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不同产地广藿香的RAPD分析
目的研究不同产地广藿香遗传上的差异.方法采用46种引物进行RAPD分析,筛选出可鉴别广藿香RAPD图谱引物6条,发现引物S358能较好地反映不同产地广藿香多态性微小的差别,不同产地的广藿香有三条相同的扩增带,并且S358、S359、S443能将石牌广藿香与同科属其他药材区分开来.结果将不同产地广藿香进行聚类分析,高要的两个广藿香为一类,湛江和海南、石牌的四个广藿香聚为一类;采芝林的一个样品与附院样品聚为一类,而来自清平药材市场的样品单独聚为一类.结论 RAPD分析可以作为不同产地广藿香的鉴定依据之一.
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道地药材阳春砂不同居群的RAPD分析
目的从 DNA分子水平上探讨阳春砂药材的道地性.方法对来自不同居群(春湾、蟠龙和云南 3个居群)的 49个阳春砂仁样品进行 RAPD分析,得到的条带用 Popgene 3.2和 Phylip软件进行数据处理.结果得出 3个居群阳春砂的聚合树状图,表明春湾和蟠龙两个居群的亲缘关系较近,云南居群与春湾、蟠龙两居群的亲缘关系较远.结论为从分子水平上探讨道地药材的形成提供客观依据.
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正交设计在RAPD-PCR条件优化中的应用
目的探索RAPD-PCR条件的优化方法.方法以北五味子为例进行研究,采用正交设计安排RAPD-PCR的各影响条件.结果仅用16次试验就得到了可很好进行RAPD-PCR扩增的几种不同的条件组合.结论正交设计是一种切实可行、快速、经济的RAPD-PCR条件优化方法.
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老年病区铜绿假单胞菌遗传聚类分析
目的:分析老年病区铜绿假单胞菌(PA)多发的原因.方法:对62株 PA菌进行随机扩增多态性 DNA分析(RAPD),采用相关软件分别将"同一时期不同患者"和"同一患者不同时期"两组 RAPD谱型进行遗传聚类图谱分析.结果:"同一时期不同患者"的40株 PA菌相异指数为0.375～0.875,可以分为3个类群;"同一患者不同时期"的22株 PA菌的相异指数为0～0.8947,可以分为4个类群.结论:在老年病区,同一患者长期住院可以反复感染相同或不同株的 PA菌,不同患者间有时存在交叉感染,一定时期表现出聚集现象.同时,也提示了反复感染的同一种菌可能为不同类群或亚群,其耐药性也会有不同程度的差异.
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MRSA的随机扩增多态DNA分型研究
目的:应用随机扩增多态性DNA技术(RAPD),对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行基因分型研究,以确定医院内是否存在MRSA流行.方法:收集我院临床分离的40株MRSA,采用RAPD技术进行同源性分析.结果:40株MRSA经电泳可得到1～11条片段,分为6个基因型.结论:RAPD分型技术简便、快速,在医院感染流行病学调查中具有较大应用价值.
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金黄色葡萄球菌RAPD基因分型研究
目的 了解医院内金黄色葡萄球菌RAPD基因分型,分析MRSA的流行传播情况.方法应用K-B纸片扩散法和随机多态性扩增DNA技术(Randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)对医院分离的金黄色葡萄球菌进行MRSA鉴定和基因分型.结果 57株金黄色葡萄球菌中有MRSA31株,经RAPD扩增后,扩增产物在2～6条带之间,通过聚类分析57株茵产生10个基因型.结论 Ⅵ型为本院金黄色葡萄球菌的流行优势基因型,不同来源菌株基因型分布有明显差异.RAPD分型技术简便、快速,在医院感染流行病学研究具有很大的应用前景.
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幽门螺杆菌基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的相关性
目的 探讨Hp基因型与慢性胃炎、消化性溃疡的关系.方法 对标准株和临床分离株幽门螺杆菌空泡毒素基因vacA和致病岛基因的cagA、cagE、cagT片段进行PCR扩增,对基因组DNA进行随机扩增多态性分析(RAPD),并以Hela细胞测定全部菌株的VacA毒素活性.SPSS13.0软件聚类分析进行基因分型.结果 全部菌株被分为3个型别,慢性胃炎、消化性溃疡和非胃炎非溃疡分别有自己的优势基因型,且各型之间的总体分布差异具有统计学意义.结论 Hp基因型与疾病类型有关,空泡毒素基因和致病岛基因可作为Hp基因分型的靶基因,RAPD是有效的基因分型手段.
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RAPD扩增分枝杆菌DNA优化条件及菌型分型的诊断应用
目的探讨随机扩增多态性DNA (Randomly amplified polymorphic DNA, RAPD)技术在分枝杆菌分型诊断中优化条件及其应用价值. 方法优化RAPD技术扩增分枝杆菌DNA的条件,并分别扩增深圳市临床病人分离株DNA,对比RAPD电泳条带特征. 结果以条带稳定、丰富、清晰为标准,确定引物1 RAPD佳反应条件为: 50μl反应体系中,含100ng模板DNA,2.5mmol/L MgCl2,2U DNA聚合酶,引物0.5μmol/L,dATP、dGTP、dCTP和dTTP各250μmol/L, 反应40个循环,每个循环为:94℃ 1min,36℃ 1min,72℃ 2min.所扩增结核杆菌临床分离株的DNA条带丰富、清晰,各条带差异较明显. 结论 RAPD技术能较好地鉴别MTB和NTM.
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云南6个地域带绦虫随机扩增DNA多态性分子鉴定分析研究
目的 分别对云南省怒江、迪庆、大理、临沧、楚雄和西双版纳的14株带绦虫标本进行分子鉴定分析.方法 在形态学鉴定的基础上取13株牛带绦虫标本株、1株猪带绦虫株、2株亚洲带绦虫标准株和1株牛带绦虫标准株的成节或孕节节片.提取总DNA,随机选择12条引物进行RAPD分析,SPSS软件构建不同地理株系统发育树.结果 12条随机引物共扩增片段134个(以相同bp数为依据),单条引物扩增片段范围为3～22个,平均扩增片段11.17个.P1～6、P9和P11可扩增出特异条带.亲缘关系树状图显示,怒江1～4号(NJ1～4)、迪庆1～3号(DQ1～3)、大理2～3号(DL2～3)与亚洲带绦虫都匀株标准(BZ1)和亚洲带绦虫大理株(BZ3)汇为一支,属于亚洲带绦虫;临沧1号(LC1)、楚雄1号(CX1)、西双版纳1号(BN1)和牛带标准株(BZ2)汇为一支,属于传统牛带绦虫;2支结合后与DL1结合.结论 云南省存在3种带绦虫的流行.RAPD可以用于带绦虫鉴定,同时也为亚洲带绦虫的具体分类定位提供参考依据.
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应用RAPD引物区分小鼠品系
目的用随机扩增多态DNA(Random amplified polymorphic DNA，RAPD)方法区分10个常用小鼠品系。方法从120条随机引物中筛选出稳定性、重复性好的4条多态性引物对10个常用小鼠品系进行RAPD扩增。扩增产物在含溴化乙锭的1.5％琼脂糖凝胶中电泳，紫外透射仪上观察照相。结果仅用这4条引物就可将10个品系小鼠完全区分开来，其中包括遗传背景或外观形态很相似的品系，如BALB/c与BALB/c-nu、KM与BALB/c也能区分出来。结论筛选出的4条引物对实际工作具有指导意义，适用于小鼠常规遗传监测。
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贵州小型香猪群体遗传结构的RAPD分析
目的分析贵州小型香猪的群体遗传结构.方法用经过筛选的31条引物对贵州小型香猪个体基因组DNA进行RAPD扩增.结果经RAPD反应,共扩增出271条带,其中多态性带79条,多态性带频率在0～71%之间,平均为26.6%.不同个体猪拥有的RAPD条带具有差异,但拥有相同条带的个体猪比率较高.该群体猪的相似系数(F)为0.933(0.830～0.980),平均等位基因频率()为0.742,低平均杂合率()为0.258.结论贵州小型香猪个体间具有较好的遗传一致性和遗传稳定性,其群体分化程度处在一个较低的水平.
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应用40条引物进行不同品系小鼠RAPD遗传检测的初步研究
目的:探讨运用RAPD-PCR对小鼠进行遗传检测的可能性,筛选在各品系小鼠间具有多态性的引物.方法:运用40条引物对TA1、BALB/c、KM、NIH、SCID、T739、DBA/2、615、BALB/c-nu/nu等9个品系小鼠的DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖凝胶电泳观察结果.结果:40条引物中只筛选出2条多态性引物,其它38条引物扩增结果无品系间多态性.结论:RAPD-PCR方法可以区分9个品系的小鼠,是一种适宜于小鼠的遗传检测方法.
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非小细胞肺癌的随机扩增多态DNA分析
目的:用RAPD技术检测非小细胞肺癌组织的遗传改变.方法:选用40条含10个碱基的随机引物对16例非小细胞肺癌进行RAPD扩增,扩增产物在含溴化乙锭的1.5%琼脂糖凝胶中电泳,紫外透视仪上观察照相.结果:40条引物都能扩增出清晰的条带,其中22条引物产生的条带在肿瘤与其相应正常组织间无差异,表现为单态性;18条引物扩增出的DNA序列在肿瘤与其相应正常组间存在差异,表现为带的缺失、增加、移动和带强弱差异.结论:用RAPD技术检测出肺癌组织中具较高水平的遗传改变,这种改变与肺癌的发生相关.
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南江黄羊基因组DNA的AFLP和RAPD研究
目的研究南江黄羊遗传多态性和探讨AFLP标记在山羊遗传多态性方面应用的可行性.方法应用RAPD和AFLP两种方法对15只南江黄羊个体基因组DNA进行了分析,并比较两种方法的检测效果.结果RAPD标记检测得到的群体遗传相似系数和多态位点比率分别为0.942和26.98%;AFLP标记检测得到的群体遗传相似系数和多态位点比率分别为0.874和31.4%.结论AFLP方法和RAPD均适合于品系内个体间的遗传检测,并且为准确评价南江黄羊的遗传稳定性提供了相关的参数.
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张家口地区健康儿童呼吸道流感嗜血杆菌带菌现状及DNA多态性分析
目的 了解张家口地区健康儿童呼吸道流感嗜血杆菌(Haemophilus infiuenzae,HI)带菌现状、对常用抗生素的耐药情况及流行特征,为预防、控制流感嗜血杆菌感染提供科学依据.方法 从健康儿童咽拭子标本中分离鉴定流感嗜血杆菌,采用K-B法测定其对抗生素的敏感性,用cefinase纸片检测菌株的β-内酰胺酶；对分离菌株进行生物分型,同时用随机扩增多态性DNA (RAPD)技术进行多态性分析.结果 100份标本中分离出流感嗜血杆菌31株,分离率为31％.所分离菌株中对亚胺培南、氯霉素、头孢克罗等9种抗生素100％敏感,对磺胺甲恶唑-甲氧苄啶耐药率为38.7％,对氨苄西林耐药率为16.1％.菌株β-内酰胺酶产酶率16.1％；生物学分型以Ⅵ型(32.4％)、Ⅷ型(22.6％)为主.RAPD聚类分析显示在95％的相似性水平上,31株HI可以分为8型,每个型有3～5个菌株,分布较平均,没有两个菌株的带型完全相同,没有明显的集中分布趋势.结论 与该地区10年前的研究结果相比,HI分离率、生物型、耐药性均发生了改变.RAPD聚类分析表明该地区正常儿童呼吸道中的流流感嗜血杆菌较少有交叉感染,没有明显的集中分布趋势.
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RAPD技术在唐山市结核分枝杆菌指纹分型研究中的应用
[目的]RAPD DNA指纹分型方法的建立及其在分枝杆菌基因分型中的应用.[方法]收集结核病患者痰标本,分离培养获得分枝杆菌,进行表型鉴定及耐药性检测;提取基因组DNA,在建立RAPD DNA指纹分型方法的基础上对分枝杆菌进行DNA指纹图谱分析.[结果]RAPD指纹图谱分析将102 株分枝杆菌分为7种菌型,其中Ⅰ型35株(34.31%),Ⅱ型28株(27.45%),Ⅲ型24株(23.53%),Ⅳ型6株(5.88%),V型3株(2.94%),Ⅵ型4株(3.92%),Ⅶ型2株(1.97%),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型是主要的3种类型.RAPD扩增特征条带大小为201～1 018 bp.分组统计显示,3种主要的RAPD DNA指纹的分布与患者的居住地、职业、结核菌耐药性有关,而与患者的性别、年龄、结核接触史等无关.[结论]RAPD DNA指纹分型方法是一种简单、快速的分枝杆菌的分型方法;3种主要类型的结核分枝杆菌在唐山地区流行.
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乙酸镍诱导16HBE细胞恶变过程中的K-ras和P15基因的改变及基因组不稳定性分析
目的:检测乙酸镍对K-ras基因和P15基因的改变及基因组不稳定性的影响,从而进一步探讨镍化合物致癌的分子机制.方法:采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析方法探查乙酸镍在诱导16HBE细胞恶变过程中的K-ras基因Exon1和P15基因Exon2存在状况.采用随机扩增多态性技术对乙酸镍在诱导16HBE细胞恶变过程中的基因组不稳定性进行分析.结果:K-ras基因Exon1和P15基因Exon2未发生改变.本实验所选用的7条随机引物均能扩增出清晰、明显的条带,条带数在1-6条之间.7条引物中P4、P7二条引物扩增的片段在实验组和对照组之间无差异.其余5条引物均有差异,对于同一随机引物他们都具有特异的带型.结论:P15基因第2外显子和K-ras基因第1外显子(包括第12、13密码子)可能不是乙酸镍作用的靶部位.在乙酸镍诱发细胞恶性转化过程中,基因组变得逐渐不稳定.
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Lewis肺癌的RAPD分析及其差异片段克隆
目的检测Lewis肺癌的遗传改变,寻找与癌变相关的DNA序列或片段.方法用105条引物对Lewis肺癌及其来源小鼠C57BL/6J正常组织基因组DNA进行随机扩增多态DNA(RAPD)扩增,比较肿瘤组织与正常组织的扩增图,对差异很明显的片段回收、克隆和测序,序列与GenBank数据库进行同源性比较.结果 105条引物中有25条引物扩增出的条带在肿瘤组织与其相应正常组织间存在差异.引物AB7-2和AB7-11扩增所得差异片段L7-2和L7-11回收纯化后克隆测序.L7-2片段长730?bp,该序列与已知序列没有任何相关性.L7-11长779?bp,与小鼠的V kappa 21-11 gene在核酸水平具有90%的同源性.结论本研究用RAPD技术检测出Lewis肺癌存在一定程度的遗传改变,并发现与Lewis肺癌发生相关的DNA序列L7-2和L7-11,这种改变可能与肺癌的发生相关.
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常见视神经疾病的病因和诊断(二)
3.外伤性视神经病变( traumatic optic neuropathies TON):是因各种外力伤及颅眶区或眼部后发生的视神经损伤.若外伤后没有眼球及额面部穿通伤口,初眼底检查正常,仅有伤侧视力受损,直接对光反应有相对性传入瞳孔障碍(RAPD),可称间接性视神经损伤.这类外伤随交通繁荣及体育运动发展,近年有增加的趋势,而且常见于中青年男性.致伤部位以眉弓外侧或额眶部居多.
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川贝母复合群之间的分子生物学亲缘关系的探讨
目的 探讨川贝母复合群之间的分子生物学亲缘关系.方法 从40个随机单引物里,筛选出1个合适的引物,对各样品进行RAPD扩增,同时用亲缘关系较远的浙贝母加以比对,用所得图谱分析和归纳川贝母复合群之间的亲缘关系.结果 在遗传距离为0.65处,可将所有贝母分为4大类,与形态分类学结果比较吻合;野生瓦布贝母与栽培瓦布贝母的扩增图谱十分接近;瓦布贝母居于川贝母复合群之间,与川贝母、暗紫贝母和康定贝母亲缘关系更加接近;川贝母2、康定贝母4及梭沙贝母产生了等级上的变动.结论 利用DNA指纹图谱探讨川贝母复合群之间分子生物学的亲缘关系,对川贝母基源植物分类提出了新的观点.
