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通脑活络针刺法对大鼠急性脑梗死细胞凋亡及梗死容积的影响
目的 评价通脑活络针刺疗法对大鼠急性脑梗死的疗效.方法 采用改进的微栓子法制造SD大鼠大脑中动脉血栓栓塞模型,将造模成功后的大鼠共264例随机分为≤1.5h组(72例)、1.5 ～2h组(72例)、2～3h组(72例)、缺血对照组(24例)、假手术组(24例)共5组.前3组分别予以通脑活络针刺疗法(针刺组)、尿激酶溶栓法(溶栓组)、单纯体针(体针组)治疗.治疗后24h、72h用TUNEL法测凋亡细胞计数、TTC染色测梗死容积百分比,并进行HE染色观察组织病理学变化.结果 在2h时间段内,在24h、72h时点针刺组在降低梗死容积百分比、降低凋亡细胞计数方面,与溶栓组比较差异无统计学意义(P＞0.05),且两者对上述指标的改善显著优于缺血对照组(P＜0.01)及体针组(P＜0.05)；在2～3h时间段以内,针刺组对上述指标的改善显著优于缺血对照组(P＜0.01),而溶栓组和缺血对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),体针组和缺血对照组比较差异亦无统计学意义(P＞0.05)；≤1.5h针刺组对上述指标的改善显著优于1.5 ～2h针刺组(P＜0.05),1.5 ～2h针刺组对上述指标的改善显著优于2 ～3h针刺组(P＜0.05).结论 通脑活络针刺疗法在降低大鼠急性脑梗死梗死容积百分比及凋亡细胞计数方面有较好疗效,且越早治疗效果越好.
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大鼠蛛网膜下腔出血迟发性血管痉挛神经细胞凋亡及其相关基因表达变化研究
目的从细胞凋亡的角度阐明SAH后CVS及其迟发性神经功能缺损的发生机制.方法 TUNEL、RT-PCR检测细胞凋亡及其相关调控基因ICE及Bcl-XL在脑神经组织中mRNA表达变化.结果 TUNEL检测发现对照组大脑皮层偶见散在凋亡神经细胞,SAH后30min海马、皮层、及基底节区均可见凋亡细胞开始出现,SAH后3d,凋亡细胞开始增多,血管内皮细胞、血管平滑肌细胞亦可见凋亡细胞开始出现,SAH后7d凋亡细胞明显增多达高峰;SAH后30min、3d、7d ICE mRNA在脑神经组织中表达均高于对照组,Bcl-XL mRNA 表达均低于对照组.结论 SAH后CVS可诱导脑神经组织发生细胞凋亡,这种凋亡改变与凋亡调控基因ICE及Bcl-X L在脑神经组织中的表达变化有关.
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高血压脑出血患者血肿周围脑组织细胞凋亡与Caspase-3表达规律的临床研究
目的初步探讨高血压脑出血患者血肿周围脑组织细胞凋亡的病理变化规律及其与Caspase-3的关系.方法术中获取19例不同时段脑出血患者血肿灶周围脑组织标本作为病例组,手术入路中远隔血肿部位脑组织标本5例作为对照组.根据脑出血后时间的不同将病例组分为:超早期组(＜8h);早期组(8～24h);延期组(＞24h).所有标本均行TUNEL染色以及Caspase-3免疫组化染色,利用图像分析仪观察阳性细胞数的变化规律,分析凋亡细胞与Caspase-3阳性细胞之间的关系.结果血肿周围脑组织存在TUNEL阳性细胞表达,出血后8～24h达高峰,随后下降,并且与Caspase-3的变化趋势相一致.结论细胞调亡是高血压脑出血患者血肿周围早期细胞死亡的主要形式.做为细胞凋亡的重要调控因子,Caspase-3的表达与脑出血后细胞凋亡的发生发展密切相关.
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电针对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡相关基因影响的研究
目的:观察电针对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡表达及变化规律.试图从线粒体启动凋亡途径相关主要因素的研究角度进一步揭示电针治疗脊髓损伤作用机制.方法:采用Allen's法制备急性脊髓损伤模型.动物分为电针组、药物组(Caspase-3抑制剂组)、模型组、假手术组.用Tunel法对细胞凋亡进行标记.结果:脊髓损伤后1d即发现神经细胞凋亡,1d凋亡的细胞主要是神经元细胞.凋亡的细胞主要位于脊髓灰质前角.结论:大鼠急性脊髓损伤后存在细胞凋亡现象,是脊髓继发性损伤主要病理机制.
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电针对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡PARP-1全长影响的研究
目的:采用大鼠急性脊髓损伤模型,观察电针对脊髓损伤后神经细胞凋亡与其相关基因PAfuP1全长表达影响及变化规律,试图从线粒体启动凋亡途径角度揭示电针治疗脊髓损伤作用机制.方法:急性脊髓损伤模型以Allen's法制备,将大鼠分为电针组、药物组(Caspase-3抑制剂组)、模型组、假手术组.对凋亡细胞采用Tunel法予以标记.结果:Tunel标记结果表明:脊髓损伤后6 h,PAfuP-1全长在模型组开始有表达,1 d表达量高,在3 d、7 d逐渐下降,14 d低.模型组在1 d、3 d表达量分别高于假手术组和药物组(P<0.05).电针组在3 d表达量低于模型组(P<0.05).结论:①细胞凋亡现象发生在大鼠急性脊髓损伤后,这是脊髓继发性损伤主要病理机制;②PARP-1全长在大鼠脊髓损伤后神经元中表达量随着时间推移逐渐增加,提示PAfuP-1全长可能参与了脊髓继发性损伤;③电针通过抑制PARP-1大鼠脊髓损伤神经元中PARP-1全长的表达,从而抑制了神经细胞的凋亡,减轻脊髓继发性损伤.
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原位末端标记法检测齐墩果酸诱导细胞凋亡的实验研究
目的:通过原位末端标记法(TUNEL)探讨齐墩果酸对S180荷瘤小鼠细胞凋亡的影响.方法:采用S180肉瘤接种小鼠腋下,制备实体瘤模型,随机分组(生理盐水组,环磷酰胺组,齐墩果酸高、中、低组).连续给药8天,处死小鼠剥离肿瘤组织,固定,石蜡包埋,切片经HE染色,原位末端标记检测.结果:与生理盐水组比较,齐墩果酸高、中、低剂量组细胞凋亡指数明显增加,差异显著(P＜0.01).结论:齐墩果酸能诱导S180荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡.
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小鼠慢性高眼压模型下视网膜神经节细胞的损伤
目的:通过巩膜外静脉烧烙术建立慢性高眼压模型,研究小鼠慢性高眼压状态下视网膜神经节细胞的凋亡情况.方法:取C57BL/6J小鼠30只.3只作为空白对照组,其余27只右眼为实验眼,左眼为对照眼.术前用iCare眼压计测量眼压,按巩膜外静脉烧烙法建立慢性高眼压模型,术后用iCare眼压计每日监测眼压.分剐取空白对照组6眼,术后1w、4 w造模成功的小鼠各8只16眼眼球,石蜡切片行Tunel法,荧光显微镜下采集图像.小鼠眼压的组间比较采用t检验.结果:给予巩膜外静脉烧烙术后1d、1w、4w小鼠慢性高眼压眼眼压(11.15±0.98、10.65±0.95、10.35±1.05)与对照眼(6.40±0.95、6.35±1.05、6.50±1.15)相比,差异有统计学意义(t=10.77～18.08,P＜0.001).Tunel法结果显示,正常小鼠空白对照组未见明显凋亡的视网膜神经节细胞.慢性高眼压组术后1w、4w可见Tunel阳性表达.而对照组术后1w及4w均未见Tunel阳性表达.结论:巩膜外静脉烧灼法能诱导出持续的肯定的小鼠慢性高眼压模型,慢性高眼压状态下小鼠视网膜神经节细胞发生凋亡,细胞凋亡是小鼠慢性高眼压状态下视网膜神经节细胞损伤的主要方式.
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TUNEL法检测抑郁模型大鼠海马细胞凋亡的改进及应用
目的:探讨TUNEL法检测抑郁模型大鼠海马神经元细胞凋亡的改良方法.方法:20只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组.复制孤养加慢性轻度不可预见性的应激抑郁模型(21天).分别采用TUNEL试剂盒标准法和改良法观察大鼠海马区凋亡细胞的变化.结果:改良法与试剂盒标准法比较,非特异性染色明显减轻,背景清晰,差异明显.结论:改良的TUNEL法检测海马神经元细胞凋亡结果更真实可靠.
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人参总皂甙对大鼠缺血再灌注后神经元凋亡的保护及作用机制的研究
目的探讨人参总皂甙对大鼠缺血再灌注脑组织的保护作用机制.方法利用大鼠大脑中动脉闭塞模型,脑组织切片行Nissel和TUNEL染色,计算调亡的细胞数.结果缺血非治疗组神经细胞数量明显减少,部分神经细胞胞体皱缩,核固缩,具有凋亡细胞的某些光镜特征.治疗组仅见少量神经细胞变性,胞体变形缩小.结论人参总皂甙能明显抑制神经细胞凋亡,从而发挥其神经营养和神经保护作用.
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不同剂量60Co射线照射后Fas、Egr-1基因在宫颈癌Hela细胞中的表达及意义
目的 研究不同剂量60Co射线照射后Fas、Egr-1在Hela细胞中的表达及其与细胞凋亡的关系;阐述其在放射诱导细胞凋亡中的作用.方法 采用TUNEL法检测宫颈癌Hela细胞凋亡,半定量RT-PCR法检测Hela细胞Fas、Egr-1的表达.结果 ①照射后Hela细胞凋亡指数与对照组比较均有极显著差异(P＜0.01);②照射后Hela细胞Fas表达与对照组比较均有极显著差异性(P＜0.01);③照射后Hela细胞Egr-1表达与对照组比较均有极显著差异(P＜0.01);④Fas表达与凋亡指数相关(r=0.947,P＜0.01);⑤Egr-1表达与凋亡指数相关(r=0.969,P＜0.01);⑥Fas表达与Egr-1表达相关(r=0.98,P＜0.01).结论 ①放射线可诱导Hela细胞中Fas、Egr-1的表达,并能诱导细胞凋亡;②Fas、Egr-1与细胞凋亡关系密切,二者呈正相关;③Egr-1可能通过上调Fas在Hela细胞中的表达而参与了放射诱导的细胞凋亡过程.
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缬沙坦对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的研究遗传性高血压及左室肥厚过程中心肌细胞凋亡及特异性AT1受体拮抗剂缬沙坦对心肌细胞凋亡的影响,探讨高血压左室肥厚及心肌细胞凋亡的可能机制.方法选用10周龄自发性高血压大鼠(SHR)30只,随机均分为缬沙坦治疗组(SHR+缬沙坦组)和非治疗组(SHR无药组),以Wistar鼠作为正常血压对照组.SHR+缬沙坦组给予特异性血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂缬沙坦20mg/(kg·d),溶解于特制饮水器中每天1次胃管灌入.其他两组每天饮用水10ml/kg灌胃.观察期限为12周,每2周测鼠尾动脉血压.12周后采用TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡情况.结果SHR随周龄增长,血压增高、心肌肥厚的同时发生心肌细胞凋亡,缬沙坦用药12周后,SHR心肌细胞凋亡显著降低至接近Wistar组(P＜0.05).结论心肌细胞凋亡是代偿性心肌肥厚发展为心力衰竭的可能机制之一.高血压病早期缬沙坦在降压同时有效抑制心肌细胞凋亡.
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M3受体激动对心肌细胞损伤的保护作用
目的探讨激动M3受体对心肌细胞损伤的保护作用.方法以H2O2诱导大鼠培养心肌细胞损伤模型为基础,给予M3受体激动剂胆碱和M3受体阻断剂4DAMP进行干预.末端标记法(TUNEL)行细胞凋亡检测;Western Blot蛋白印迹检测凋亡抑制蛋白Bcl-2.结果①胆碱可显著降低H2O2对心肌细胞的损伤,提高心肌细胞存活率,并降低细胞的凋亡率;②胆碱可增加凋亡心肌细胞Bcl-2的表达;③M3受体阻断剂4DAMP可逆转胆碱的上述作用(P<0.01).结论 M3受体激动对H2O2诱导的心肌细胞损伤有保护作用.
关键词： M3受体 心肌细胞凋亡 过氧化氢 Western blot TUNEL -
胃肠道间质瘤中凋亡细胞的表达及意义
目的 探讨胃肠道间质瘤中凋亡细胞的表达及意义.方法 应用TUNEL法观察40例胃肠道间质瘤凋亡细胞的表达情况.结果 良性、潜在恶性、恶性胃肠道间质瘤的凋亡指数(AI)为分别(1.51±0.32)、(1.37±0.17)、(1.02±0.04),良性和潜在恶性胃肠道间质瘤的凋亡指数高于恶性胃肠道间质瘤(P<0.05).结论 TUNEL法标记凋亡细胞对胃肠道间质瘤的恶性程度及预后判断有意义.
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体外培养人肝癌细胞凋亡TUNEL法检测的体会
目的:用缺口末端标记技术(TUNEL)对培养肝癌SMMC-7721细胞系的细胞凋亡进行形态学观察.方法:采用武汉博士德生物公司生产的原位末端标记试剂盒培养肝癌细胞进行TUNEL染色,显微镜观察肝细胞凋亡的形态特征.结果:TUNEL阳性信号为黄色,位于胞核,呈环行、小圆形或颗粒状,提示凋亡细胞有典型的新月体状染色质边集、核浓缩以及有大量微核体的形成.TUNEL阳性细胞大多HE染色表现为凋亡的细胞.结论:TUNEL技术观察凋亡细胞是目前原位观察凋亡的理想方法,特别适用于凋亡细胞的早期检测.
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小鼠肾发育中的细胞凋亡
目的:探讨小鼠肾发育过程中细胞凋亡的发生规律.方法:在树脂切片上,应用原位末端标记技术,观察昆明小鼠发育不同时期的肾中凋亡细胞的分布及量的变化.结果:在肾发生发育的过程中,肾皮质和髓质内几乎所有结构都有凋亡细胞散在分布.其中,肾小体的凋亡指数在生后14 d达到高峰,而肾小管的凋亡指数从生后7d之后变化不大.同时,髓质中的间质细胞也发生了明显的凋亡变化.结论:伴随着肾各种结构的发生发育而出现的细胞凋亡是肾发育的一个基本特征,此过程延续到生后2周.肾单位的数量虽然在生后7d已经不再增加,但是肾小体结构的成熟和分化还在继续进行,可能将进一步促进肾小体滤过功能的成熟.
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DAPK1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义
背景与目的:死亡相关蛋白激酶(DAPK1)是凋亡的正性调节因子之一,在肿瘤的发生发展中具有重要作用.本研究通过检测甲状腺乳头状癌组织和相应的癌旁组织中DAPK1 mRNA表达及细胞凋亡情况,探讨DAPK1与细胞凋亡的关系及其在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用.方法:本研究采用45例由癌及癌旁组织组成的配对甲状腺癌乳头状标本,其中癌旁组织的病理类型分别为:正常甲状腺、结节性甲状腺肿、滤泡状腺瘤,各15例,每例取癌及癌旁组织各一份,分别行连续切片.用原位杂交法检测DAPK1 mRNA表达;用原位末端标记(TUNEL)法检测相应组织中细胞凋亡,计算凋亡指数(AI).结果:甲状腺乳头状癌组织中的DAPK1 mRNA阳性表达率和AI分别为37.78%(17/45),(0.74±0 .30)%;癌旁组织中为71.11%(32/45),(1.39±0.29)%.两者在癌旁组织中的表达均显著高于癌组织(P＜0.01).癌组织中DAPK1 mRNA呈阳性表达者,其AI为(0.94±0.22)%;表达阴性者,其AI为(0.62±0.28)%,两者间差异有非常显著性(P ＜0.001).在连续切片上,DAPK1 mRNA阳性细胞的分布区域与凋亡阳性细胞的分布相似.淋巴结癌转移阳性的癌组织DAPK1 mRNA阳性表达率低于淋巴结转移阴性的病例(17.65% vs 50%,P ＜0.05).DAPK1的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、周围浸润情况无关(P＞0.05).结论:DAPK1有肿瘤抑制作用,其表达低下或缺失可能参与了甲状腺乳头状癌的发生发展过程.检测DAPK1表达水平可作为判断甲状腺乳头状癌转移和预后的参考指标.
关键词： 甲状腺肿瘤/乳头状癌 死亡相关蛋白激酶 凋亡 原位杂交 TUNEL -
细胞凋亡在骨折愈合中的作用
目的探讨骨折愈合过程中细胞凋亡的发生及意义.方法建立颌骨骨折模型,利用末端脱氧核苷酸酶(TdT)介导的dUTP-X切口末端标记(NUNEL)法,原位观察骨折愈合不同时期细胞凋亡的发生情况.结果在整个愈合过程中,均可见凋亡细胞,而膜内骨化期(第5d)和软骨形成期(第11d)凋亡细胞明显增多.结论骨折愈合过程伴随凋亡的发生,通过凋亡机制控制细胞的数量和清除无用的细胞,以利于组织的正常修复.
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前列腺癌p53、bcl-2、bax基因表达与凋亡、增殖的关系
目的研究前列腺癌组织中细胞增殖与细胞凋亡,及其相关蛋白表达意义.方法采用原位细胞凋亡标记技术(TUNEL)及免疫组织化学ABC法对36例前列腺癌(Pca)和11例正常前列腺(NP)组织石蜡切片p53、 bcl-2、 bax、 PCNA蛋白及细胞凋亡检测.结果前列腺癌细胞的增殖指数和细胞凋亡指数较NP明显增高,且AI/PI比值较正常组织AI/PI低(P＜0.01); 随着肿瘤分级的增加,细胞增殖水平明显增加(P＜0.01).p53蛋白表达与前列腺癌细胞增殖水平相关; bcl-2蛋白表达与细胞凋亡水平相关(P＜0.05); bax基因表达与凋亡无关,但发现它们的bcl-2/bax的比值与凋亡有关,结果显示:高bcl-2/bax比值多见于低凋亡组;低bcl-2/bax比值多见于高凋亡组.结论细胞增殖与细胞凋亡均参与了前列腺癌的发生、发展.p53基因与细胞增殖水平的调控有关.bcl-2和bax在细胞凋亡调节中起到重要作用,由于bcl-2蛋白过量表达引起bcl-2/bax失平衡,在前列腺癌发生、发展过程中起到重要作用.
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前列腺良、恶性病变组织中细胞增殖与细胞凋亡表达的相关性研究
目的:研究前列腺良、恶性病变组织中细胞增殖与细胞凋亡的关系及其生物学意义.方法:对36例前列腺癌(Pca)、20例前列腺增生(BPH)和10例正常前列腺(NP)的细胞增殖和凋亡情况进行研究.应用免疫组织化学ABC法检测增殖细胞核抗原(PCNA)来反映细胞增殖活性(PI),用原位末端标记(TUNEL)的方法反映细胞凋亡(AI)情况.结果:PI和AI在前列腺癌组织中的表达明显高于良性前列腺增生(P＜0.01),PCNA与前列腺癌分级有关,随着肿瘤分级增高而增高;前列腺增生组织中细胞增殖活性较正常前列腺明显增高,但细胞的凋亡率却显著下降.结论:细胞增殖与细胞凋亡的增加在前列腺癌的发生和发展中起重要作用;而前列腺组织细胞增殖的增加和细胞凋亡的减少参与了BPH形成过程.
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前列腺癌p53、bcl-2、bax基因表达与凋亡、增殖的关系
目的:研究前列腺癌组织中细胞增殖与细胞凋亡,及其相关蛋白表达意义.方法:采用原位细胞凋亡标记技术(TUNEL)及免疫组织化学ABC法对36例前列腺癌(Pca)和11例正常前列腺(NP)组织石蜡切片p53、bcl-2、bax、PCNA蛋白及细胞凋亡检测.结果:前列腺癌细胞的增殖指数和细胞凋亡指数较NP明显增高,且AI/PI比值较正常组织AI/PI低(P＜0.01);随着肿瘤分级的增加,细胞增殖水平明显增加(P＜0.01).p53蛋白表达与前列腺癌细胞增殖水平相关;bcl-2蛋白表达与细胞凋亡水平相关(P＜0.05);bax基因表达与凋亡无关,但发现它们的bcl-2/bax的比值与凋亡有关.表明高bcl-2/bax比值多见于低凋亡组,低bcl-2/bax比值多见于高凋亡组.结论:细胞增殖与细胞凋亡均参与了前列腺癌的发生、发展.p53基因与细胞增殖水平的调控有关.bcl-2和bax在细胞凋亡调节中起到重要作用,由于bcl-2蛋白过量表达引起bcl-2/bax失平衡,在前列腺癌发生、发展过程中起到重要作用.
