首页 > 文献资料
-
RAPD法构建板蓝根和大青叶基因组DNA指纹图谱
目的:采用RAPD法研究和分析不同地区板蓝根和大青叶的遗传差异性.方法:利用随机扩增多态性DNA (RAPD)技术,对3个不同地区人工栽培的板蓝根和大青叶的基因组DNA进行了遗传差异性分析.结果:获得的指纹图谱显示,供试材料之间有共同位点和特征位点,揭示了板蓝根和大青叶资源丰富的遗传多样性.结论:RAPD技术为培植优质板蓝根和大青叶新品种提供了理论依据和现实意义,该技术可用于板蓝根和大青叶种质资源的分类、真伪鉴定等.
-
一种随机引物联合多特异性DNA片段检测结核分支杆菌的新方法
目的:针对目前结核性疾病实验室诊断的局限性,探索一种更为敏感和特异的结核分枝杆菌DNA检测新方法.方法:选取10株江苏地区流行的结核分支杆菌(MTB)菌株,选取临床其他常见菌株及分枝杆菌菌株作为对照组,分别提取DNA作为随机引物的模板.参考国内、外文献设计12条随机引物,并分别对MTB及对照菌株进行单个引物随机扩增,2％的琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分离并切胶纯化,通过TA克隆将纯化片段连接到质粒pEASYTM-T5 Zero并进行测序,通过BLAST-nr比对验证是否为MTB DNA片段.按照所确定的MTB片段序列,在其内部设计、合成一对特异性引物.用此特异性引物扩增对应的随机引物扩增产物,获得MTB特异性条带图谱.并将该方法检测的敏感性和特异性与临床上常用的real-time PCR进行比较.结果:经BLAST-nr比对,随机引物IS986F,S535及IS986R扩增的条带与MTB DNA有高度同源性(均为99％).随机引物IS986F、S535和IS986R分别联合其特异性引物可以检测稀释105倍、105倍和103倍的MTB DNA,其特异性分别为100％、90％和80％.常规real-time PCR可检测出稀释104倍的MTB DNA.结论:随机引物IS986F联合其特异性引物检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性优于S535、IS986R两组,特异性为100％,且灵敏度优于常规real-time PCR法.
-
DNA标记技术在螨类系统学研究中的应用
长期以来,螨类主要依靠其形态特征进行系统学研究.DNA标记是指能反映生物个体或物种间基因组中某种差异特征的DNA片段.近年来,DNA标记技术在螨类系统学研究中得到越来越广泛的应用.本文综述了随机扩增多态性RAPD、限制性内切酶片段长度多态性RFLP、微卫星SSR、核酸序列扩增、扩增片段长度多态性AFLP和直接扩增片段长度多态性DALP等6种DNA标记技术在螨类系统学研究中的应用现状及前景.
-
RAPD技术及其在假丝酵母菌研究中的应用
随着医学科学的发展及人们对深部真菌感染的重视,越来越多的新技术用于临床真菌的检测和鉴定,随机扩增DNA多态性(RAPD)是在PCR基础上发展起来的一种新的基因分型方法.本文综述了假丝酵母菌RAPD分析技术应用的研究进展及前景.
-
8种贝母的RAPD分析
1 引言中药贝母来源于百合科(Liliaceae L.)贝母属(Fritillaria L.)多种植物的鳞茎,具有清热润肺,化痰止咳之功效[1].我国产的贝母属植物有20种和2变种,不同种类贝母药材的市场价格差异较大,传统的鉴定方法有一定的局限性[2],而将先进的分子生物学技术与传统药用植物的研究结合起来,是药用植物研究现代化的重要途径[3].RAPD的核心技术是多聚酶链反应(PCR)[4,5,应用人工合成的10个左右的寡核苷酸引物,随机扩增基因组DNA,产生多态性扩增谱带.本研究通过不同产地的8种贝母RAPD的分析,探讨贝母种间的遗传差异,为进一步发掘和充分利用贝母资源提供理论依据.
-
黔产宽叶缬草的RAPD分析
目的 探讨黔产宽叶缬草在分子水平上的遗传多样性.方法 试剂盒法提取20份宽叶缬草样本的总DNA,扩增多态性(RAPD)技术从40个随机引物中筛选出13个,对总DNA样品进行扩增,Popgene 1.32和NTSYS 2.10e软件分析样本的Nei's、Shannon's多样性指数以及Jaccard遗传相似性系数,UPGMA法进行聚类分析.结果 20份宽叶缬草样本中共扩增出102条清晰条带,其中88条具有多态性,多态率为86.27％,Nei's和Shannon's多样性指数分别为0.303 0和0.453 7,Jaccard遗传相似系数在0.411 8～0.8824之间.另外,UPGMA聚类分析可将来自剑河县的13份样本聚为一类,江口县的7份样本聚为另一类,而且剑河地区又分为栽培与野生样本2个分支.结论 黔产宽叶缬草种水平上具有较高的遗传多样性,其RAPD标记可用于遗传多样性研究,为今后开发该植物的选种与育种工作奠定基础.
-
金龙胆草基因组DNA的提取及均匀设计优化RAPD反应体系
目的 探索金龙胆草DNA的提取并利用均匀设计方法对其RAPD反应体系进行优化.方法 比较改良SDS法和试剂盒提取法提取的DNA效果,通过电泳、紫外分光光度仪检测及RAPD扩增效果确立适合实验操作的佳方法；利用两次均匀设计实验确立佳PCR反应体系,并考察退火温度对扩增效果的影响.结果 改良SDS法较适合金龙胆草基因组DNA提取,25 μL体系中内含10xTaq reaction Buffer 2 μL、Mg2+2.5 mmol/L,dNTPs 4.5 mmol/L,Primer 3.5 μmol/L,DNA模板60 ng,Taq酶1.5U,退火温度为38.9℃.结论 改良SDS法及金龙胆草的RAPD反应体系可以用于金龙胆草的DNA分析.
-
野生与组培金线莲有效成分的比较及RAPD分析
目的 研究人工栽培金线莲替代金线莲野生资源的可行性.方法 比较金线莲组培苗与野生金线莲药材中多糖、氨基酸及总黄酮的量,采用随机扩增多态性DNA (RAPD)技术对金线莲组培苗及野生药材进行了基因组DNA多态性分析.结果 多糖和总黄酮的比较表明,金线莲组培苗与野生品(台湾)的多糖和总酮量相近；总氨基酸比较表明,金线莲组培苗中总氨基酸达9.17％,高于野生品的总氨基酸量；通过随机扩增多态性DNA (RAPD)技术,从中筛选出了能用于鉴别金线莲组培苗的特异性引物.结论 初步证明通过组织培养获得的金线莲组培苗可以代替其野生品,它是解决金线莲资源紧缺的有效途径之一.
-
综合评分法优化柴胡RAPD-PCR反应体系
目的:采用综合评分法优化柴胡RAPD-PCR的反应体系.方法:以柴胡基因组DNA为模板,应用L16(4 5)正交表.研究了Taq酶、Mg2+、随机引物、dNTPs和模板DNA 5种RAPD反应组分浓度变化对扩增结果的影响.结果:优化反应体系为:25 μL反应体系中含有1 × buffer、Taq 酶1.5 U、Mg2+2.5 mmol/L、引物0.4 μmol/L、dNTPs 0.15 mmol/L、模板DNA50ng.结论:综合评分法能客观高效的优化柴胡RAPD反应体系.
-
中药苍术炮制前后DNA指纹图谱研究
目的:探讨苍术炮制前后DNA指纹图谱研究方法.方法:采用RAPD技术对不同产地的茅苍术炮制前后进行DNA指纹图谱研究.结果:不同产地的茅苍术生品DNA指纹图谱一致,几种麸炒苍术的DNA指纹图谱与生品有较大差异.结论:DNA指纹图谱可用于鉴别同种药材的生品.
-
中药乌梅炒炭前后DNA指纹图谱的研究
目的 探讨乌梅炒炭炮制前后DNA指纹图谱特征.方法 采用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)技术扩增植物基因组DNA样品.从10个引物中筛选出能稳定扩增的引物S362(5'-GTCTCCGCAA-3')对不同产地乌梅进行扩增.结果 此种分子生物学鉴别方法可以获得清晰可靠的DNA指纹图谱,不同产地的乌梅生品DNA指纹图谱一致,均有900bp、750 bp、650 bp、550 bp、300 bp、200 bp条带；经炮制后的乌梅炭DNA指纹图谱与生品有较大差异,缺少较长碱基对的扩增条带,均多出了400 bp的条带.结论 RAPD技术可作为乌梅生品道地品种的鉴定的参考方法.
-
用随机扩增多态DNA(RAPD)技术鉴定野山人参
目的:探索用随机扩增多态DNA(RAPD)技术鉴别野山参和栽培人参的可能性.方法:从经过形态鉴定的野山人参和栽培人参药材中提取DNA模板,运用RAPD技术在电泳中产生条带.结果:用80个引物,其中一个引物产生野山人参可重复的特征条带.结论:结果证明应用RAPD技术能有效地区别野山人参和栽培人参.
-
我国利什曼原虫RAPD分析
目的我国不同疫区利什曼原虫分离株的RAPD分析.方法用7种随机引物,扩增来自我国3个疫区(得自利什曼病患者、病犬及白蛉)的利什曼原虫分离株和国际标准株,并将扩增产物进行聚类分析.结果①来自我国山丘疫区及平原疫区的L.d.分离株分别聚为两类,两者遗传距离较远;②来自新疆荒漠疫区、近荒漠疫区及平原地区的L.d.XJ771、L.d.XJ901和L.d.XJ801聚在一类,表明它们的遗传距离较近;③山丘疫区虫株中来自病人和病犬的分离株区别不明显,两者同源性高,表明犬在传播中起着重要作用;④印度平原型标准株L.d.DD8与我国平原疫区虫株聚在一类;⑤L.infantum与我国山丘疫区的L.d.分离株分属于两类;⑥L.d Jed与平原疫区L.d.分离株亲缘关系较近;⑦L.infantum与L.tropica早聚合,遗传距离近.结论我国不同疫区利什曼原虫分离株在基因水平上存有差异.
-
隐孢子虫种株的RAPD分析
目的 对鼠隐孢子虫( Cryptosporidium muris)、小球隐孢子虫( Cryptospordium parvum )和火鸡隐孢子虫( Cryptosporidium meleagridis )3个种8个虫株进行随机扩增多态性DNA (RAPD)分析。方法 从200个引物中选用重复性较好的26个引物对所有虫株进行随机扩增。结果 RAPD分析结果表明：①在隐孢子虫不同种( C. muris、 C. parvum 和 C. meleagridis)之间的基因存在明显的差异，平均遗传距离为7.037；②同种不同分离株之间均有一定差异，平均遗传距离为5.162。结论 RAPD技术能鉴别8个隐孢子虫分离株共有和各自特有基因片段。
-
伯氏疟原虫氯喹抗性株和敏感株基因组DNA比较研究
目的比较伯氏疟原虫敏感株(N株)和抗性株(RC株)基因组DNA差异.方法应用基因组DNA随机多态性扩增(RAPD)和锚定引物扩增DNA(APAD),分别对抽提的伯氏疟原虫N株和RC株基因组DNA进行PCR扩增,并对扩增的产物进行电泳,对结果进行统计分析.结果37条随机引物RAPD方法扩增出440条DNA条带,其中RC株和N株的共有条带是196条,差异带43条.84条锚定多聚A引物APAD方法扩增出952条DNA条带,其中RC株和N株的共有条带是436条,差异带53条.两种方法得到N株和RC株基因组DNA的同源性分别为0.89和0.9l;距离系数分别为0.197和0.155.结论伯氏疟原虫N株和RC株基因组DNA具有高度同源性.
-
不同产地红曲基原菌的RAPD分析
目的：建立中药红曲基原菌的RAPD分析方法。方法：CTAB法提取不同产地红曲基原真菌的基因组DNA；琼脂糖凝胶电泳法检测PCR扩增产物，PHYLIP3.5c 进行聚类分析。结果：S282等10个随机引物的扩增产物谱带多，特征好；产地间指纹图谱呈现出明显的DNA扩增产物多态性。结论：RAPD分析技术可作为红曲鉴定的有用手段。
-
斑马鱼分子遗传位标及多态性研究进展
过去二十年间,分子遗传位标可揭示DNA水平的多态性,在斑马鱼的遗传研究中所占比重越来越大.本文介绍分子遗传位标及斑马鱼遗传图谱,探讨这些遗传位标使用时的优缺点,展示斑马鱼品系的多态性.
-
实验兔RAPD反应体系的优化及引物筛选
目的 建立实验兔随机扩增多态DNA(RAPD)的优反应体系,并对RAPD引物进行筛选优化.方法 以白毛黑眼(WHBE)兔,日本大耳白(JW)兔,新西兰(NZW)兔为实验材料,对影响RAPD反应的各因素进行优化,摸索出佳的Mg2+,dNTP,Taq酶,引物和DNA模板的浓度,并从60个随机引物中筛选出适合实验兔RAPD反应的引物.结果 优RAPD-PCR反应体系为:在20 μl的反应体系中,Mg2+1.5 mmol/L,dNTP 0.25 nmaol/L,Taq酶1.25 U,引物5 μmol/L,模板DNA 40 ng.60个RAPD引物中剔除了重复性差,条带模糊的引物后,有25个引物稳定,扩增出来的条带清晰、多态性高.结论 本研究筛选出的25个引物和建立的PCR体系可应用于实验兔的RAPD反应.
-
两个地理株青海血蜱基因组DNA差异研究
目的研究青海血蜱是否有种型差异.方法分别提取青海血蜱两个地理株的DNA,选取8条不同的随机排列碱基顺序的多聚核苷酸单链为引物,进行RAPD-PCR扩增反应.将扩增产物制备成DNA图谱,比较青海血蜱两个地理株基因组DNA多态性.从DNA水平对青海血蜱两个地理株进行差异分析.结果青海血蜱两个地理株大部分DNA条带是相同的,少数DNA条带不同.结论两个地理株青海血蜱DNA存在着差异.
-
RAPD指纹图谱在莲子GAP实施过程中的应用
目的:建立莲子种质标准.方法:采用筛选到的13条寡核苷酸引物对莲DNA进行RAPD分析.结果:从13个不同品种的样品中扩增出98个条带,其中多态性条带33个,多态性条带百分率为33.7%.数据分析表明,不同品种间的遗传距离较小,但籽莲与其它品种的遗传距离较远.结论:所用的引物可以区分不同的品种,可用于莲子GAP实施过程中的种质资源鉴定与控制.
