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RAPD技术研究6种拟钉螺的遗传变异
目的对来自中国3省5地的6种拟钉螺进行遗传变异研究,明确它们的亲缘关系,为拟钉螺的DNA分类提供依据.方法采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对6种拟钉螺进行PCR扩增,根据扩增产物琼脂糖凝胶电泳的带型,计算各地拟钉螺的遗传距离,并绘制系统进化树;观察比较6种拟钉螺的外部形态和生态环境,并结合RAPD实验分类结果进行综合分析讨论. 结果 RAPD技术可将6种拟钉螺分为4类:①秉氏拟钉螺和向氏拟钉螺;②洪山拟钉螺和新店拟钉螺;③十堰拟钉螺;④武鸣拟钉螺.外部形态和生态环境方面,秉氏拟钉螺与向氏拟钉螺、洪山拟钉螺与新店拟钉螺的外部形态及生态环境较为相似,其它螺种间则差异较大.结论 6种拟钉螺在基因水平上存在差异,此差异与拟钉螺外部形态、生态因素等传统分类因素相关联.
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致病性小肠结肠耶氏菌DNA多态性及其毒力表达
目的探讨致病性小肠结肠耶氏菌(简称：耶氏菌)DNA特征及其表达。方法用聚合酶链反应(polymeraseChain Reaction；PCR)、DNA序列分析、随机扩增多态性DNA(Randomly Amplified Polymorphic DNA；RAPD)检测耶氏茵致病基因(adherent invasionlocus；ail)，并用自凝试验、刚果红试验检测其毒力表达。结果PCR和DNA序列分析证实致病性耶氏菌O：3、O：9、O：5，27血清型含有ail致病基因，而非致病型O：4，33、O：7，8血清型不含有ail基因。此外，O：22血清型也含有ail基因与文献报告ai1核苷酸序列同源性为88.3％。O：3、O：9、O：5，27致病血清型DNA指纹图谱相类似，O：22血清型有部分DNA片段与0：3血清型相似，而非致病O：4，33血清型DNA指纹图谱完全不同。毒力试验显示致病性耶氏茵全部阳性，3株O：22血清型均有少数菌落刚果试验阳性。结论致病性耶氏菌含有ail致病基因，DNA指纹图谱相似，但表现为多态性。O：22血清型含有ail基因，DNA指纹图谱部分与O：3血清型相似，少数菌落毒力试验呈阳性反应，该血清型可能存在潜在致病性。
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布鲁氏菌AP-PCR优反应体系的建立
目的建立布鲁氏菌的随机扩增DNA多态性的优化反应体系,用于布鲁氏菌分子流行病学研究.方法利用几种随机引物及其组合(P1、P2、P3、P4、P5、OPLO4、P3/5、P4/5)进行随机引物PCR的反应(AP-PCR,又称RAPD), 及重复片断引物ERIC1R/ERIC2的随机扩增多态性;另外针对优选引物P5和OPLO4,分别对Mg2+浓度、dNTPs浓度、模板DNA浓度、引物的浓度及扩增过程中的退火温度等影响反应结果的因素,进行了一系列优化组合方案的试验及系统分析.结果引物P5、OPLO4和引物组合P4/5可以得到布鲁氏菌的高分辨率的分型带谱,并建立相应的优化反应体系.结论在严格的优化反应条件下,建立简单、快捷、灵敏度高的RAPD方法,用于布鲁氏菌的DNA多态性研究,为布鲁氏菌分子流行病学的深入研究提供资料.
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用SSR-PCR和RAPD技术研究中国不同地域旋毛虫株的遗传变异
目的对中国不同地域的旋毛虫株基因组DNA进行多态性分析,并为其种及种下分类提供依据.方法采用微卫星锚定PCR(SSR-PCR)及随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对我国6旋毛虫株基因组DNA进行PCR扩增,根据扩增产物电泳条带情况进行SAS分析,计算遗传距离并构建进化树.结果 T3、T7与国内各地域株间遗传距离均大于0.85;湖北株与天津株、黑龙江株与云南株之间的遗传距离均小于0.2.河南株与前4株的遗传距离在SSR-PCR小于0.3,在RAPD小于0.6.结论中国6株旋毛虫在基因水平可分为不同层次的3类:a.湖北株、天津株为一类;b.黑龙江株、云南株为一类;c.不明株与河南株归为一类或者不明株归为a类中.国内6株归属于T1.此外,国际标准株T3、T7分为另两大类.
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RAPD比较分析我国四省区周期型马来丝虫DNA的多态性
本文采用RAPD技术对我国湖北古城、贵州独山、福建建阳和安徽泾县四个地区的周期型马来丝虫成虫基因组DNA的多态性进行扩增分析.结果显示:四个地区马来丝虫基因组DNA扩增产物出现有3条相同条带,多条不同条带,其中湖北古城、福建建阳和安徽泾县三地区马来丝虫株所扩增出的条带极为相似,而贵州独山株马来丝虫扩增出的特异性条带较多.表明这四个地区虫体基因具有明显的同源性,但也存在一定差异.从而进一步证实了我国不同地区周期型马来丝虫出现有种内分化的迹象.
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血吸虫种株随机扩增多态性DNA差异研究
目的对曼氏血吸虫、日本血吸虫的种株基因组DNA进行多态性分析.方法随机扩增多态性DNA技术(RAPD).结果日本血吸虫与曼氏血吸虫种间差异明显,两种间的遗传距离大于0.90;日本血吸虫中国大陆株与台湾株之间存在较大的差异,两者的遗传距离大于0.20;日本血吸虫中国大陆株内,以四川天全为代表的西部山区型地域株与湘、鄂、赣代表的湖沼型地域株之间有一定差异,其遗传距离在0.060～0.067之间;湘、鄂、赣湖区之间并非完全一样,也存在较小的差异,遗传距离在0.000～0.029之间;位于湖北省境内的4个地域株的日本血吸虫存在一定的基因差异;RAPD技术能鉴别血吸虫雌雄性别差异,718bp为雌虫特异扩增条带.结论日本血吸虫中国大陆株已发生不同程度的遗传分化,中国大陆株并非单一的地域株,是由若干不同株构成的复合株;湖北省血吸虫虫株至少存在3个基因类型;RAPD技术能从DNA基因水平区分血吸虫的种株及性别差异,是分析血吸虫基因遗传变异的好方法.
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弓形虫种株DNA多态性研究
目的分析比较3株弓形虫基因组DNA的多态性.方法应用随机扩增的多态性DNA(random amplified polymorphic DNA-RAPD)技术对弓形虫RH株、BH株、PP株基因组DNA扩增产物进行琼脂糖电泳.结果单一及复合引物均能扩增产生多态性的DNA指纹图谱.3株弓形虫基因组DNA扩增产物的带型和强度均有不同.根据Nei's相似系数对3株弓形虫基因组DNA遗传相似性进行定量分析,用不同的引物扩增,虫株间表现出不同的相似性.结论表明3株弓形虫基因组DNA经RAPD反应产生的多态性能够应用于弓形虫种、株的鉴定和分类.
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环境因子对药用植物木榄遗传多态性及其分布的影响
目的 探讨环境因子变化对木榄的DNA遗传多态性的影响. 方法 利用RP-PCR技术分析中国南部3省6个红树群落中木榄的DNA遗传多态性,并与6个群落环境因子数据对比. 结果 在扩增到的1277个DNA片段中,25.5%的DNA片断呈现多态性变化:聚类分析显示,来自于山口、高桥、东寨港以及三亚红树群落的木榄可聚为一支(群落间遗传相似系数大于0.90),文昌和特呈岛木榄分别属于另外两支(与上述4个红树群落的遗传相似系数小于0.90,二者间的遗传相似系数小于0.85);环境因子数据的聚类分析显示,这6个红树群落可分为4支,其中东寨港和文昌为一支,高桥和特呈岛为一支, 山口以及三亚分别属于另外2支. 结论 地理位置的差异是导致木榄遗传水平出现多态性变化的重要原因之一.
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23株灵芝栽培菌种的DNA指纹鉴别
目的收集23株灵芝栽培菌种为材料,从DNA水平上探讨不同产地的灵芝菌种的差异.方法从247个随机引物中筛选出具有较高多态性扩增检测能力的引物9条,对23株灵芝菌种进行RAPD分析.结果以其中的两条随机引物S17和S1005进行扩增分析可以有效鉴别大部分灵芝栽培菌种,作为分子标记.
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RAPD技术在中药材道地性鉴定中的应用
随机扩增多态DNA(RAPD)是近年来应用十分广泛的一种遗传分析技术,它可在对物种没有任何分子生物学研究的情况下进行分子多态的检测,目前已越来越多地用于中药材研究.本文主要对目前应用RAPD技术研究中药材道地性进行了综述.
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肝移植术后阴沟肠杆菌感染耐药性及分子流行病学研究
目的 了解肝移植术后阴沟肠杆菌感染的耐药谱和分子生物学特征及两者的关系.方法 基因分型采用随机扩增多态性DNA(RAPD)法,耐药谱选用K-B法.结果 RAPD分型将28株阴沟肠杆菌分为10种株型,耐药谱则将其分为7种不同的耐药型,28株阴沟肠杆菌中AmpC酶检出率为53.6%,未发现美洛培南耐药株.RAPD的基因分型得的遗传聚类图可分为10类.结论 RAPD技术对肝移植术后阴沟肠杆菌感染的流行病学分析是一个有效的方法,肝移植术后阴沟肠杆菌有很高的耐药性,治疗应首选美洛培南,RAPD指纹图谱与耐药谱分型具有一定的相关性.
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江枳壳种质资源的RAPD分析
通过时江枳壳不同栽培品系的RAPD分析研究,建立了枳壳种质资源的DNA指纹图谱.结果表明:江西枳壳不同栽培品系存在一定遗传差异,但不同品系之间遗传距离较近,应属于同一类群.
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马拉色菌毛囊炎致病菌随机扩增DNA多态性研究
目的:评价马拉色菌随机扩增DNA多态性(RAPD)与生理生化方法在菌种分型上的差异及菌株DNA型别和菌种间的关系,分析其种间和种内的DNA多态性.方法:选取从马拉色菌毛囊炎分离出的马拉色菌,经生理生化及形态学方法鉴定的菌株52株,提取DNA,采用RAPD方法分析DNA多形性.结果:共有90个DNA片断被扩增,从RAPD带型画出的遗传树状图来看,RAPD与生理生化-形态学方法在菌种分型上存在差异,所有52个菌株均可见到一定程度的种间和种内DNA多态性.结论:二种方法在菌种分型上存在差异,菌株DNA型别和菌种间的关系不甚明确；种间、种内存在DNA多态性,种内的DNA多态性反映优于种间.
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PAPD和POD分析技术在金银花品种鉴定中的应用
采用RAPD标记与POD分析方法对金银花两品系进行了分析,试图从DNA分子水平上为两品系的鉴别提供依据.实验结果表明,RAPD技术可有效用于金银花两品系的分类与鉴别,POD图谱亦有一定的差异.
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峨眉黄连及近缘种DNA提取与RAPD反应的优化
目的 对峨眉黄连及其近缘种植物进行DNA的提取和RAPD的反应条件的优化.方法 CTAB法提取DNA,RAPD研究多样性.结果 模板DNA的浓度20ng/反应～60ng/反应;dNTPs的适宜浓度范围为0.2～0.3mmol/L;Mg2+的适宜浓度范围为2.0～2.5mmol/L;其合适的复性温度为39～40℃;1min的延伸时间,40次热循环.结论 按照此优化的RAPD条件进行重复实验,实验结果重现性良好,为峨眉黄连及近缘种的分子生物学研究奠定基础.
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食品中污染酵母菌的RAPD分类鉴定
目的 探索采用RAPD技术对食品污染酵母进行分类鉴定的可行性.方法 采用RAPD技术对从食品中分离到的22株污染酵母菌进行分子分型并以UPGMA法构建以上菌株的带型关系系统树状图.结果 22株污染酵母菌总共扩增出11种不同的指纹图谱,经聚类分析可分为2个聚类群.结论 RAPD技术可以作为一种有效、快速、简便的对污染酵母菌进行分类鉴定的手段.
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野生天麻和栽培天麻的DNA指纹图谱分析
目的:对野生天麻和3种人工栽培天麻进行DNA指纹图谱鉴别研究,了解其间遗传变异的大小,并建立天麻品种的检定方法.方法:采用RAPD技术.结果:从45个引物中筛选出23个扩增稳定且谱带清晰的引物,共得到209个遗传标记.DNA指纹图谱显示,各样品间有遗传差异,具有不同的遗传特征,据此可进行鉴别.结论:RAPD技术可作为天麻鉴别的参考方法.
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鲍曼不动杆菌随机扩增多态性DNA的分子流行病学研究
目的:采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法监测鲍曼不动杆菌医院感染.方法:对临床分离的48株医院感染鲍曼不动杆菌进行RAPD基因分型,绘制亲缘关系树状图,分析菌株间的同源性,确证是否存在医院感染的院内流行.结果:48株鲍曼不动杆菌共分得10个型别,鲍曼不动杆菌存在医院感染的院内流行.结论:RAPD技术可对鲍曼不动杆菌进行分子流行病学研究.
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RAPD在大肠埃希菌0157同源性分析中的应用
目的:研究腹泻病人和食品中分离出的大肠埃希菌0157的分子特征,为0157菌株的流行病学溯源和疫情控制提供有效手段.方法:采用随机引物扩增多态性DNA分析(randomly amplified polymorphic DNA analysis,RAPD)对10株0157菌株进行基因分型.结果:10株菌聚类为3个类群,分属于三个不同的克隆.结论:RAPD技术可用于0157菌株的流行病学调查和溯源.
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鲍曼不动杆菌耐药特性及同源性研究
目的 了解温州医科大学附属第一医院分离的鲍曼不动杆菌的耐药情况;应用RAPD技术监测鲍曼不动杆菌医院感染状况,探讨鲍曼不动杆菌分子流行病学特点.方法 应用纸片扩散法对100株鲍曼不动杆菌进行药物的敏感性实验;应用RAPD DNA基因分型方法对100株鲍曼不动杆菌进行基因分型,通过NTSYSpc软件绘制菌株之间亲缘关系树状图,统计各型别在该院临床各科室分布情况.结果 分离的鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮/舒巴坦,左旋氧氟沙星等抗生素保持相对较高的敏感性以外,对其它常见抗生素的耐药率均已超过了60％;将100株鲍曼不动杆菌用RAPD法分为A-F6个型别,其中B型与C型之间的同源关系近.鲍曼不动杆菌以6个型别中的A型和B型流行为主,其中A型28株,B型24株.结论 该院鲍曼不动杆菌耐药情况相当严重,以A型和B型为主要流行株,个别科室存在着A-F型的科内小流行.
