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褪黑素对小鼠肝癌细胞凋亡及自然杀伤细胞活性的影响
目的探讨褪黑素(MLT)在体内对H22肝癌细胞凋亡及免疫调节作用的影响及其机制.方法应用免疫组织化学染色方法及原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)对Bcl-2、Bax的表达及凋亡细胞进行检测,MTT比色法检测脾细胞NK杀伤活性.结果实验发现MLT治疗组、预防组及5-Fu组Bcl-2和Bax的表达及凋亡细胞数明显高于生理盐水组(P＜0.01).Bax/Bcl-2比例在MLT预防组大.NK杀伤活性在MLT治疗组、预防组较其它组明显增高(P＜0.05).结论MLT在体内有促进肿瘤细胞凋亡的作用,且可使NK杀伤活性增高,推测Bcl-2、Bax和机体的免疫系统参与了褪黑素的抗肿瘤作用.
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脑膜瘤bcl-2,baX,Ki-67的表达及意义
采用免疫组化方法检测67例脑膜瘤组织中bcl-2,bax,Ki-67的表达,探讨其表达与脑膜瘤组织学分级、复发及预后的关系.结果发现:良性复发组bcl-2表达显著高于良性无复发组、不典型组、恶性组(P＜0.01);恶性脑膜瘤bax的表达高于良性无复发组(P＜0.05);Ki-67表达在良性有无复发组间未见显著差异(P＞0.05),不典型组与良性组间差异有显著性(P＜0.05),恶性组与良性组差异有极显著性(P＜0.01).提示:过表达bcl-2的脑膜瘤患者预后差、有潜在复发的可能;bax在诱发恶性脑膜瘤细胞的凋亡及加速其坏死等方面具有重要作用;Ki-67标记指数(Ki-67LI)不仅可作为评价脑膜瘤组织学分级的客观量化指标,也可作为评估其术后复发及恶变指标之一.
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培多普利对自发性高血压大鼠心室重塑过程中左室心肌细胞凋亡和Bcl2、BaX基因表达的影响
为研究培多普利对自发性高血压大鼠(SHR)左室心肌细胞凋亡和Bcl2、Bax基因表达的影响,采用TUNEL技术及DNA电泳研究心肌细胞凋亡;原位杂交研究Bcl2、Bax基因表达.结果显示:培多普利①抑制左室心肌细胞凋亡发生,②使Bcl2/Bax基因表达比率恢复正常.提示:培多普利使SHR心肌Bcl2/Bax表达比率恢复正常是其抑制心室重塑过程中心肌细胞凋亡的重要机制.
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紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及基因调控的研究
目的探讨紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡的基因调控机制.方法用紫杉醇诱导卵巢癌细胞HO-8910细胞凋亡,采用荧光染色,透射电镜,流式细胞仪,蛋白免疫印迹等方法进行检测和观察.结果卵巢癌细胞在紫杉醇作用下,首先表现为G2/M期阻滞,一定时间后出现细胞凋亡.凋亡抑制基因bcl-2在细胞凋亡过程中低表达而促凋亡基因bax呈高表达.结论紫杉醇可诱导卵巢癌细胞凋亡,bcl-2和bax基因在紫杉醇诱导的卵巢癌细胞凋亡中可能起着重要的调控作用.
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卡托普利对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响
目的:研究心肌细胞凋亡和凋亡相关基因在心力衰竭发展中的变化及卡托普利的干预作用,从细胞凋亡角度探讨血管紧张转化酶抑制剂治疗心力衰竭的机制.方法:选用雄性SD大鼠,随机分为假手术组(sham组)、心梗组(MI组)和心梗后卡托普利干预组(MI+Cap组),经冠脉前降支结扎术建立心肌梗死模型,术后24小时的MI+Cap组大鼠给予Cap 400mg.kg-1.d-1,饮水给药,sham组和MI组大鼠饲普通饮用水.术后4周、6周检测大鼠非心梗区心肌细胞凋亡指数;western蛋白印迹检测心肌细胞凋亡加速基因Bax和凋亡抑制基础Bcl-2的蛋白表达水平,并计算Bax/Bcl-2蛋白比;压力传感器记录左室血流动力学改变.结果:①术后6周非心梗区心肌细胞凋亡指数,MI组及MI+Cap组均显著高于sham组(P＜0.01),但MI+Cap组显著低于MI组(P＜0.01);②与sham 组相比,MI组和MI+Cap组术后6周时的Bax蛋白表达量均显著增高(P＜0.01),但MI+Cap组显著低于MI组(P＜0.01);MI组和MI+Cap组的Bcl-2蛋白表达量均低于sham组(P＜0.01),而MI+Cap组显著高于MI组(P＜0.01);③MI组和MI+Cap组大鼠的心功能明显降低(与sham组比,P＜0.01),而MI+Cap组大鼠的心功能显著改善(与MI组比,P＜0.01).结果:血管紧张素转化酶抑制剂可通过调节凋亡相关基因Bax和Bcl-2的蛋白表达,减少心肌细胞凋亡,改善心功能.
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凋亡调节基因bcl-2和bax在肺鳞癌中的表达
采用免疫组化S-P法检测了24例肺鳞癌及其中6例淋巴结转移癌组织中的bcl-2和bax的表达.结果显示,bcl-2在肺鳞癌中高、中、低分化阳性表达率分别为16.6%(1/6)、37.5%(3/10)、87.5%(7/8),随分化程度的降低而表达上调(P＜0.05),伴淋巴结转移的肺鳞癌组织中bax的表达(16.7%,1/6)较无转移者(77.8%,14/18)下调(P＜0.05).
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五羟黄酮调节肝癌HepG2细胞bax基因表达诱导细胞凋亡的实验研究
目的 探讨三磷酸肌醇(IP3)和bax基因表达变化在五羟黄酮(Quercetin)诱导肝癌细胞凋亡中的作用.方法 以肝癌HepG2细胞培养72 h为对照,以20,40,60,80μmol/L Quercetin作用于HepG2细胞72 h时和60μ,mol/L Quercetin作用于HepG2细胞6,12,24,48,72 h,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,RT-PCR分析bax mRNA表达,Western blotting分析细胞bax蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 各浓度的Quercetin作用于肝癌HepG2细胞72 h,IP3含量显著低于对照组(P＜0.01),bax mRNA和bax蛋白表达显著高于对照组,细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.01);60 μmol/L Quercetin作用于肝癌HepG2细胞6,12,24,48,72 h,各时相IP3含量显著低于对照组(P＜0.01);12 h后bax mRNA和bax蛋白表达显著高于对照组,24 h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组(P＜0.01).结论 Quercetin能减少IP3生成,上调bax基因表达,诱导肝癌细胞凋亡.
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Cariporide对热缺血大鼠停跳心脏颈部移植术后bcl-2和bax基因表达的影响
目的:对热缺血死亡大鼠停跳心脏异位移植术后的供体进行有关bcl-2和bax基因表达的研究,以观察cariporide对大鼠停跳心脏供体的保护作用.方法:取清洁级Sprague-Dawley雄性大鼠共112只,随机分成7组,每组16只,即正常心脏对照组(C组);心脏停搏后10,30,45min取心组(S10,S30,S45组);心脏停搏后10,30,45 min取心并用cariporide灌注组(SH10,SH30,SH45组);对实验组大鼠均采用热缺血死亡处理,再用颈部Cuff法进行异位心脏移植.S10,SH10,S30,SH30组于移植后48 h取供心标本,S45,SH45组于移植术后取供心标本.然后采用RT-PCR法检测标本心肌细胞的bcl-2和bax基因的表达.结果:大鼠腹主动脉横断放血后9～11(10.11±0.59)min死亡;RT-PCR检测bcl-2基因的电泳图显示实验C组的表达强,相对光密度ROD值大,bax基因的表达弱,ROD值小;S10组、S30组bcl-2基因ROD值小于SH10组、SH30组;而bax基因的ROD值正好相反,差异具有统计学意义(P<0.05);S45和SH45组比较ROD值结果无统计学差异(P>0.05).结论:热缺血死亡大鼠颈部异位心脏移植模型是进行NHBD的心肌保护研究的理想模型;cariporide能抑制热缺血死亡后(30 min内)大鼠心脏心肌细胞凋亡的发生.
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烟酰胺对高糖介导胰岛细胞bax及bcl-2表达的影响
目的探讨烟酰胺对高糖环境下胰岛细胞bax及bcl-2蛋白表达的影响.方法体外培养大鼠胰岛细胞,应用免疫组化方法检测培养液中葡萄糖终浓度为22.2 mmol/L及加入烟酰胺后胰岛细胞bax及bcl-2蛋白表达.结果培养液中葡萄糖终浓度为22.2 mmol/L 时,胰岛细胞bax表达阳性,bcl-2表达较对照组降低.加入烟酰胺后bax表达降低,bcl-2表达增强.结论烟酰胺能够上调bcl-2表达,下调bax表达,在高糖介导的胰岛细胞损伤中起一定作用.
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黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用的机制
目的 观察黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡的影响,探讨黄芪甲甙抗心肌细胞凋亡的可能机制.方法 Balb/C小鼠50只随机分5组(每组10只).空白对照组:腹腔无菌注射不含病毒的Eagle's培养基0.1 mL,在腹腔注射病毒培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7天;病毒性心肌炎对照组:小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含1×105TCID50 CVB3 的Eagle's培养基,在腹腔注射含病毒的Eagle's培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7天;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组:在腹腔注射病毒30 min后,用黄芪甲甙[具体剂量分别为0.07、0.2、0.6 mg/(kg·d)]0.1 mL灌胃,共7天.采用缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2、Bax基因的表达,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行半定量分析.结果 与空白对照组比较,病毒性心肌炎对照组心肌细胞凋亡发生率增高;抑制凋亡因子Bcl-2基因及蛋白表达下降,而促进凋亡因子Bax基因及蛋白表达增强,Bcl-2/Bax mRNA比值降低.与病毒性心肌炎对照组比较,黄芪甲甙高剂量干预组能降低CVB3病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡指数,Bcl-2基因及蛋白水平表达增强,Bax基因及蛋白水平表达下降.结论 黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用机制可能是促进了抑制凋亡基因Bcl-2表达,抑制了促凋亡Bax基因表达.
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胰腺癌组织中bax基因和蛋白的过度表达
目的分析人胰腺癌组织中bax基因的mRNA转录和蛋白表达,探讨其在胰腺癌发生发展中的作用.方法应用原位杂交和免疫组织化学法检测40例胰腺癌和14例慢性胰腺炎组织的bax表达.结果胰腺癌组织中bax基因的mRNA水平及蛋白水平的表达分别为65%(26/40)、72.50%(29/40),明显高于慢性胰腺炎组织.该基因的表达与患者的年龄、性别、TNM分期及组织分化程度无关.结论在胰腺癌组织中bax基因mRNA转录和蛋白表达结果具有显著一致性,该基因在胰腺癌发生发展中起重要作用.
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凋亡相关基因Bax,Bcl-2在大鼠急性胰腺炎中表达的研究
目的:探讨凋亡调控基因Bax,Bcl-2在胰腺组织中的表达情况与急性胰腺炎严重程度的关系.方法;制作大鼠急性重型胰腺炎和急性轻型胰腺炎模型.制模后3h取材,查血清胰淀粉酶及应免疫组化SABC法检测胰腺组织中基因Bax,Bcl-2蛋白表达.结果:急性胰腺炎时,基因Bax蛋白表达在胰腺腺泡细胞胞浆,急性轻型胰腺炎组和急性重型胰腺炎组均明显高于对照组(P＜0.05 ),且急性轻型胰腺炎组高于急性重型胰腺炎组(P＜0.05 ) ;Bcl- 2蛋白表达在胰腺导管细胞胞浆,对照组Bcl-2蛋白表达弱,急性轻型胰腺炎组和急性重型胰腺炎组表达明显增强,急性重型胰腺炎组高于急性轻型胰腺炎组,统计学处理急性轻型胰腺炎组和急性重型胰腺炎组之间无显著性差异,但急性轻型胰腺炎组、急性重型胰腺炎组与对照组比较差异有显著性(P＜0.05 ).结论:Bax基因在大鼠的急性胰腺炎过程中可能参与诱导胰腺腺泡细胞凋亡,减轻胰腺炎症反应程度;而Bcl-2基因可能参与防止导管细胞凋亡而促进其增生并且形成导管管状复合体.
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Bcl-2和Bax基因在喉癌组织中的表达及临床意义
目的探讨喉癌组织Bcl-2和Bax基因蛋白表达与喉癌发生、发展的关系.方法采用免疫组化SP法测定5例正常人声带组织和73例喉癌组织标本中Bc1-2和Bax基因蛋白表达.结果喉癌组织中Bc1-2基因蛋白表达阳性检出率45.2%,喉癌组织中Bax基因蛋白表达阳性检出率60 3%,与正常人相比,差异均无显著性(P＞0.05).喉癌组织中Bcl-2和Bax基因蛋白的表达呈明显的负相关关系,r值-0.71,P＜0.05.结论喉癌组织中Bcl-2和Bax基因蛋白表达的失调可能与喉癌的发生、发展有关.
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胃黏膜球样异型增生Ki-67、P53、bcl-2及bax的表达
目的采用免疫组化方法检测了41例胃黏膜球样异型增生Ki-67、P53、bcl-2及bax的表达,以探讨其增殖活性程度和与癌的关系.方法复查胜利石油管理局中心医院1993年～1994年收检的外科手术切除胃癌标本,从中检出伴有球样异型增生者41例,包括球样异型增生I级23例,II级11例,III级7例.免疫组化标记Ki-67、P53、bcl-2及bax.结果 41例胃黏膜球样异型增生分别见于高分化腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌.2例见与印戒细胞癌有形态移行,3例见与低分化管状腺癌移行.多数球样异型增生细胞显示Ki-67、P53、bcl-2及bax阳性.与正常胃黏膜比较,球样异型增生细胞Ki-67、P53表达增高,高级别者与癌接近.球样异型增生细胞bcl-2表达较低,bax表达较高,但较高级别的球样异型增生细胞bcl-2表达增高,bcl-2/bax比值增高.结论胃黏膜球样异型增生细胞增生活跃,可能与多种类型胃癌的发生有关.
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苦杏仁苷对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖和Bax基因表达的影响
目的:研究苦杏仁苷对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖的影响和对凋亡基因Bax的调控作用.方法:利用噻唑蓝染色法动态检测不同浓度的苦杏仁苷对大鼠HSC-T6细胞增殖的影响,利用PCR法检测苦杏仁苷对HSC-T6细胞凋亡基因Bax的表达水平.结果:苦杏仁各实验浓度组对HSC-T6细胞的增殖无直接抑制作用,但其高浓度10-3mol/L和中浓度10-4mol/L可以使HSC-T6细胞提前到达增殖高峰期；而各浓度组对HSC-T6细胞的Bax基因都有一定的诱导作用,并且存在量效关系.结论:苦杏仁苷不能直接抑制HSC-T6细胞的增殖,但可能通过诱导或上调凋亡基因Bax的过度表达,使细胞提前进入凋亡程序阶段,终使活化的HSC-T6发生细胞凋亡,以起到抗肝纤维化的作用.
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天花粉蛋白诱导小鼠前列腺癌细胞
目的:研究天花粉蛋白诱导小鼠前列腺癌细胞RM-1凋亡的作用,并探讨其作用机制.方法:将不同浓度的天花粉蛋白作用于小鼠RM-1前列腺癌细胞,用MTT法检测其半数抑制浓度(IC50),用这一浓度作用于RM-1细胞一定时间后,通过Hoechest33258荧光染色、流式细胞仪检测RM-1细胞凋亡的情况.采用Western Blot检测凋亡基因bax蛋白表达的变化.结果:MTT法测得天花粉蛋白对RM-1细胞的IC50值为117.32 mg/L;Hoechest33258荧光染色提示天花粉蛋白干预后RM-1细胞出现凋亡小体;流式细胞仪检测结果显示随着天花粉蛋白干预时间的延长,RM-1细胞凋亡率增加,同时凋亡基因bax蛋白的表达在天花粉蛋白干预后逐渐增加.结论:天花粉蛋白具有抗小鼠前列腺癌细胞RM-1的作用,其作用机制之一是诱导肿瘤细胞凋亡;bax基因在天花粉蛋白诱导RM-1细胞凋亡过程中起重要调控作用.
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缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达的影响
目的 研究缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达的影响.方法 对原代海马神经元进行缺氧和药物处理,倒置显微镜和NF免疫组织化学法观察细胞生长和形态,MTT法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测Bax基因Mrna表达水平.结果 与单纯缺氧组比较,缺氧+二氮嗪组和缺氧+甲苯磺丁脲组的多级神经元百分率和细胞存活率差异有显著性(P<0.01).缺氧+二氮嗪组中基因Bax的Mrna表达水平与单纯缺氧组相比下降(P<0.01),缺氧+甲苯磺丁脲组中基因Bax的Mrna表达水平相对于单纯缺氧组也有提高(P<0.05).结论 缺氧时KATP的开放对细胞具有保护作用,它通过降低Bax的表达抑制缺氧海马神经元的凋亡.
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白藜芦醇对重症急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的影响
目的:探讨白藜芦醇对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)胰腺腺泡细胞凋亡及凋亡调控基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法:L-精氨酸盐酸盐分次间隔2h注入大鼠腹腔和皮下以建立SAP模型,48只大鼠随机分为白藜芦醇(RES)治疗组、非治疗(SAP)组(各20只)和正常对照(NS)组(8只).RES组于皮下注射L-精氨酸盐酸盐后立即腹腔注射白藜芦醇.各组在末次注射后分别于6、12、24和48 h测血清淀粉酶、胰腺湿/干重比值,观察各组胰腺组织的病理变化并评分,免疫组化SP法检测胰腺组织Bax和Bcl-2基因表达,同时行末端脱氧核苷酸转换酶介导的原位末端标记检测胰腺细胞凋亡情况.结果:RES组12、24 h血清淀粉酶活性明显下降,24、48 h胰腺湿/干重比值降低,胰腺组织出血坏死减轻,24、48 h病理评分均低于SAP组(P＜0.05);给药后6、12h细胞凋亡指数和Bax、Bcl-2基因表达均高于SAP组(P＜0.01).结论:白藜芦醇可诱导SAP受损胰腺细胞凋亡,抑制血清淀粉酶释放,减轻大鼠胰腺病理损伤,其机制可能是通过上调Bax和Bcl-2基因的表达.
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深低温停循环下不同脑保护方法对海马区神经细胞凋亡及bcl-2、bax基因mRNA表达的影响
目的:观察深低温停循环下给予不同脑保护方法后犬海马组织中神经细胞凋亡情况,探讨其对凋亡相关基因 bcl-2和 bax的 mRNA表达的影响.方法:健康成年杂种犬 (18～ 22 kg)18只,随机分成 3组,深低温停循环 (deep hypothermia circulatory arrest, DHCA)组( A组 ,对照组); DHCA+间断选择性顺行脑灌注( intermittent selective antegrade cerebral perfusion, ISACP)组( B组); DHCA+逆行脑灌注( retrograde cerebral perfusion, RCP)组( C组).术后取出海马组织,分别采用电镜和逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)检测海马组织神经细胞凋亡情况及凋亡相关基因 bcl-2和 bax的 mRNA表达情况.结果:电镜下, A组可见明显神经细胞凋亡改变, B、C两组仅见少量神经细胞凋亡改变.bcl-2 mRNA在 B组表达高 (P< 0.01), C组表达明显高于 A组 (P< 0.01); bax mRNA在 A组表达强 (P< 0.01), B组和 C组间差异无显著性 (P >0.05).结论:DHCA下,给予 ISACP或 PCR两种脑保护方法都可以上调 bcl-2 mRNA的表达,但前者优于后者;两种脑保护方法也可以下调 bax mRNA的表达,但二者间差异无显著性.
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BAX基因在遗传不稳定的大肠癌、胃癌突变的研究
目的:了解Bax基因在大肠癌,胃癌的突变情况.方法:用QIAamp方法提取肿瘤和正常组织的DNA,选择5对引物,经P CR扩增,走DNA序列胶电泳,检测其MI及Bax基因编码区序列.结果:胃癌有8例MI阳性,其中3例Bax基因有突变,大肠癌有14例MI 阳性,其中6例Bax基因有突变.结论:Bax基因突变在胃癌和大肠癌的发生过程中起重要作用,Bax 基因是胃癌、大肠癌MI+的遗传改变受累的一个靶基因.
