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阿霉素联合他莫昔芬对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用
目的:分别研究阿霉素、他莫昔芬及两者联合用药对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及相应机制；方法:建立裸鼠活体二次移植肿瘤的动物模型,并随机分为4组,每组5只.分别为阿霉素用药组、他莫昔芬用药组、阿霉素他莫昔芬联合用药组及对照组；用药处理裸鼠移植瘤模型3周.对照组予以注射生理盐水3周.计算各组移植瘤体积、抑瘤率及裸鼠体重情况,肿瘤组织标本进行免疫组化检测Ki67蛋白的表达,并用TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:联合用药组与单独用药组及对照组的瘤体积比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；用药前各组裸鼠体重差异无统计学意义(P＞0.05),用药后对照组与单独用药组及联合用药组的体重比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；联合用药组与单独用药组及对照组的抑瘤率比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；用药组的Ki67表达阳性率明显低于对照组,联合用药组Ki67表达低；TUNEL法检测联合用药组肿瘤细胞凋亡率为(32.33 ±3.68)％,明显高于阿霉素组(17.40±2.58)％、他莫昔芬(15.40±6.05)％和对照组(3.50±1.50)％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:阿霉素、他莫昔芬均可抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长,两者联合应用较两药单独应用对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用更为显著.
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阿魏菇多糖联合顺铂对小鼠宫颈癌U14细胞的凋亡诱导作用
目的:观察阿魏菇多糖(polysaccharides from Pleurotus ferulae,PFP)、顺铂(DDP)及两者联合对小鼠宫颈癌细胞株U14移植瘤的抑制作用及凋亡诱导作用,并初步探讨阿魏菇多糖的抗肿瘤作用机制.方法:建立昆明小鼠U14宫颈癌模型,并随机分为四组:模型对照组、PFP组、DDP组、PFP+DDP组,治疗10天后检测各组瘤重及抑瘤率,采用TUNEL法检测各组瘤组织凋亡指数(apoptosis index,AI).结果:模型组小鼠体内瘤体积、瘤重明显高于各干预组(P<0.01),PFP+DDP组小鼠体内瘤重和瘤体积分别为[(0.40±0.61)g,(197.84±11.99)mm3 ]低于DDP组[(0.61±0.26)g,(211.46±14.58)mm3]; PFP组、DDP组、PFP+ DDP组瘤组织凋亡指数均高于模型对照组,其中以PFP+DDP组明显.结论:PFP联合DDP比两药单独应用抑制肿瘤生长及诱导肿瘤细胞凋亡的作用更强,二者具有协同抗癌作用.PFP可以增强DDP的药物敏感性,其作用机制可能是通过诱导宫颈癌细胞凋亡而实现的.
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胃癌及癌前病变细胞凋亡与Caspase-9,Bax表达的关系
目的:探讨细胞凋亡基因Caspase-9和Bax在胃癌前病变和胃癌发展中的作用.方法:应用免疫组化S-P法检测 Caspase-9和Bax在57例胃癌及48例非癌胃黏膜组织的表达,用原位末端标记法(TUNEL法)检测相应胃组织细胞凋亡.结果:Caspase-9蛋白在非癌胃黏膜组(慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生)阳性表达率分别为 100.00%、86.67%、50.00%、42.85%,呈逐渐下降趋势.慢性浅表性胃炎组中Caspase-9蛋白阳性表达率与肠上皮化生、不典型性增生有显著性差异(P＜0.05),肠上皮化生组Caspase-9蛋白阳性表达率高于不典型增生组,但无统计学差异(P＞0.05).Bax蛋白在48例非癌胃组织中的阳性表达率分别为:慢性浅表性胃炎100.00%、慢性萎缩性胃炎80.00%、肠上皮化生56.25%、不典型增生57.14%,呈逐渐下降趋势,其中慢性浅表性胃炎组Bax蛋白阳性表达率与肠上皮化生、不典型增生有显著性差异(P＜0.05).慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎 、肠上皮化生、不典型增生、胃癌组织中,AI值( 细胞凋亡指数)分别为(14.72±2.68)%、(10.02±2.34)%、(7.55±2.80)%、(6.09±2.35)%、(3.26±1.23)%,呈逐渐下降趋势,有显著性差异(P＜0.05).结论:Caspase-9和Bax可能参与胃癌癌前病变的形成,促进胃癌的发生.
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大肠腺瘤及癌变组织hMLH1和hMSH2表达与细胞凋亡的研究
目的:探讨hMLH1和hMSH2基因在大肠腺瘤及其癌变中的作用,及其表达对细胞凋亡的影响.方法:采用免疫组织化学染色检测63例大肠腺瘤、20例腺瘤癌变和20例大肠癌组织hMLH1和hMSH2表达;同时采用TUNEL法检测其细胞凋亡指数(AI).结果:大肠腺瘤、腺瘤癌变和大肠癌组织错配修复基因hMLH1、hMSH2的表达率逐渐降低,与正常大肠相比相差显著,随腺瘤不典型增生程度增加其阳性率逐渐降低;大肠腺瘤、腺瘤癌变和大肠癌中hMLH1表达缺失者细胞凋亡指数较显著高于其阳性者,且大肠腺瘤不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级hMLH1-与hMLH1+组存在差异显著;而hMSH2-与hMSH2-间AI仅大肠腺瘤组有显著性差异,不典型增生Ⅰ、Ⅱ级组hMSH2-与hMSH2+间AI差异显著,而不典型增生Ⅲ级组hMSH2蛋白的表达阴性与阳性间AI无统计学差异.结论:DNA错配修复基因突变或功能缺失与大肠癌的发生有关,可能系大肠癌发生过程中的早期事件,且可能与大肠肿瘤细胞凋亡活性增加相关.
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自体免疫性甲状腺疾病中甲状腺组织凋亡与凋亡相关蛋白Fas/FasL和Bcl-2表达研究
目的:探讨细胞凋亡相关蛋白Fas/FasL和Bcl-2在自体免疫性甲状腺疾病(ATDs)中的表达及意义.方法:采用原位细胞凋亡检测(Tunel法)及免疫组化SP法进行检测.桥本甲状腺炎(HT)19例,Graves病(GD)13例,对照组非毒性结节性甲状腺肿(NTNG)(结甲)7例.结果:HT及GD滤泡细胞表达Fas蛋白,阳性率分别为100%和80.01%,结甲组滤泡细胞为57.14%.HT及GD分别与结甲组相比有显著差异(P《0.01).HT及GD中均有滤泡细胞表达FasL和Bcl-2,而结甲中FasL没有表达.Bcl-2的表达在HT和GD中较强,而在结甲组织中的表达较弱,与HT和GD相比有显著差异(P《0.01).结论:在HT、GD中滤泡细胞通过表达Fas和FasL,并经过Fas与FaL的作用导致部分滤泡细胞凋亡.在HT、GD中由于滤泡细胞通过增强Bct-2的表达,从而使得Fas和FasL介导的滤泡细胞凋亡作用减弱.凋亡相关蛋白的表达在自身免疫性甲状腺病的发生发展中有重要作用.
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宫颈癌血清NO、Gal-9的表达及其与细胞凋亡的相关性
目的:探讨NO、Gal-9在宫颈癌血清中的表达及二者与宫颈癌细胞凋亡的关系,并分析血清NO、Gal-9在宫颈癌中表达的相关性.方法:利用硝酸还原酶法分别检测宫颈鳞状细胞癌患者、CINⅡ-Ⅲ患者及对照组患者血清中NO的含量;选用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组患者血清中Gal-9蛋白的表达水平;原位末端标记(TUNEL)法检测相应各组患者宫颈细胞的凋亡情况,计算凋亡指数(apoptotic index,AI).并对三项指标进行相关性分析.结果:CSCC组与对照组比较:血清NO及Gal-9水平显著升高(P<0.05);宫颈细胞AI值明显升高(P<0.05).CINⅡ-Ⅲ 组与对照组比较:血清NO及Gal-9水平明显升高(P<0.05);宫颈细胞AI值显著升高(P<0.05).CSCC组与CINⅡ-Ⅲ组比较:血清NO及Gal-9水平升高(P<0.05);宫颈细胞AI值升高(P<0.05).血清NO与Gal-9之间呈显著正相关(P<0.01);同时,血清NO及Gal-9均与宫颈细胞AI值呈正相关(P<0.01).结论:血清中NO、Gal-9的过度表达参与了HR-HPV相关的宫颈鳞状细胞癌的发生发展及细胞凋亡;宫颈癌血清中NO和Gal-9具有正相关性.
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枸杞子提取液对单眼视觉剥夺性弱视大鼠视网膜的保护作用
目的:观察枸杞子提取液(LBA)对视觉剥夺性弱视大鼠视网膜的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法:新生Wistar大鼠21只,雌雄不限.随机分为空白对照组(5只)、治疗对照组(8只)及治疗组(8只).1周后,缝合治疗对照组及治疗组大鼠单侧眼睑,建立动物模型.4周后,拆除手术缝线,并给予治疗组大鼠LBA1 mg/kg治疗,每日一次.空白对照组及治疗对照组自由进食.6周后处死所有大鼠,摘取眼球.应用伊红-苏木素(HE)染色观察视网膜的改变;应用TUNEL检测视网膜细胞凋亡的状况;应用免疫组织化学检测Bcl-2蛋白(Bcl-2)、Bax蛋白(Bax)及caspase-3在视网膜细胞的表达.结果:与空白对照组相比,治疗对照组Bax及caspase-3的表达明显增强(P<0.05),Bcl-2的表达明显减弱(P<0.05);与治疗对照组比较,治疗组Bax及caspase-3的表达均明显减弱(P<0.05);而Bcl-2的表达明显增强(P<0.05).结论:LBA对视觉剥夺性弱视大鼠视网膜在视觉发育可塑期内可能具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2、下调Bax及抑制caspase-3的表达,减少细胞凋亡有关.
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Humanin拮抗Aβ_(31-35)诱导的神经元凋亡
为了研究Humanin(HN)对A_(31-35)诱导的大鼠皮层神经元凋亡的影响.本研究采用原代培养的大鼠皮层神经元,应用流式细胞术、TUNEL法、H033342染色法检测不同时间(0、8、16 h)加入不同浓度的HN对A_(31-35)致神经元凋亡的影响.结果显示:A_(31-35)(25μmol/L)引起培养皮层神经元的凋亡率明显增高,神经元凋亡率由7.43%上升到32.69%;凋亡指数由6.87%上升到28.36%(P<0.05).与Aβ_(31-35)同时或提前8 h给予不同浓度(5,10,20μmol/L)的HN对Aβ_(31-35)(25μmol/L)诱导的神经元凋亡均未产生影响;但20μmoVL的HN提前16 h孵育可明显抑制Aβ_(31-35)所致的神经元凋亡.其凋亡率由32.69%下降到20.36%,凋亡指数由28.36%下降到17.57%.本研究结果提示,HN拮抗Aβ_(31-35)致神经元凋亡作用具有剂量和时间依赖性.
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角化棘皮瘤皮损CD4 CD8和细胞凋亡的检测
目的探讨角化棘皮瘤(keratoacanthoma,KA) 皮损中T淋巴细胞与细胞凋亡及其意义.方法应用免疫组化技术检测皮损部位CD4,CD8,CD56,S-100蛋白;用末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)介导的d-UTP生物素缺口末端标记技术(TUNEL), 原位检测28例角化棘皮瘤皮损中凋亡细胞. 结果 28例KA中,CD4,CD8,CD56,S-100蛋白的阳性率分别为85.71%,92.86%,82.14%和67.86%.CD4阳性率低于CD8,但无显著性差异(t = 1.54, P>0.05).46.43%KA(13/28)瘤中心出现凋亡细胞.KA凋亡率(21.89%)与CD8阳性率呈显著正相关(r = 0.904, P<0.001).结论淋巴细胞介导的细胞凋亡可能在KA的自行消退中发挥重要作用.
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电镜与TUNEL技术检测银屑病皮肤细胞凋亡的比较研究
目的评价银屑病皮肤中细胞凋亡的情况.方法采用电镜与TUNEL法对银屑病表皮及真皮的细胞凋亡情况进行了观察并比较其结果.结果电镜下银屑病表皮颗粒层中细胞凋亡并不常见,在棘细胞层与基底层则更少,但TUNEL 染色见阳性细胞广泛分布于表皮各层.结论认为电镜与TUNEL 所见不同的原因除了TUNEL法评价细胞凋亡的局限性以外,还有两种可能的解释:①银屑病中角质形成细胞凋亡在早期(可被TUNEL染色)即受到抑制而不能继续发展到具有典型形态学改变的中晚期被电镜识别;②TUNEL阳性的角质形成细胞(含凋亡早期的DNA断链)在发展到具有典型形态学改变之前就已从皮表脱落.
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深低温保存导致胎儿角膜细胞凋亡的初步研究
目的:研究新鲜和深低温保存后的胎儿角膜的细胞凋亡情况.方法:应用TUNEL法对20例新鲜及深低温保存后胎儿角膜进行了细胞凋亡的研究.结果:凋亡的角膜细胞全为细胞核着色.新鲜角膜中平均每高倍视野可见凋亡细胞0.817±0.612个,经冷冻保存后的角膜每高倍视野可见凋亡细胞平均为7.483±2.490个.经统计学处理P<0.05,差异有显著性.结论:新鲜胎儿角膜可见极少量凋亡细胞.胎儿角膜经深低温冷冻保存后,凋亡细胞数量显著增加.降温-复温损伤可能与细胞凋亡有关.
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促红细胞生成素对急性高眼压大鼠视网膜的保护作用
目的:探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)预处理对大鼠急性高眼压视网膜损伤的保护作用及其机制.方法:选用健康成年雄性Wistar大鼠36只,随机分为正常组4只(不做任何处理直接处死),生理盐水组16只(造模前3hip生理盐水),rhEPO组16只(造模前3hip rhEPO).采用生理盐水前房加压灌注法升高大鼠眼压至100mmHg并维持60min,于造模成功后6,24,48,72h分别处死动物摘取眼球制作视网膜石蜡切片.HE染色观察视网膜组织的形态学改变;分别采用TUNEL法和免疫组化法观测凋亡细胞和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)在视网膜中的表达和分布,并利用计算机图像分析系统量化检测指标,进行统计学分析.结果:急性高眼压造成大鼠视网膜损伤,生理盐水组大鼠视网膜内层变薄,所占整个视网膜的百分比较正常组下降,rhEPO组视网膜内层所占百分比较生理盐水组大,差异有统计学意义(P＜0.01);正常组大鼠视网膜未见TUNEL阳性细胞,生理盐水组和rhEPO组在神经节细胞层、内核层均可见TUNEL阳性凋亡细胞,但thEPO组与生理盐水组比较,TUNEL阳性细胞减少,差异有统计学意义(P＜0.01).正常组视网膜p-Akt有弱表达,生理盐水组和rhEPO组在神经节细胞层、内网层、内核层均可见p-Akt阳性细胞,但rhEPO组比生理盐水组表达增强,差异有统计学意义(P＜0.01).神经节细胞层与内核层p-Akt的表达较内网层强.结论:rhEPO预处理可减弱高眼压对视网膜造成的损伤,减少和延缓细胞凋亡的发生,其可能的机制是通过激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信号传导通路上调p-Akt来抑制凋亡的发生.
关键词： 促红细胞生成素(EPO) 视网膜 高眼压 TUNEL 磷酸化蛋白激酶B -
犬恒牙牙根正常发育过程中细胞凋亡的研究
目的:探讨细胞凋亡在牙根发育过程中的生理作用.方法:采用原位末端标记技术(TUNEL),观测犬恒牙牙根发育过程中各组织中凋亡细胞的分布情况.结果:牙根发育时期在成牙本质细胞、牙髓组织、牙乳头组织、上皮根鞘、牙槽骨组织中有特异性细胞凋亡发生.结论:细胞凋亡在牙根发育过程中的发生具有时空特异性,提示其在牙根形态形成过程中发挥重要的生理作用.
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不同海拔高原地区严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织细胞凋亡及基因调控机制
目的:探讨不同海拔的高原地区严重烫伤延迟复苏后肺组织细胞凋亡及其基因调控机制.方法:雄性Wistar大鼠240只,分别在1517 m和3848 m海拔高度随机分为延迟复苏组(DFR, n=50), 即时复苏组(IFR, n= 60) 和对照组(n=10), 建立总体表面积30%的Ⅲ度烫伤模型,分别于伤后1, 6, 12, 24, 72和168 h取材.采用组织病理学、组织芯片技术、原位末端标记(TUNEL)法、免疫组织化学染色与图象分析技术,观察肺组织病理学改变与细胞凋亡及Bcl-2和HIF-1α的表达.结果:随海拔的增加,肺泡壁明显增厚,毛细血管内皮肿胀,肺泡腔中出现水肿液且有炎性细胞浸润,DFR组较IFR组差异有统计学意义(P＜0.05),肺泡上皮细胞凋亡逐渐增多,各海拔高度DFR组均较IFR组变化大(P＜0.05). Bcl-2与HIF-1α的阳性表达均位于肺泡上皮细胞的细胞核或胞浆,其表达强度实验组高于对照组(P＜0.05),随海拔梯度上升Bcl-2表达增强,各海拔高度DFR组Bcl-2表达强度高于IFR组(P＜0.05).细胞凋亡与Bcl-2和HIF-1α表达强度的变化呈正相关(r=0.872,0.945,P＜0.05).结论:高原地区严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织细胞凋亡数量随海拔梯度升高而增加,Bcl-2和HIF-1α对细胞凋亡具有调节作用.
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大鼠甲状腺功能状态对心肌细胞凋亡的影响
目的了解甲状腺功能变化对心肌细胞凋亡的影响,探讨甲状腺功能异常影响心肌细胞凋亡的机制. 方法建立实验性甲亢与甲减大鼠模型(n=24),检测血清T3,T4及促甲状腺激素(TSH),利用末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡. 结果正常大鼠及甲亢大鼠未出现心肌细胞凋亡. 甲减大鼠均出现心肌细胞凋亡,凋亡程度左心室＞右心室,并与血清T3,T4呈负相关(r=-0.834,P＜0.001),与TSH呈正相关(r=0.941,P＜0.001). 结论心肌细胞凋亡与甲状腺功能状态密切相关,血液中甲状腺激素参与调控心肌细胞凋亡.
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人脑胶质瘤凋亡的原位研究
目的探讨不同恶性程度胶质瘤中凋亡的作用和意义.方法应用TUNEL技术对38例胶质瘤的凋亡表达及其意义进行了研究.其中低恶性胶质瘤20例,高恶性18例.结果 TUNEL阳性细胞在各级别胶质瘤中均有表达,其在高分化的Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤的阳性率(凋亡指数)明显低于Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤(2.8±0.5 vs 5.6±1.2,P＜0.01),其表达强度与胶质瘤的良、恶性程度明显相关(P＜0.01).结论不同级别胶质瘤凋亡指数有明显差别,TUNEL法可辅助临床判断胶质瘤的良、恶性程度.
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TUNEL技术原位检测肝癌细胞凋亡激光共聚焦显微镜观察
目的:用缺口末端标记技术(TUNEL)对肝硬变、肝细胞肝癌及培养肝癌细胞系的细胞凋亡进行形态学观察. 方法:采用德国宝灵曼公司生产的原位末端标记试剂盒对福尔马林固定、石蜡包埋的肝组织和培养肝癌细胞进行TUNEL染色,激光共聚焦显微镜观察肝细胞凋亡的形态特征. 结果:TUNEL阳性信号为黄绿色或黄色强荧光,位于胞核,呈环行、小圆形或颗粒状,提示凋亡细胞有典型的新月体状染色质边集、核浓缩以及有大量微核体的形成. 在阿霉素诱导的HCC-9204细胞系还可见凋亡细胞的出泡现象. TUNEL阳性细胞大多HE染色表现为凋亡的细胞. 结论:TUNEL技术加激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞是目前原位观察凋亡的理想方法,特别适用于凋亡细胞的早期检测.
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肺癌组织凋亡相关基因的表达意义
目的:探讨肺癌组织中凋亡相关基因Fas,Bax,p53,Bcl-2蛋白的表达意义,为进行肺癌的分子生物学研究提供理论依据. 方法:应用原位末端DNA片段标记法(TUNEL),结合免疫组化技术对57例肺癌切除标本进行Fas,Bax,p53及Bcl-2蛋白检测. 结果:在肺癌组织中凋亡相关基因阳性率分别为:Fas 28%,Bax 70%,p53 69%,Bcl-2 33%,各基因在肺癌不同病理类型中表达率亦不同,且肺癌的淋巴结转移与调亡相关基因表达无明显关系(P＜0.05). 其中,p53,Fas随肺癌病理分期的升高而增加,Bcl-2则随病理分期的升高而减少,而Bax则与病理分期无明显关系(P＜0.05). 结论:肺癌组织有调亡相关基因表达,其表达程度与肺癌的病理类型有关,p53, Fas表达可能与不良预后有关.
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人工冬虫夏草菌粉提高大鼠肝脏保存质量的实验研究
目的探讨人工冬虫夏草菌粉提取液对大鼠肝脏低温保存损伤的保护作用.方法将一定剂量的虫草提取液加入乳酸林格液内,分别低温保存大鼠肝脏6、12h后,再灌注30min.通过高压液相色谱法(HPLC)检测肝脏组织内的ATP、ADP、AMP含量,测定再灌注流出液内的AST、ALT、MDA及ET含量.并切取肝脏标本,光镜及电镜观察肝组织损伤情况.结果于保存6h后,实验组AST、ALT、MDA和ET均低于对照组,但无统计学显著差异(P>0.05).光镜下除轻度细胞水肿外,无其他明显病理改变;保存12 h后,实验组流出液ALT、MDA及ET含量明显低于对照组(P<0.05),肝脏组织内ATP、TAN及AEC显著高于对照组(P<0.01).实验组细胞凋亡指数显著低于对照组(P<0.01).实验组和对照组在光镜及电镜下的超微结构改变亦有明显差异.结论人工冬虫夏草菌粉提取液可以显著提高保存肝脏的质量.
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宫颈癌细胞凋亡及Fas、FasL基因的表达
目的检测宫颈癌中Fas、FasL的表达和宫颈癌细胞凋亡.方法采用免疫组织化学SP法时47例宫颈癌、16例宫颈上皮内瘤样变(CIN)、10例慢性宫颈炎及10例正常宫颈中Fas和FasL的表达进行检测;并采用TUNEL技术,对47例宫颈癌细胞凋亡进行原位观察.结果 Fas和FasL在宫颈癌中表达与CIN、慢性宫颈炎及正常宫颈有显著性差异(P＜0.01),并且与宫颈癌细胞的分化程度有关;宫颈癌细胞凋亡与癌细胞分化程度、临床分期有关(P＜0.05).Fas和FasL表达阳性的宫颈癌细胞凋亡均高于Fas和FasL阴性组(P＜0.05).结论 Fas及FasL对宫颈癌细胞凋亡具有促进作用.基因治疗特异性改变凋亡阈限有利于改变宫颈癌的自然进程.
