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长期酒精摄入对大鼠骨骼肌组织IR、IRS-1和PI-3K基因表达的影响
目的 研究酒精长期作用下对大鼠骨骼肌胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)、磷脂酰肌醇3-激酶p85亚单位(PI-3K)mRNA表达的影响,探讨酒精与胰岛素抵抗的关系及相关分子机制. 方法 清洁级Wistar大鼠80只(雌雄各半),按体重随机分为对照组和低、中、高剂量组,分别给予蒸馏水以及10%、20%和33%酒精溶液,灌胃剂量为每天10 ml/kg bw.第19周末,断头处死大鼠,测定空腹血糖和血胰岛素,计算HOMA胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).提取骨骼肌总RNA,通过RT-PCR测定IR、IRS-1、PI-3K(p85)mRNA表达水平. 结果 雄性大鼠,与对照组比较高剂量组空腹血糖,低、中剂量组空腹胰岛素水平升高,各酒精剂量组HOMA-IR指数均升高.IR mRNA的表达在中、高剂量组降低,而IRS-1、PI-3K(p85)mRNA表达水平表现为随着酒精剂量的增加先升高后降低,与对照组比较差异有显著性(P＜O.05);与对照组比较,雌性大鼠高剂量组空腹血糖升高、空腹血胰岛素下降,IR、IRS-1、PI-3K(p85)mRNA的表达在中、高剂量组降低(P＜0.05).各剂量组HOMA-IR指数与对照组比较差异无显著性. 结论 长期摄入过量酒精可以造成骨骼肌组织IR、IRS-1、PI-3K(p85)mRNA表达的降低,这可能是酒精降低胰岛素敏感性,引起胰岛素抵抗的分子机制.
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酒精联合高脂饮食对大鼠脂肪组织磷脂酰肌醇3激酶表达的影响
目的 研究酒精和高脂饮食对雄性大鼠脂肪组织磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)P85αmRNA及蛋白水平表达的影响.方法 酒精灌胃和高脂饮食方法建立动物模型.测定空腹血糖和血胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).通过RT-PCR和Western blotting方法测定P85αmRNA及蛋白水平.结果 与普通对照组相比,高脂对照组HOMA-IR指数升高;与高脂对照组相比,各剂量酒精和高脂饮食组血糖升高,胰岛素抵抗指数在低中剂量组升高,各剂量酒精联合高脂饮食组脂肪组织PI-3KP85αmRNA及蛋白表达水平均降低(P
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明日叶查尔酮对糖尿病大鼠肝细胞PI3K和Akt mRNA表达的影响
目的 研究明日叶查尔酮(ashitabe chalcone,AC)对糖尿病大鼠肝细胞磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidy Ⅰ inositol 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶(serine-threoninekinases,Akt) mRNA表达的影响.方法 高脂饲料喂养加链尿佐菌素腹腔注射诱发的2型糖尿病大鼠随机分为糖尿病对照组和高、低剂量AC组,每组10只,均喂饲高脂饲料,分别每日经口灌胃给予明日叶查尔酮0、30和10mg/kg BW.另设一个正常对照组为正常大鼠喂饲普通饲料,实验周期4周.用放射免疫分析法检测血清胰岛素水平,葡萄糖氧化酶法测血糖含量,逆转录聚合酶链式反应方法检测肝细胞PI3K和Akt mRNA表达水平,蛋白印迹法测肝细胞Akt磷酸化水平.结果 高剂量AC组空腹血糖和血清胰岛素水平显著低于糖尿病对照组,而PI3K mRNA、Akt mRNA和磷酸化Akt蛋白表达水平均显著高于糖尿病对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 明日叶查尔酮可上调糖尿病大鼠PI3K和Akt mRNA的表达水平,改善胰岛素抵抗.
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明日叶查尔酮对胰岛素抵抗细胞PI3K-Akt-GLUT4信号通路的影响
目的 研究明日叶查尔酮(Angelica keiskei chalcones,AC)对胰岛素抵抗L6细胞磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶-葡萄糖转运体4(PI3 K-Akt-GLUT4)信号通路的影响.方法 采用高浓度胰岛素诱导的胰岛素抵抗L6细胞,分别加入5、10、20μmol/L终浓度的明日叶查尔酮共同培养24 h,葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖含量,逆转录聚合酶链式反应方法检测细胞PI3K和Akt的mRNA表达水平,蛋白印迹法检测GLUT4和Akt的蛋白表达水平.结果 胰岛素抵抗组细胞培养液的葡萄糖含量显著高于空白对照组(P＜0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则降低(P＜0.05);中、高剂量AC组细胞培养液葡萄糖含量均低于胰岛素抵抗组(P＜0.05),而PI3K mRNA、Akt mRNA和GLUT4、Akt蛋白表达水平则升高(P＜0.05).结论 明日叶查尔酮可上调L6细胞胰岛素抵抗模型PI3K-Akt-GLUT4信号通路的表达水平,增强其对葡萄糖的摄取利用,改善胰岛素抵抗.
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陈皮半夏通过PI3K-Akt通路对衰老脐静脉内皮细胞中p53和p21表达的影响
目的 探讨陈皮半夏是否能通过衰老脐静脉内皮细胞(HUVEC)中磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3 K-Akt)信号通路对p53和p21的表达进行干预.方法 半夏、陈皮按照1:1的比例配伍,常法煎煮制备陈皮半夏汤剂.对5只SD大鼠使用陈皮半夏汤剂灌胃,分离血清.使用0.25％胰岛素-柠檬酸盐诱导HUVEC衰老,使用流式细胞仪检测细胞周期,建立细胞衰老模型后,通过Western blot法检测陈皮半夏干预衰老HUVEC中PI3K、磷酸化Akt (p-Akt)、p53和p21的表达.结果 0.25％胰岛素-柠檬酸盐诱导可以有效建立细胞衰老模型.与空白对照组和陈皮半夏对照组比较,模型组中PI3K、p-Akt、p53和p21表达显著升高(P＜0.01);陈皮半夏和PI3K特异性阻滞剂LY294002干预后,PI3K、p-Akt、p53和p21表达较模型组均显著降低(P＜0.05).结论 陈皮半夏有可能通过衰老HUVEC中PI3K-Akt通路调控p53和p21的表达.
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导痰汤对颈动脉硬化家兔PI3K和磷酸化蛋白激酶B表达的影响
目的 探讨导痰汤治疗颈动脉粥样硬化的作用机制.方法 将20只新西兰白兔造模前经基础饲料适应性喂养1周后随机分为正常对照组、模型组、治疗组及治疗+LY294002组各5只.通过HE染色,观察颈动脉硬化的情况；通过免疫组化方法,观察导痰汤对颈动脉硬化家兔血管磷脂酰肌醇(PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达的影响.结果 与模型组比较,导痰汤治疗组血管内皮细胞胞浆中PI3K和p-Akt水平显著升高(P＜0.01)；使用PI3K/Akt通路特异性阻滞剂LY294002后,模型组内皮细胞内PI3K和p-Akt阳性表达显著低于治疗组(P＜0.01).结论 导痰汤可以通过上调血管内皮细胞中PI3K和p-Akt的表达,达到治疗颈动脉硬化的作用.
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陈皮、半夏对衰老脐静脉内皮细胞中PI3K-Akt和磷酸化p38表达的影响
目的 研究陈皮、半夏对衰老脐静脉内皮细胞(HUVEC)中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路和磷酸化p38表达的影响.方法 0.25％胰岛素-柠檬酸盐诱导建立HUVEC衰老模型.采用Western blot方法检测陈皮、半夏干预后衰老HUVEC中PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化p38(p-p38)的表达水平.结果 与空白对照组和陈皮半夏对照组比较,诱导衰老组PI3K、p-Akt和p-p38表达显著升高(P＜0.01);陈皮半夏干预组、PI3K阻滞组PI3K、p-Akt 和p-p38表达均较诱导衰老组显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 陈皮、半夏对衰老HUVEC中PI3K-Akt通路和磷酸化p38的表达有抑制作用.
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萝卜硫素调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导胃癌HGC27细胞凋亡
目的 研究萝卜硫素对胃癌HGC27细胞凋亡的影响,探讨其作用机制.方法 培养HGC27细胞,分别以不同浓度的萝卜硫素干预,检测萝卜硫素对HGC27细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测萝卜硫素对 HGC27 细胞凋亡的影响;采用 WB 法检测萝卜硫素诱导胃癌 HGC27 细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3的表达及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)信号通路中PI3K、Akt及p-Akt蛋白的表达;WB检测抑制剂LY294002、萝卜硫素单独及联合诱导 HGC27 细胞后,PI3K、Akt 及 p-Akt 蛋白表达变化.结果 萝卜硫素呈时间浓度依赖性抑制HGC27细胞的增殖.与对照组比较,10、20、40 μg/ml萝卜硫素组细胞凋亡率[(10.29±1.57)%、(23.68±1.69)%、(35.29±2.38)%比(2.52±0.74)%]增加(P＜0.05),Bax[(18.92±2.18)、(34.06±5.06)、(44.08±5.69)比(12.51±2.15)]、caspase-3[(29.37±3.06)、(49.24±6.08)、(81.55±7.95)比(18.16±2.35)]表达升高(P＜0.05) , Bcl-2[(56.39±5.27) 、(33.06±4.26)、 (25.61±4.01)比(78.25±7.26)] 、 PI3K[(51.06±5.27) 、(42.06±5.21)、(23.08±4.51)比(79.07±8.12)]、p-Akt/Akt[(58.62±5.34)、(35.24±4.06)、(14.52±2.56)比(82.64±8.25)]蛋白表达降低(P＜0.05);与对照组比较,40 μg/ml萝卜硫素组、LY294002组、LY294002+萝卜硫素组细胞中 PI3K[(56.41±5.36)、(34.37±4.52)、(23.11±3.05)比(81.24±7.16)]、p-Akt/Akt [(49.52±5.84)、(31.06±4.09)、(21.05±2.28)比(77.52±7.06)]蛋白表达降低(P＜0.05).结论 萝卜硫素可抑制胃癌HGC27细胞增殖、促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路活化有关.
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补中益气汤对裸鼠肺腺癌移植瘤PI3K/AKT信号通路作用的研究
目的:探讨补中益气汤对裸鼠肺腺癌移植瘤生长抑制作用及对磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kina se B,AKT)信号通路的影响.方法:50只裸鼠随机分为①正常对照组,②荷瘤对照组,③顺铂组,④顺铂联合补中益气汤组,⑤补中益气汤组.分别给予相应干预后,处死小鼠,计算抑瘤率;应用免疫组化方法、实时定量PCR(real time PCR,RT-PCR)检测移植瘤组织中PI3K,AKT的表达水平.结果:顺铂联合补中益气汤组对移植瘤的抑制率强,与其他各组比较有显著差异(P＜0.05),顺铂和补中益气汤协同作用的q值1.201;移植瘤中PI3K,AKT蛋白和mRNA基因的表达在顺铂联合补中益气汤组显著降低(P＜0.05).结论:补中益气汤联合顺铂对耐顺铂肿瘤有协同抑制作用;补中益气汤能通过干预PI3K、AKT基因和蛋白的表达而增加顺铂对耐顺铂肿瘤的敏感性.
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黄金胶囊改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗与PI-3K,GLUT4蛋白的表达
目的:研究黄金胶囊对糖尿病(DM)大鼠磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K),葡萄糖转运因子4(GLUT4)在肝脏及骨骼肌组织中的蛋白表达,并探讨其改善大鼠血糖的可能机制.方法:SPF级雄性Wistar大鼠65只,血糖在4.77 ～7.77 mmol·L-的大鼠入选,入选大鼠60只,正常组12只外,其余大鼠采用高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素ip的方法,建立DM大鼠模型.将造模成功大鼠随机分为黄金胶囊组(2.025 9·kg-1),罗格列酮组(0.36 mg·kg-1),模型组,继续高脂饲料喂养,并予以相应药物ig治疗10周,其中模型组与正常组均予以生理盐水ig,观察大鼠一般状态,体重及摄食量,干预10周后,予10％水合氯醛麻醉大鼠,检测大鼠空腹血糖(FBG),空腹胰岛素(FINS)及胰岛素敏感指数(ISI).采用苏木素-伊红(HE)检测各组大鼠肝脏、骨骼肌组织的病理改变及免疫组化检测PI-3K和GLUT4蛋白的表达.结果:与正常组比较,模型组DM大鼠FBG,FINS水平明显升高,ISI水平明显降低,肝脏及骨骼肌组织中PI-3K,GLUT4蛋白表达明显降低(P＜0.05),病理学检测发现大鼠肝脏、骨骼肌组织的病变较为明显;与模型组比较,药物干预后,黄金胶囊组与罗格列酮组均可降低DM大鼠的FBG,FINS水平,提高ISI水平,明显升高肝脏及骨骼肌组织中PI-3K,GLUT4蛋白表达(P＜0.05),大鼠肝脏、骨骼肌组织的病变明显改善.结论:黄金胶囊提高胰岛素敏感性的作用,与激活肝脏及骨骼肌组织胰岛素信号传导通路中PI-3K和GLUT4的蛋白表达有关.
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化浊颗粒对2型糖尿病大鼠磷脂酰肌醇3激酶和葡萄糖转运蛋白4基因表达的影响
目的：观察化浊颗粒对2型糖尿病(T2DM)大鼠磷脂酰肌醇3激酶(PI-3K)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)在骨骼肌组织中表达的影响,探讨其对PI-3K及GLUT4信号通路激活的作用。方法采用高脂饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM大鼠模型,随机分为化浊颗粒组、罗格列酮组、模型组。各给药组给予相应药物灌胃,模型组与空白组予生理盐水灌胃,观察大鼠一般状态、体质量及摄食量。干预10周后,予10%水合氯醛麻醉大鼠,检测大鼠空腹血糖(FBG)、葡萄糖耐量试验餐后2 h血糖(2 h PG)、空腹胰岛素(FINS)水平；RT-PCR检测各组大鼠骨骼肌组织PI-3K和GLUT4 mRNA表达的水平。结果与模型组比较,化浊颗粒组与罗格列酮组大鼠FBG、2 h PG及FINS水平降低(P＜0.05),PI-3K及GLUT4 mRNA表达水平升高(P＜0.05)。结论化浊颗粒具有提高胰岛素敏感性的作用,与激活骨骼肌组织胰岛素信号传导通路中PI-3K和GLUT4 mRNA的表达有关。
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北五味子总木脂素对脑缺血模型大鼠神经细胞凋亡及p-AKT表达的影响
目的:观察北五味子总木脂素(Schisandra chinensis lignans,SCL)对局灶性脑缺血损伤大鼠神经细胞凋亡和PI3 K/AKT信号传导途径的影响,并探讨其作用机制.方法:用北五味子总木脂素高、中、低剂量组(100,50,25 mg·kg-1)给大鼠分别灌胃给药,连续14 d后,线栓法建立脑缺血损伤模型,进行神经功能评分,TTC染色观察大鼠的脑梗死面积,HE染色观察脑组织的病理形态学改变,免疫组化检测脑组织中Bel-2和Bax的表达,Western blotting检测脑组织内p-AKT和AKT蛋白的表达情况.结果:与模型组比较,北五味子总木脂素高、中、低剂量组均能不同程度缩小脑梗死面积;改善脑组织的病理形态学改变;促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制促凋亡蛋白Bax表达,同时促进p-AKT的表达.结论:北五味子总木脂素对大鼠脑缺血性损伤具有一定的保护作用,机制可能与其促进p-AKT活性增加,提高脑组织抗缺血损伤的能力和抑制神经细胞的凋亡有关.
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葛根芩连汤对2型糖尿病模型大鼠胰岛细胞IRS-2/PI3K-Akt通路的影响
目的 探讨葛根芩连汤保护2型糖尿病大鼠胰岛细胞的可能作用机制. 方法 24只雄性ZDF(fa/fa)大鼠给予高脂饲料诱导2型糖尿病模型,造模成功后随机分为葛根芩连汤组、二甲双胍组、模型组,每组8只.8只雄性ZDF(fa/+)大鼠设为正常组.模型组、正常组给予生理盐水10 ml/kg灌胃,葛根芩连汤组给予葛根芩连汤13.8g/kg灌胃,二甲双胍组给予盐酸二甲双胍肠溶片300 mg/kg灌胃.给药8周后检测空腹血糖(FPG),采用蛋白免疫印迹法检测胰腺胰岛素受体底物2(IRS-2)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K) p85、蛋白激酶B(Akt2)、磷酸化胰岛素受体底物2(p-IRS2)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K) p85、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt2)的蛋白表达.实时荧光定量PCR法检测胰腺IRS-2、PI3K p85与Akt2 mRNA表达.ELISA法测定空腹胰岛素(FINS)含量,免疫抑制比浊法测定糖化血红蛋白(HbA1c)的百分含量. 结果 与模型组比较,葛根芩连汤组FPG、FINS水平及HbA1c下降,IRS-2、PI3K p85、Akt2、p-IRS2、p-PI3K p85、p-Akt2蛋白表达上升,IRS-2、PI3K p85和Akt2 mRNA表达上升(P＜0.05或P＜0.01). 结论 葛根芩连汤可能是通过提高IRS-2/PI3K-Akt信号转导通路的活性起到保护胰岛β细胞的作用.
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蛋白激酶C及磷脂酰肌醇3激酶参与心力衰竭患者心肌重构
目的 探讨蛋白激酶C(PKC)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路参与心力衰竭(CHF)患者心肌重塑的机制.方法 选择因瓣膜性心脏病接受二尖瓣置换术的CHF患者39例,正常对照38例(其中8例来自意外伤亡的器官捐献者).彩色多普勒超声心动仪检测心脏扩大和心功能参数,放射免疫法检测血浆及心肌组织中AngⅡ浓度,竞争蛋白结合法检测PKC,免疫沉淀法检测MAPK活性,免疫沉淀法测心肌组织PI3K/Akt磷酸化、C-FOS、α-骨骼肌动蛋白(d-skeletal-actin)的表达.结果 CHF患者心肌组织呈典型重构心肌的病理改变.血浆及心肌组织AngⅡ浓度与心功能级别呈正相关.CHF患者心肌组织PKC和MAPK活性明显高于对照组(P＜0.01),并随心功能恶化其表达逐渐增加;CHFⅡ级组患者心肌组织PI3K/Akt磷酸化明显强于正常对照组(P＜0.01)和CHFⅢ、Ⅳ级组(P＜0.01).CHFⅢ、Ⅳ级组间没有差异.正常心肌组织中无C-FOS蛋白表达,CHFⅡ级组C-FOS蛋白表达明显高于Ⅲ、Ⅳ级组(P＜0.01).CHF患者心肌组织d-skeletal-actin表达明显高于对照组(P＜0.01),并随心功能恶化其表达逐渐增加.结论 PKC/MAPK及PI3K/Akt信号通路共同参与调节CHF患者心肌重构的病理过程.
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碱性成纤维细胞生长因子对人胚肾HEK293细胞蛋白激酶B活性的影响
目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人胚肾HEK293细胞蛋白激酶B(PKB)活性的影响.方法以[γ-32P]ATP掺入法观察不同作用时间bFGF对HEK293细胞膜、胞浆PKB活性的影响. 结果75μg/LbFGF刺激HEK293细胞10 min,使胞液和膜性PKB酶活性达高峰.Wortmannin预处理后,HEK293细胞膜和胞浆PKB活性在各时间点均明显降低. 结论bFGF能通过PI3K途径迅速激活HEK293细胞的PKB活性.
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胶质细胞系源性神经营养因子促进大鼠中脑多巴胺能神经元存活与分化的机制
目的探讨胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)促进中脑多巴胺(DA)能神经元存活和分化过程中,磷脂酰肌醇3激酶(P13K)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的可能作用.方法生后大鼠中脑脑片培养,并依培养基内加入的不同物质分为空白对照组、GDNF组、PI3K通路阻断组、MAPK通路阻断组.培养6 d后,进行酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色,光镜观察,计算机辅助图像分析,统计学处理;同时用Western blotting方法检测脑片中TH的表达.结果GDNF组TH表达阳性神经元的形状更趋向成熟,其TH表达阳性神经元的密度、胞体大小和TH的表达水平均显著高于空白对照组;P13K通路阻断组TH表达阳性神经元几乎消失,其TH表达水平显著低于GDNF组而与空白对照组无显著差别;MAPK通路阻断组TH表达阳性神经元的密度及TH表达水平与GDNF组无显著区别,但TH表达阳性神经元胞体显著小于GDNF组.结论P13K通路参与介导GDNF对DA能神经元的促存活作用,而MAPK通路参与介导其促形态学分化作用.
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基质细胞衍生因子在不同的急性髓系白血病细胞系的迁移、黏附和细胞凋亡中的生物学作用
本研究探讨基质细胞衍生因子(stromal cell derived factor 1,SDF-1)在急性髓系白血病(AML)细胞的迁移、黏附和细胞凋亡中的生物学作用及有关的信号转导.采用流式细胞术检测AML的细胞系KG1a、ML1、U937细胞表面标记物的表达;以免疫荧光技术检测SDF.1对肿瘤细胞膜表面分子的影响;通过微孔细胞转移实验检测SDF-1对AML细胞的趋化作用及磷脂酰肌醇3激酶(P13K)在趋化过程中的作用;用蛋白免疫印记技术检测P13K信号途径有关的细胞凋亡分子BCL-XL在SDF-1活化此途径后的变化.结果表明:3种AML细胞系不同程度表达CD34(KG1a=95.6%、ML1=4.6%、U937=4.8%)、CIM5(KG1a=98.3%、U937=97.5%、ML1=17.8%)、CXCR4(ML1=85.4%、U937=43.6%、KG1a=3.8%)、ICAM(KG1a=75.8%、U937=41.8%、NIL1=46.3%).SDF-1能促进CXCR4高表达的ML1和U937细胞在基质细胞的黏附并能够诱导此类细胞的迁移,上述作用被G蛋白抑制剂pertussis toxin(PTx)、PI3K抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)明显抑制;而对CXCR4低表达的KG1a细胞则无上述作用.SDF通过此途径还促进肿瘤细胞存活;此作用同样可被P13K抑制剂明显抑制,加用wortman-nin后促肿瘤细胞调亡显著增加.蛋白免疫印记检测phospho-AKT、BCL-XL显示,在SDF组明显增强,加用PTX、wortlnannin组则减弱.结论:SDF-1能触发CXCR4高表达的ML1和U937细胞的极化形态的建立及诱导黏附分子的重新分布.从而通过P13K信号途径促进此类AML细胞的迁移,减少肿瘤细胞的调亡,而对CXCR4低表达的KG1a细胞则无上述作用.上述作用可以被PDK信号途径阻断剂和G蛋白抑制刺所阻断.
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磷脂酰肌醇3激酶对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡和转化生长因子β1表达的影响
目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3-K)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖、凋亡和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法 以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及PI3-K特异性抑制剂wortmannin作为工具药,分别将TNF-α、TNF-α+wortmannin接种ASMC,置37℃,5%CO2培养箱中培养.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3-Kp85α、TGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测PI3-Kp85α、PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位,Sandwich ELISA检测NF-κB活性,四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMC增殖,AnnexinV/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡,ELISA测定TGF-β1蛋白质含量.结果 (1)培养的ASMC PI3-K p85α的阳性定位在胞浆.TNF-α组ASMC PI3-Kp85α mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P＜0.01);(2)TNF-α组ASMCNF-κB活性与对照组相比显著增高(P＜0.01),TNF-α+wortmannin组NF-κB活性与TNF-α组相比显著降低(P＜0.01);(3)TNF-α组ASMC的增殖反应与对照组及TNF-α+wortmannin组相比显著增加(P＜0.01);TNF-α组细胞凋亡率与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05),TNF-α+wortmannin组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P＜0.01).(4)TNF-α组ASMC的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P＜0.01);(5)TNF-α组ASMC的TGF-β1的mRNA表达水平、培养液上清TGF-β1的蛋白质含量均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P＜0.01).结论 PI3-K可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β1的表达和分泌,NF-κB作为PI3-K的下游信号参与此过程.
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磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白在帕金森病模型大鼠黑质区的表达
目的 观察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白在帕金森病模型大鼠黑质区的表达及变化情况.方法 96只健康Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、PI3K抑制剂LY294002组及p-mTOR抑制剂雷帕霉素组,每组又分为模型制备成功后4 d和8 d两个亚组,每个亚组12只.后三组颈背部皮下注射鱼藤酮制作帕金森病大鼠模型,相应时间点免疫组化及Western blotting检测大鼠黑质区PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组各时间点PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达增加(P<0.05),8 d亚组高于4 d亚组(P<0.05).与模型组比较,LY294002组各时间点p-Akt、p-mTOR蛋白表达减少(P<0.05),PI3K蛋白表达无明显变化(P>0.05);雷帕霉素组各时间点p-mTOR蛋白表达下降(P<0.05),PI3K、p-Akt蛋白表达无明显变化(P>0.05).结论 黑质PI3K/Akt/mTOR信号通路激活可能是帕金森病发生、发展的重要机制之一.
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多巴胺D4受体对糖尿病血管内皮损伤的保护作用
目的 研究多巴胺D4受体对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及相关机制.方法 构建链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,Western blot法检测内皮组织D4受体表达的变化.以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为靶细胞,测定在高糖(33 mmol/L)刺激下细胞的活力,同时检测D4受体表达变化;用高糖刺激HUVEC后,在D4受体激动剂PD168077(10-7 mol/L)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002(5×10-5 mol/L)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(l-NAME) (10-4 mol/L)分别作用的情况下,检测HUVEC细胞活力水平的变化,并检测细胞中蛋白激酶B(Akt)和eNOS的磷酸化水平以及总的Akt和eNOS表达水平.结果 D4受体在糖尿病大鼠胸主动脉内皮组织和HUVEC的表达下降(均P＜0.05).高糖条件下,HUVEC的细胞活力下降(P＜0.05);与高糖组比较,加入PD168077后HUVEC的细胞活力增加(P＜0.05).在LY294002和l-NAME的作用下,HUVEC的细胞活力下降(P＜0.05);同时,p-Akt[高糖+LY294002+ PD168077组(0.59±0.09),高糖+l-NAME+ PD168077组(0.62±0.07),高糖+PD168077组(1.44±0.07),P＜0.05]和p-eNOS[高糖+LY294002+ PD168077组(0.62±0.05),高糖+l-NAME+PD168077组(0.66土0.08),高糖+PD168077组(1.44±0.08),P＜0.05]的蛋白表达水平也降低.结论 多巴胺D4受体可以改善高糖诱导的HUVEC的损伤,该作用可能与PI3K/Akt/eNOS信号通路相关.
