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小鼠腹腔注射环磷酰胺建立少精子症模型的稳定性探讨
近来有人寻求用腹腔注射环磷酰胺的方法诱导小鼠以建立一种经济、周期短、便于获取的少精子症模型并用于实验研究.已有研究证实环磷酰胺可诱导小鼠睾丸生精细胞大量凋亡、精子数量减少.但小鼠生精上皮再生速度很快,诱导后能否在相当长时间内仍保持显著低的生精水平,抑或有一个快速恢复过程,即模型的稳定性问题,目前尚无结论,因此在此平台上进行下一步的治疗性实验并不一定可靠.本实验对此进行研究,并初步探讨其作用机制.
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银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas、bax的检测
为了探讨细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas、bax在银屑病发病中的意义,采用免疫组化ABC法、SABC法检测了这几种基因在1 5例银屑病组织中的表达.结果发现银屑病的角质形成细胞中抑凋亡基因bcl-2几乎不表达,促凋亡基因Fas、bax阳性表达. 提示促凋亡基因Fas、bax在银屑病中发病起重要作用,而抑凋亡基因bcl-2作用可能不大.
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伊达拉奉对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CAI区神经元凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响
目的:探讨伊达拉奉对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CAI区神经元凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响及可能的作用机制. 方法: 采用Global模型造成沙土鼠全脑缺血损伤模型;腹腔注射伊达拉奉对其进行治疗后运用免疫组织化学方法,检测受损脑组织海马CAI区神经元中的Bcl-2、Bax免疫反映阳性细胞数量. 结果: 治疗组大鼠脑组织中Bcl-2表达明显增加,Bax表达明显低于损伤对照组(P<0.05). 结论:伊达拉奉通过清除羟自由基,抗脂质过氧化;可能通过增强Bcl-2的表达,抑制Bax的表达来减少脑缺血后神经细胞的凋亡,发挥脑保护作用.
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胃癌中转化生长因子-βRⅡ、胰岛素样生长因子-ⅡR、Bax基因突变与微卫星不稳定性相关性研究
目的:检测胃癌组织中转化生长因子-βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)、胰岛素样生长因子Ⅱ型受体(IGF-ⅡR)和Bax基因突变与微卫星不稳定性(MSI)发生情况,探讨其相关性以及MST在胃癌发生发展中可能的作用机制.方法:胃镜下取36例胃癌标本,酚与氯仿法抽提基因组DNA,银染PCR-SSCP方法同时检测目的位点.结果:胃癌组织中TGF-βRⅡ、IGF-ⅡR和Bax基因发生突变分别有7例、6例和6例,MSI发生率达58.3%,3种基因突变均见于MSI阳性的胃癌,尤其是MSI-H型胃癌.结论:MSI可通过引起靶基因突变,特别是部分抑癌基因突变,促进了部分胃癌的发生发展.
关键词： 胃肿瘤 基因突变 微卫星不稳定性 转化生长因子受体-βⅡ 胰岛素样生长因子受体 bax基因 -
GCS基因的表达与急性白血病耐药的相关性探讨
目的:探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)基因的表达与急性白血病患者耐药的相关性.方法:以β-actin基因为内参照物,采用RT-PCR方法分析了36例耐药/非耐药急性白血病患者血标本中GCS基因及经典的多药耐药基因(mdr1)的表达情况;并同时对标本中的BCL-2基因和BAX基因的表达水平亦进行了检测,以初步探讨GCS基因导致肿瘤细胞耐药的机制.结果:急性白血病耐药组标本的GCS基因及mdr1基因的扩增条带吸光度(A)相对比值均明显高于非耐药组(P＜0.001).耐药组BCL-2基因扩增条带A相对比值同样明显高于非耐药组(P＜0.001),而BAX基因的表达则明显低于非耐药组(P＜0.01),BCL/BAX比值在耐药及非耐药组之间差异有显著性(P＜0.01).结论:GCS基因在急性白血病细胞耐药的形成过程中可能起重要作用,且GCS促进肿瘤细胞耐药的机制可能与其通过催化神经酰胺糖基化从而影响凋亡相关基因的表达有关.
关键词： 急性白血病 耐药 葡萄糖神经酰胺合成酶基因 Bcl-2基因 bax基因 -
巴曲酶对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡的时间效应关系研究
目的:研究巴曲酶对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元凋亡的影响及时间效应关系,探讨其可能的作用机制.方法:采用双侧颈总动脉夹闭5 min后再通建立沙土鼠前脑缺血再灌注的损伤模型,在不同时间点腹腔注射巴曲酶(8 BU/kg)对其进行治疗,运用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP-生物素切口末端标记法(TUNEL)及免疫组织化学方法,检测沙土鼠海马CA1区神经元中的TUNEL染色阳性细胞数及凋亡相关基因Bcl-2、Bax免疫反应阳性细胞数.结果:治疗组TUNEL染色阳性细胞数明显减少,与对照组之间差异有显著性(P＜0.05);与对照组相比,治疗组海马CA1区Bcl-2表达明显增加,Bax表达降低,尤以缺血再灌注前6 h、即刻、缺血再灌注后1、3及6 h明显(P＜0.01).结论:巴曲酶可减少脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡,发挥脑保护作用,其作用存在明显时效关系,机制可能是增强Bcl-2的表达及抑制Bax的表达有关.
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降压药物对未成年自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增生与凋亡及相关基因蛋白的影响
目的观察不同种类降压药物对未成年自发性高血压大鼠(SHR)主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增生和凋亡的影响,探讨其在高血压早期血管重塑中的作用和意义.方法 36只4周龄SHR,按随机化区组设计分成6组,分别应用普萘洛尔(50 mg·kg-1·d-1)、依那普利(30 mg·kg-1·d-1)、硝苯地平(35 mg·mg·kg-1·d-1)干预6周.另设一对照组,采用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞;用免疫组化法检测Bcl-2、Bax基因蛋白;光镜下观察主动脉组织学改变.结果 (1)依那普利、硝苯地平和缬沙坦组VSMC凋亡指数(SMCAI)显著增高(P＜0.01),而普萘洛尔、双氢氯噻嗪组与对照组相比较无显著性差异(P＞0.05).(2)依那普利和缬沙坦组Bcl-2基因表达较对照组显著下降(P＜0.01),硝苯地平组也显著下降(P＜0.05),而普萘洛尔、双氢氯噻嗪组与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).(3)缬沙坦组Bax基因表达较对照组显著增高(P＜0.01),余4组与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).(4)依那普利、硝苯地平和缬沙坦组Bcl-2/Bax较对照组显著下降(P＜0.01),而普萘洛尔、双氢氯噻组与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).(5)光镜下观察到依那普利、硝苯地平和缬沙坦组SMC细胞核排列整齐,内膜光整;普萘洛尔、双氢氯噻嗪组与对照组SMC细胞核排列紊乱,胶原纤维增生明显.结论降压药物对未成年SHR主动脉血管平滑肌凋亡的影响显著不同,揭示降压药物影响血管重塑的机制不同及其早期干预血管重塑可能是通过调节血管平滑肌增生与凋亡的平衡来实现的.
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Bax基因在紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡过程中作用的研究
目的:观察bax基因在紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡过程中的表达.方法:将不同浓度的紫杉醇作用于HL-60细胞,用RT-PCR法检测药物孵育前后bax基因的表达水平.结果:在紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡过程中bax基因的表达水平上升,并显示剂量效应.结论:bax基因参与紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡的基因调控.
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荧光定量PCR法对糖尿病大鼠肾脏BAX基因表达的检测
目的:对单肾切除糖尿病大鼠肾脏中BAX基因mRNA的拷贝数进行精确定量,以探讨糖尿病肾病的发病机制.方法:以SYBR Green Ⅰ作为定量检测中荧光染料,采用实时荧光定量PCR法,对单肾切除糖尿病模型组和单肾切除对照组大鼠肾脏中BAX基因的转录水平进行检测.结果:糖尿病模型组中BAX转录拷贝数明显高于对照组.结论:糖尿病大鼠肾脏中存在BAX基因的转录异常,细胞凋亡亢进可能参与糖尿病肾病的发生发展.
关键词： 实时荧光定量聚合酶链反应 糖尿病肾病 bax基因 -
两元腺病毒载体系统转移bax基因诱导肝癌细胞凋亡的研究
目的采用两元腺病毒载体系统,介导bax基因转移至培养的肝癌细胞SMMC-7721,探讨腺病毒介导转移bax基因抗肝癌的活性.方法常规方法在293细胞中扩增腺病毒Ad/GT-Bax和Ad/PGK-GV16,CsCl密度梯度离心法纯化病毒后测定病毒滴度.结果(1)Bax蛋白表达情况:感染Ad/GT-Bax和Ad/PGK-GV16的SMMC-7721细胞,其在24、48和72小时的Bax蛋白表达量依次为阴性对照细胞的2.5、3.1和3.9倍;(2)PI染色后,感染Ad/GT-Bax和Ad/PGK-GV16的SMMC-7721细胞出现亚二倍体峰,该峰面积占总面积的值在24、48、72小时时依次为31.65%、50.44%和61.81%.结论两元腺病毒载体系统介导转移Bax基因可诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡,可望成为治疗肝癌的有力工具.
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慢性胃炎胃粘膜上皮细胞中bax、fas、p16基因的表达
目的:探讨bax、fas和p16在胃粘膜病变发生发展过程中的作用及意义.方法:应用免疫组织化学方法,检测慢性浅表性胃炎(CSG)和轻、中、重度慢性萎缩性胃炎(CAG)患者胃粘膜上皮细胞中bax、fas(促凋亡基因)和p16(增殖负调控基因)基因蛋白的表达情况.结果:CSG和轻、中、重度CAG胃粘膜中bax的表达率分别为41.75%、72.41%和78.26%,fas的表达率分别为39.81%、65.52%和78.26%,p16的表达率分别为9.71%、24.14%和30.43%.轻、中、重度CAG与CSG比较,bax、fas、p16的表达差异有显著性意义P<0.05～0.01.轻、中、重度CAG间比较,差异无显著性意义.结论:bax、fas和p16的高表达,使得细胞增殖/凋亡的比例失衡,在胃粘膜病变的发生发展中可能有重要意义.
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子宫内膜癌中细胞凋亡和bcl-2、bax基因的表达
目的 探讨细胞凋亡及其调控基因bcl-2、bax在子宫内膜癌变过程中的作用.方法 应用免疫组织化学S-P法和TUNEL技术,对子宫内膜腺癌癌变过程各级病变组织中细胞凋亡、bcl-2和bax蛋白进行测定.结果 正常增生期子宫内膜有偶发凋亡,子宫内膜增生症和子宫内膜腺癌的细胞凋亡率分别为0.6%和2.8%.bcl-2蛋白在正常增生期子宫内膜、子宫内膜增生症和子宫内膜腺癌的表达率分别为100%、74.4%和52.1%.bax蛋白表达于所有被检组织.细胞凋亡率、bcl-2表达率及bax蛋白表达强度与子宫内膜癌分化有关,bcl-2表达率与细胞凋亡率呈负相关,bax蛋白表达强度与细胞凋亡率呈正相关.结论 细胞凋亡及凋亡基因bcl-2、bax参与子宫内膜癌的发生发展过程,且表达水平的不同有助于评估预后.
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人bax基因逆转录病毒表达载体的构建及其在Hela细胞中的表达
[目的]构建带有报告基因EGFP的bax基因逆转录病毒表达载体,建立高表达bax基因的Hela细胞.[方法]通过RT-PCR方法从Hela细胞克隆bax基因,根据基因工程原理,经PCR、酶切等方法构建bax基因和报告基因EGFP双基因逆转录病毒表达载体pLBaxSN-IRES2-EGFP,转染Hela细胞后,荧光显微镜和Western Blotting检测bax基因的表达情况.[结果]成功构建了带有EGFP的bax基因的逆转录病毒表达载体,并将其转入Hela细胞.[结论]成功建立的高表达bax基因的Hela细胞株,为探讨bax基因与放射敏感性之间的关系奠定了基础.
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创伤性颅脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因表达的实验研究
目的 探讨不同程度颅脑损伤后bcl-2、bax基因表达与细胞凋亡的关系。方法 将100只SD大鼠分为轻、中、重度损伤组和对照组，通过改进的Feeney自由落体损伤装置制作脑损伤模型，然后用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法以及免疫组织化学方法，对各组大鼠脑组织中的凋亡细胞和bcl-2、bax免疫反应阳性细胞进行检测和统计。结果 各损伤组大鼠脑组织中凋亡细胞标记指数(LI)明显高于未损伤的对照组(均P＜0.05)，bcl-2、bax阳性细胞LI也有所增加(均P＜0.05)，同时，各损伤组bax/bcl-2阳性细胞LI的比值均大于对照组(均P＜0.05)；轻度、中度组与重度组之间各项指标的差别大多有显著性意义，损伤程度重者指标升高明显。结论 bcl-2和bax表达的比例对颅脑损伤后促进细胞凋亡可能起重要的调控作用，其表达水平与损伤程度成正比。
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抑制Bax基因表达与细胞保护的研究进展
细胞凋亡是基因控制的细胞死亡,与多种生理和病理过程有关.Bax蛋白是细胞凋亡通路中的促凋亡成员,有6种亚型,抑制其表达或功能可增强细胞的抗凋亡作用,有利于细胞的保护和存活.本文就近年来影响Bax蛋白的多种因素,Bax基因敲除后生物效应和以Bax-mRNA为靶点的反义核苷酸的研究进展作一概述.
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蒜氨酸+蒜酶抗肿瘤及其机制的研究
大蒜制剂、大蒜提取物和大蒜提取成分的抗肿瘤作用已有广泛的研究[1].蒜氨酸( Alliin,2-烯丙基半胱氨酸亚砜)为大蒜活性成分的主要前体物质,蒜氨酸在蒜氨酸酶(Alliinase,EC 4.4.1.4)的催化作用下产生大蒜辣素(Allicin,二烯丙基硫代亚磺酸酯).本课题组发现蒜氨酸+蒜氨酸酶生成的大蒜辣素13 h内基本稳定.据此,本文采用MGC-803和HeLa肿瘤细胞株,利用蒜氨酸+蒜氨酸酶生成的大蒜辣素研究其体外的抗肿瘤作用及其作用机制.
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18氟-脱氧葡萄糖诱导Lewis肺癌细胞凋亡的实验研究
目的:观察不同浓度18氟-脱氧葡萄糖(18F-FDG)对Lewis肺癌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:指数生长期Lewis肺癌细胞分为18F-FDG实验组(为92.5×104 Bq/ml组、185×104 Bq/ml组、370×104 Bq/ml组和740×104 Bq/ml组)和对照组,应用光镜、电镜、流式细胞术(flow cytometry,FCM)和免疫组化技术检测不同浓度18F-FDG作用于体外培养的Lewis肺癌细胞后,诱导脂质氧化、细胞凋亡及bcl-2和bax基因表达情况.结果:18F-FDG能诱导Lewis肺癌细胞产生凋亡形态学变化,随着18F-FDG 浓度增加,脂质氧化增强、细胞凋亡率增加、bcl-2表达减弱、bax表达增强(P＜0.01).结论:18F-FDG 能诱导Lewis肺癌细胞凋亡,且凋亡具有剂量依赖性.
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Bcl-2、Bag-1、Bax在乳腺浸润性导管癌中的表达
目的：探讨Bcl-2、Bag-1、Bax表达对乳腺浸润性导管癌影响。方法采用SP免疫组化染色法检测收集128例患者癌组织和癌旁组织中的Bcl-2、Bag-1、Bax表达情况。结果经过检测，癌组织中Bcl-2、Bag-1、Bax表达的阳性率分别为73．4％、89．8％、80．5％，明显高于癌旁组织中Bcl-2、Bag-1、Bax的表达率57％、59．4％、65．6％。经过统计学检验后差异具有统计学意义（P＜0．05）；经过卡方检验Bcl-2、Bag-1、Bax阳性表达与各个病理参数的相关性检验，得出Bcl-2、Bag-1与肿瘤的直径有关（P＜0．05）。相关性分析得出，Bcl-2、Bag-1呈现正相关性（r＝0．63，P＜0．05）。结论 Bcl-2、Bag-1在乳腺浸润性导管癌中高表达，起着重要的作用。
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口腔癌凋亡相关基因bcl-2、bax表达的初步研究
目的探讨凋亡相关基因bcl-2及bax基因在口腔癌的表达情况。方法 60例口腔癌的组织切片标本。bcl-2单克隆抗体、bax多克隆抗体,SP免疫组织化学染色法。结果 60例中,bcl-2阳性率为68.33%;bax阳性36.67%。颈淋巴结转移组的阳性率为38.71%,无颈淋巴结转移组的阳性率为34.48%(P>0.05)。病理分级中,高分化组的bax阳性率为60%,中分化组为41.67%,低分化组为17.86%,高中分化组与低分化组差异有显著性(P<0.05〉。结论 bcl-2和bax在分化较好的早期肿瘤细胞中表达较多,随着分化程度的降低,bcl-2及bax表达率也降低。
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不同剂量X线大分割照射对大鼠小肠的近期生物学效应
目的 观察腹部大分割照射后大鼠小肠的形态学变化,并检测细胞凋亡基因Bax、Bcl-2的表达情况.方法 将80只大鼠随机分为5组:空白对照组(0 Gy);4 Gy组(连续照射5次,每天1次);6 Gy组(照射3次,隔天1次);8 Gy组(照射2次,一周2次);12 Gy组(照射1次);各组于照射后第1、3、5、7天分别断头处死4只,取空肠组织,进行HE染色及免疫组化染色,光镜下观察病理变化,并检测Bax和Bcl-2的表达情况.结果 与空白对照组比较,12 Gy、8 Gy照射组大鼠小肠黏膜损伤重,4 Gy照射组次之,6 Gy照射组损伤较轻;所有照射组小肠Bax和Bcl-2基因表达水平均下降,与空白对照组相比有显著统计学差异(P＜0.001),而不同照射剂量组间比较无统计学差异(P=0.101).结论 采用等效生物剂量为32 Gy的不同分割方式照射大鼠小肠后,小肠黏膜均出现不同程度损伤,而细胞凋亡基因Bax、Bcl-2表达水平均出现下降.
