SiHa细胞中miR-886-5 p表达抑制稳定细胞系的建立

目的：建立miR-886-5p表达抑制稳定宫颈癌SiHa细胞系。方法应用脂质体转染法分别向宫颈癌SiHa细胞中转染miR-886-5p表达抑制质粒及其对照质粒，48 h后加抗生素筛选，筛选4 w后消化阳性克隆并进行培养；qRT-PCR检测细胞转染效率。结果建立了宫颈癌 SiHa细胞中miR-886-5p表达抑制的稳定细胞系。结论稳定表达抑制miR-886-5p的SiHa细胞系的成功建立，为深入研究miR-886-5p在宫颈癌 SiHa细胞中的作用提供了良好的实验模型。

新型光动力学疗法联合核仁素沉默对宫颈癌SiHa细胞的光动力学效应

目的：研究新型光敏剂阳离子卟啉（TMPyP4）介导的光动力学疗法（PDT）联合人核仁素基因沉默对人宫颈癌 SiHa细胞的体外抑瘤效应，探讨有效的宫颈癌联合治疗方案。方法：SiHa细胞分为空白对照组、RNAi组、PDT组和联合治疗组（PDT-RNAi组）。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（CCK8）法检测各组细胞增殖活性；采用流式细胞术定量检测各组细胞凋亡率；采用 Tranwell 实验检测各组细胞侵袭能力。结果：与空白对照组比较， RNAi 组、PDT 组和 PDT-RNAi 组细胞的生长抑制率明显升高（P＜0.01）；PDT-RNAi组细胞生长抑制率明显高于 RNAi组和PDT组（P＜0.05），Q值等于1.27。与空白对照组比较，各实验组细胞凋亡率增加（P＜0.05）， PDT-RNAi 组晚期细胞凋亡率明显增加， PDT-RNAi 组细胞凋亡率与RNAi组和PDT组比较差异也有统计学意义（P＜0.05）。与空白对照组比较，各实验组细胞侵袭性均减弱（P＜0.05）；PDT-RNAi组细胞侵袭性减弱为显著，且与 RNAi组和 PDT组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：新型PDT对SiHa细胞具有良好的体外光动力效应，可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖和侵袭，促进其凋亡。核仁素基因沉默对 SiHa细胞的PDT具有协同增效作用，PDT联合核仁素沉默可能成为治疗肿瘤的新方案。

胡桃醌对宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨胡桃醌对人宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响,阐明胡桃醌在宫颈癌治疗中的作用.方法:选取处于对数生长期的SiHa细胞,随机分为对照组和10、20、40、60、80和100 μmol·L-1胡桃醌处理组.倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性和细胞生长抑制率,流式细胞术检测SiHa细胞的细胞周期.结果:与对照组比较,胡桃醌处理组SiHa细胞体积缩小,连接消失,与周围细胞脱离.与对照组比较,胡桃醌处理组细胞增殖活性降低(P＜0.05),细胞生长抑制率升高(P＜0.05),且呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)为20.7 μmol·L-1;流式细胞术检测,与对照组比较,10和100 μmol·L-1胡桃醌处理组SiHa细胞的亚二倍体峰(SubG1)比率增加,G0/G1和S期细胞比率降低,G2/M期细胞比率先升高后降低.结论:胡桃醌对SiHa细胞增殖具有抑制作用,并可使细胞周期SubG1比率增加.

20(s)-原人参二醇诱导体外培养Siha细胞凋亡的作用

目的:观察20(s)-原人参二醇(PPD)对体外培养人宫颈癌Siha细胞凋亡的作用,阐明其抗肿瘤作用机制.方法:体外培养人官颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组(乙醇)、阳性对照组(40μg·L~(-1)顺铂)及PPD 10、20和40 μmol·L~(-1)组.分别用乙醇、顺铂和PPD处理细胞48 h后.利用光学显微镜观察细胞形态学改变.采用Annexin V-EGFP/PI双染色法、TUNUL染色法检测细胞凋亡情况,分别采用RT-PCR、Western blotting方法检测bax基因的转录及蛋白表达情况.结果:不同剂量的PPD处理后,Siha细胞变圆回缩并出现碎片,Annexin V-EGFP/PI染色呈现不同程度的绿染和红染,TUNUL染色可见绿色荧光,bax基因的转录与蛋白表达升高.结论:PPD可诱导人宫颈癌Siha细胞出现凋亡.其作用与bax基因表达上调有关.

20(s)-原人参二醇对体外培养宫颈癌Siha细胞的增殖抑制作用及其机制

目的:观察20(s)-原人参二醇(PPD)对体外培养宫颈癌Siha细胞生长周期的作用及其对p53、p21及细胞周期素E(cyclin-E)基因转录和表达的影响,探讨PPD抑制Siha细胞增殖的机制.方法:体外培养人宫颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组(乙醇)和实验组(20 μg·L-1 PPD),分别用乙醇和PPD处理体外培养的宫颈癌Siha细胞,48 h后流式细胞术检测细胞周期,Real time PCR和Western blotting法检测宫颈癌Siha细胞内p53、p21及cyclin-E mRNA及蛋白的表达情况.结果:与阴性对照组比较,20μg·L-1 PPD处理48 h后,G0/G1期Siha细胞比例增加(P＜0.01),G1期阻滞作用明显增强;Siha细胞中p53与p21 mRNA及蛋白表达水平上调(P＜0.01),cyclin-E mRNA及蛋白表达水平下调(P＜0.01).结论:PPD可抑制人宫颈癌Siha细胞增殖,其机制可能与上调p53、p21基因表达,下调cyclin-E基因表达有关.

苦参碱对SiHa细胞增殖及其凋亡相关蛋白表达的影响

目的：研究苦参碱对宫颈癌SiHa细胞增殖及其凋亡相关蛋白表达的影响，并探讨其作用机制。方法：苦参碱作用于SiHa细胞，倒置显微镜下观察其形态变化；MTT法检测苦参碱对SiHa细胞增殖的影响，并筛选苦参碱作用的适当浓度及时间。 Western blot法检测所筛选各浓度苦参碱对SiHa细胞凋亡相关蛋白bcl－2与bax表达的影响。结果：同空白对照组相比，苦参碱作用后倒置显微镜下见SiHa细胞出现皱缩、变圆，细胞质浓缩、水泡化等凋亡形态学改变。苦参碱能够抑制SiHa细胞的增殖，且在一定时间、剂量范围内，呈时间－剂量依赖性。苦参碱能降低 bcl－2蛋白表达量，增加bax蛋白表达量，差异具有显著统计学意义（ P＜0．05）。结论：苦参碱对宫颈癌SiHa细胞增殖具有抑制作用，可诱导其细胞凋亡，抑制Bcl －2蛋白表达、促进Bax蛋白表达从而降低Bcl－2／Bax比率可能是其机制之一。

丹皮酚抑制 SiHa细胞增殖及 COX－2转录的实验研究

目的：探讨丹皮酚对SiHa细胞增殖及COX－2转录的影响。方法：以人宫颈鳞癌SiHa细胞系作为体外模型，MTT法检测丹皮酚对SiHa细胞增殖的影响。用COX－2启动子质粒和AP－1结合位点质粒转染SiHa细胞，采用双荧光素酶报告基因检测系统检测COX－2的转录水平和AP－1的活性。结果：MTT实验结果显示丹皮酚显著抑制SiHa细胞的增殖（ P＜0．01），且与丹皮酚剂量及干预时间呈正相关。荧光素酶检测结果显示丹皮酚显著降低SiHa细胞COX－2的转录水平（ P＜0．01），同时显著抑制AP－1的活性。结论：丹皮酚可通过抑制转录因子AP－1的活性，进而抑制COX－2的转录，从而抑制SiHa细胞的增殖。

上调Raf激酶抑制蛋白的表达对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨上调Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitory protein,RKIP)表达对宫颈癌细胞生物学行为的影响.方法 脂质体介导将pcDNA3.1(+)-RKIP转染SiHa细胞,转染后将细胞分为空白对照组、空载体转染组及转染组.分别采用MTT方法、体外黏附及侵袭实验以及流式细胞仪检测细胞生物学行为变化.结果 RT-PCR发现空白对照组与空载体转染组的RKIP mRNA表达无差异,转染组RKIP mRNA高表达.MTT显示转染组的增殖能力明显减弱,体外黏附能力及体外侵袭能力亦明显减弱,差异有统计学意义(P值分别为0.010、0.040、0.002).流式细胞仪检测提示转染组细胞呈现G1期阻滞,G2 +S期比例下降,而空白对照组及空载体转染组G1期比例减少,G2 +S期比例增加.结论 RKIP可降低宫颈癌细胞的增殖及侵袭能力,作用机制可能与改变细胞周期分布相关.

应用RNAi技术抑制人宫颈癌细胞端粒酶活性表达的研究

目的 研究转染前后对SiHa细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响.方法 SiHa细胞分为3组:实验组、阴性对照组及空白对照组,其中实验组和阴性对照组分别用siRNA#1 ～4和阴性对照siRNA转染,空白对照组不做任何转染处理.用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测各组细胞hTERT mRNA和蛋白的表达,CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,克隆形成实验通过单靶多击模型拟合计算D0、Dq值,检测细胞的放射敏感性.结果 转染后48 h及72 h,实验组siRNA#3hTERT mRNA及蛋白表达量较阴性对照组下降,P＜0.05;转染96 h后实验组细胞A值0.80±0.09,阴性对照组为1.25 ±0.11,P=0.0054;转染后实验组早期凋亡率(10.50 ±0.20)％较阴性对照组(5.80±0.10)％明显增加,P ＜0.0001;实验组及阴性对照组D0及Dq值分别为1.53 Gy、0.77 Gy和2.19 Gy、1.31 Gy,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 siRNA能特异性下调SiHa细胞中hTERT mRNA和蛋白水平的表达,提高细胞的早期凋亡率并抑制细胞增殖活性,增强SiHa细胞的放射敏感性.

RNA干涉(RNAi)抑制宫颈癌细胞SiHa中E7基因表达的实验研究

目的 探讨HPV16 E7特异性小干涉RNA(siRNA)表达栽体对宫颈癌 SiHa 细胞E7基因的抑制作用.方法 构建 HPV16 E7 特异性表运载体,利用脂质粒转染 SiHa 细胞,用RT-PCR及Western blot检测其对E7 mRNA及蛋白的影响.结果 两条siRNA均能有效抑制 E7 mRNA 的转录表达,其中以pshRNA-HPV16 E71作用效果明显,在转染后72 h,对E7 mRNA和蛋白的抑制率分别为 78.4%和57.6%.结论 HPV16 E7 siRNA表达载体对宫颈癌SiHa细胞E7基因的表达有抑制作用.

膜联蛋白A5过表达对宫颈癌细胞系SiHa细胞凋亡的影响

目的:构建膜联蛋白A5的重组表达质粒,转染宫颈癌细胞使其过表达后检测宫颈癌细胞的凋亡情况.方法:PcR法从pJLA503膜联蛋白A5中获得膜联蛋白A5基因;磷酸钙共沉淀法转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,免疫印迹法和免疫组织化学ABC法检测了细胞中膜联蛋白A5蛋白的过表达;对过表达膜联蛋白A5的细胞采用免疫荧光法检测其细胞凋亡情况.结果:重组质粒中膜联蛋白A5基因序列正确;转染重组质粒后的SiHa细胞过表达膜联蛋白A5蛋白;过表达膜联蛋白A5的SiHa细胞凋亡显著增多.结论:膜联蛋白A5可促进宫颈癌细胞系SiHa细胞的凋亡.

膜联蛋白A5与宫颈黏膜上皮细胞癌变的关系

目的:确定在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞中是否有膜联蛋白A5(anxA5)的表达,为研究anxA5的功能及其与宫颈癌的关系奠定基础.方法:培养Hela细胞和SiHa细胞.TRIzol法提取细胞总RNA,RT-PCR法检测anxA5在mRNA水平的表达并将其基因片段连接于T载体,测序仪测序;Western印迹法和免疫细胞化学ABC法检测anxA5的表达.结果:两种宫颈癌细胞的RT-PCR结果和Western印迹法均显示目的条带;免疫细胞化学染色可见胞质和核膜被染成棕黄色;测序并经NCBI的BLAST进行比对,显示为人anxA5.结论:anxA5在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞的mRNA水平和蛋白质水平均有表达.

Gal-1单抗增强γδT细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用

目的:探讨γδT细胞联合半乳糖凝集素1(galectin-1,Gal-1)单抗对人宫颈癌细胞的杀伤作用.方法:从人宫颈癌组织中分离肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs),并通过固相单抗包被法在体外扩增获得γδT细胞,流式细胞术检测其纯度；Western blotting和ELISA法检测宫颈癌SiHa、HeLa细胞及其上清中Gal-1的表达,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验检测-γδT细胞联合Gal-1单抗对宫颈癌SiHa、HeLa细胞的杀伤作用.皮下注射SiHa细胞制备荷瘤小鼠模型,随机分为对照组、同型对照组(IgG1组)、γδT细胞组(γδT组)、Gal-1单抗组(Gal-1 mAb组)及γδT细胞联合Gal-1单抗组(γδT+ Gal-1 mAb组),观察各组荷瘤小鼠移植瘤生长的情况.结果:固相单抗包被法体外扩增后TCRγδ阳性γδT细胞比例达(91.2±1.2)％,SiHa、HeLa细胞及其上清中Gal-1高表达.与对照组相比,Gal-1 mAb组能够增强γδT细胞体外杀伤SiHa细胞[(68.1±3.0)％vs(48.7±3.8)％,P＜0.05]和HeLa细胞[(79.4±5.6)％vs(48.3±6.5)％,P＜O.05]的效率.裸鼠荷瘤30 d,γδT+ Gal-1 mAb组的移植瘤体积明显小于Gal-1单抗组[(31.3 ±9.1)vs(199.6±41.2)mm3,P＜0.01]和γδT细胞组[(31.3±9.1)vs (85.6±45.1)mm3,P＜0.05].结论:Gal-1单抗能增强γδT细胞对宫颈癌细胞的杀伤作用.

鸦胆子油乳对宫颈癌SiHa细胞的抑制

目的:探讨鸦胆子(Brucea javanica)油乳在体外对宫颈癌SiHa细胞的抑制作用及其作用机制.方法:以鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80 μg/ml)作用于SiHa细胞24、48、72 h,以MTT法检测鸦胆子油乳对SiHa细胞增殖的抑制作用;透射电镜观察细胞的超微结构;琼脂糖凝胶电泳观察SiHa细胞基因组DNA片段化改变;流式细胞术测定AnnexinV/PI双染色后SiHa细胞凋亡率.结果:MTT结果显示,鸦胆子油乳以剂量和时间依赖方式对SiHa细胞增殖有明显的抑制作用,其中80 μg/ml 药物作用72 h时的抑制率可达92.43%;20 μg/ml药物作用后,透射电镜下可观察到细胞出现凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳显示细胞凋亡特征性的DNA片段化"梯状"条带;流式细胞仪检测显示,10、20、40 μg/ml药物组作用48 h后凋亡率分别为(8.02±2 41)%、(51.60±7.67)%、(77.22±5.80)%.结论:鸦胆子油乳能够抑制SiHa细胞增殖,其作用机制可能为诱导SiHa细胞发生凋亡.

抗原肽冲击Angiostatin修饰淋巴细胞对Siha细胞的体内外作用

5-氟尿嘧啶联合米非司酮对人宫颈癌SiHa细胞增殖的影响及作用机制研究

目的:体外研究5-氟尿嘧啶(5-fluororacil,5-Fu)联合米非司酮(mifepristone,MIF)对人宫颈癌SiHa细胞株的增殖抑制作用及可能的作用机制.方法:体外培养人宫颈鳞癌SiHa细胞株,采用MTT法检测不同浓度MIF、5-Fu单药以及两药联合作用对SiHa细胞增殖率的影响;采用FCM分析两药合用对SiHa细胞凋亡率及细胞周期分布影响;蛋白质印迹法检测药物处理后SiHa细胞中p53、Bax和Bcl-2蛋白表达的变化.结果:不同浓度5-Fu和MIF单药对SiHa细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性.5-Fu联合MIF作用于SiHa细胞可增强5-Fu对SiHa细胞的增殖抑制p<0.05),且对MIF的作用浓度呈剂量依赖作用;蛋白质印迹法检测结果显示,联合用药组能使p53和Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,呈浓度依赖性.结论:MIF能增强5-Fu对SiHa细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与上调p53和Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白表达有关.

RNAi抑制Survivin基因表达对宫颈癌SiHa细胞放射敏感性的影响

目的:通过RNA干扰技术抑制宫颈癌SiHa细胞中Survivin基因的表达,观察其对X线敏感性的变化.方法:构建Survivin短发卡RNA表达质粒pSurvivin-shRNA并转染入宫颈癌SiHa细胞,RT-PCR及Western印迹法分别检测Survivin mRNA及蛋白的表达情况,激酶活性检测法测定caspase-3活性变化,流式细胞仪法检测细胞凋亡率,克隆形成实验检测转染细胞放射敏感性的变化.结果:与未转染细胞和转染阴性质粒细胞(SiHa/pNeg-shRNA细胞)相比,转染pSurvivin-shRNA质粒的SiHa细胞(SiHa/pSurvivin-shRNA细胞)中Survivin mRNA和蛋白表达明显下降;caspase-3活性明显增强,D405达1.34±0.05(P＜0.05);8 Gy的X线照射24 h和48 h后,SiHa/pSurvivin-shRNA细胞的凋亡率分别为(5.13±0.81)%和(11.27±1.89)%,明显高于SiHa/pNeg-shRNA细胞和未转染细胞(P＜0.05);克隆形成实验结果显示SiHa/pSurvivin-shRNA细胞的成克隆能力明显下降,对X线的敏感性明显增加.结论:短发卡状RNA干扰技术阻抑宫颈癌SiHa细胞中Survivin基因的表达,增强caspase-3活性,可诱导细胞凋亡并促进SiHa细胞对X线的敏感性.

中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响

目的:探讨中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响及其诱导凋亡作用的可能机制.方法:设立空白对照组,清毒栓高、中、低剂量组(0.16、0.04、0.01 g/ml)及保妇康栓组(0.017 5 g/ml),分别以不同药液作用于宫颈癌SiHa细胞24h、48 h、72 h,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞增殖情况,采用线粒体膜电位法检测细胞凋亡情况.结果:不同剂量的清毒栓作用24 h、48 h、72 h时对宫颈癌SiHa细胞的增殖均具有一定的抑制作用,其中以清毒栓高剂量组在48 h时作用为明显.不同剂量的清毒栓均可引起宫颈癌SiHa细胞线粒体膜电位的改变,进而引起不同程度的细胞凋亡;经统计学分析显示,清毒栓各剂量组、保妇康栓组的凋亡率与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),清毒栓低、中剂量组与清毒栓高剂量组比较,差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论:高剂量的中药清毒栓在48 h时对宫颈癌SiHa细胞增殖的抑制作用为明显,其作用机制可能是通过使线粒体膜电位降低来促进肿瘤细胞的凋亡.

曲格列酮抑制宫颈癌SiHa细胞增殖中的作用

目的 观察曲格列酮对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响,并探讨S期激酶相关蛋白2(s-phase kinase associated protein 2,skp2)、p27在此过程中的作用. 方法 曲格列酮(0、100、200、400 μg/ml)处理人宫颈癌SiHa细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性,膜联蛋白-Ⅴ(Annexin Ⅴ)-FITC法检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;倒置显微镜观察SiHa细胞形态学变化;构建skp2表达质粒并转染SiHa细胞,Western blot检测蛋白的表达. 结果 曲格列酮明显抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,且呈明显时间及浓度依赖性(P＜0.05);曲格列酮增加SiHa细胞周期G1/S期阻滞,细胞凋亡率未见显著性变化(P＞0.05);曲格列酮上调SiHa细胞p27表达,下调skp2表达;过表达skp2可明显抑制曲格列酮对p27表达的升高作用,同时抵消曲格列酮对细胞周期抑制的作用. 结论 曲格列酮通过调节细胞周期而非凋亡途径,抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,其机制可能与调节skp2、p27蛋白表达有关.

熊果酸对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨熊果酸(UA)对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制.方法 采用MTT法观察UA对SiHa细胞增殖的影响,流式细胞术检测UA对细胞周期和凋亡率的影响,Hoechst33258荧光染色和透射电镜观察凋亡细胞的形态变化,RT-PCR技术检测SiHa细胞中转化生长因子(TGF)-β1mRNA和Smad 4 mRNA表达的变化.结果 UA可明显抑制SiHa细胞生长,并呈时间和浓度依赖趋势(P＜0.05或0.01)；流式细胞术检测发现,UA作用24h、48 h和72 h后SiHa细胞周期阻滞在G0/G1期,并检测到凋亡峰,凋亡率分别为1.16％、16.37％、18.70％(P＜0.05或0.01)；Hoechst33258荧光染色观察可见胞核染色质不均,呈颗粒状或块状荧光,透射电镜观察出现胞质浓缩、胞核染色质凝聚、边集等典型凋亡细胞核形态变化；RT-PCR检测到TGF-β1mRNA表达减弱,并呈时间依赖趋势,Smad 4 mRNA表达随时间延长而增强.结论 熊果酸在体外对SiHa细胞具有抗增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与TGF-β/Smads信号传导通路有关；UA可能通过上调Smad 4的表达恢复TGF-β/Smads信号传导通路,从而诱导细胞凋亡.