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肺癌中PTEN基因表达及其与凋亡的关系
目的:探讨非小细胞肺癌组织中PTEN的表达及临床意义与细胞凋亡的关系.方法:72例肺癌组织(NSGLG和SCLC)、16例癌旁正常肺组织和7例肺良性病变组织PTEN的表达采用免疫组织化学S-P法检测,34例SCLC组织肿瘤细胞凋亡采用TUNEL法检测.结果:PTEN基因在肺癌组织中的阳性表达率为54.16%,显著低于肺良性病变组织的93.75%(P＜0.01).小细胞癌组织中的阳性率为31.8%,显著低于鳞癌组织(62.96%)和腺癌组织(50.00%)(P＜0.05).结论:PTEN基因的缺失与肺癌的发生与发展密切相关,并可能影响肿瘤的分化和癌细胞凋亡.
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妊娠肝内胆汁淤积症胎盘细胞凋亡及其机制的研究
目的 通过观察妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘细胞凋亡及fas基因mRNA在胎盘中的表达,探讨ICP围产儿死亡率升高的原因和机制. 方法采用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交法分别检测20例ICP患者和20例正常产妇胎盘细胞凋亡和fas基因mRNA表达情况. 结果 ICP患者胎盘细胞凋亡指数明显高于正常妊娠组,而fas基因mRNA的表达在两组中无显著差异. 结论 ICP患者围生儿死亡率升高可能与胎盘组织细胞凋亡水平升高有关,但其细胞凋亡的发生可能与fas基因表达无关.
关键词： 妊娠期肝内胆汁淤积症 凋亡 Fas基因 TUNEL 原位杂交 -
人参皂甙对大鼠慢性颈髓损伤中神经细胞凋亡的影响
[目的]探讨大鼠慢性颈髓损伤后人参皂甙对神经细胞凋亡的影响.[方法]4月龄SD大鼠随机分为3组:A组(对照组),切开颈椎后方皮肤后即缝舍;B组(模型组),破坏大鼠颈椎后柱稳定性建立慢性颈髓损伤模型,造模后立即腹腔注射生理盐水2μg/kg,以后每周注射一次;C组(人参皂甙干预组),建立模型后立即腹腔注射人参皂甙100 mg/kg,以后每周注射一次;在此基础上另设D组(人参皂甙+IL-10干预组),建立模型后立即腹腔注射人参皂甙100 mg/kg和IL-10 5μg/kg,以后每周注射一次.腹腔麻醉取C4～C6脊髓行组织学切片,苏木素-伊红(HE)染色观察形态学变化,TUNEL免疫荧光法测定颈脊髓神经细胞凋亡情况,免疫组化法测定颈脊髓IL-10的表达.[结果]成功建立大鼠慢性颈髓损伤模型,光镜下C、D组较B组病理改变明显改善,3个月及5个月时,相同时间点B、C组IL-10的表达与A组比较均明显增高,C组高于B组有显著统计学差异(P<0.01);且A、B、C各组内比较5个月的表达高于3个月时的表达,有显著统计学差异(P<0.01).5个月时,A组大鼠脊髓组织TUNEL阳性细胞极少,B组有大量的阳性细胞,C、D组有少量的阳性细胞,D组少,但均多于A组.[结论]人参皂甙都能抑制慢性颈脊髓损伤中神经细胞的凋亡,促进脊髓神经功能恢复,其作用可能与增高IL-10表达相关,联合运用IL-10可显著提高其疗效.
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新生大鼠缺氧缺血晚期Caspase-3表达及bFGF对其的影响
目的观察凋亡相关基因Caspase-3在新生大鼠HIBD晚期的蛋白表达情况以及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对其影响.方法采用新生大鼠HIBD模型,新生7 d龄Wistar大鼠,随机分成4组:HIBD组、假手术组、对照组(生理盐水治疗)及bFGF治疗组.分别于缺氧缺血(HI)后2周、3周或4周处死大鼠,用免疫组织化学染色方法观察脑组织Caspase-3的表达情况,用TUNEL法观察神经细胞DNA断裂情况.结果①HI后2周和3周时左脑凋亡细胞数高于假手术组(P<0.05);②HI后2周和3周时脑组织Caspase-3平均光密度值(0.39±0.04,0.38±0.04)明显高于相应假手术组(0.36±0.01,0.36±0.02),差异有显著性(P<0.05);③bFGF组于治疗3周后Caspase-3平均光密度值(0.36±0.09)低于对照组(0.37±0.04)和HIBD组(0.38±0.04),差异有显著性(P<0.05);④bFGF治疗3周后TUNEL阳性细胞数(4.20±1.30)亦明显少于对照组(9.80±1.92)和HIBD组(8.00±1.00),差异有显著性(P<0.05).结论 Caspase-3参与了新生大鼠HIBD过程,并持续活化;bFGF可能通过下调HIBD模型鼠脑组织中Caspase-3的表达及阻止其随后的DNA断裂,从而发挥其神经保护作用.
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Accutase消化传代对人胚胎纹状体来源神经干细胞凋亡的影响
目的:观察人类胚胎纹状体来源神经干细胞(neural stem cells,NSCs)经消化酶accutase消化传代后是否发生了大量细胞凋亡.方法:提取人13～18周自然流产胚胎脑组织纹状体的NSCs,体外形成神经球并培养至3～5代.经消化酶accutase消化后传代,运用活性caspase-3染色、TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)染色等方法对多聚甲醛固定的NSCs进行凋亡检测,同时采用Annexin V和Hoechst33342/PI等联合染色方法对活细胞进行凋亡鉴定,以确定NSCs在体外传代后的凋亡情况.结果:在传代后检测的3个时间点(1,24,72 h)中TUNEL染色和活性caspase-3染色均高度重合.传代后1h,TUNEL和活性caspase-3染色所检测到的凋亡率为20％～25％,传代后24 h增高为75％～80％(P＜o.01),而传代后72 h,由于存活下来的细胞开始增殖,所以整体凋亡率降为60％～70％,明显低于24 h(P＜0.01).结论:由人类纹状体来源NSCs形成的神经球,经accutase消化传代后24 h内即发生大量细胞凋亡.对于体外培养的NSCs,抑制其凋亡可能是促使其自我更新和增殖,终起到提高细胞扩增能力的有效手段.
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甘草次酸对晶状体上皮细胞增殖的抑制作用
目的 研究甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)对培养的兔晶状体上皮细胞(rabbit lens epithelial cells,RLECs)增殖的影响及其机理.方法 首先进行RLECs的体外培养,取第3代的RLECs分别加入不同浓度的GA和20 mg/L的MMC处理,观察细胞形态学变化、免疫细胞化学方法--脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)进一步鉴别凋亡细胞,利用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)对细胞凋亡率进行定量检测.结果 GA对体外培养的RLECs的增殖有显著的影响, RLECs的凋亡率随着GA的浓度增加和时间的延长而增加.结论 GA可以引起体外培养的RLECs凋亡,且对RLECs凋亡诱导作用呈剂量和时间依赖性.
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Beta-防御素抗裸鼠宫颈癌移植瘤生长作用及其机制研究
目的 采用稳定转染pcDNA3.1(+)/mBD2的细胞株复制裸鼠移植瘤模型,通过对荷瘤小鼠肿瘤生长、瘤组织凋亡等指标的观察,揭示mBD2在动物体内抗肿瘤作用机制.方法 将稳定转染PcDNA3.1(+)/mB D2、PcDNA3.1(+)的细胞株SiHa/M、SiHa/K及正常SiHa细胞于裸鼠左前腋下皮下接种,复制裸鼠移植瘤模型.观察肿瘤生长状况、荷瘤小鼠存活时间及肿瘤组织病理改变,采用免疫组织化学方法测定肿瘤组织中目的蛋白的表达,并用TUNEL法检测肿瘤组织的细胞凋亡.结果 成功复制了裸鼠宫颈癌移植瘤模型.肿瘤生长曲线显示,SiHa/M组裸鼠肿瘤生长慢于SiHa/K组和SiHa组(P＜0.05);SiHa/M肿瘤直径小于SiHa组和SiHa/K 组,差异均有统计学意义(P＜0.05).肿瘤组织HE染色结果显示,SiHa/M细胞生长不活跃,局部有出血坏死,病理性核分裂相少;SiHa/K组与SiHa组肿瘤细胞生长活跃,病理性核分裂相多见,瘤细胞侵犯周围脂肪及肌肉组织.免疫组织化学染色结果显示SiHa/M组有mBD2表达;由TUNEL染色结果可以看出,SiHa/M组细胞凋亡较多,而SiHa/K及SiHa组细胞凋亡少,两者之间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 mBD2能够抑制移植瘤的生长,其机制可能与mBD2诱导肿瘤细胞凋亡有关.
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淫羊藿甙对大鼠早期卵巢卵泡发育和卵母细胞凋亡影响的初步研究
目的 探讨淫羊藿甙对早期卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响.方法 用淫羊藿甙对受孕11.5 d大鼠灌胃[100mg/(kg·d)]直至生产,分别取淫羊藿甙灌胃组(试验组)和空白对照组中出生2 d、4 d、8 d龄新生大鼠卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化,免疫组化染色观测caspase-3的定位和表达水平.结果 在试验组新生大鼠,2d龄卵巢卵母细胞巢内卵母细胞比例增高,原始卵泡比例下降;4 d龄卵巢中原始卵泡比例显著增高,发育卵泡比例降低;8d龄卵巢各不同发育阶段卵泡比例与对照组相一致;试验组2d卵巢内TUNEL阳性率降低;Caspase-3主要在卵母细胞巢和原始卵泡的卵母细胞中表达,2 d卵巢表达水平高于4 d卵巢.结论 淫羊藿甙能延缓新生大鼠卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵泡的消耗;能降低2 d龄卵巢卵母细胞的凋亡率,抑制卵母细胞凋亡,增加原始卵泡池的储备量.
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Foxo3a转录因子参与卵母细胞的凋亡
目的 进一步探讨新生大鼠卵巢中Foxo3a(forkhead box group O)转录因子参与卵母细胞凋亡的调节机制.方法 取出生后1、2、3和4d龄大鼠的卵巢,用免疫组化方法观察Foxo3a、Bim和FasL在卵巢组织中的表达水平以及细胞定位,并且应用TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测卵巢内卵母细胞的凋亡变化.结果 免疫组化显示Bim和FasL都在新生大鼠部分卵母细胞巢和原始卵泡的卵母细胞核内和胞浆高表达,且阳性率曲线都在2 d达到高峰,随后逐渐降低,与TUNEL和Foxo3a的阳性率变化曲线一致.然而Bim和FasL的阳性率都低于Foxo3a的阳性率.结论 Foxo3a可能同时诱导Bim和FasL的表达从而调节卵母细胞的凋亡.
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Bax mRNA在胆管癌组织中的表达及意义
目的 检测胆管癌组织中Bax mRNA表达及细胞凋亡,探讨Bax mRNA表达与细胞凋亡的关系及其在胆管癌发生、发展中的作用.方法 用原位分子杂交法检测32例胆管癌组织及10例癌旁组织Bax mRNA表达;用原位末端TUNEL法检测相应组织中细胞凋亡.结果 癌旁组织的Bax mRNA阳性表达率明显高于癌组织(P＜0.05);癌旁组织的凋亡指数AI明显高于癌组织(P＜0.05);在胆管癌组织中,Bax mRNA 阳性表达率与其凋亡指数及凋亡阳性细胞的分布均呈正相关(P＜0.05).结论 胆管癌组织中的细胞凋亡受到抑制,Bax mRNA表达低下或缺失参与了胆管癌的发生、发展过程.
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大鼠脊髓横断性损伤胶质细胞凋亡实验研究
为证实大鼠脊髓横断损伤后胶质细胞凋亡的存在及其随时间变化的规律，采用TUNEL法标记 凋亡细胞，并用透射电镜加以证实。结果提示，胶质细胞损伤后凋亡出现于4h，高峰在损 伤后1周。持续3周以上，提示骨髓损伤胶质细胞凋亡同坏死一样，亦是细胞死亡 的重要形式。
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豚鼠耳蜗外毛细胞凋亡时听力变化的实验观察
目的:观察耳蜗外毛细胞发生凋亡时听力改变情况.方法:对20只豚鼠药物造模,诱发耳蜗外毛细胞发凋亡.应用TUNEL技术观察凋亡表达,测试ABR阈值观察听力变化.结果:应用丁胺卡那霉素1天即可诱发豚鼠耳蜗外毛细胞发生凋亡,连续应用3d,耳蜗外毛细胞凋亡呈强阳性表达,但ABR阈值无明显改变;随着用药时间延长,凋亡细胞数目增加,甚至出现部分毛细胞缺失现黎,此时ABR阈值明显升高.结论:耳蜗外毛细胞发生凋亡早期对豚鼠听力无明显影响,随着耳毒性药物应用时间延长,豚鼠ABR阈值升高可能存在两种原因:毛细胞凋亡或毛细胞坏死.
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淫羊藿甙腹腔注射对新生大鼠卵巢发育的影响
目的 应用淫羊藿甙对新生大鼠进行腹腔注射,了解其对卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响.方法 用淫羊藿甙对出生后1～8 d大鼠腹腔注射50 mg/(kg·d),分别取出生后2、4、8 d龄卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL)荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化.结果 在淫羊藿甙腹腔注射组的新生的鼠中,1、2 d龄卵巢内未装配卵泡比例及4、8 d龄卵巢内原始卵泡比例均高于对照组;各日龄组卵巢中卵母细胞TUNEL阳性率明显低于对照组.结论 淫羊藿甙可能通过延缓卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵母细胞凋亡从而增加新生大鼠卵巢中卵母细胞的储备量.
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瑞舒伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后细胞凋亡的影响
目的 观察瑞舒伐他汀对大鼠颈动脉球囊损伤后细胞凋亡的影响.方法 36只雄性SD大鼠随机分为对照组、损伤组和治疗组,每组12只.损伤组和治疗组分别建立大鼠左侧颈动脉球囊损伤模型,右侧颈动脉未予球囊损伤.治疗组于损伤前3 d始连续每天给予瑞舒伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃,对照组和损伤组予9g/L氯化钠溶液灌胃.术后14 d取左侧颈总动脉.进行HE染色和末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素-dUTP缺口标记技术(Terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick end labeling,TUNEL)的凋亡检测.结果 共30只大鼠成功完成本次实验.①血管损伤14 d,可见明显的新生内膜:损伤组和治疗组的内膜面积、内膜/中膜面积的比值较对照组增大(P<0.05);与损伤组比较,治疗组内膜/中膜面积的比值减少,管腔面积增加26%(P<0.05).②对照组血管偶可见单个散在的凋亡细胞;损伤组凋亡细胞阳性率为(12.3±1.8)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组凋亡细胞数目增多,凋亡细胞阳性率达(26.8±3.2)%,与损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.05).凋亡细胞主要位于新生内膜.结论 瑞舒伐他汀可抑制大鼠颈动脉球囊损伤后的内膜增生,可促进大鼠颈动脉球囊损伤后的细胞凋亡.瑞舒伐他汀促进细胞凋亡的作用可能与其抑制内膜增生有关.
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镉诱导小鼠胸腺细胞凋亡的研究
目的探索镉的免疫毒性机制，系统性地研究镉体外诱导小鼠胸腺细胞凋亡的发生，解释其细胞毒性机制。方法通过以下方法检测凋亡：末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)，DNA含量／细胞周期分析，DNA琼脂糖凝胶电泳。结果镉能引起原代培养的胸腺细胞发生凋亡，并呈时间-反应和剂量-效应关系。结论本研究为阐述镉免疫毒性机制提供了依据，尤其对解释镉引起的胸腺萎缩和导致的T细胞介导的免疫力损伤有重要意义。
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榆耳尿素溶多糖对小鼠H22肝癌移植瘤的抑瘤作用
目的:探讨榆耳尿素溶多糖对小鼠H22移植瘤的生长抑制作用及其机理.方法:以抑瘤率、肝指数、胸腺和脾脏指数、IL-2、IFN-γ、TNF-α、ALT、AST等指标来考察榆耳尿素溶多糖对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用,以HE染色法观察肿瘤组织的病理改变,TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:榆耳尿素溶多糖能显著抑制肿瘤的增殖,提高荷瘤小鼠脾脏、胸腺指数以及血清细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α水平,同时降低血清中ALT、AST水平;肿瘤组织HE染色和TUNEL实验表明榆耳尿素溶多糖可通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抑制肿瘤生长的作用.结论:榆耳尿素溶多糖具有一定的抗肿瘤作用,其作用机制可能与免疫调节、促细胞凋亡、保护肝功能有关.
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EBV相关胃癌中Fas/FasL的表达及其与凋亡的关系
背景与目的:大约有10%的胃癌组织EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV阳性,但EBV在胃癌发生发展中的作用尚不明确.本研究检测Fas、FasL在EBV相关胃癌(EBV-associated gastric carcinoma,EBVaGC)中的表达,及其与肿瘤细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)凋亡的相互关系.方法:采用免疫组织化学方法检测49例EBVaGC、20例EBV阴性胃癌(EBVnegative gastric carcinoma,EBVnGC)以及12例正常胃黏膜中Fas、FasL的表达,并采用TUNEL技术检测细胞凋亡指数(apoptosis index,AI).结果:12例正常胃黏膜和69例胃癌组织的Fas阳性率分别为91.7%和76.8%,FasL阳性率分别为16.7%和58.0%,差异有统计学意义(P＜0.05);Fas在EBVaGC和EBVnGC组织中的阳性率分别为71.4%和90.0%,差异无统计学意义(P＞0.05).FasL在EBVaGC和EBVnGC组织中的阳性率分别为63.2%和45.0%,差异有统计学意义(P＜0.05),且在弥漫型中的表达高于肠型(P:0.015);EBVaGC肿瘤细胞AI显著低于EBVnGC(P=0.002);TIL在EBVaGC的数量和AI均较EBVnGC高(P＜0.05),且TIL的AI值与肿瘤细胞FasL表达呈正相关(r=0.237,P=0.028).结论:EBVaGC中FasL蛋白表达的上调及TIL凋亡的降低有利于肿瘤细胞逃避机体免疫监视,为肿瘤的发生发展创造条件.
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柴胡皂甙D对肺腺癌A549细胞的影响
目的 研究柴胡皂甙D对A549细胞的抑制柞用及机制.方法 绘制生长曲线观察柴胡皂甙D对A549细胞的抑制作用,TUNEL法检测凋亡,免疫组化测P53表达.结果 不同浓度的柴胡皂甙D对A549均有抑制作用,且呈时间,浓度依赖性,其P53表达并无差异.结论 SSD能诱导A549细胞的凋亡,从而抑制肺癌A549细胞的生长.
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Survivin与Smac在子宫腺肌病中的表达及意义
目的:探讨抑凋亡蛋白survivin与促凋亡蛋白Smac在子宫腺肌病(adenomyosis,AM)发病中的作用及关系.方法:收集38例AM患者子宫全切标本,取其异位内膜(异位组)及非异位区内膜(在位组);收集20例子宫肌瘤患者子宫全切标本,取其非肌瘤区内膜(对照组).采用Tunel法与免疫组化法分别测定三组内膜细胞凋亡及survivin与Smac表达情况.结果:凋亡指数(apoptosis index,AI),异位组略小于在位组,明显小于对照组;在位组明显小于对照组.Survivin的表达,异位组略高于在位组,明显高于对照组;在位组明显高于对照组.Smac的表达,异位组明显低于在位组和对照组,在位组明显低于对照组.Survivin与Smac的表达在异位组呈负相关,在在位组和对照组均呈不相关.结论:Survivin与Smac可能通过负反馈调节或相互拮抗作用打破凋亡平衡,促进AM发生.
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子宫内膜异位症在位内膜细胞凋亡和增殖特性研究
目的:探讨子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)在位内膜细胞的凋亡和增殖特性.方法:应用免疫组化方法对32例EMs在位子宫内膜组织及24例对照组子宫内膜组织的Ki-67蛋白的表达进行测定.应用TUNEL技术检测两组子宫内膜细胞的凋亡特性.结果:EMs在位内膜细胞分泌期凋亡指教(AI)低于同期时照组子宫内膜(P<0.05);EMs在位内膜组织Ⅲ～Ⅳ期AI低于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05):EMs在位内膜组织Ki-67蛋白表达与对照组差异无显著性(P>0.05),EMs在位内膜组织Ⅲ～Ⅳ期Ki-67蛋白的表达与Ⅰ～Ⅱ期差异无统计学意义(P>0.05).结论:EMs在位子宫内膜细胞因凋亡能力下降并非高度增殖导致细胞活性升高,在位内膜细胞的生物学特性改变在EMs的病理生理中可能起着重要作用,为进一步探索针对在位内膜的EMs治疗策略提供依据.
