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用随机扩增多态DNA(RAPD)区分不同地株微小按蚊
目的:对来自泰国、广西、临沧3个地区的30 只雌蚊进行随机扩增多态DNA分析.方法:RAPD法.结果:UPGMA法构建的分子系统树表明, 30只微小按蚊可归并为显著不同的3个组,证明各群体间存在着明显不同的基因组多态性基因流,不同群体存在着显著的遗传分化.结论:用RAPD可以区分不同地理群体的微小按蚊.
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随机扩增多态性DNA技术鉴别肠道杆菌
肠道杆菌是一大群生物学性状相似的革兰阴性菌,传统鉴别肠道杆菌的方法主要包括细菌培养、生化反应及血清学方法等,但这些传统方法较繁、耗时.随着分子生物学技术的发展,随机扩增多态性DNA(random amplified polymor-phic DNA,RAPD)技术作为一种快速鉴定物种种属的特异性方法被广泛应用.
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鲍氏不动杆菌的耐药性及同源性研究
目的调查当地省级医院临床分离的鲍氏不动杆菌耐药性及产AmpC酶情况,并对AmpC酶阳性的多重耐药菌株进行同源性研究.方法药敏试验采用纸片琼脂扩散法,采用AmpC酶表型筛选法结合PCR法检测AmpC酶,利用RAPD分型技术对AmpC阳性的多重耐药鲍氏不动杆菌进行基因分型.结果106株鲍氏不动杆菌对亚胺培南耐药率低11.1%,对青霉素类、头孢菌素类和单环β-内酰胺类抗生素耐药率均较高,特别是氨曲南和哌拉西林;对氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗生素也有一定的耐药性;共检测出25株AmpC酶阳性菌株,产AmpC酶阳性率占总菌株数的23.58%;通过聚类分析发现5、6、10、12、13、14、20、23号菌株分为同一聚类群;8、17、18号菌株分为同一聚类群.结论鲍氏不动杆菌对各类抗生素均有不同程度的耐药性;AmpC酶表型筛选试验检测AmpC酶结果可靠,操作简便、快速,易于在临床实验室中推广使用;RAPD分型技术对鲍氏不动杆菌进行基因分型对于确定鲍氏不动杆菌菌株间的同源性,监控感染的传播有重要意义.
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RAPD技术对表皮葡萄球菌DNA分型
目的 对表皮葡萄球菌进行DNA分型并分析其多态性,为临床提供采用RAPD分析表皮葡萄球菌同源性的方法.方法 用随机引物RAPD1,对眼科病房分离到的21株表皮葡萄球菌菌株DNA做RAPD并对其做药敏试验.结果 以电泳图谱条带的差异对分离株的DNA分析后,21株表皮葡萄球菌分5个型别,其中属Ⅰ型的菌数占71%.结论 RAPD技术能在DNA水平上对表皮葡萄球菌分型,其方法快速、简易、特异、可靠,适用于该菌致医院感染的追踪及流行病学研究.
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RAPD用于新生儿病房产气肠杆菌分子流行病学研究
目的 建立产气肠杆菌RAPD技术,用于新生儿病房产气肠杆菌分子流行病学研究.方法 在具有10张床位的新生儿病房,于同一时间采自4例同期住院患儿分离出5株产气肠杆菌,做RAPD分析及药敏试验,找出流行相关菌株及分析耐药情况.结果 两株具有相同RAPD指纹图谱的产气肠杆菌是流行相关菌株,分别采自住院第4天和第10天的两例患儿,在新生儿病房内获得;所有菌株不同程度地对氨基苷类、哌拉西林、三代头孢菌素耐药.结论 RAPD技术为产气肠杆菌分子流行病学研究提供了简便、可靠的手段,菌株的耐药情况可能与标本采集之前抗菌药物的应用有关.
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空间诱变育成的茄子"HANGQIE-5"的RAPD体系优化及RAPD分析
目的 对空间诱变育成的"航茄"5号(HQ-5)进行RAPD分析,寻找特异扩增条带,试图为空间诱变育种提供分子生物学证据.方法 "天水长茄"(TSCQ)和"龙果圆茄"(LGYQ)种子分别搭载"神舟"4号和"神舟"3号飞船进行空间诱变后,通过4代地面自交选育得到"天水长茄诱变第4代(TSCQ-MUT-4)"和"龙果圆茄诱变第4代(LGYQ-MUT-4)"2个突变系;利用后两者分别作为父母本进行杂交得到HQ-5.采用正交设计对其RAPD体系进行优化并进行RAPD分析.结果 采用25μL扩增体系(DNA:40 ng,dNTPs:7.5 nmol,primer:10 ng和rTaq聚合酶:1.25 U)进行RAPD反应,发现"TSCQ-MUT-4"与野生型TSCQ相比产生4条差异带,LGYQ-MuT4与野生型LGYQ相比产生1差异带;HQ-5与父母本相比均有6条差异带,有父母本共有带和特有带,并且保持航天诱变产生的变异带.结论 空间诱变可能引起植物DNA水平的变异,有助于选育出新的农作物品种(系).
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随机扩增多态性DNA和同工酶分析鉴别金银花品系
目的采用多态基因研究新技术鉴定金银花品系.方法用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术和过氧化物酶同工酶(POD)电泳分析技术对大毛花忍冬和鸡爪花忍冬两品系进行鉴别.结果大毛花忍冬共扩增DNA谱带24条,鸡爪花忍冬共扩增DNA谱带26条,POD的谱带数目分别为5条和2条.结论两品系DNA指纹图谱和POD指纹图谱具有明显差异.
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酸枣仁与其混淆品及伪品的RAPD分析
目的对酸枣仁及其混淆品和伪品进行DNA指纹图谱的鉴别研究,并对分子生物学在中药材鉴别中存在的一些问题进行探讨.方法应用随机扩增DNA多态性技术对酸枣仁及其易混淆品、伪品进行DNA指纹图谱多态性的比较.结果DNA指纹图谱显示,各样品间具有不同的遗传关系,根据这些差别成功地进行了酸枣仁及其易混淆品、伪品的鉴别.结论RAPD可以有效地鉴别酸枣仁与其混淆品及伪品.同时对RAPD中存在的问题进行了讨论.
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鱼腥草种质资源的RAPD分析
目的分析鱼腥草种质资源在分子水平上的遗传多样性.方法应用RAPD技术对92份鱼腥草种质资源进行检测.结果 34个随机引物中有32个引物(94.1%)扩增产物具多态性.34个引物共得到200条扩增DNA片段,其中93.5%的片段具多态性.每个多态性引物平均可扩增出5.8个多态性片段.峨眉蕺菜和蕺菜种内平均遗传相似系数(genetic similarity,GS)分别为0.521和0.572,二者种间GS值为0.517.峨眉蕺菜与蕺菜中染色体数目为36的细胞型间相似程度高,其平均GS值达0.530.栽培蕺菜类群比其野生类群遗传多样性相对较高.聚类分析表明,利用RAPD技术可将全部供试材料区分开,所有材料共划分为14类.其中,绝大多数(62个)聚为一类,且根据RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系.结论 (1) 鱼腥草种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异.(2) RAPD标记可作为构建鱼腥草DNA指纹图谱的有效工具.(3) 鱼腥草药材道地性与环境因素有关,但更大程度上由其遗传因素所决定.
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野生人参RAPD指纹的研究
目的:分析山参遗传多样性及其遗传特性.方法:用随机扩增多态DNA(RAPD)标记方法对7个来源地不同的山参和1个园参样品进行遗传多样性检测和遗传分析.结果和结论:用14个10-mer寡聚核苷酸引物共检测111个位点,其中多态位点76个,占67.6%,远大于园参内的遗传变异,因此山参在人参育种上有很大利用价值.聚类分析表明,山参之间及其与园参之间的遗传变异,没有超出与近缘种西洋参之间的遗传差异;遗传因素在人参形态变异上的作用小于环境因素,这一结果为"山参"的培育提供了理论依据.
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芍药野生与栽培群体的遗传变异研究
目的探讨芍药(Paeonia lactiflora Pall.)的野生群体和栽培群体之间的遗传分化与中药材赤芍和白芍道地性形成的关系.方法应用RAPD技术,使用21条随机引物对来自11个产地的43株有代表性的芍药样品进行PCR扩增.结果 (1)芍药在物种水平上的多态位点比率为85.26%,基因多样度为0.166;其中野生群体(77.61%)高于药用栽培群体(54.96%)及观赏栽培群体(61.76%);(2)芍药群体间的遗传变异占总变异的29.50%,基因分化系数为0.254;野生与药用群体之间遗传距离远(0.3632),药用与观赏群体之间遗传距离近(0.0973),群体间遗传分化显著(P<0.001);(3)从聚类图看,芍药种内大致分为野生与栽培两大类群.在野生群体中来自多伦的芍药单独聚为一类;在药用栽培群体中产于安徽亳州的与产于浙江磐安、缙云的芍药各聚为一类.结论首次揭示了芍药种群的遗传分化,在分子水平上为赤芍和白芍道地性的形成找到依据.鉴于多伦产芍药(赤芍道地药材的主要来源)的种质资源面临灭绝的危险,建议列为濒危种质加以保护.
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厚朴DNA分子标记的研究正品的RAPD研究
目的利用RAPD技术探讨厚朴种内关系、道地性问题；寻找正品厚朴DNA指纹特征。方法选择代表厚朴主要分布区的11个产地33个的个体材料作为样本，经DNA提取，用74个随机引物进行PCR扩增。结果从17个引物中得到116条带，用于种内关系探讨，经聚类分析，得到3个主要分支及反映正品种及优良品种的特异性引物和条带。结论 (1) 将厚朴分为3个地理宗更合适，分别是：典型的厚朴、典型的凹叶厚朴及中间类型，这与叶的形态等性状一致； (2) “川朴”及“温朴”有明显的遗传分化，且与有效成分相关，故厚朴的道地性主要来源于遗传差异； (3) 具有代表性的样品研究结果可用于正品厚朴DNA指纹鉴别库的建立。
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铁皮石斛野生居群遗传多样性的RAPD分析与鉴别
目的采用RAPD分子标记技术,对铁皮石斛8个野生居群的遗传多样性、亲缘关系以及分子鉴别等进行研究.方法筛选随机引物进行RAPD分析,通过UPGMA聚类,研究铁皮石斛各居群间的遗传关系,构建居群亲缘关系的分子系统树;利用特异性条带对铁皮石斛野生居群进行指纹分析鉴别.结果共筛选出10个有效引物,在8个野生居群材料的RAPD扩增中共得到439个位点,平均每个引物扩增出43.9个位点,每个居群扩增出54.9个位点;在所获得的104条可重现谱带中,9条是单态的,95条是多态的,多态性程度达91.35%,遗传距离在0.590～0.727之间,平均为0.686.结论铁皮石斛居群间遗传差异明显,具有较丰富的遗传多样性;RAPD可以作为铁皮石斛野生居群遗传多态性、居群亲缘关系和分子鉴别研究的有效手段;引物S412可以有效鉴别铁皮石斛的8个野生居群.
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苍术遗传结构的RAPD分析
目的考察苍术遗传特性,探讨不同产地苍术遗传多样性.方法用RAPD方法,选择20个随机引物对47株苍术叶片DNA进行扩增,在种内多态性水平、个体间遗传关系及居群间遗传分化3个方面对苍术的遗传结构进行分析.结果①RAPD共检测到94条谱带,其中77个位点为多态位点.苍术种内多态性百分率为81.91%,Shannon's信息指数0.413 2,Nei's基因多样性指数为0.274 3;②来源于两个亚居群的11个苍术道地药材聚为一类,而其他居群或亚居群的非道地苍术个体均没有各自聚为一类;③苍术居群内、亚居群间和居群间变异分别占总变异的76.74%,11.58%和11.68%.结论本研究所用3个指标均表明苍术种内遗传多样性水平较高;苍术的遗传变异主要分布在居群内,但居群间已形成一定的遗传分化;茅山苍术个体间的遗传距离较小,遗传背景较为相似,并且不论在居群水平还是个体水平,茅山苍术都能单独聚为一类,表明茅山苍术在长期适应环境的过程中,已经发生遗传上的分化.
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DNA指纹谱与HPLC指纹谱对中药地榆质量评价研究
目的为充分利用药源,对中药地榆内在质量全面评价的方法进行研究,以使地榆药材质量标准进一步规范化.方法采用分子生物学技术随机扩增多态性DNA(RAPD)技术和HPLC技术对地榆属的4个品种及其混淆品进行分析.结果可提供清晰RAPD指纹谱;不同品种的黄酮类成分的HPLC指纹谱具有差异性.结论表明这两种方法均可以做为4种地榆品种及其混淆品的质量评价方法.
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HFJ和MIJ近交系大鼠RAPD特征与比较研究
目的 利用人工合成的PCR随机引物,对本单位培育的HFJ和MIJ近交系大鼠基因组DNA进行扩增,建立HFJ和MIJ大鼠RAPD扩增特征图谱；选择常用近交系大鼠Lewis和F344作为对照品系,观察HFJ和MIJ大鼠与对照品系大鼠的RAPD多态性.方法 用酚-氯仿法分别提取4个不同品系大鼠的基因组DNA,从60条随机引物中筛选能够得到清晰扩增条带的30条引物,对HFJ和MIJ大鼠DNA进行扩增.再从30条引物中随机选择12条,对4个品系大鼠基因组DNA扩增,并对扩增条带多态性比较分析.结果 30条引物对HFJ和MIJ大鼠DNA进行扩增,均能获得1～7个较清晰条带,除引物0～08外,条带的分子大小均在200～1 100 bp之间,两品系的引物0-08扩增结果,均在2 000 bp以上的近原点处扩增出1条清晰的条带.HFJ和MU大鼠品系内个体间和两个品系之间,扩增的结果均完全一致；用12条随机引物对4个品系大鼠同时扩增,HFJ和MIJ大鼠扩增结果一致,与Lewis和F344比较,有5个引物出现差异条带.结论 用30条随机引物建立了HFJ和MIJ大鼠RAPD扩增特征性图谱.由于两品系来源于同一对Wistar封闭群大鼠,虽然遗传特性有显著差异,但是在所选30条引物扩增时,未发现多态性.两品系与Lewis和F344之间存在多态性条带.
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不同居群白芍的DNA随机扩增多态性研究
目的 分析6个不同居群白芍的遗传多样性,为白芍的种质鉴定及遗传多样性分析提供依据.方法 运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对浙江磐安、四川中江、安徽毫州、上海崇明、江苏宿迁和山东荷泽居群白芍的基因组DNA进行随机扩增,利用NTsys2.10e软件计算遗传相似性,运用UPGMA法进行聚类分析并构建树状图.结果 共筛选了70个随机引物,从中挑选出8条多态性强、重复性好的引物,共检测出215个位点,多态性位点137个,多态位点比率为63.7％,UPGMA聚类可以将不同来源的白芍很好地区分开.结论 不同产地间的白芍存在丰富的遗传多样性,RAPD分子标记方法可以用来鉴定不同产地的白芍.
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应用RAPD标记技术对树鼩遗传多样性的分析
目的 建立树鼩RAPD(random amplified polymorphic DNA)遗传标记分析方法,了解中缅树鼩种群的遗传多样性.方法 采用PCR技术对40条随机引物进行优化,筛选出能有效用于树鼩群体遗传分析的RAPD位点,对48只树鼩个体的基因组DNA进行PCR扩增,并应用Popgene 1.32与RAPDistance Package Version 1.04等软件进行数据处理,分析树鼩的群体遗传特性.结果 20个RAPD引物共检测到113个位点,平均每个引物可扩增出5.65个位点,其中多态位点数为69个(占61.1%).个体间的遗传相似系数平均为0.8307,个体间遗传距离在0.09～0.27之间,平均遗传距离为0.1693.雄性群体的遗传多态度(H0)(0.1864)略高于雌性群体(0.1470),平均遗传多态度(Hpop)为0.1667;树鼩遗传多态度所占的比例在群体内为48.29%,而雌、雄群体间为51.71%.NJ法进行聚类分析得出T15、T33和T47号树鼩个体聚类成一大类,其余45只树鼩个体聚成另一大类,雌、雄个体呈相互交叉现象.结论 实验所筛选的随机引物可有效用于中缅树鼩种群的遗传结构分析.本树鼩群体具有较好的遗传多样性.
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红鲫C1HD近交系RAPD标记的建立
目的 建立红鲫C1HD近交系的RAPD标记.方法 从80条随机引物中筛选出20条扩增效果和多态性较好的引物,对8尾红鲫C1HD近交系和8尾普通红鲫基因组DNA进行RAPD扩增.结果 S333引物扩增出一条特异性条带,大小约为2.1 kb.结论 S333引物扩增出的特异性条带可以作为区分普通红鲫与红鲫C1HD近交系的分子遗传标记.
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RAPD法构建黑水缬草基因组DNA指纹图谱
目的 采用RAPD 技术对黑水缬草、缬草、毛节缬草及黄花败酱等4 种药用植物进行分子水平的鉴定,并获得清晰可靠的DNA 指纹图谱.方法 采用植物基因组DNA 快速提取试剂盒提取4 种供试材料基因组DNA,以随机引物进行随机扩增. 结果4 种供试材料DNA 指纹图谱具有共同的位点,但又有各自的特征性位点.结论 RAPD 法能有效的将4种药用植物区分开.
