K562细胞线粒体△ψm,有38.33%的细胞出现线粒体△ψm下降;可增强Cyt C的表达,激光光度扫描仪测得其表达光密度值由2.33±0.3升高到4.78±0.1.结论:线粒体途径通过介导凋亡信号而在CML信号转导中发挥重要作用.
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高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其机制的研究
目的 观察高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响并探讨其机制.方法 体外培养人骨肉瘤MG-63细胞株,给予不同浓度的高良姜素处理24h,MTT法测定细胞活力,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡,Western blot分析Caspase-3、Cytochrome C及Bcl-2蛋白表达.结果 高良姜素可导致人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡并抑制其增殖,其作用具有浓度依赖性,在80mM为显著；同时可改变细胞周期分布.与对照组相比,80mM高良姜素处理24h后MG-63细胞活力降低、凋亡率增加(P＜0.01 ) G0/G1期百分比增高,S+G2+M期百分比降低(P＜0.01)Caspase-3、CytochromeC表达增加,Bcl-2表达降低(P＜0.01).结论 高良姜素可诱导人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡、抑制其增殖,并改变细胞周期分布,其作用与线粒体途径相关.
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凋亡途径与肿瘤治疗
经典的凋亡途径是指死亡受体途径和线粒体途径,其调控可通过死亡受体、线粒体、凋亡抑制蛋白和Caspase酶等多个水平实现,也受相关传导通路信号的调节.凋亡与肿瘤的发生、发展和治疗密切相关,利用有关的凋亡诱导和调控机制诱导肿瘤细胞凋亡已经成为治疗肿瘤的一个重要途径,我们即对该方面的研究进展进行综述.
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线粒体途径相关信号通路对成骨细胞凋亡的作用
骨质疏松症是由于多种原因导致的骨质量和骨密度下降,骨微结构遭到破坏,造成骨脆性增加,从而容易发生骨折的一种全身性代谢性骨病变.其中,成骨细胞是促进骨形成的主要功能细胞,是骨质疏松发生的关键细胞,其功能退变和异常凋亡将会引起骨量丢失,诱导骨质疏松发生.因此,探究成骨细胞的凋亡机制对预防和治疗骨质疏松症具有重要意义.其中,线粒体途径是成骨细胞凋亡的主要途径,是由多基因参与、多通路相互作用而形成的复杂过程.因此,本文综述了线粒体途径的凋亡过程及其众多相关信号通路:PI3k/Akt信号通路、MAPK信号通路、Ca2+/CaM信号通路以及其他信号通路和因子(Keap1/Nrf2信号通路、PHB、FoxO家族、cAMP/CREB),同时还归纳了这些信号通路在成骨细胞经线粒体途径凋亡的过程中发挥的促进或者抑制作用,以及他们在成骨细胞凋亡中的一些相互作用.这为进一步探究成骨细胞的凋亡机制和骨质疏松的发病机制提供了可靠依据,也为更深入研究安全、有效的抗骨质疏松药物提供了一些可能的作用靶点(如:Akt、ERK、JNK、p38、Ca2+、PHB、FoxO3a、CREB、Keap1/Nrf2等).
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2-甲氧基雌二醇诱导K562细胞凋亡的机制研究
目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)对K562细胞的凋亡诱导效应及其作用机制.方法 使用不同浓度2-ME(0,5,10,20,40 μmol/L)作用于K562细胞,48 h后用流式细胞术检测2-ME作用后K562细胞的凋亡率的变化;用western blot方法检测2-ME作用48 h后K562细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达.结果 (1)2-ME在5～40 μmol/L浓度范围内作用48 h对K562细胞有凋亡诱导作用,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),这种作用呈剂量依赖关系;(2)2-ME作用48 h后,K562细胞Bcl-2蛋白的表达较对照组减少,差异有显著性(P<0.05),而Bax和Caspase-3表达较对照组增高,差异有显著性(P<0.05).结论 2-ME可能通过线粒体途径诱导K562白血病细胞凋亡.
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骨骼肌收缩及线粒体功能研究的细胞模型
大量研究表明,长时间、大强度运动所产生的疲劳与线粒体功能的改变关系密切.我们认为:这类运动性疲劳发生的骨骼肌细胞机制可能通过线粒体途径,至少可以认为线粒体功能的改变在其中起着重要的作用.建立骨骼肌收缩及线粒体功能研究的细胞膜型,可以为认识长时间、大强度运动过程中及运动性疲劳发生时骨骼肌细胞内的变化,探讨延缓和消除运动性疲劳的方法,提供与在体研究相互补充的有益平台.本文就这方面的研究进行综述,藉此为同行们提供一些有所启发的思路.
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β-榄香烯哌嗪衍生物DX2通过线粒体途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡
目的 对β-榄香烯哌嗪衍生物DX2体外抑制人肝癌HepG2细胞增殖作用及其机制进行研究. 方法 采用MTT法测定细胞存活情况;采用倒置显微镜及吖啶橙染色观察细胞形态学变化;用流式细胞仪检测凋亡细胞比率及线粒体膜电位变化. 用免疫印迹法分析DX2对细胞凋亡线粒体通路蛋白水平的影响. 结果 DX2可明显抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞出现凋亡小体,增加凋亡细胞比率. 免疫印迹结果显示,35μmol/L DX2作用细胞后呈时间依赖性地降低HepG2细胞的线粒体膜电位,上调Bax/Bcl-2的比值,促进细胞色素c向胞浆释放,激活胱天蛋白酶(caspase)-9及其下游caspase-3,降解caspase-3底物ICAD. 结论 DX2可诱导HepG2细胞凋亡,其机制为激活细胞凋亡线粒体途径.
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重组人血管内皮抑素心脏毒性作用的靶标及作用机制研究
目的 探讨重组人血管内皮抑素(恩度)心脏毒性作用的靶标及作用机制. 方法 以H9c2心肌细胞为观察对象,进行以下实验:(1)将H9c2细胞分为对照组(不给予药物干预)和恩度100、200、400 μg/ml组(加入相应浓度药物培养24、48 h),用流式细胞术检测各组各时点细胞凋亡率;(2)将H9c2细胞分为对照组和恩度400 μg/ml干预24 h实验组,用透射电镜观察细胞超微结构改变;(3)将H9c2细胞分为对照组和恩度100、200、400 μg/ml组(加入相应浓度药物培养18 h),应用JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位;(4)将H9c2细胞分为对照组和恩度400 μg/ml干预24 h实验组,用细胞免疫化学方法观察细胞色素C (Cyt-C)释放情况;(5)将H9c2细胞分为对照组和恩度100、200、400 μg/ml组(加入相应浓度药物培养24 h),用化学发光法检测各组细胞的ADP/ATP比值. 结果 (1)恩度200 μg/ml组在药物干预24 h、恩度400μg/ml组在药物干预24、48 h后,细胞凋亡率均明显高于对照组[24 h:(16.34±3.72)％、(27.03 ±3.91)％比(6.99±1.72)％;48 h:(24.89 ±4.77)％比(6.44±1.81)％,均P＜0.01];恩度200 μg/ml组药物干预24h后的细胞凋亡率高于药物干预48 h[(16.34 +3.72％)比(11.34±3.09)％,P＜0.01].(2)对照组细胞超微结构正常;恩度400 μg/ml干预24 h实验组细胞核固缩碎裂、染色质块聚,细胞内空泡增多,内质网扩张,线粒体肿胀,出现凋亡小体.(3)与对照组相比,不同剂量恩度干预组细胞线粒体跨膜电位去极化程度随恩度浓度增加而下降.(4)对照组细胞Cyt-C主要分布于线粒体,恩度400 μg/ml干预24 h实验组细胞Cyt-C从线粒体释放至胞质.(5)恩度200、400 μg/ml组细胞的ADP/ATP比值明显高于对照组(1.14 ±0.11、1.31±0.18比0.98±0.09,均P＜0.01). 结论 心肌细胞线粒体可能是恩度心脏毒性作用的靶标,经线粒体依赖性途径诱导的心肌细胞凋亡是恩度致心肌损伤的机制之一.
