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硫辛酸不同方式给药对急性声损伤耳蜗细胞凋亡的抑制效应
目的 比较抗氧化剂硫辛酸(lipoic acid,LA)经静脉与鼓室两种不同给药途径对急性声损伤后动物耳蜗内细胞凋亡过程的影响.方法 48只豚鼠随机分为4组.A:鼓室注射硫辛酸组,不给于噪声暴露;B:单纯噪声暴露组(110 dB SPL稳态噪声暴露5 h);C:噪声暴露+静脉注射硫辛酸组;D:噪声暴露+鼓室注射硫辛酸组.各组动物于处理前和处理后1、3、5、7 d取出豚鼠耳蜗,石蜡包埋、切片.应用原位末端标记技术(TUNEL)标记凋亡细胞,观察耳蜗Corti器、血管纹、螺旋神经节等部位细胞的凋亡特点. 结果光镜下Corti器、血管纹、螺旋神经节TUNEL阳性反应细胞表现为细胞核染成棕黄色或棕褐色.硫辛酸经鼓室注射组(A组)未见明显凋亡细胞.噪声暴露后经鼓室注射硫辛酸组(D组)与经静脉注射组(C组)同单纯暴露组(B组)相比,差异有统计学意义(P<0.05).但C、D两种方式抑制凋亡无明显的差异(P>0.05).结论 110 dB SPL噪声暴露5 h可导致急性声损伤,引起豚鼠耳蜗组织内细胞的凋亡.抗氧化剂硫辛酸经鼓室与静脉注射对噪声暴露后细胞的凋亡皆有明显的抑制效应,但鼓室注射较静脉注射无明显的优势.
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TUNEL与碘化丙啶双染检测耳蜗毛细胞的损伤
目的应用TUNEL与PI(碘化丙啶)双染法检测耳蜗毛细胞损伤.方法听力正常豚鼠经庆大霉素致聋后,做耳蜗基底膜铺片,用TUNEL与PI双染检测耳蜗毛细胞损伤的情况.结果在核固缩、核碎裂及部分核肿胀的细胞中TUNEL染色为阳性,细胞核正常及部分核肿胀的细胞中TUNEL染色为阴性.所有有核细胞均能被PI染色.结论通过TUNEL与PI双染可以确定TUNEL染色为阳性的细胞为凋亡的细胞,而核肿胀的细胞中TUNEL染色为阴性者可能为胀亡细胞.
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曲安奈德对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增生抑制作用的实验研究
目的观察曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)对培养的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增生的影响.设计实验性研究.研究对象ARPE-19.方法采用MTT比色法和TUNEL染色法观察不同终质量浓度(0、10、30、300mg/L)TA分别作用于培养的ARPE-19细胞24、72小时后细胞的增生和凋亡的情况.主要指标吸光度,凋亡指数.结果(1)TUNEL法:质量浓度10mg/L TA不影响ARPE-19细胞的生长,随着质量浓度增大,细胞凋亡程度逐渐增强(t=2.921,P＜0.01),随着时间延长,ARPE-19细胞的凋亡指数逐渐增大(t=2.306,P＜0.01).(2)MTT法:TA浓度和作用时间均对ARPE-19细胞的增生具有显著影响,随着浓度增加和时间延长,其抑制作用的差别有显著性意义(F0.05,3,16=3.24,P＜0.05;F0.05,1,16=4.49,P＜0.05),而且,TA浓度和作用时间相互影响着ARPE-19细胞的生长,对其抑制作用具有统计学意义(F0.05,1,16=4.49,P＜0.05).结论TA能够抑制ARPE-19细胞的增生,通过玻璃体腔内注射TA或联合玻璃体切割手术可能成为增生性玻璃体视网膜病变的有效治疗.
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神经生长因子对脑梗死大鼠神经元凋亡与脑梗死体积的影响
目的 本研究拟观察鼠神经生长因子(nerve growth factor, NGF) 对脑梗死大鼠脑部神经元凋亡与脑梗死体积的影响.方法 建立MCAO大鼠模型,腹腔注射NGF,TUNEL染色检测神经元的凋亡,TTC染色检测脑梗死体积.结果 脑梗死后,神经元的凋亡比较明显.腹腔注射NCF能显著抑制神经元的凋亡与降低脑梗死体积.结论 NGF可以抑制神经细胞的凋亡,其对脑梗死大鼠具有明显的神经保护作用.
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山茶花总黄酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响
目的 研究山茶花总黄酮(TFC)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响.方法 用改良Longa法行造模术,制成局灶性脑缺血再灌注模型,参照Kato法对海马CA1区组织学改变进行分级,采用TUNEL法和电镜法观察缺血区脑细胞凋亡情况.结果 TFC可明显减少缺血区神经细胞的死亡,对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的细胞凋亡有明显的抑制作用.结论 TFC可明显抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的脑细胞凋亡.
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TUNEL技术原位检测多种癌组织中的细胞凋亡
用TUNEL法对肝细胞肝癌、乳腺癌、胃腺癌以及结肠腺癌组织中的凋亡细胞进行形态学观察.主要采用附加蛋白酶K和微波预处理的TUNEL试剂盒(德国宝灵曼公司和武汉博士德公司生产)对福尔吗啉固定、石蜡包埋的上述肿瘤组织进行TUNEL染色,荧光、光学显微镜观察凋亡细胞的形态特征.结果:TUNEL阳性信号位于胞核,呈环形、小圆形或颗粒状.TUNEL阳性细胞大多为凋亡的瘤细胞和肿瘤浸润的淋巴细胞.结论:TUNEL技术是目前原位观察凋亡的理想方法,特别适用于凋亡细胞的早期检测.
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对凋亡细胞TUNEL染色操作中的体会
凋亡细胞的TUNEL染色已在科学研究中广泛应用.由于TUNEL染色的步骤多,操作精细,影响DNA断裂的因素多,实验结果往往不够准确致使实验失败.总结多年实践经验,拟从组织的取材方式、取材大小、固定剂选择、组织离体后缺血时间、组织在固定剂内的固定时间以及实验操作中的诸多细节等方面进行介绍.
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小细胞肺癌中PTEN的表达及其与凋亡的关系
目的探讨小细胞肺癌(SCLC)组织中PTEN的表达及临床意义与细胞凋亡的关系.方法 42例SCLC组织和16例肺良性病变组织PTEN的表达采用免疫组织化学S-P法检测.42例SCLC组织肿瘤细胞凋亡采用TUNEL法检测.结果 42例SCLC组织PTEN缺失率73.8%高于16例肺良性病变(P<0.01),PTEN的缺失与SCLC的临床TNM分期相关,与细胞学亚型、性别、年龄无关.PTEN蛋白的缺失与小细胞肺癌癌细胞凋亡无关.结论 SCLC中存在PTEN缺失并对SCLC的发生、发展起着重要作用.
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胃癌中survivin基因的表达与相关性研究
目的探讨survivin基因表达与胃癌生物学行为及bcl-2、p53和凋亡指数(AI)的相关性.方法应用免疫组织化学SP法检测87例胃癌中survivin、 bcl-2 和p53的表达,应用TUNEL法检测AI.结果 survivin、 bcl-2和p53的阳性率分别为79%,86%和77%.survivin表达与胃癌组织学类型、浸润深度无关(P>0.05),与淋巴结转移和生存期有关(P<0.05).淋巴结转移阴性组survivin阳性表达率明显高于转移阳性组(P<0.05), 生存＜3年组的survivin阳性表达率明显高于≥3年组(P<0.05).survivin阳性表达与bcl-2和p53阳性表达呈正相关(P<0.01), survivin阳性表达组的平均AI明显低于survivin阴性组(P<0.01).结论 survivin基因可能在胃癌的发生、发展中起重要作用,检测survivin基因蛋白可对胃癌预后分析和进一步治疗提供有效依据,survivin与bcl-2和p53一样可作为判断肿瘤预后的指标.
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大鼠脑出血灶周水肿变化与缺血改变的研究
目的:通过观察大鼠脑出血模型不同时段的脑含水量,灶周缺血区,凋亡细胞指标的改变,探讨血肿灶周水肿、缺血的变化.方法:自体动脉血注入法制作大鼠脑出血模型,于脑出血(ICH)损伤后3、5、7、14、21 d时间点进行脑含水量测定,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,应用图像处理软件,结合病理组织学改变,比较各个时间点ICH模型血肿灶周水肿与缺血的演变过程.结果:TTC染色,血肿周围色淡染,梗死带内径逐渐扩大,14 d后变化为显著[3 d组(0.31±0.06)mm;14 d组(2.03±0.13)mml(P<0.01).手术组3～21 d血肿面积逐渐减小,14 d后变化显著[3 d组(19.17±1.52)mm2;14 d组(6.91±0.59)mm2](P<0.01).脑含水量,手术组含水量均高于对照组13 d手术组(82.23±2.71)%;3 d对照组(68.56±1.70)%1(P<0.01).手术组3～7 d脑含水量达高值,而后下降,至14 d后基本恒定[3 d组(82.23±2.71)%;14 d组(72.98±1.81)%1(P<0.01).凋亡细胞,手术组均高于对照组[3 d手术组(20.25±2.50)个;3 d对照组(1.90±0.51)个](P<0.01);手术组3～14 d凋亡细胞持续高表达,14 d后开始下降[3 d组(20.25±2.50)个;14 d组(15.55±2.60)个](P<0.01).结论:大鼠脑出血后,灶周是一种水肿缺血混合区域,3～14 d以水肿为主,14 d后水肿相对恒定,以缺血为主.
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人肾透明细胞癌组织中细胞增殖与凋亡及凋亡相关因子的表达
目的:本课题旨在通过检测人肾透明细胞癌组织中细胞增殖(PCNA)与凋亡(TUNEL法)及凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化,研究这些因子的表达与肾癌的关系.方法:标本离体后分成三组,(Ⅰ)肾透明细胞癌组;(2)癌旁组织组;(3)证常肾组织组,应用HE染色法、TUNEL法及免疫组织化学方法进行观察研究.结果:(1)HE染色结粜:肾透明细胞癌组织镜下可见肿瘤细胞体积较大,圆形或多边形,胞质染色浅,透明或颗粒状,核同缩,间质富有毛细血管和血窦.(2)TUNEL检测结果:在肾癌组织、癌旁组织及正常肾组织组均有凋亡发生.凋亡肾组织细胞表现为染色质凝集、边集,核固缩.正常肾组织组细胞核有弱的阳性表达,癌旁组织表达明显增多,肾癌组织阳性表达少.(3)PCNA免疫组化染色结果:正常肾组织内的细胞核有弱的阳性表达,癌旁阳性表达增加,肾癌组织阳性表达明显增多.(4)Caspase-3、Caspase-9免疫组化结果:Caspase_3 Caspase-9在难常肾组织中可见少量弱的阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少.结论:癌旁细胞组织Caspase-3和Caspase-9的蛋白表达明显高于正常肾组织及癌组织,癌组织表达少;而PCNA则相反,癌组织高于癌旁组织和正常肾组织,正常肾组织表达少.癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,PCNA表达升高说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制.Caspase-3、Caspase-9、PCNA于肾透明细胞癌的表达在肿瘤分期间无明显差异性.
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缬沙坦对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的探讨遗传性高血压及心肌肥厚过程中心肌细胞凋亡的意义及AT1受体拮抗剂缬沙坦对其的影响. 方法 实验动物为8周龄自发性高血压大鼠（SHR）,分为缬沙坦治疗组（SHR+缬沙坦组）和非治疗组（SHR无药组）,以Wistar鼠作为正常血压对照,观察期限为8-16周.采用TUNEL染色法检测心肌组织凋亡细胞数. 结果 缬沙坦治疗后血压降至163±6?mm?Hg,与治疗前175±3?mm?Hg及无药组193±7?mm?Hg比较显著降低.SHR+缬沙坦组心脏指数3.22±0.19?mg/g,较SHR无药组4.02±0.31?mg/g显著降低.SHR+缬沙坦组与SHR无药组比较,前者TUNEL阳性细胞数显著减少至接近Wistar组. 结论 心肌细胞凋亡是代偿性心肌肥厚发展为心力衰竭的可能机制之一.高血压病早期缬沙坦在降压同时有效抑制心肌细胞凋亡.
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骨髓增生异常综合征造血细胞bcl-2VEGF 抗原表达及原位凋亡的研究
目的:研究骨髓增生异常综合征(MDS)bcl-2、VEGF抗原表达及造血细胞原位凋亡之间的关系,探讨MDS发病机理.方法:对MDS患者骨髓活检标本光镜下观察骨髓增生程度、各系造血细胞形态异常情况、不成熟前体细胞异常定位(ALIP)等组织病理学改变,免疫组织化学染色观测bcl-2及VEGF抗原的表达,TUNEL法检测造血细胞原位凋亡.结果:13例患者骨髓均有不同程度的异常造血,异常造血主要累及的细胞系列不尽相同,RA、RAEB两组患者异常造血未见明显区别;有6例患者检出ALIP现象,其中RA 3例(3/8,37.50%),RAEB 3例(3/5,60.00%);VEGF阳性者占9例(9/13,69.23%),其中RA 6例(6/8,75.00%),RAEB 3例(3/5,60.00%);bcl-2阳性者占7例,其中RA 4例(4/8,50.00%),RAEB 3例(3/5,60.00%);TUNEL检测13例患者均为阳性,检出ALIP现象者,其造血细胞发生原位调亡明显,而bcl-2、VEGF与TUNEL结果之间未见明显关联.结论:MDS患者均存在不同程度的细胞凋亡异常,而TUNEL法提供了简便、实用、敏感、快速特异的检测MDS细胞原位凋亡的方法.结果初步显示MDS患者ALIP现象明显者其细胞凋亡也明显,提示调控MDS患者细胞凋亡和恶性克隆增殖可能是两种完全不同的机制.
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结直肠癌组织中Golph3的表达与细胞凋亡的相关性*
目的：探讨Golph3在结直肠癌组织中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法：免疫组织化学方法检测62例结直肠癌组织中的Golph3、Caspase-3的表达，TUNEL法检测结直肠癌组织的凋亡指数，分析结直肠癌组织中的Golph3表达与临床病理因素、细胞凋亡的相关性。结果：Golph3在结直肠癌组织中的表达率明显高于正常结直肠黏膜（P<0.05）；低分化、浸润深度侵及浆膜外、淋巴结转移、Ⅲ期的结直肠癌组织中Golph3的表达率分别明显高于高中分化、浆膜内、无淋巴结转移者、Ⅰ～Ⅱ期结直肠癌组织的表达率（P均<0.05），而Golph3的表达与年龄、性别、肿瘤位置、大体类型、肿瘤长度无关（P>0.05）。Golph3高表达的结直肠癌组织中Cas-pase-3阳性表达率及凋亡指数明显低于Golph3低表达的结直肠癌组织（P<0.05），相关分析显示结直肠癌组织中Golph3的表达与AI呈负相关（r=-0.320，P<0.05）。结论：结直肠癌组织中Golph3存在过表达，与细胞凋亡呈负相关。
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子宫内膜腺上皮细胞中增殖与凋亡相关基因表达初探
目的:探讨不同类型子宫内膜腺上皮细胞的增殖和凋亡情况.方法:采用免疫组化和TUNEL方法检测不同类型子宫内膜组织中增殖细胞核抗原(PCNA)与细胞凋亡表达.结果:(1)从正常子宫内膜直至子宫内膜样癌的PCNA表达逐渐增加.在子宫内膜样腺癌中随着癌细胞分化程度的降低、肌层浸润深度的增加和手术病理分期的升高,PCNA表达逐渐增加,且各组之间PCNA表达均有显著性差异(P＜0.05).(2)从正常子宫内膜、子宫内膜增殖症到子宫内膜样腺癌细胞凋亡的表达逐渐增加.子宫内膜样腺癌中不同分化程度的癌细胞、不同手术病理分期之间凋亡表达均有显著差异(皆P＜0.01);而不同肌层浸润深度之间凋亡表达无显著差异(P＞0.05).(3)PCNA表达与细胞凋亡在不典型增生、子宫内膜样癌中均呈负相关(分别r=-0.943,P＜0.01;r=-0.976,P＜0.01).结论:PCNA是内膜细胞癌变过程中一项重要的指标,其在内膜癌的发生和发展中起重要作用,可作为估计患者预后的一个重要参数.细胞凋亡情况在一定程度上可以反映肿瘤的生物学行为.内膜细胞增殖与凋亡相互作用共同促进内膜细胞过度增殖,从而导致肿瘤的形成和进展.
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金雀异黄素对人乳癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响
目的:采用离体细胞培养的方法,研究大豆异黄酮的主要成分金雀异黄素(GEN)对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用及其作用机理.方法:MCF-7细胞接受不同浓度的GEN处理,MTT比色法测定GEN抑制MCF-7细胞的量效关系;细胞分裂指数试验用于评价GEN对该细胞的恶性增殖的抑制作用;细胞形态学观察及原位细胞凋亡检测法(TUNEL)用于检测细胞凋亡.结果:GEN的IC30与IC50分别为17.5μmol/L及32.0 μmol/L,GEN对MCF-7具有明显的抑制作用,且该抑制作用呈剂量反应关系;各剂量GEN均可抑制MCF-7细胞分裂并且呈剂效关系;细胞形态学观察及TUNEL检测发现GEN处理48 h及96 h后有明显的凋亡细胞出现,并呈现剂效关系,而本次实验未发现其时效关系.结论:GEN可抑制离体培养MCF-7细胞的增殖,其作用机理可能与GEN诱导细胞凋亡的途径有关.
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EAE大鼠外周免疫器官细胞凋亡的研究
目的:研究实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠外周免疫器官中细胞凋亡的情况.方法:应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术和流式细胞仪定量分析动态检测EAE病程不同阶段大鼠外周免疫器官中细胞凋亡的变化情况.结果:实验组脾和淋巴结中细胞凋亡率很低,组间及组内均无显著差异.结论:外周免疫器官在EAE凋亡中不起主要作用.
关键词： 实验性变态反应性脑脊髓炎 外周免疫器官 细胞凋亡 TUNEL 流式细胞仪定量分析 -
实验性衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶、TUNEL的改变
目的 探讨D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺β-半乳糖苷酶(β-gal)表达及凋亡细胞的改变.方法 通过β-gal活性的检测,观察下颌下腺衰老细胞数目的改变;应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,观察下颌下腺凋亡细胞数目改变.结果 β-gal阳性表达以模型组高,正常组低; TUNEL阳性表达以模型组高,正常组低.结论 D-半乳糖所致衰老大鼠下颌下腺β-gal表达增加,凋亡细胞数较正常组明显增多.
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下颌骨髁状突软骨发育中的细胞凋亡及增殖
目的研究胎儿下颌骨髁状突软骨细胞凋亡及增殖情况.方法32例胎儿下颌骨髁状突软骨标本按胎龄分为两组:A组(13～22周);B组(23～33周).采用原位末端标记法(TUNEL)及免疫组织化学法观察胎儿髁状突软骨发育不同时期中的细胞凋亡及PCNA的表达,并对表达结果作定量分析.结果两胎龄组中均有PCNA及TUNEL阳性表达.PCNA、TUNEL染色以增殖层阳性细胞率大,其次为成软骨细胞层,肥大软骨细胞层小.B组PCNA染色强于A组,A组TUNEL染色强于B组.A组TUNEL/PCNA大于B组,TUNEL/PCNA在肥大软骨细胞层大于成软骨细胞层、增殖层小.结论细胞凋亡与细胞增殖在胎儿髁状突软骨发育中具有一定意义.
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妊娠滋养细胞肿瘤中细胞凋亡原位观察
目的:探讨妊娠滋养细胞肿瘤(GTT)中的细胞凋亡情况.方法:采用核酸原位末端标记(TUNEL)法,检测10例正常早期绒毛(NP)、10例完全性葡萄胎(CM)、20例侵袭性葡萄胎(IM)、19例绒癌(CCA)中的细胞凋亡.结果:在NP、CM、IM和CCA中,细胞凋亡指数(AI)分别为1.88%、2.59%、6.45%、1.26%,各组间差异有统计学意义,(F=7.020,P=0.000).其中,在IM与CCA之间,差异有统计学意义(P=0.009).结论:GTT的发生是由于机体监控能力减弱或消失、增殖与凋亡调节系统失调所致.
