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rh-BNP对大鼠心肌细胞H9c2缺氧/复氧损伤的保护作用及机制
目的 探讨重组人脑钠肽(rh-BNP)对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激的影响及机制.方法 将培养的大鼠H9c2细胞分为对照组、H/R模型组和rh-BNP处理组.采用MTT法检测处理后各组细胞的活力;试剂盒测定细胞中丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Real-time PCR检测核因子NF-E2相关因子(Nrf2)和血红素氧合酶-1(HO-1)的相对表达量.结果 H/R模型组的相对细胞活力为(30.75±4.74)％,低于对照组的100％;rh-BNP处理组的细胞活力为(58.31±6.53)％,高于H/R模型组的(30.75±4.74)％,差异均具有统计学意义(P<0.05).H/R模型组细胞中MDA含量为(3.92±0.27),明显高于对照组的(1.43±0.12);SOD活性为(114.72±14.80),明显低于对照组的(236.99±20.45);而rh-BNP处理组细胞MDA含量为(2.23±0.34),明显低于H/R模型组的(3.92±0.27);SOD活性为(153.17±14.64),明显高于H/R模型组的(114.72±14.80),差异均具有统计学意义(P<0.05).H/R模型组Nrf2和HO-1的相对表达量分别为(0.58±0.04)、(0.44±0.04),均低于对照组,rh-BNP处理组的Nrf2和HO-1的相对表达量分别为(0.81±0.02)和(0.76±0.02),明显高于H/R模型组,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 rh-BNP对H9c2细胞的缺氧/复氧损伤具有一定的保护作用,能够降低氧化应激水平,Nrf2/HO-1通路可能参与了对这一过程的调控.
关键词： 重组人脑钠肽 心肌细胞 氧化应激 核因子NF-E2相关因子 血红素氧合酶-1 -
腺梗狶莶ⅡA对深静脉血栓形成大鼠血红素氧合酶-1活性的影响
目的 观察腺梗狶莶ⅡA对深静脉血栓形成大鼠血红素氧合酶-1活性的影响.方法 60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阿司匹林组、肝素组、腺梗狶莶ⅡA高剂量组、腺梗狶莶ⅡA低剂量组,采用环形缩窄下肢股静脉管腔1/2限流,直流电持续电击损伤造下肢深静脉血栓模型,缝合腹壁6h后重新打开,剥离静脉取出血栓称湿重及干重,并采用分光光度法检测HO-1活性.结果 腺梗狶莶ⅡA对结扎并电击损伤管壁造成的股静脉血栓的重量有明显减轻作用并能诱导HO-1活性增加,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 腺梗狶莶ⅡA能诱导HO-1表达,保护血管内皮细胞功能,起到抗血栓的作用.
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克拉霉素对哮喘大鼠肺组织血红素氧合酶-1的调控
目的:研究哮喘大鼠肺组织中血红素氧合酶-1(HO-1)的表达情况及克拉霉素对HO-1的调控作用;观察其HO-1表达与BALF中EOS占细胞总数的百分比(EOS%)、嗜酸性粒细胞(EOS)、全血COHb的百分比含量之间的相关性.方法:清洁级雄性SD大鼠30只,随机分为正常对照组(N组)、哮喘组(A组)、克拉霉素治疗组(C组),每组10只.测定全血COHb的百分比含量;计数BALF沉渣中细胞总数和分类;计数肺组织中浸润的炎性细胞数;免疫组织化学染色法观察HO-1在哮喘大鼠肺组织的表达.结果:HO-1主要表达在气道上皮细胞,三组HO-1阳性表达的平均吸光度分别为0.07±0.01、0.22±0.03、0.14±0.02.A组HO-1表达水平显著高于N组(P＜0.001),C组HO-1蛋白的表达显著低于A组(P＜0.01).HO-1表达水平与全血COHb的百分比含量、BALF中EOS占细胞总数的百分比及肺组织中EOS总数均呈显著正相关(分别为r=0.887,P＜0.01;r=0.889,P＜0.01;r=0.883,P＜0.01).结论:哮喘大鼠的肺组织HO-1表达水平显著增加,提示HO-1可能参与哮喘发病过程.克拉霉素明显改善哮喘的气道炎症浸润,其作用机制部分是通过抑制HO-1起作用.
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HO-1在良、恶性乳腺组织中的表达及意义
目的:探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在乳腺良恶性组织中的表达及意义.方法:分别用RT-PCR4免疫组化、Western blot蛋白印迹杂交检测正常乳腺组织10例;乳腺增生症18例;乳腺纤维腺瘤20例;乳腺癌25例组织中的HO-1mRNA及HO-1蛋白,并检测HO-1酶活性,探讨HO-1在乳腺肿瘤组织中表达及意义.结果:乳腺癌组织中的HO-1mRNA表达(0.3755±0.0628)明显高于正常乳腺(0.1199±0.0810)、乳腺增生(0.15021±0.0479)及乳腺纤维腺瘤组(0.1834±0.054)(t=2.2992,P＜0.01),乳腺良、恶性肿瘤组织中的HO-1表达(23.4617±7.0136,34.2712±4.3423)均高于正常乳腺(4.2742±0.821)及乳腺增生组(6.2525±1.0032)(P＜0.05).乳腺良、恶性肿瘤组织中的HO-1酶活性(1.1458±0.0458,1.4646±0.04892)均高于正常乳腺(0.8935±0.0271)及乳腺增生组(0.9375±0.0302)(P＜0.01),乳腺癌组织中的HO-1酶活性高于纤维腺瘤(t=3.7546,P＜0.01).结论:HO-1mRNA、蛋白表达以及HO-1酶活性的变化与乳腺良性病变及癌变存在相关性,提示HO-1对肿瘤细胞存在保护作用.
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HO-1在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达及意义
目的:探讨血红素氧合酶-1在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达及意义.方法:建立NIH Wistar颈部异位心脏移植模型,分别于移植前、移植后1h、6h、12h、24h、48h和72h切取移植心脏,应用RT-PCR、Western Blot检测HO-1mRNA、HO-1蛋白表达并检测HO 1酶活性;同时比较钴原卟啉(CoPP)诱导HO-1对延迟性异种心脏移植排斥反应的影响.结果:移植心脏均有HO-1表达,HO-1mRNA(t=2.5170,P＜0.05)、HO-1蛋白表达(t=2.3702,P＜0.05)及酶活性(t=2.246,P＜0.05)移植术后24～48h表达到达高峰;CoPP诱导的HO-1明显延长了移植心脏的存活时间(t=4.74442,P＜0.001).结论:HO-1表达在延迟性异种心脏移植后24～48h到达高峰;CoPP诱导的HO-1能延长延迟性异种心脏移植的存活时间.
关键词： 血红素氧合酶-1 延迟性异种移植排斥反应 心脏 -
亚甲蓝预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响
目的:研究亚甲蓝(methylene blue,MB)预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤的影响及其可能机制.方法:64只健康成年雄性SD大鼠随机分为4组(n=16):假手术(S)组、亚甲蓝对照(S+M)组、局灶性脑缺血再灌注(I/R)组、亚甲蓝预处理(I/R+M)组,采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.S组于假手术后腹腔注射生理盐水0.5 mL/kg,S+M组于假手术后腹腔注射亚甲蓝5 mg/kg,I/R组于再灌注前5 min腹腔注射生理盐水0.5 mL/kg,I/R+M组于再灌注前5 min腹腔注射亚甲蓝5 mg/kg.各组于再灌注前5 min和再灌注24 h时采用Longa评分法行大鼠神经功能缺失评分;再灌注24 h时2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色后计算脑梗死体积及其百分比;HE染色观察缺血侧脑皮质病理学变化;化学发光法测定缺血侧脑组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;Western blot、免疫组织化学法检测缺血侧脑组织核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和血红素氧合酶-1 (heme oxygenase 1,HO-1)蛋白表达水平.结果:与S组和S+M组相比,I/R组和I/R+M组的神经功能缺失评分、脑梗死体积及其百分比、脑组织ROS含量均升高,Nrf2和HO-1蛋白表达上调(P＜0.01),缺血侧脑皮质有明显病理学损伤.与I/R组相比较,I/R+M组的神经功能缺失评分、脑梗死体积及其百分比、脑组织ROS含量均降低,Nrf2和HO-1蛋白表达上调(P＜0.01),缺血侧脑皮质病理学损伤较轻;S组和S+M组之间上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论:亚甲蓝预处理可以改善大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,其机制可能与上调Nrf2和H0-1的表达、降低脑ROS的含量、产生抗氧化应激作用有关.
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血红素氧合酶-1通过NF-κB信号通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡
目的 探讨血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的作用及机制.方法 采用免疫组化和Western blot检测正常(LVF组,标本来源于年轻的椎体骨折行手术治疗的患者)及退变(IDD组,标本来源于椎间盘退变性疾病行手术治疗的患者)人椎间盘髓核组织中HO-1和磷酸化的P65(p-P65)的表达差异;体外培养退变髓核细胞,通过IL-1β处理增加髓核细胞凋亡,再用载HO-1质粒的慢病毒及小干扰RNA处理髓核细胞后检测凋亡的变化;通过P65抑制剂PDTC抑制p-P65表达后检测髓核细胞凋亡的变化.结果 免疫组化结果显示,HO-1在IDD组中的阳性表达率为(18.58 ±0.59)％,明显低于LVF组(58.26 ±2.48)％ (P ＜0.05),而p-P65在IDD组中的阳性表达率为(40.27±2.03)％,明显高于LVF组(19.75±1.98)％ (P ＜0.05).IL-1β能增加退变髓核细胞的凋亡,同时引起p-P65表达增加,HO-1-siRNA抑制HO-1表达后可以进一步提高髓核细胞凋亡率(P＜0.05),而过表达HO-1处理细胞后能够降低IL-1β引起的凋亡增加,同时降低p-P65表达(P＜0.05).使用P65抑制剂PDTC抑制髓核细胞P65信号通路后,髓核细胞凋亡率明显降低,此时沉默HO-1不能增加髓核细胞凋亡.结论 HO-1能够通过NF-κB通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡.
关键词： 血红素氧合酶-1 核转录因子kappa B p65 髓核 凋亡 -
热休克处理诱导小鼠心脏HO-1表达并延长其移植至大鼠的存活时间
目的探索热休克诱导NIH小鼠心脏表达HO-1的方法及其对延迟性异种心脏移植排斥反应的影响.方法采用取暖器加热NIH小鼠,使其温度维持在42℃20 min,分别于加热后1、6、12、24、48、72 h切取心脏,应用RT-PCR、Western blot分别检测HO-1 mRNA、HO-1蛋白以及HO-1酶活性检测.借助NIH小鼠-Wistar大鼠颈部异位心脏移植模型,对热休克处理供体并结合CoPP(cobalt protoporphyrin,CoPP)、ZnPP(zinc protoporphyrin,ZnPP)了解热休克诱导HO-1对移植心脏存活时间的影响.结果热休克预处理6 h后心脏组织HO-1 mRNA、蛋白表达及酶活性开始增多,以24～48 h为高峰,24 h组和48 h组与其余任意组比较均有显著性差异(t=3.507,P＜0.05),72 h后开始下降.热休克组心脏存活时间明显长于空白对照组(t=5.703,P＜0.01)和ZnPP+热休克组(t=4.913,P＜0.001).而热休克+CoPP组移植心脏存活时间[(6.250±1.512)d]明显长于热休克组[(4.750±1.363)d](t=2.084,P＜0.01).当热休克与ZnPP和CoPP同时使用时,移植心脏存活时间略短于热休克组,但其差异无显著性(t=0.816,P＞0.05).结论取暖器加热NIH小鼠可诱导心脏HO-1的产生,能延长NIH小鼠-Wister大鼠心脏移植存活时间,推迟DXR的发生.
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RDP1258对人外周血单核细胞增殖能力及HO-1活性的影响
目的观察一种新型HLA衍生肽(RDP1258)针对人外周血单核细胞由丝裂原以及同种异体抗原刺激导致的增殖能力的影响,并探讨其机制.方法人工固相合成RDP1258, 3H-TdR掺入法观察其在体外对人外周单核细胞增殖反应的影响,以酶化学法观察其对淋巴细胞血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1, HO-1)活性的影响.结果 RDP1258可显著抑制人外周血单核细胞的转化及MLR增殖反应;该肽体外降低HO-1活性呈现出剂量依赖性.结论 RDP1258能够显著抑制人外周单核细胞经丝裂原或同种抗原刺激引起的增殖反应,这种作用可能是通过影响HO-1活性而达到的.
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细胞游离血红蛋白对小鼠脓毒症肺损伤的影响
目的 探讨细胞游离血红蛋白(CFH)对小鼠脓毒症肺损伤的影响.方法 将60只BALB/c小鼠分为假手术组(A组)、脓毒症组(B组)、脓毒症+生理盐水组(C组)、脓毒症+ CFH组(D组),每组15只.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平.测定肺组织湿/干比值,苏木素-伊红染色观察肺组织病理改变并评分.免疫组织化学检测核因子-κB(NF-κB)及其抑制蛋白-α(IκB-α)、血红素氧合酶-1(HO-1)及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达.结果 各组小鼠肺组织水肿、病理改变和炎症反应严重程度由轻至重依次为A组,B、C组及D组.与B、C组比较,D组小鼠肺组织NF-κB、HO-1及RAGE表达均上调,IκB-α表达下调,差异均有统计学意义(P＜0.05);而B、C组间肺组织NF-κB、HO-1及RAGE水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 CFH加重小鼠脓毒症肺损伤的机制可能与HO-1及RAGE表达上调有关.
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HO-1对脓毒症大鼠血浆中HMGB-1表达的影响及其心肌保护机制
目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对脓毒症心肌损伤大鼠血浆中高迁移率族蛋白B-1(HMGB-1)变化的影响及其心肌保护机制.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症大鼠模型.SPF级SD雄性大鼠128只,分为4组:假手术组、脓毒症组、钴原卟啉Ⅸ组(CoppⅨ组)、锌原卟啉Ⅸ组(ZnppⅨ组),每组32只.术后分别在0、6、12、24 h取全血检测血浆中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTn I)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)及HMGB-1的表达;24 h除取全血检测上述指标外,留取心脏组织行苏木素-伊红(HE)染色,观察心肌损伤情况,提取心肌细胞总蛋白,Western Blot检测心肌细胞HMGB-1及HO-1蛋白的表达.结果 除假手术组外,各实验组HMGB-1水平随时间增加均升高,其中ZnppⅨ组升高明显,与脓毒症组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),与CoppⅨ组相比,差异亦有统计学意义(P＜0.01).光镜下假手术组细胞结构基本正常,CoppⅨ组细胞肿胀、胞核完整,脓毒症组及ZnppⅨ组细胞肿胀明显,核溶解坏死.Western Blot检测结果表明,ZnppⅨ组HMGB-1蛋白表达高,HO-1蛋白表达低,而CoppⅨ组H01蛋白表达高,HMGB-1蛋白表达低.结论 HO-1抑制脓毒症心肌损伤大鼠血浆中HMGB-1的表达,并可能通过抑制HMGB-1的表达而发挥心肌保护作用.
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激活AMPK对妊娠高血压大鼠HO-1水平、血压和尿蛋白的影响
目的 探讨激活AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)对妊娠高血压大鼠的保护作用.方法 建立妊娠高血压大鼠模型,用AMPK特异性激动剂阿卡地新(AICAR)干预后,分为正常妊娠组、亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)组、L-NAME+ AICAR组,测量大鼠血压,ELISA测定24 h尿蛋白,胎盘组织苏木精-伊红(HE)染色,免疫组织化学检测AMPK、血红素氧合酶-1(HO-1)表达的细胞定位,Western blot检测胎盘组织AMPK、HO-1表达水平.结果 与正常妊娠组孕鼠比较,L-NAME组孕鼠血压升高,24 h尿蛋白水平显著增加,AMPK、HO-1表达水平降低(P＜0.05).与L-NAME组比较,L-NAME+ AICAR组血压降低,24 h尿蛋白减少,AMPK、HO-1表达水平升高(P＜0.05).结论 激活AMPK可提高妊娠高血压大鼠HO-1水平、降低血压及减少24 h尿蛋白.
关键词： 高血压 妊娠性 AMP依赖的蛋白激酶 血红素氧合酶-1 24小时尿蛋白 -
姜黄素对机械通气相关性肺损伤的保护作用及其机制研究
目的 研究姜黄素对机械通气相关性肺损伤的保护作用及其分子机制.方法 将30只健康的日本大耳白兔分为对照组、损伤组和姜黄素组.其中对照组采用正常潮气量8 mL/kg通气;损伤组采用20 mL/kg大潮气量机械通气诱导肺损伤;姜黄素组在损伤组基础上给予姜黄素鼻饲,并分别予以血红素氧合酶1(HO-1)激动剂钴原卟啉(CoPP)和抑制剂锌原卟啉(Zn-PP)干预.实验过程中检测氧合指数,48 h后处死动物获取肺组织标本检测肺组织湿干比(W/D)、丙二醛(MDA)水平及髓过氧化物酶(MPO)活性;用实时荧光定量-聚合酶链反应(RTQ-PCR)法检测HO-1 mRNA表达水平,比色法检测其活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)水平.结果 与对照组比较,损伤组氧合指数明显降低,W/D、MDA水平及MPO活性、肺损伤总积分增加(P＜0.05).姜黄素干预后,姜黄素组氧合指数较损伤组明显增加,W/D、MDA水平、MPO活性及肺损伤总积分明显降低;BALF中TNF-α及IL-6水平明显降低,HO-1活性及mRNA表达水平明显增加(P＜0.05).姜黄素组经HO-1激动剂CoPP处理后TNF-α、IL-6、肺损伤积分明显降低;经HO-1抑制剂ZnPP处理后TNF-α、IL-6、肺损伤积分明显增加.结论 姜黄素可能通过上调HO-1表达,从而改善机械通气相关性肺损伤兔肺部气体交换功能,减轻炎性反应.
关键词： 姜黄素 机械通气相关性肺损伤 血红素氧合酶-1 -
钴原卟啉诱导HO-1高表达抗大鼠心肌缺血/再灌注损伤的实验研究
目的 探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护效应及作用机制.方法 采用HO-1诱导剂钴原卟啉(CoPP) 和抑制剂锌原卟啉(ZnPP) 分别进行干预处理后建立大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型,观察大鼠再灌注后I/R左心室心肌超微结构变化;检测HO-1蛋白在大鼠心肌的表达情况;测定大鼠左心室心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.结果 再灌注前使用CoPP 进行预处理可以诱导HO-1蛋白表达上调.HO-1蛋白表达上调可以减少缺血/再灌注后心肌细胞坏死,提高心肌组织中SOD含量,并降低MDA含量.结论 CoPP诱导的HO-1过表达可以抑制心肌缺血/再灌注损伤后细胞坏死,从而减轻心肌再灌注损伤,抗氧自由基是其机制之一.
关键词： 血红素氧合酶-1 心肌缺血/再灌注损伤 保护作用 抗氧自由基 -
大蒜素抑制H2O2诱导的心肌细胞凋亡的实验研究
目的 探究大蒜素对过氧化氢(Hydrogen Peroxide,H2O2)诱导的H9c2细胞凋亡的影响.方法 H2O2和不同浓度大蒜素分别作用于H9c2细胞,Western blot检测对Caspase-3表达的影响,流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,RT-PCR和Western blot检测对血红素氧合酶1(Heme Oxygenase-1,HO-1)表达的影响.分别通过HO-1抑制剂ZnPP9(Zinc protoporphyrin Ⅸ)和PI3 K/A KT抑制剂LY294002,MTT检测对细胞增殖活性的影响,Western blot检测对p-Akt、核转录因子Nrf2(nuclear factor-erythroid 2 related factor 2)和HO-1等表达的影响.结果 对照组和100 μMH2 O2+大蒜素(0、5、10、20、40 mg/L)组细胞凋亡率分别为(4.83±0.66)％、(68.38±6.97)％、(61.19±6.01)％、(47.32±5.21)％、(22.07±3.73)％和(20.05±2.93)％、与Caspase-3蛋白表达趋势一致,并具有浓度依赖性(P＜0.05).大蒜素作用下,HO-1 mRNA和蛋白表达亦呈浓度依赖性增加(P＜0.05).H2O2组细胞相对增殖活性降低至(61.38±1.76)％ (P＜0.05),大蒜素处理使其上调至(81.64土3.79)％(P＜0.05),而ZnPP9可阻断该上调,为(69.82±2.22)％(P＜0.05).大蒜素明显增加p-Akt、Nrf2和HO-1等表达,可被LY294002阻断(P＜0.05).结论 大蒜素可通过Akt/Nrf2途径上调HO-1表达并抑制H2O2诱导的H9c2细胞凋亡.
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慢性肾脏病血清血红素氧合酶-1与氧化应激的相关性及影响因素
目的 探讨不同分期CKD患者血红素氧合酶-1(HO-1)与氧化应激的变化和它们之间的相关性及影响因素.方法 选择CKD患者132例(CKD组)及健康体检者30例(对照组),测定血清HO-1、丙二醛(MDA)及过氧化物歧化酶(SOD).结果 (1) CKD组HO-1、MDA高于对照组,SOD低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).HO-1、MDA呈上升趋势,至CKD4期达高峰.SOD呈下降趋势. (2)单因素相关分析:HO-1与MDA、血尿酸(UA)、甲状旁腺素呈正相关,与SOD、肾小球滤过率(eGFR)、血清铁(SI)、铁饱和度(ISAT)、血清总胆红素(TBIL)呈负相关.MDA与UA、PTH呈正相关,与SOD、eGFR、SI、ISAT呈负相关.SOD与eGFR、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、SI、血清钙(Ca)、TBIL呈正相关,与UA、24 h尿蛋白定量、PTH呈负相关. (3)多因素回归分析提示,eGFR、MDA、SI是血清HO-1的独立影响因素;血清HO-1、SOD、PTH是MDA的独立影响因素;Alb、MDA、eGFR是SOD的独立影响因素.结论 CKD患者普遍存在氧化应激,低蛋白血症、高甲状旁腺素血症是氧化应激的独立影响因素.肾功能减退、MDA、铁缺乏是HO-1的独立影响因素.
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银杏叶提取物抗动脉粥样硬化的实验研究
目的 探讨银杏叶提取物(effects of Extract of Ginkgo Biloba EGB)是否通过诱导血红素氧合酶-1 (HO-1)表达发挥抗动脉样硬化(atherosclerosis AS)作用.方法 选用雄性Wistar大鼠40只,随机均分为A、B、C、D、E5组,A组给普通饲料喂养,其余各组均给高脂饲料喂养,C组、D组、E组分别给予腹腔注射EGB 30 mg/kg、锌原卟啉(ZnPPⅨ) 7.5 mg/kg、EGB 30 mg/kg+ ZnPPⅨ7.5 mg/kg,每两天1次,A组及B组则同法注射等量生理盐水.12周后检测主动脉HO-1蛋白表达量、HO-1蛋白活力及AS病变程度.结果 与A组相比,B组及C组HO-1蛋白表达量及活力均明显升高,C组升高尤为显著,D组及E组HO-1蛋白表达量及活力则显著降低.与B组比较,C组AS程度明显减轻,而D组及E组AS程度则显著加重.结论 EGB主要通过诱导HO-1表达发挥显著的抗AS作用.
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HO-1真核表达质粒的构建及在肾小管上皮细胞中的表达
[目的]构建HO-1基因真核表达质粒,转染大鼠肾小管上皮细胞,检测其在细胞中的表达效果.[方法]从大鼠肾组织中提取总RNA,通过逆转录PCR(RT-PCR)扩增大鼠HO-1基因片段,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,运用脂质体将重组质粒pcDNA 3.1(+)-HO-1转染大鼠肾小管上皮细胞,通过RT-PCR和Western blot分析HO-1基因细胞转染及表达的效果. [结果]成功构建了HO-1基因真核表达重组质粒pcDNA 3.1(+)-HO-1.RT-PCR及Western blot分析显示,HO-1基因能转染大鼠肾小管上度细胞并在细胞内有效表达. [结论]HO-1基因真核表达重组质粒pcDNA 3.1(+)-HO-1的成功构建及其在肾小管上皮细胞中的有效表达为深入研究其生物学作用奠定了基础.
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HO-1抗汞引起肾细胞凋亡的研究
[目的]探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对汞引起肾细胞凋亡的影响及其可能的机制.[方法]64只雄性Wistar大鼠随机均分为4组:对照组、单纯染汞组、HO-1诱导组、HO-1抑制组,先分别腹腔注射生理盐水、空白液、血晶素、ZnPPⅨ预处理,8 h后各组内半数鼠处死取肾查HO-1表达与活性,余鼠除对照组注射生理盐水外,其余3组均腹腔注射HgCl2(2 mg·kg-1),24 h后检测血Cr、BUN及肾内总抗氧化能力(TAOC)、丙二醛(MDA)、Bcl-2蛋白表达与细胞凋亡指数(AI).[结果]与对照组比较,单纯染汞组TAOC降低而MDA、Cr、BUN、Bcl-2表达和AI均明显增加,HO-1抑制组除Bcl-2表达受抑外,其余指标的变化与单纯染汞组相似,但更为显著.与单纯染汞组及HO-1抑制组比较,HO-1诱导组TAOC及Bcl-2表达均显著升高,而MDA、Cr、BUN及AI则明显降低.[结论]HO-l通过抗氧化、上调Bcl-2蛋白表达发挥抗汞引起肾细胞凋亡的作用.
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山楂叶总黄酮对大鼠心肌缺血性损伤的保护作用及机制研究
目的:探讨山楂叶总黄酮对大鼠心肌缺血性损伤的保护作用及通过HO-1诱导途径的作用机制.方法:建立皮下注射异丙肾上腺素造成大鼠心肌缺血模型,观察山楂叶总黄酮对心电图、血清肌酸激酶CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)的活性以及血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达和mRNA水平的影响.结果:山楂叶总黄酮(100～ 200mg/kg)能显著对抗异丙肾上腺素所致急性大鼠心肌缺血心电图T波的异常,显著降低血清LDH和CK活力,增加心肌组织SOD和GSH活性,上调HO-1的表达,并呈一定的剂量依赖性.HO-1抑制剂组能够部分取消HLF的对异丙肾上腺素造成的心肌损伤的保护作用.结论:山楂叶总黄酮对急性缺血性心肌损伤的保护作用机制与诱导HO-1的表达密切有关.
