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Bax过表达对培养人视网膜色素上皮细胞bak和bcl-xl表达的影响
目的观察bak和bcl-xl在正常培养和经bax转染后的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中的表达.方法采用脂质体对正常培养人RPE细胞进行bax基因的转染,筛选阳性转染的细胞.实验分为正常细胞组,空载体组和基因转染组.运用抗bak和bcl-xl的多克隆抗体进行免疫细胞化学染色,观察两种基因在RPE细胞中的表达的变化.结果bak和bcl-xl各组细胞中都存在阳性表达.bak在三组细胞中的染色光密度分别为56.4±5.7,52.3±5.1和75.4±7.5,其中转基因组的染色强度高于正常和空载体组(P<0.05).bcl-xl在三组细胞中的染色光密度分别为32.4±4.7,29.5±4.2和28.7±4.3,染色强度在三组之间没有明显差别(P>0.05).结论bak和bcl-xl在正常人RPE细胞中存在表达.bax转染可以促进细胞bak的表达,这可能是其诱导RPE细胞凋亡的机制之一.
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喉癌组织Bc1-2和Bax基因蛋白表达及其临床相关性研究
目的探讨喉癌组织Bc1-2和Bax基因蛋白表达与喉癌发生、发展的关系.方法采用免疫组化SP法测定5例正常人声带组织和73例喉癌组织标本中Bc1-2和Bax基因蛋白表达.结果喉癌组织中Be1-2基因蛋白表达阳性检出率45.2%,喉癌组织中Bax基因蛋白达阳性检出率60.3%,与正常人相比,均无显著性差异(P＞0.05).喉癌组织中Bc1-2及Bax基因蛋白的表达呈明显的负相关关系,r值-0.71,P＜0.05.结论喉癌组织中Bc1-2和Bax基因蛋白表达的失调可能与喉癌的发生、发展有关.
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牛蒡子苷元对人食管癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究
目的:观察牛蒡子苷元(arctigenin,ARG)对体外培养的人食管癌细胞(esophageal cancer-1 cells,EC-1)增殖和凋亡的影响.方法:将不同浓度的ARG作用于EC-1,噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测细胞增殖抑制率、流式细胞术测定细胞周期变化,免疫组化法测定增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)表达水平；将不同浓度的ARG作用于EC-1,流式细胞术检测细胞凋亡率、琼脂糖凝胶电泳和DNA缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick-end labeling technique,TUNEL)来检测细胞凋亡,免疫组化检测Bcl-2、Bax凋亡基因表达水平.结果:与对照组比较,ARG对EC-1细胞生长有抑制作用,随着时间/浓度的增加抑制作用逐渐增强(P＜0.05)；ARG可抑制EC-1由G0/G1向S期转换,G0/G1期细胞百分率较对照组显著增加,S期细胞百分率显著降低；随ARG浓度增加EC-1内PCNA表达水平逐渐降低.随ARG浓度增加,EC-1细胞凋亡率和凋亡指数显著增加(P＜0.05)；随ARG浓度增加,Bcl-2表达逐渐减弱,Bax表达逐渐增强(P＜0.05).结论:ARG有抑制EC-1增殖,下调EC-1内PCNA表达水平,阻滞细胞周期的作用.ARG可明显诱导EC-1细胞凋亡可能与ARG调控Bcl-2,Bax基因表达有关.
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醛固酮对大鼠主动脉bax基因表达的影响
目的 研究醛固酮对大鼠主动脉bax基因表达的影响.方法 32只SD大鼠随机分为空白对照组、腺瘤组、腺瘤+依普利酮组和腺瘤+肼苯哒嗪组.在每只大鼠皮下埋植的微量渗透泵内注入空白溶剂或醛固酮.8周后通过免疫组化、RT-PCR和Western 印迹检测主动脉bax基因的表达.结果 与对照组相比,腺瘤组大鼠主动脉bax mRNA和蛋白表达都显著上调(P＜0.05);依普利酮能够抑制醛固酮对bax基因的诱导作用(P＜0.05);而肼苯哒嗪虽然可以使大鼠收缩压下降,但不能阻止醛固酮对bax基因的作用.结论 醛固酮通过诱导bax基因表达,调节血管平滑肌细胞凋亡和干预细胞周期进程,可能是其导致血管重构的机制之一.
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凋亡相关基因caspase-9,bax及bcl-2在大肠癌中的表达及其意义
目的探讨凋亡相关基因caspase-9,bax和bel-2在大肠癌中的表达及其在大肠癌发生、发展中的可能作用及相互关系.方法应用免疫组化S-P法检测20例正常大肠黏膜、48例大肠腺瘤及56例大肠癌中的caspase-9、bax和bcl-2蛋白的表达.用TUNEL法检测细胞凋亡.结果正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌中caspase-9的阳性表达率分别为5.00%、33.33%、64.29%,其表达率在三者间差异有显著性(P＜0.01).bax在三种组织中的表达率分别为5.00%、35.42%、62.50%,三者间差异有显著性(P＜0.01).bel-2在三者中的阳性表达率分别为15.00%、87.50%、60.71%,三者间差异亦有显著性(P＜0.01).caspase-9,bax和bcl-2的表达与大肠癌的分化程度有关(P＜0.01),与Dukes分期无关(P＞05).正常大肠黏膜、腺瘤和大肠癌中细胞凋亡指数差异有显著性(P＜0.01),细胞凋亡指数与肿瘤的分化程度有关(P＜0.01),与Dukes分期无关(P＞0.05).caspase-9、bax和bcl-2的表达与细胞凋亡指数有密切联系(P＜0.01).结论肿瘤早期阶段的细胞凋亡异常,可能是大肠癌的发病原因之一.bcl-2和bax通过调节caspase-9参与大肠癌的发生.
关键词： 大肠癌 细胞凋亡 caspase-9基因 bax基因 Bcl-2基因 -
急性心肌梗死心肌细胞中Bax和Bcl-2基因的mRNA表达量及其与凋亡的关系
目的:探讨急性心肌梗死心肌细胞中Bax和Bcl-2基因的mRNA表达量及其与凋亡的关系.方法:新西兰兔48只,随机分为不结扎冠状动脉的正常对照(oh)及结扎冠状动脉后1 h,2 h,3 h,4 h,6 h,8 h及12 h共8组.TUNEL法检测梗死区心肌细胞凋亡,逆转录PCR法检测Bax和Bcl-2基因在心肌细胞中的 mRNA表达量,探讨它们之间的相互关系.结果:兔梗死区心肌细胞凋亡千分率在冠状动脉结扎后1 h开始增多,4 h达高峰,其后逐渐下降,到12 h降至正常.Bax基因mRNA的表达量在冠状动脉结扎后2 h开始升高,4 h达高峰,持续6 h后逐渐下降,至12 h接近正常.Bcl-2基因mRNA表达量在冠状动脉结扎后2 h开始明显下降,4 h达低点,持续2 h后开始回升,到12 h时已恢复到比正常高的水平.两种基因mRNA表达量的对数值之间呈负相关,心肌细胞凋亡数与Bac/Bcl-2基因mRNA比值呈正相关.结论:兔梗死区心肌细胞存在明显的凋亡现象,Bax基因使其上调、Bcl-2基因使其下调,Bax/Bcl-2基因mRNA表达比值调控细胞凋亡.
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福辛普利对自发性高血压大鼠心室重塑时左室心肌细胞凋亡和Bcl 2及BaX基因表达的影响
目的:研究福辛普利对自发性高血压大鼠(SHR)左室心肌细胞凋亡和Bcl 2、Bax基因表达的影响.方法:①使用左室重量指数作为大鼠左室重构的指标;②使用末端脱氧核苷酸转移酶标记技术和DNA电泳技术,研究心肌细胞凋亡的发生情况;③使用核酸原位杂交技术研究左室心肌细胞Bcl2、Bax基因表达的变化.结果:①福辛普利使SHR左室重量指数显著降低,由3.31±0.17下降至2.56±0.25,P＜0.05;②福辛普利能显著减少左室心肌细胞凋亡的发生[(214±28)下降至(54±11)个凋亡细胞/105细胞,P＜0.01];③福辛普利能显著增加细胞Bc12基因的表达,同时减少Bax的基因表达.福辛普利使切片的Bcl2与Bax基因表达阳性面积百分数之比恢复正常(均P＜0.01).结论:血管紧张素转换酶抑制剂能有效地抑制心室重塑的发生以及此过程中的心肌细胞凋亡;福辛普利使心肌细胞Bcl2及Bax基因表达阳性面积百分数之比恢复正常是其抗细胞凋亡作用的一个机制.
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急性心肌梗死延迟再灌注后心肌细胞凋亡与bcl-2和bax基因mRNA表达的研究
目的:探讨犬实验性心肌梗死延迟再灌注(LR)后对梗死周边缺血区心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA表达的影响.方法:健康成年杂交犬28只全麻下常规开胸暴露冠状动脉后随机分为3组:假手术(SHAM)组(8只),急性心肌梗死(AMI)组(10只),LR组(10只).SHAM组仅行左冠状动脉前降支下穿过丝线而不结扎冠状动脉,AMI组行左冠状动脉前降支高位永久结扎,LR组在高位结扎左冠状动脉前降支6h后松解结扎线予以再灌注6h.共有23只犬模型制作成功.各组犬均于术后12h处死,采集心肌标本.使用脱氧脲核苷酸缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡,计算心肌细胞凋亡指数(AI).逆转录聚合酶链反应法检测心肌细胞中bcl-2和bax mRNA表达水平,以β-actin作为内参照.结果:LR组心肌细胞AI较AMI组明显减少(P＜0.05).与SHAM组相比,bcl-2和bax mRNA在AMI组和LR组的表达均升高(P＜0.01),但bcl-2 mRNA在该2组间差异无统计学意义(P＞0.05);而bax mRNA在AMI组的表达较LR组明显增高(P＜0.05).结论:AMI后LR可以减少梗死周边缺血区心肌细胞凋亡,其机制可能与降低心肌细胞bax mRNA的表达有关.
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姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝脏bax和bcl-2表达的影响
[目的]探讨姜黄素(curcumin,CUR)对大鼠肝纤维化的防治作用及对肝组织bax和bcl-2蛋白及基因表达的影响.[方法]建立CCl4致大鼠实验性肝纤维化模型.用免疫组化法比较正常组、模型组以及CUR组的bcl2、bax蛋白的表达,用RT-PCR法比较各组肝组织bcb-2、bax mRNA的表达.[结果]CUR组肝组织炎症和纤维化程度较模型组显著减轻.bax蛋白主要表达在肝细胞质,而纤维间隔及汇管区呈低表达;beb-2主要表达在纤维间隔及汇管区.bax及bcl-2在模型组及CUR组表达均高于正常组(P<0.01),CUR组均较模型组降低(P<0.01).bax及bcI-2 mRNA在模型组及CUR组表达比正常组增高(P<0.01,<0.05),CUR组均较模型组降低(P<0.05).[结论]CUR可能通过降低肝细胞表达bax、减少肝细胞凋亡而减轻肝脏损伤,通过降低bcl-2表达、诱导肝星状细胞凋亡发挥减轻肝纤维化的作用,防治大鼠肝纤维化.
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健脾理气方对小鼠HAC肝癌细胞凋亡和bax基因蛋白表达影响的实验研究
目的:探讨健脾理气方对HAC肝癌细胞凋亡及bax基因蛋白表达的影响.方法:建立小鼠HAC肝癌荷瘤模型,随机分3组,称瘤重,计算抑瘤率.用TUNEL法和电镜检测肿瘤细胞凋亡,用免疫组化法检测bax基因蛋白表达水平.结果:中药组和化疗组瘤重均低于对照组(P＜0.01),抑瘤率分别为41.6%和43.0%.其凋亡指数较对照组明显升高(P＜0.01).电镜检测发现凋亡细胞发生特征性形态学改变.对照组bax基因蛋白无强阳性表达,中药组和化疗组均强阳性.结论:健脾理气方能诱导HAC肝癌细胞凋亡并上调肿瘤细胞bax基因蛋白表达,可能是该方抗癌机制之一.
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增生性瘢痕中凋亡相关基因转录的变化
目的探讨凋亡相关基因bcl-2、bax、p53和c-myc在不同形成时期的增生性瘢痕中的基因转录变化.方法提取16例不同发生时期的增生性瘢痕和8例正常皮肤的总RNA后,分离mRNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测bcl-2、bax、p53和c-myc基因在不同组织中的表达.结果在增殖期的瘢痕中,凋亡促进基因bax、c-myc和p53的表达量分别是正常皮肤的(62.8±14.7)%、(78.0±17.0)%和(49.8±4.3)%,基因表达明显降低(P<0.05),而在成熟期的瘢痕中,这3种基因的表达量都明显高于增殖期的瘢痕,恢复到正常皮肤水平.在正常皮肤中,bcl-2基因表达水平较低,而在增殖期和成熟期的增生性瘢痕中表达量都显著升高(P<0.05).结论 bax、c-myc和p53基因表达降低,bcl-2基因表达增强可能是瘢痕中细胞凋亡减少,形成增生性瘢痕的机制之一,而bax、c-myc和p53基因表达增强可能与瘢痕达到成熟状态有关.
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肝脏低温保存-再灌注期间肝细胞凋亡及其与Bax基因蛋白相关性的研究
目的 研究临床肝移植过程中供肝低温保存-再灌注期间肝细胞凋亡及其相关机制。方法 应用细胞凋亡原位末端标记法并结合电镜观察,检测低温保存时间分别为0(A 组)、3(B组)、6(C组)、9(D组)h的4组兔肝脏在低温保存-再灌注过程中肝细胞凋亡情况。同时,对各组肝脏再灌注前后肝细胞内Bax基因蛋白表达进行测定。结果 [ HT5”SS〗A、B、C、D各组肝脏于低温保存后的再灌注60 min时,组织内可见明显的肝实质细胞凋亡；其凋亡细胞数量(1×10-2个/μm2)分别为：1.21±0.84、4.38±1.14 、7.24±2.39、11.39±3.36；且4组间差异均有显著性(P＜0.05或P＜0.01 )。此外, 4组肝脏组织内均有程度不等的Bax蛋白表达，阳性物质主要分布于肝实质细胞浆内；定量结果显示，4组Bax阳性细胞数及阳性物质积分吸光度值依次为：1.18±0.84、737.04 ±45.57，3.21±1.30、1 006.58±70.10，6.56±1.14、1 401.16±106.93，11.18±1.92 、1 797.23±130.73；各组间差异均有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。结论 肝实质细胞凋亡明显参与了肝脏低温保存-再灌注损伤过程,这种肝实质细胞凋亡可能受Bax基因蛋白的调节。
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放疗联合pGL3/EGR1-Bax基因促进肺癌H460细胞凋亡及Bax基因表达的研究
目的 探讨重组质粒pGL3/EGR1-Bax基因联合放射治疗对肺癌H460细胞的凋亡作用及对Bax基因表达的影响.方法 将pGL3/EGR1-Bax质粒转染肺癌H460细胞,分组进行射线照射.RT-PCR检测各组细胞Bax基因的表达,蛋白免疫印迹检测Bax蛋白的表达;用流式细胞仪检测各组H460细胞凋亡情况.结果 经酶切鉴定pGL3/EGR1-Bax重组质粒构建正确,基因联合放疗能促进Bax基因及蛋白的表达(与对照组比P＜0.01,与空载体放疗组比P＜0.05);基因放射治疗组H460细胞凋亡率明显高于对照组及空载体放疗组(P＜0.01,P＜0.05).结论 射线可通过诱导pGL3/EGR1-Bax重组质粒中Bax基因在肺癌H460细胞表达增强,从而显著提高H460细胞的凋亡率,为临床肺癌的基因放射治疗奠定实验基础.
关键词： pGL3/EGR1-Bax重组质粒 bax基因 H460细胞 凋亡 放疗 -
bax基因对人BcaCD885颊癌细胞凋亡的影响
目的 探讨bax基因对人BcaCD885颊癌细胞凋亡的影响.方法 转染人bax-α基因重组质粒及对照质粒于BcaCD885细胞中.通过HE染色光镜观察对细胞形态学进行检测;通过TUNEL原位末端标记及流式细胞术对细胞凋亡进行定性、定量检测.结果 bax质粒转染组BcaCD885细胞出现凋亡的形态学改变,TUNEL阳性红染凋亡细胞数量增多,凋亡小体出现,其细胞凋亡率与空白对照组及对照质粒转染组之间存在极显著差异(P＜0.01).结论 bax-α基因重组质粒能促进BcaCD885细胞发生凋亡.
关键词： bax基因 BcaCD885细胞 细胞凋亡 -
肺癌组织Bax的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系
目的 探讨Bax基因在肺癌中的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系.方法 对38例肺癌组织及21例肺部良性组织,应用TUNEL技术对细胞凋亡情况进行了检测,应用免疫组织化学法对Bax蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)进行检测.并分别定义凋亡指数和增殖指数.结果 肺癌组织Bax蛋白及PCNA的表达明显高于肺部良性组织,P＜0.01;肺癌组织中凋亡指数和增殖指数均高于肺部良性组织,P＜0.01;而Bax阳性肺癌组织中的凋亡指数明显高于Bax阴性肺癌组织P＜0 .01;结论 Bax蛋白在肺癌中的表达率较高,同时在肺癌中细胞凋亡和细胞增殖亦较活跃;Bax蛋白过度表达促进细胞凋亡.
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转染Bax基因提高BcaCD885颊癌细胞热敏感性的研究
目的:探讨Bax基因对BcaCD885颊癌细胞热敏感性的影响.方法:采用脂质体Lipofectamine 2000转染人Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α于人颊癌细胞株BcaCD885细胞中,再对细胞进行43 ℃ 40 min水浴加温处理,用流式细胞仪检测BcaCD885细胞的凋亡率及Bax蛋白的表达水平;用RT-PCR技术检测BcaCD885细胞的Bax mRNA的表达水平.结果:Lipofectamine 2000能将人Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α导入BcaCD885颊癌细胞中,Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α能在BcaCD885颊癌细胞中表达,提高BcaCD885颊癌细胞内Bax 蛋白质及mRNA的水平,促进热诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡的发生.结论:转染Bax基因于BcaCD885颊癌细胞内,能提高细胞对热杀伤的敏感性.
关键词： bax基因 BcaCD885细胞 热敏感性 -
熊果酸对结肠癌细胞作用机制的初步研究
目的:探讨熊果酸对结肠癌细胞株HT-29凋亡的作用机制.方法:不同浓度的熊果酸处理HT-29细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色检测熊果酸对HT-29细胞的增殖抑制效应,采用形态学、TUNEL法、流式细胞术检测细胞凋亡的发生,应用免疫组织化学法检测凋亡相关基因caspase-9,bax表达的变化.结果:熊果酸对HT-29细胞有中度增殖抑制效应,HT-29细胞出现显著的细胞凋亡征象:TUNEL显示细胞固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体.流式细胞术检测在G1期之前出现sub-G1峰,凋亡率高为11.63%,熊果酸的作用具有浓度和时间依赖性.细胞凋亡过程中,凋亡相关基因caspase-9和bax的表达逐渐增强.结论:熊果酸通过促进caspase-9的活化、上调bax的表达,对HT-29细胞具有凋亡的作用.
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当归对心肌梗塞后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响
目的:探讨当归对大鼠心肌梗塞后梗塞灶边缘区心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响. 方法: 雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)﹑心梗组(MI组)﹑当归干预组(MI+Angelica 组).经结扎大鼠冠状动脉左前降支制备心肌梗塞模型,MI+Angelica 组于造模24 h后,每日每只大鼠腹腔注射50%当归注射液3.5～4.0 ml(含生药量1.75～2 g),MI组和Sham组注射同等剂量的生理盐水,术后1, 2, 3, 4周处死动物.分别采用TUNEL染色及免疫组织化学法检测心肌细胞凋亡数﹑心肌细胞凋亡加速基因Bax和凋亡抑制基因Bcl-2的蛋白表达水平.结果:① MI组和MI+Angelica组梗塞灶边缘区均有心肌细胞凋亡; 但MI+Angelica组心肌细胞凋亡数明显低于MI组(P< 0.01); ②与Sham组相比,MI组和MI+Angelica组Bax和Bcl-2基因的蛋白表达均明显升高,加入当归干预后,进一步增加Bcl-2基因的表达(与MI组比, P< 0.01),明显抑制Bax基因的表达(与MI组比, P< 0.01).结论:心肌梗塞后梗塞灶边缘区有大量的心肌细胞凋亡,当归通过上调凋亡抑制基因Bcl-2和下调凋亡加速基因Bax的表达, 而抑制该区的心肌细胞凋亡, 进而减少梗塞灶边缘区心肌细胞的坏死, 有助于心肌梗塞的治疗和预防心肌梗塞后并发症的发生.
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血管紧张素Ⅱ调控bax、bcl-2 mRNA表达诱导血管内皮细胞凋亡
目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导细胞凋亡的机制.方法健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第3代,用不同浓度AngⅡ作用18 h,用TUNEL和ELISA检测AngⅡ能否诱导细胞凋亡及其量效关系;用RT-PCR检测bax和bclA-2的mRNA表达.结果AngⅡ与2型血管紧张素Ⅱ受体(AT2)激动剂CGP42112A一样可以诱导血管内皮细胞凋亡;并且凋亡强度与Ang Ⅱ呈典型的剂量依赖关系.在AngⅡ与CGP4211A作用18 h后,bax mRNA显著增加,bcl-2 mRNA显著减少.结论AngⅡ通过在转录水平调节bax和bcl-2 mRNA的表达,从而诱导血管内皮细胞凋亡.
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低氧预适应对大鼠脑缺血再灌注Bcl-2、Bax mRNA及其蛋白表达的影响
目的探讨低氧预适应(8%O2,3 h)对大鼠大脑中动脉缺血3 h再灌注后不同时间脑梗死体积、神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax mRNA及其蛋白表达的影响.方法低氧预适应后12 h制作脑缺血再灌注模型.在大鼠大脑中动脉缺血3 h再灌注后不同时间进行脑梗死体积测定(TTC)和原位细胞凋亡检测(TUNEL),通过Northern blot检测脑组织中Bcl-2、Bax mRNA的表达以及免疫组化检测Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果低氧预适应组的脑梗死体积、神经细胞凋亡、Bax的表达较缺血再灌注组明显减少;Bcl-2的表达明显增高.结论低氧预适应可减少大脑中动脉缺血3 h再灌注后梗死体积,增强Bcl-2及减少Bax的表达,抑制神经细胞的凋亡可能是其脑保护机制之一.
