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Bak在细胞凋亡期间对线粒体形态学的影响
目的:探讨Bak基因在细胞凋亡线粒体信号传导中的作用以及与Bax基因之间的相互关系.方法:应用Bax/Bak双重基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和Hela细胞进行基因重构,细胞按不同基因型(野生型、Bax敲除和Bak敲除、双重基因敲除)分组,并通过共转染方式导入目的基因.细胞凋亡的处理条件:细胞在无葡萄糖缓冲液的培养基中,在含10 mmol·L-1叠氮钠或1μmol·L-1十字孢碱(STS)或20 p.mol·L-1顺铂条件下培养,并诱导细胞凋亡.应用共聚焦显微镜和免疫荧光及免疫印记技术分析细胞凋亡、线粒体碎裂和细胞色素C释放情况,综合评价Bak基因在细胞凋亡和线粒体碎裂中的作用.结果:Hela细胞内线粒体碎裂和细胞色素C释放百分率分别与细胞凋亡有关联(P<0.01);MEF细胞在Bak基因缺失(Bak-/-)时,应用化学诱导剂导致的细胞凋亡率(17.9%)明显低于野生型MEF细胞(71.3%)(P<0.01);且Bax和Bak基因两者协同作用可以增强细胞凋亡发生率;当pEGFP-Bak重新导入PBx-/-/Bak-/-MEF细胞,线粒体破碎百分率从43.7%增加到76.4%,pEGFP-Bak组细胞凋亡率明显高于pEGFP-Pax组(P<0.05);应用不同的化学诱导剂均可以得到同样的结果;且Bcl-2不能够明显阻止Bak诱导的细胞凋亡.结论:Bak基因明确诱导线粒体碎裂和细胞色素C释放,导致细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的效果明显大于Bax基因,并且其作用独立于Bax基因功能之外.
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邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导隐睾对SD幼鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响
目的 探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[Di(2-ethylhexy1)phthalate,DEHP]作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中生殖细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法 将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只.玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组自妊娠第12.5～19.5天分别每日灌胃玉米油(2ml)和DEHP(500 mg/kg),正常对照组不给药.取各组出生后第20天的雄性幼鼠睾丸组织,采用Q-PCR法检测睾丸组织中Bax和Bcl-2基因的水平,流式细胞术检测睾丸生殖细胞的凋亡情况.结果 DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸组织中Bax基因mRNA的水平显著高于两对照组(P＜0.000 1),Bcl-2基因mRNA的水平显著低于两对照组(P＜0.01)；DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸生殖细胞凋亡百分率显著高于两对照组(P＜0.000 1).结论 孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,且隐睾鼠睾丸生殖细胞凋亡率增加,隐睾子代睾丸组织中凋亡基因Bax和Bcl-2的表达有改变,推测其改变可能参与了生殖细胞的凋亡过程,并可能与隐睾继发的远期不育有关.
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抑制JTV1基因表达对大黄素引起的K562细胞凋亡的影响及其机制
目的 探讨抑制JTV1基因表达对大黄素引起的人白血病K562细胞系凋亡的影响及其机制.方法 将pGenesil-1-JTV1-1.1 siRNA重组质粒、pGeneSil-1-N.1 阴性对照质粒及pGeneSil-1空载体分别转染人K562细胞,通过集落形成试验检测细胞的增殖能力;各组转染K562细胞经80 μmol/L大黄素处理后,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc转录水平的变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax、C-myc翻译水平的变化.结果 抑制JTV1基因的表达后,K562细胞的增殖能力明显提高;抑制JTV1基因表达可使经80μmol/L大黄素处理的K562细胞G1期细胞比例下降,并减轻大黄素引起的细胞凋亡,同时,细胞Bax基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均明显下降,而Bcl-2基因和C-myc基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平则明显上调.结论 抑制JTV1基因表达可能通过上调Bcl-2和C-myc基因的表达,下调Bax基因的表达,促进K562细胞的增殖,并阻止细胞凋亡.
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鹿茸多肽对辐射诱导神经母细胞瘤细胞调亡后Bax和Bcl-2表达的影响
目的 探讨鹿茸多肽对辐射诱导神经母细胞瘤细胞调亡后B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)基因和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)基因表达的影响.方法 将神经母细胞瘤经X射线2 Gy照射5 min,诱导细胞凋亡后,用400和800 mg/ml鹿茸多肽溶液处理细胞,同时设未处理细胞作为对照组.采用RT-PCR法检测Bcl-2、Bax基因mRNA转录水平.结果 与对照组相比,鹿茸多肽400、800 mg/ml处理组Bcl-2、Bax基因mRNA转录水平均上调(P均＜0.05);800 mg/ml处理组Bcl-2基因mRNA转录水平高于400 mg/ml处理组,而800 mg/ml处理组Bax基因mRNA转录水平低于400 mg/ml处理组,但两组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 鹿茸多肽对神经母细胞瘤细胞的凋亡具有明显的抑制作用,其抑制细胞凋亡的作用是通过上调Bcl-2表达、下调Bax表达实现的.
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促凋亡基因Bax在大鼠脊髓损伤后的表达及意义
目的:研究促凋亡基因Bax表达与脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)程度的关系.方法:Wistar大鼠36只,随机分成3组,为正常对照组、轻(中)度损伤组和重度损伤组.大鼠在脊髓损伤后14天处死,HE和Nissel染色观察脊髓组织形态结构和病理学变化,免疫组织化学S-P法检测脊髓中Bax表达情况.结果:Bax蛋白在大鼠脊髓损伤前后表达阳性率分别为5.6%和58.3%,有显著性差异(P＜0.05);轻(中)度脊髓损伤和重度脊髓损伤中的Bax的阳性率分别为18.5%和59.3%,有显著性差异(P＜0.05).结论:Bax基因表达与大鼠脊髓损伤有密切关系,且随着损伤程度加重Bax表达也增强.
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细胞凋亡在宫颈癌放疗中的诱导意义
目的观察放射线治疗宫颈癌诱导细胞凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白的表达.方法利用Ir192源对28例宫颈癌患者进行术前腔内后装治疗(观察组),术后取病理标本蜡块,采用S-P免疫组化方法对细胞凋亡基因Bcl-2和Bax蛋白表达进行观察,并与28例单纯手术病例(对照组)进行对比.结果在两组对比中,Bcl-2和Bax基因的表达,有统计学意义的差别(P＜0.05).在观察组Bcl-2基因的阳性表达明显低于对照组,Bax基因阳性表达明显高于对照组;Bcl-2和Bax的阳性表达呈无相关性(P＞0.05).结论Bcl-2和Bax基因的不同阳性表达说明宫颈癌组织在放疗中表现部分程序化凋亡,与宫颈癌的病理学特征及生物学行为有关.
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实验性肝硬化大鼠的c-fos、bcl-2、Bax表达及细胞凋亡的研究
目的: 检测c-fos、bcl-2、Bax基因及细胞凋亡在肝纤维化、肝硬化中的表达,探讨肝纤维化的发生发展机制.方法: 将100只同龄Wistar大鼠随机分为实验组80只,对照组20只,实验组皮下注射四氯化碳制备肝纤维化大鼠模型,采用TUNEL末端标记检测凋亡细胞数.用免疫组化S-P法检测实验组与对照组肝组织中c-fos-bcl-2-Bax基因表达,了解细胞凋亡和c-fos、 bcl-2、Bax在肝纤维化、肝硬化发展过程中的作用.结果: c-fos在肝组织中的表达明显高于正常肝组织(P<0.01). bcl-2在肝纤维化大鼠肝组织中的表达明显高于正常肝组织,且主要表达在纤维间隔、汇管区等组织中.Bax在肝纤维化大鼠肝组织中的表达明显高于正常肝组织,且主要表达在肝细胞浆中.结论: c-fos、bcl-2、Bax在肝纤维化、肝硬化的发展过程中起调控作用,这些基因通过对肝贮脂细胞凋亡的控制,在肝纤维化演变过程中起关键作用.
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冠心苏合丸系列组方对心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响
冠心苏合丸由苏合香、冰片、乳香、檀香、青木香五味药物组成,源于宋<太平惠民和剂局方>,用于治疗于心绞痛、胸闷憋气、心肌梗塞等病症,特别对心绞痛的发作有较好的疗效,服用后无硝酸甘油等西药的头痛、头胀、头晕等副作用,广泛用于临床.
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巴曲酶对缺血再灌注后凋亡相关基因时效研究
目的:探讨巴曲酶对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响及可能的作用机制.方法:分组采用双侧颈总动脉夹闭5 min后再通,造成沙土鼠前脑缺血再灌注的损伤模型,在不同时间点腹腔注射巴曲酶对其进行治疗后,运用免疫组织化学方法,检测沙土鼠海马CA1区神经元中的Bcl-2、Bax免疫反应阳性细胞的数量.结果:与对照组相比,治疗组海马CA1区Bcl-2表达明显增加,Bax表达降低,尤以缺血再灌注前6h、即刻、缺血再灌注后1 h、3 h及6h明显(P＜0.01).结论:巴曲酶可减少脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡,发挥脑保护作用;其作用存在明显时效关系,机理可能与增强Bcl-2的表达及抑制Bax的表达有关.
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依那普利对肝组织bax和bcl-2基因表达的影响
目的 探讨血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)依那普利(Ena)对大鼠肝纤维化的防治作用及其部分机制,及对肝组织bax和bcl-2基因表达的影响.方法 以四氯化碳(CCl4)诱导形成大鼠肝实质损伤性肝纤维化模型.大鼠分为空白对照组、模型对照组、预防组及治疗组.除空白对照组外,其余各组大鼠均皮下注射40%CCl4橄榄油混合液,每3日1次,共10周.预防组同时给予Ena灌胃.治疗组则在造模第5周给予Ena灌胃.对肝组织标本炎症及纤维化程度进行评价,并用RT-PCR技术观察Ena对肝组织bax和bcl-2基因表达的影响.结果 Ena高剂量预防及高剂量治疗组肝组织炎症和纤维化程度较模型对照组显著减轻(P＜0.01).Ena高剂量预防及高剂量治疗组肝组织bax基因表达显著弱于模型对照组(P＜0.01),bcl-2基因表达显著强于模型对照组(P＜0.01),bax/bcl-2基因表达比值和肝纤维化程度呈显著直线正相关(P＜0.01).结论 Ena能有效防治大鼠肝纤维化,抑制促凋亡基因bax的表达,促进抑凋亡基因bcl-2的表达,是其可能机制之一.bax/bcl-2基因表达比值与肝纤维化程度正相关.
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Bax基因对人胃癌耐药细胞多药耐药性的逆转作用
目的 研究凋亡相关基因Bax对胃癌多药耐药细胞的多药耐药性的逆转作用.方法 构建含有人Bax cDNA全长的真核表达载体pBK-Bax,经脂质体导入缺乏Bax蛋白表达的人胃癌多药耐药细胞系SGC7901/VCR中.Western印迹观察Bax基因在转导细胞中的表达,MTT法检测Bax转导细胞与空载体转导细胞对化疗药物的敏感性.结果 成功构建了Bax的真核表达载体,Bax转导细胞能稳定表达Bax蛋白,与空载体转导细胞相比,Bax转导细胞对长春新碱(vincristine,VCR)、阿霉素(adriamycin,ADR)、丝裂霉素(mitomycin,MMC)的敏感性显著增加(P＜0.01).结论 Bax基因转导对胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR的多药耐药性具有逆转作用.
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血糖浓度对缺氧缺血新生大鼠脑内调控凋亡基因表达的影响
目的通过观察缺氧缺血(HI)合并高或低血糖新生大鼠脑内一对调控凋亡基因Bcl-2和Bax基因的表达变化,从分子生物学角度评估葡萄糖对缺氧缺血脑保护效果.方法将7日龄SD新生大鼠分成正常对照组、HI组、HI前低血糖组、HI前高血糖组以及HI后高血糖组,应用竞争性RT-PCR技术,分别于HI后0、2、6、12、24、48、72h及7 d对各组新生大鼠脑内Bcl-2基因和Bax基因进行测定.结果正常情况下,Bcl-2基因和Bax基因在脑组织中无明显表达或仅有微弱表达.HI可引起这对调控凋亡基因的表达反应性增强,其中Bcl-2基因的表达高峰在HI后12 h,Bax基因的表达高峰在HI后24h,在HI后48～72 h,这一对基因的表达分别回落至低水平.血糖浓度对这一对基因的表达时相有明显影响.HI前高血糖组Bax基因的表达呈明显下调;Bcl-2基因的表达呈明显上调,其表达高峰较其余各组晚12 h.HI前低血糖组Bax基因的表达呈明显上调;Bcl-2基因的表达则明显下调.HI后高血糖组的表达时相类似HI组,假手术组的基因表达则等同于正常组.结论结合本研究组已完成的脑细胞凋亡形态学结果,本研究进一步提示,通过上调Bcl-2基因和下调Bax基因的表达,高血糖在一定程度上抑制了HI后脑细胞的凋亡;低血糖则通过下调Bcl-2基因和上调Bax基因的表达,一定程度上加剧了HI后脑细胞的凋亡.结合临床,如对重度窒息新生儿在生后早期进行葡萄糖的合宜补充以及高危孕妇在临产前输注足量葡萄糖,有可能减轻窒息儿的脑病变程度,改善高危儿的生存质量.
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bax嵌合基因克隆及其在人舌癌细胞的表达
目的:构建能在人舌癌细胞中高效表达Bax蛋白的bax嵌合基因.方法:将RT-PCR获得bax基因编码序列克隆至原核表达载体pGEX-5T,再将bax cDNA 插入人α1(Ⅰ)胶原基因顺式作用元件(CIP)与报告基因CAT之间,构成 pSV-CIP-bax-CAT嵌合基因;用阳离子脂质体DOSPER将此嵌合基因转染至人舌鳞癌细胞Tca8113;用免疫狭缝印迹和ELISA方法分析报告基因CAT和目的基因bax在细胞中的表达.结果: bax基因编码序列及嵌合基因限制性酶谱正确;CAT表达的ELISA检测证实,转染是成功的,且CIP在Tca8113细胞中有促进其下游基因表达的作用(为对照组的15倍);免疫狭缝印迹和ELISA证实,转染细胞能高效表达Bax蛋白(为对照组的8倍).结论:bax嵌合基因 pSV-CIP-bax-CAT能在人舌癌细胞中高效表达Bax蛋白,为进一步研究bax基因对舌癌细胞生长与凋亡的影响奠定了基础.
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吸入性损伤对小鼠肺组织细胞凋亡的影响
目的探讨细胞凋亡、促凋亡基因和凋亡抑制基因在吸入性损伤发生的作用及意义.方法以小鼠烟雾吸入性损伤为模型,应用RT-PCR和TUNEL技术,观察其损伤后肺组织中Bcl-2和Bax基因mRNA表达及细胞凋亡的变化.结果小鼠烟雾吸入性损伤后肺组织Bcl-2和Bax的表达增加,细胞凋亡指数升高,与对照组相比,差异有非常显著性(P＜0.01).结论提示细胞凋亡可能参与了吸入性损伤肺组织的病理形成过程.
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紫杉醇耐药机制的研究进展
耐药是临床治疗肿瘤失败的重要原因,肿瘤细胞对紫杉醇耐药又是一个多途径的过程,本文分别从多药耐药、微管蛋白同型的改变、微管蛋白的突变以及促凋亡基因Bax和p53等方面阐述紫杉醇的耐药作用机制.
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pGL3/EGR1-Bax重组载体的构建及对非小细胞肺癌细胞的转染
目的 构建早期生长反应基因1(EGR1)启动子与Bax基因共表达载体pGL3/EGR1-Bax并转染非小细胞肺癌细胞.方法 以小鼠脑组织基因组DNA为模板,采用PCR法分别扩增EGR1和Bax基因全长编码序列,分别克隆入载体pTA2,构建重组质粒pTA2/EGR1和pTA2/Bax,测序鉴定；再将EGR1与Bax基因亚克隆至pGL3-Basic载体中,构建双基因共表达载体pGL3/EGR1-Bax,测序鉴定.采用基因转染技术将基因导入非小细胞肺癌NCI-H460细胞,分别以未转染及空pGL3-Basic载体转染的NCI-H460细胞株作为空白对照组和阴性对照组,采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测NCI-H460细胞EGR1和BaxmRNA和蛋白的表达.结果 测序鉴定证实,构建的双基因共表达载体pGL3/EGR1-Bax的EGR1、Bax序列与GenBank发布基因序列完全一致.与对照组和空载体转染组NCI-H460细胞比较,pGL3/EGR1-Bax转染组NCI-H460细胞中EGR1和Bax的mRNA表达以及Bax的蛋白表达明显增强.结论 成功构建双基因共表达载体pGL3/EGR1-Bax,并实现了EGR1和Bax基因在NCI-H460细胞中的有效表达.
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多巴胺D1和D2受体激动剂和拮抗剂对脑缺血/再灌注损伤的影响
实验应用开阔法、组织病理学方法、原位末端标记(in situterminal deoxynucleotidyl transferase-mediated de-oxy-UTP nick end labeling,TUNEL)法及免疫组织化学等方法,探讨多巴胺D1、D2受体激动剂和拮抗剂对沙土鼠前脑缺血/再灌注损伤海马CA1区神经元凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响.结果显示:前脑缺血5 min可引起沙土鼠探索活动增加;再灌注3 d,海马CA1区约95%的锥体细胞凋亡;再灌注7 d,海马CA1区仅残存约2%-7%的存活锥体细胞;前脑缺血5 min可抑制bcl-2的表达并诱导bax表达增高;预先应用D2受体激动剂培高利特可减轻缺血后沙土鼠行为学异常、抑制海马CA1区锥体细胞凋亡、提高锥体细胞存活数、显著诱导bcl-2的表达并抑制bax的表达.预先应用SKF38393、SCH23390及螺哌隆对以上结果无明显影响.实验结果提示,培高利特具有确切的脑保护作用,诱导bcl-2并抑制bax的表达可能是其脑保护作用机制之一.
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牛蒡子苷元对人食管癌细胞增殖、凋亡的影响
目的 观察牛蒡子苷元(ARG)对人食管癌细胞(EC-1)增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将不同浓度的ARG作用于EC-1细胞,采用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖活性(ARG浓度分别为2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mg/L,作用时间为24、48、72、96、120 h),流式细胞术检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳和DNA缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡指数,免疫细胞化学法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的改变(该3种检测均采用:ARG浓度10.0、20.0、40.0 mg/L,作用时间24h)；分析不同浓度ARG对EC-1细胞的影响.并设阴性对照组(只加培养液不加药物)进行比较.结果 ARG对EC-1细胞增殖、凋亡的影响呈剂量/时间依赖性.随ARG浓度和作用时间的递增,对EC-1细胞增殖的抑制率递升(P＜0.05或P＜0.01).随ARG浓度的递增,EC-1细胞凋亡率和凋亡指数递升(P均＜0.01),Bcl-2表达率递降(P＜0.01),Bax表达率递升(P＜0.01).上述变化与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 ARG可明显抑制EC-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与ARG调控Bcl-2、Bax基因表达而诱导EC-1细胞凋亡有关.
关键词： 牛蒡子苷元 人食管癌细胞( EC-1) 凋亡 Bcl-2基因 bax基因 -
卵巢癌及癌旁组织端粒酶活性与凋亡相关性研究
目的 研究端粒酶活性和抗凋亡基因Bcl-2及促凋亡基因Bax在卵巢癌发生、发展过程中的变化.方法 应用SP免疫组织化学方法,对50例卵巢癌及癌旁正常组织进行hTERT、Bcl-2、Bax基因蛋白的检测.结果 hTERT和Bcl-2阳性表达率在卵巢癌组织中高于癌旁组织.而Bax阳性表达率在卵巢癌组织低于癌旁组织,2组间均有明显差异.hTERT蛋白表达阳性率在临床Ⅰ、Ⅱ期和临床Ⅲ、Ⅳ期分别为16/23(69.56%)和26/27(96.30%),差异有显著性(P<0.05).高分化组织与低分化组织中阳性率分别为18/23(78.26%)和25/27(92.59%),差异也有显著性(P<0.05).对于Bcl-2蛋白表达阳性率在临床Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期中分别为8/23(34.78%)和16/27(59.26%),高分化组织和低分化组织阳性率分别为9/23(39.13%)和18/27(66.67%),差异均有显著性(P<0.05).卵巢癌组织凋亡指数明显低于卵巢癌旁组织,差异有显著性(P<0.05).结论 凋亡调控功能失调与肿瘤的形成有关,hTERT、Bcl-2、Bax基因蛋白的异常表达与卵巢癌发生有关;hTERT、Bcl-2在卵巢癌的发生发展中可能有协同作用,hTERT、Bcl-2与Bax在卵巢癌的发生发展中可能有拮抗作用.hTERT、Bcl-2蛋白的表达可能是反映卵巢癌生物学行为的重要参数.
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bcl-2和bax在口腔癌组织中表达与凋亡关系的研究
目的通过对口腔癌组织及癌旁正常组织中bcl-2和bax基因表达与本底凋亡细胞的研究,探讨口腔癌组织及癌旁正常组织中凋亡与基因表达的关系.方法利用免疫组化法检测67例口腔癌组织标本及42例癌旁正常口腔组织中bcl-2和bax基因表达,利用TUNEL方法检测口腔癌组织标本中凋亡的情况.结果 bcl-2、 bax基因在口腔癌组织及癌旁口腔组织中的阳性及阴性表达均具有显著性差异; 两者在口腔癌组织中的阳性及阴性表达,其细胞凋亡的指数均有显著性差异.bcl-2、 bax基因表达呈显著负相关.结论口腔癌组织中bcl-2基因阳性表达时,其本底凋亡指数较阴性表达时低;而bax基因性表达时,其本底凋亡指数较阴性表达时高, 两者在细胞凋亡过程中存在着拮抗作用的关系.
