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马拉色菌属种内基因多态性机制的分析
目的 分析RAPD法对马拉色菌属分型的可靠性,并探讨马拉色菌属种内基因多态性的机制.方法 分别用RAPD法和传统的生化法对74株马拉色菌临床株进行分型鉴定,比较两者结果的异同.扩增7株糠秕马拉色菌ITS1区,并进行SSCP分析.结果 大部分马拉色菌的RAPD分型结果与生化结果是符合的,但也有9株马拉色菌被归入别的种.同时即便被归入同一类的菌株也存在多态性的RAPD带型.对糠秕马拉色菌的ITS1区进行SSCP分析可看到明显的单链构象差异,而且其差异程度在RAPD分型中得到了印证.结论 由此推断种内基因多态性会干扰马拉色菌的分子分型,而ITS1的序列是种内基因多态性的敏感指标.
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石斛属植物的RAPD指纹图谱聚类分析
目的 建立石斛属植物RAPD指纹图谱,探讨RAPD分子标记技术在石斛属种类鉴别上的应用.方法 用RAPD方法 构建石斛属内7种石斛及一种石仙桃植物RAPD指纹图谱,对其扩增条带进行分析.结果 共扩增出53条带.分布在0.25～1.3kb之间.其中39个条带有遗传多样性.约占总数的73.6%.经聚类分析不同石斛间的遗传距离分布在0.04762～0.68421,平均遗传距离为0.44380,而石仙桃与石斛属植物的平均遗传距离为0.71734.结论 石斛属植物的遗传多态性丰富,与种外植物遗传距离较大,RAPD技术可作为石斛属植物鉴别的有效方法 .
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长江流域南方鲇(Silurus meridionalis)和鲇(Silurus asotus)分子遗传标记的建立
目的为南方鲇和鲇的分类提供分子鉴定的依据.方法随机扩增多态性DNA技术(RAPD).结果建立了南方鲇和鲇的分子遗传标记,即S449-1.0kb.结论南方鲇和鲇的分子遗传标记可在遗传育种中用于物种的有效鉴定,应用随机扩增多态性DNA技术可以发现并建立两个种之间鉴别的分子遗传标记.
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一种改进的鲇鱼( Silurus asotus and Silurus meridionalis )基因组DNA的高效提取方法
目的介绍一种改进的高效提取基因组DNA的方法.方法采用有机溶剂提取法,并加以若干改进.结果采用改进后的方法获得了量大且质量好的基因组DNA,完全能满足RAPD研究的需要.结论该方法值得在鲇鱼(genus Silurus)基因组DNA提取中推荐使用,也可为其他鱼类的相关研究提供参考.
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野生天麻和栽培天麻的DNA指纹图谱分析
目的:对野生天麻和三种人工栽培天麻进行DNA指纹图谱的鉴别研究,了解其间遗传变异的大小,并建立天麻品种的检定方法.方法:采用RAPD技术.结果:从45个引物中筛选出23个扩增稳定且谱带清晰的引物,共得到209个遗传标记.DNA指纹图谱显示,各样品间有遗传差异,具有不同的遗传特征,据此可进行鉴别.结论:RAPD技术可作为天麻鉴别的参考方法.
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三七DNA指纹图谱分析
目的:对文山三七和广西三七进行DNA指纹图谱的鉴别研究,了解其间遗传变异的大小,并建立三七品种的检定方法.方法:采用RAPD技术.结果:从45个引物中筛选出23个扩增稳定且谱带清晰的引物,共得到211个遗传标记.DNA指纹图谱显示,样品间有遗传差异,具有不同的遗传特征,据此可进行鉴别.结论:RAPD技术可作为三七鉴别的参考方法.
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宁夏枸杞道地性研究回顾与展望
本文综述了道地药材宁夏枸杞的研究现状,且仅就宁夏枸杞道地性的研究成果作一简要回顾,并以此展望该领域的发展,为宁夏枸杞道地药材形成模式的终确立奠定基础,对于宁夏枸杞的种质资源利用、道地药材品种确定及其质量评价具有重要现实意义.
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云南铁线莲属12种药用植物的RAPD分析
目的:通过对12种铁线莲属药用植物进行遗传多样性和亲缘关系分析,为生药鉴定提供依据.方法:随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析遗传多样性,UPGMA类平均法进行聚类分析.结果:利用筛选出的10个随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到89条带,其中多态性带有89条,多态性百分率为100%.采用UPGM聚类法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,得出反映各种间亲缘关系的树状图.对多数种而言,种间差异明显,同种不同分布点也存在差异,但同一分布点的不同个体差异较小.结论:该标记技术对铁线莲属植物的生药鉴定是可行的,在系统学方面的应用有待进一步研究.
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婴儿头部念珠菌病1例及病原菌的FCM和RAPD分析
目的报告1例婴儿头部念珠菌病,并对其病原菌进行流式细胞(FCM)和随机扩增多态性DNA(RAPD)分析.方法对患儿皮损进行真菌镜检和培养,真菌经芽管试验、科玛嘉念珠菌显色培养基、API 20C AUX系统鉴定;FCM方法测量真菌细胞的总DNA含量、细胞周期及增殖指数(PI),RAPD分析其基因指纹图.并以一白念珠菌标准珠为对照.结果本例和对照白念珠菌菌株稳定生长阶段细胞的总DNA含量相等,G0/G1期及G2M期细胞数相差较少,S期细胞数及增殖指数相差较多;两株白念珠菌的扩增条带数量和片段大小无差异.结论婴儿头部念珠菌病其病原菌进入DNA合成期的细胞多,增殖活性高,发生了致病力的变化,但在致病过程中基因基本稳定.
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几种常见真菌的RAPD指纹图谱的建立
目的建立常见真菌的随机引物扩增多态DNA(RAPD)指纹图谱.方法以标准株真菌的基因组DNA为模板,采用(AC)10,(GTG)5,AP3和M13等4种RAPD引物扩增产物条带组合,建立特征性指纹图谱,并与常规真菌培养结果进行验证比较.结果单独一种引物往往不能够产生特征性的基因指纹,但是4种产物的组合,却可以形成肉眼直观的、足以区分常见真菌型别的指纹图谱.此图谱与门诊真菌培养结果比较,一致率达95%.结论皮肤科真菌RAPD指纹图谱的建立和不断扩大将有望成为传统真菌检测的一个快速、可靠的补充.
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分子生物学技术在蚤类分类学研究中的应用
蚤类是重要的医学昆虫,是鼠疫的重要传播媒介,鼠疫也是我国法定的甲类传染病之首.随着分子生物学技术的不断发展.蚤类基因组DNA的提取方法 也日渐成熟.研究蚤类分子系统学的方法 手段也取得了革命性的进展,DNA重组、基因克隆、限制性内切酶的应用以及DNA测序等技术使得对蚤类的核酸分子系统学研究成为可能.而后产生的聚合酶链反应技术以及DNA测序成本的逐步降低更是大大促进了蚤类核酸分子系统学的进展.分子生物学的发展为传统意义上的蚤类系统学研究提供了新的技术手段,有着广阔的应用前景.
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细粒棘球蚴和多房棘球蚴的随机扩增多态性DNA分析
利用RAPD技术,对细粒棘球蚴和多房棘球蚴两种包虫幼虫的基因组DNA进行扩增比较,对7种随机引物进行筛选,结果表明,在本实验条件下,其中3种引物OPB16、OPB11和OPB10的扩增产物可明显地将棘球蚴和泡球蚴在基因水平上区分开来.
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8株霍乱弧菌耐药状况及RAPD同源性分析
目的 分析蚌埠市2010年霍乱弧菌对抗生素的敏感性和同源性,为霍乱防控提高依据.方法 选取2010年安徽省蚌埠市O1/O139群霍乱病例分离株8株,采用WHO推荐的改良Kirby-Bauer纸片法,分析霍乱弧菌对15种抗生素在体外的药物敏感性；应用随机引物扩增多态性(RAPD)技术对其作分子流行病学分型和同源性分析.结果 所有O1/O139群霍乱弧菌对氨苄西林、头孢唑啉、丁胺卡那、庆大霉素、舒普生、氧哌嗪青霉素、头孢曲松、亚胺培南均100％敏感,对复方新诺明、四环素、强力霉素均100％耐药.O139群霍乱弧菌在氯霉素、诺氟沙星、环丙沙星等的敏感度上与O1群霍乱弧菌有一定的差异.根据随机扩增多态DNA聚类分析可以将检出的O1/O139群霍乱弧菌分为2个型别.结论 O139群霍乱弧菌耐药率较O1群霍乱弧菌高,应根据不同菌型选择相应的抗生素药物进行治疗.分离的O1群霍乱弧菌有同源性.
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山兰不同部位DNA提取的比较研究
目的 研究珍稀植物山兰的假鳞茎、叶片、花芽中的DNA的质量,为开展分子鉴定等研究提供依据. 方法 采用CTAB法提取其基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳对其进行质量检测,用分光光度计进行浓度及纯度检测,并分别进行RAPD扩增.结果 不同来源的DNA的电泳均有明显条带,表明质量均较好. 花芽提取的DNA浓度高,为356.82μg/μL;叶片次之,为215.43μg/μL;假鳞茎低,为93.76μg/μL. 3个部位提取的纯度相近,不同部位提取的DNA模板对RAPA扩增没有明显影响. 结论 山兰3个部位提取的质量均较好,可以进行后续的酶切及PCR扩增等实验. 从来源上,采用叶片提取DNA好.
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人参基因组RAPD条件的优化
目的确定药用人参佳随机扩增多态DNA(RAPD)分析方法.方法以药用人参新鲜叶为材料,研究对影响RAPD反应的各因素进行优化.结果药用人参RAPD反应体系及程序为:在25μL反应体系中,含40ng模板DNA,0.3μmol/L随机引物,0.2mmol/LdNTPs,2.5μL10×PCRBuffer,2.0UTaq酶;扩增程序为:第一步94℃预变性2min,第二步94℃变性1min,第三步36℃退火45s,第四步72℃延伸90s,返回至第二步重复40个循环,第六步72℃延伸10min,后4℃保存以备电泳.结论建立了人参RAPD的优化反应体系及程序.
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德尔卑沙门菌的随机扩增多态性DNA分析
[目的]对2004年湖北省食源性疾病监测中检测出的德尔卑沙门菌进行分型,探讨RAPD技术在沙门菌鉴别和分型中的应用.[方法]采用RAPD法(random amplified polymorphism DNA),选用11条随机引物,对7株德尔卑沙门菌进行分型,用标准菌株猪霍乱沙门菌(ATCC 50019)和鼠伤寒沙门菌(ATCC 50115)作为对照.[结果]在选用的11条随机引物中,不能分析出任何条带的有3条,扩增条带无多态性的有5条,能够扩增出条带且图谱具有多态性的有3条(WM-l、WM-4、WM-7).利用3条具有多态性的引物进行分析,扩增出54条DNA片段,片段大小为0.3～1.1¨,其中7个菌株共有的片段有44条,显示多态性的片段有10条,可以将7株德尔卑沙门菌分别分成2～3个亚型.[结论]利用RAPD法对同一血清型的沙门菌进行分析,可区分出不同的亚型菌株,能够起到监测菌株的变异情况的作用.
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蒙药冷蒿的遗传多样性随机引物多态性分析
目的研究内蒙古通辽地区蒙药冷蒿的遗传特异性及通辽、呼和浩特、锡林郭勒3个不同地区蒙药冷蒿的遗传多样性.方法采用随机引物多态性(RAPD)方法,从17组RAPD引物中筛选出13组条带清晰、多态性明显并且重复性好的引物用于实验,并利用Popgen32和NTSYS软件进行数据计算与聚类分析.结果①13组引物共产生的209条带中,有201条多态性带,多态位点百分率达96.17%.②3个地区蒙药冷蒿Ht=0.2381,Hs=0.1874,Dst=0.0507,地区间的Gst=0.2129.③通过UPGMA分析,呼和浩特与锡林郭勒盟冷蒿聚为一类,通辽冷蒿单独聚为一类.结论①冷蒿具有较高的遗传多样性且不同地区差异明显.②冷蒿居群总的遗传多样性来自于居群内(78.71%),且居群间有基因的交流.
