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灵芝对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制
目的 探讨灵芝(GL)对链脲佐菌素诱导的糖尿病(DM)大鼠肾脏的保护作用及其机制.方法将30只雄性SD大鼠随机均分为对照组、DM组及GL组.腹腔注射链脲佐菌素诱导大鼠造成DM模型,治疗组用GL治疗性灌胃.8周后,用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清高敏C反应蛋白(hs-XRP),免疫组化法检测肾皮质单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)蛋白表达.结果 DM组血清hs-CRP、肾小球MCP-1蛋白表达较对照组升高,GL组较DM组减少,病理变化明显好转(P均<0.01).结论 GL可能通过降低hs-CRP、MCP-1表达而减轻炎症反应,起到保护DM大鼠肾脏的作用.
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腹腔注射趋化因子受体2抑制剂RS102895、色甘酸钠对小鼠间质性膀胱炎的预防观察
目的 观察腹腔注射趋化因子受体2(CCR2)抑制剂RS102895、肥大细胞稳定剂色甘酸钠对小鼠间质性膀胱炎(IC)的预防作用.方法 36只雌性BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D组,每组9只.A、B、C组麻醉后排空膀胱,膀胱灌注50 g/L硫酸鱼精蛋白,保留45 min,再次排空膀胱,生理盐水冲洗3次,灌注750 μg/mL的脂多糖溶液并保留30 min,再次排空膀胱,每隔7天1次,上述处理共3次.A组在上述首次处理后1.5h即5 mg/kg腹腔注射RS102895,1次/d,共注射21 d;B组在上述首次处理前2天腹腔内注射肥大细胞稳定剂色甘酸钠溶液50 mg/kg,1次/d,共注射23 d;C组每日注射等体积PBS溶液,共注射21 d.D组为空白对照.首次膀胱灌注记为第1d,第5d收集各组小鼠尿液,采用ELISA法测定各组尿液单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、组胺含量;第22 d处死各组小鼠,HE染色后观察膀胱组织膀胱组织黏膜和固有层炎性变化,甲苯胺蓝染色后测算膀胱固有层及逼尿肌中肥大细胞、脱颗粒细胞.结果 与D组比较,A、B、C组MCP-1均升高,P均＜0.05;与C组比较,A、B组MCP-1均降低,P均＜0.05.与D组比较,A、B、C组组胺含量均升高,P均＜0.05;与C组比较,A、B组组胺含量均降低,P均＜0.05.C组膀胱上皮部分脱落,膀胱上皮黏膜下及逼尿肌肥大细胞浸润增多;A、B组膀胱组织尿路上皮细胞脱落轻于C组,肥大细胞浸润少于C组.与D组比较,A、B、C组固有层和逼尿肌中肥大细胞计数和脱颗粒细胞百分比均升高,P均＜0.05;与C组比较,A、B组固有层和逼尿肌中肥大细胞计数和脱颗粒细胞百分比均降低,P均＜0.05.结论 腹腔注射RS102895、色甘酸钠对小鼠IC起预防作用,其机制可能为MCP-1与肥大细胞结合、促进组胺释放.
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脊髓小胶质细胞在神经病理性疼痛发生发展过程中的作用机制研究进展
脊髓小胶质细胞是神经病理性疼痛的发生过程中发挥重要的关键细胞之一.脊髓小胶质细胞中单核细胞趋化蛋白-1、趋化因子配体-2、基质金属蛋白酶-9 和 丝裂原激活蛋白激酶类家族蛋白参与了脊髓小胶质细胞激活进而导致神经病理性疼痛产生的过程.
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MCP-1及其基因多态性与原发性高血压的关系
炎症反应在原发性高血压发生发展过程中的作用及机制是目前研究热点。单核细胞趋化蛋白（ MCP-1）是一种强效趋化细胞因子，参与炎症反应过程。多项研究显示原发性高血压患者血清MCP-1水平升高，MCP-1可诱导单核-巨噬细胞趋化、募集和迁移到血管内皮下，可能在高血压的发病和持续发展中起重要作用。 MCP-1的基因多态性可能影响其基因的转录。 MCP-1基因多态性也与高血压的发病有关，其中以-2518 G／A多态性关注多，携带G等位基因者动脉压更高。目前，对于血清MCP-1水平与-2518 G／A多态性之间的关系仍存在争议。
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2型糖尿病合并骨质疏松症患者外周血中MCP-1表达水平及意义
目的 检测2型糖尿病合并骨质疏松症患者外周血中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达水平,探讨MCP-1与骨密度的相关性.方法 入组80例2型糖尿病合并骨质疏松症患者(实验组)及100例2型糖尿病未合并骨质疏松症患者(对照组),测量骨密度;分别收集实验组、对照组患者的外周血,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血中MCP-1蛋白质表达水平,比较两组患者外周血中MCP-1表达水平;用Pearson相关性分析方法分析MCP-1表达水平与骨密度的相关性.结果 2型糖尿病合并骨质疏松症组外周血中MCP-1表达高于对照组,两组之间差异有统计学意义(P ＜0.05);MCP-1表达水平与骨密度呈负相关(r=-0.364,P＜0.05).结论 2型糖尿病合并骨质疏松症患者外周血中MCP-1表达增高,MCP-1可能参与骨质疏松的发病.
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单核细胞趋化蛋白1及其受体与缺氧缺血性脑损伤
缺氧缺血性脑损伤可诱导脑中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达,MCP-1通过趋化单核/巨噬细胞系统,调节细胞因子合成,参与脑损伤;其作用通过特异性受体来介导,CCR2是脑组织中MCP-1受体.探讨MCP-1和CCR2在缺氧缺血性脑损伤中的作用有助于从免疫学机制方面探索对新生儿缺氧缺血性脑损伤有效的干预途径.
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血小板CD26p和单核细胞趋化蛋白1与进展性脑梗死及颈动脉粥样硬化斑块性质的关系
目的 分析颈动脉斑块的性质及血小板活化功能和单核细胞趋化蛋白1,探讨血小板CD26p和单核细胞趋化蛋白1水平与颈动脉斑块性质及进展性脑梗死的关系.方法 选择120例急性脑梗死患者,根据病情分为进展组58例和非进展组62例,58例同期进展性脑梗死体检者作为对照组.根据颈动脉多普勒超声检查结果分为无斑块、稳定斑块和不稳定斑块,分析各组所占得比率;分别采用流式细胞仪和酶联免疫双抗体夹心法测定3组血小板CD26p的水平和血清单核细胞趋化蛋白1,比较各组血小板CD26p和单核细胞趋化蛋白1水平.结果 进展组和非进展组中颈动脉不稳定斑块比率、血小板CD62p和单核细胞趋化蛋白1水平明显高于对照组(P＜0.05);进展组中颈动脉不稳定斑块比率、血小板CD62p和单核细胞趋化蛋白1水平明显高于非进展组(P＜0.05);进展组和非进展组中不稳定斑块患者血小板CD62p、MCP-1水平明显高于稳定斑块患者.结论 颈动脉易损斑块、血小板CD62p和单核细胞趋化蛋白1水平与脑梗死进展有关;血小板CD62p和单核细胞趋化蛋白1水平的高低与斑块性质有关.
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MCP-1基因-2518A/G多态性与葡萄膜炎易感性的Meta分析
背景 近年来研究表明,单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)基因多态性与葡萄膜炎易感性密切相关,然而目前国内外关于MCP-1基因-2518A/G多态性与葡萄膜炎发病风险的相关性尚未有一致结论.目的 系统评价MCP-1基因-2518 A/G多态性与葡萄膜炎易感性的关系.方法 按照检索策略,计算机检索PubMed、Embase、Web of Science、中国知网(CNKI)、维普网(VIP)、万方数据及中国生物医学文献数据库(CBD),检索时限为建库起至2014年3月,收集关于MCP-1基因-2518A/G多态性与葡萄膜炎发病风险的相关文献,按照纳入及排除标准筛选文献、提取数据资料,并对纳入研究的文献进行质量评价.采用RevMan 5.2及Stata12.0软件进行Meta分析,计算合并效应量优势比(OR)值及其95％可信区间(CI),并进行发表偏倚及敏感性分析.结果 共纳入8篇研究文献,累积病例1 197例,对照1 570例.MCP-1基因-2518A/G G和A、GG和AA及GG和AG+AA基因型与总体葡萄膜炎发病风险均无明显相关性(均P＞0.05),GG+AG和AA基因型与总体葡萄膜炎发病风险具有显著相关性(P=0.01,OR=1.25,95％C1:1.06～1.48),而敏感性分析结果显示二者无明显相关性(P=0.19,OR=1.16,95％ CI:0.93～1.45).按葡萄膜炎类型进行亚组分析结果显示,携带等位基因G、GG基因型的个体罹患前葡萄膜炎的风险明显增高(G和A:P=0.01,OR=1.49,95％CI:1.16 ～1.90;GG和AA:P=0.01,OR=2.09,95％CI:1.21～3.61;GG+AG和AA:P=0.01,OR=1.58,95％ CI:1.12～2.23;GG和AG+AA:P=0.01,OR=1.78,95％CI:1.12 ～2.83),且GG+AG和AA基因型个体罹患白塞病的风险也明显增高(P=0.04,OR=1.35,95％CI:1.01～1.79),而与其他类型葡萄膜炎发病风险无明显相关(P＞0.05).按种族进行亚组分析结果显示,在黄种人群中,携带等位基因G、GG基因型的个体罹患葡萄膜炎的风险明显增高(G和A:P=0.04,OR=1.15,95％CI:1.01～1.32;GG和AA:P=0.04,OR=1.32,95％ CI:1.02 ～1.71;GG+AG和AA:P=0.01,OR=1.36,95％CI:1.09～1.70),而在白种人群中等位基因G、GG基因型与葡萄膜炎均无明显相关(均P＞0.05).结论 MCP-1基因-2518A/G多态性与白塞病、前葡萄膜炎及黄种人群葡萄膜炎易感性有关,GG基因型及等位基因G可能是白塞病、前葡萄膜炎及黄种人群葡萄膜炎易感的危险因素.
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趋化因子与视网膜静脉阻塞的相关性
趋化因子是一类在炎症与免疫反应中诱导白细胞募集的细胞因子家族.体外及动物实验证实,趋化因子参与视网膜病理损害过程.趋化因子与视网膜静脉阻塞(RVO)具有一定相关性,如白细胞介素8(IL-8)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1(MIP-1)在RVO患眼中存在高表达现象,MCP-1、IL-8加重RVO继发黄斑水肿和视网膜缺血.针对RVO的治疗,曲安奈德(TA)及抗血管内皮生长因子(anti-VEGF)药物眼内应用亦被证实可抑制眼内部分趋化因子表达,且治疗效果与初始趋化因子水平具有一定相关性.本文将从上述几方面对趋化因子与RVO的相关性研究进展进行介绍.
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脂多糖和同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1 mRNA表达的影响
目的:探讨脂多糖和同型半胱氨酸是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA及其机制.方法:将生长至汇合的人脐静脉内皮细胞分为对照组、脂多糖组,脂多糖+SB203580组,同型半胱氨酸组,同型半胱氨酸+SB203580组,脂多糖+同型半胱氨酸组.采用斑点杂交和RT-PCR检测其MCP-1 mRNA的表达.用免疫细胞化学法检测对照组、脂多糖组和同型半胱氨酸组P38蛋白激酶蛋白的表达.结果:培养的人脐静脉内皮细胞能表达较低水平的MCP-1 mRNA.斑点杂交和RT-PCR均显示各实验组的MCP-1 mRNA明显高于对照组.免疫细胞化学显示,P38蛋白激酶蛋白在对照组的细胞核阳性表达率为9.6%,当人脐静脉内皮细胞暴露于脂多糖或同型半胱氨酸后,细胞核阳性表达率升至46.7%或57.7%.结论:脂多糖和同型半胱氨酸能诱导人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1 mRNA,P38蛋白激酶可能参与了该过程.
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腺病毒介导MCP-1-siRNA对人单核细胞体外迁移能力的影响
目的 构建针对单核细胞趋化蛋白1(monoeyte chemoattractant protein 1,MCP-1)基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒,探讨干扰MCP-1表达对人单核细胞白血病株THP-1迁移能力的影响.方法 设计并合成针对人MCP-1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与带有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183细菌中进行同源重组,获得重组腺病毒载体pAdeasy-si-MCP-1,转染人胚肾细胞株293细胞,包装并扩增病毒颗粒.体外感染能表达MCP-1的293细胞,RT-PCR检测siRNA对MCP-1转录水平影响.Millicell细胞迁移实验检测对人单核细胞白血病株THP-1体外迁移能力的影响.结果 高糖诱导下,人293细胞MCP-1的表达增强;而Ad-si-MCP-1感染后,能够显著抑制高糖刺激的MCP-1 mR-NA水平的升高;Ad-si-MCP-1感染293细胞后的培养上清对THP-1的趋化作用较高糖刺激组及其siRNA阴性对照组显著降低.结论 成功构建了抑制MCP-1表达的siRNA腺病毒载体,其抑制MCP-1表达可明显抑制高糖诱导的THP-1的趋化作用,提示MCP-1表达的干预可能为糖尿病肾病等MCP-1相关疾病提供新的预防和治疗手段.
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六味地黄丸对狼疮肾炎患者糖基化终末产物受体、单核细胞趋化蛋白1及趋化因子Fractalkine的影响
目的 观察六味地黄丸对狼疮肾炎患者糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)、单核细胞趋化蛋白1及趋化因子Fractalkine水平的影响,探讨六味地黄丸用于狼疮肾炎的临床疗效,以期为临床上狼疮肾炎的治疗提供参考.方法 收集大连大学附属中山医院2014年9月至2016年9月肾内科门诊收治的狼疮肾炎患者46例,其中男性25例,女性21例,按照随机数字表法原则分为观察组和对照组,每组23例,其中对照组给予甲泼尼龙0.5 g/d静脉滴注3 d 后口服泼尼松片(0.6 mg·kg-1·d-1)治疗,8周后逐渐减量至10 mg/d 维持治疗;观察组在常规西医治疗的基础上给予浓缩六味地黄丸辅助治疗,8丸/次,3次/日,均进行8个疗程(16 d为一个疗程)治疗.分别比较2组患者治疗前、后糖基化终末产物受体、单核细胞趋化蛋白1及趋化因子Fractalkine水平以及2组患者的临床疗效进行观察.结果 与对照组临床疗效相比,六味地黄丸观察组总有效率为78.3％,高于对照组的70.0％(P<0.05);与对照组治疗后相比,观察组治疗后糖基化终末产物受体、单核细胞趋化蛋白1、趋化因子Fractalkine水平显著低于对照组(P<0.05).结论 六味地黄丸辅助常规西药治疗狼疮肾炎能够降低糖基化终末产物受体、单核细胞趋化蛋白1以及趋化因子Fractalkine的表达,提示六味地黄丸能够通过减轻狼疮肾炎的相关指标对狼疮肾炎具有治疗作用,值得临床进一步推广.
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舒洛地特对糖尿病高血压大鼠肾脏单核细胞趋化蛋白1表达的影响
目的 探讨糖尿病高血压大鼠肾脏单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达变化及舒洛地特对MCP-1表达的影响.方法 18只Wistar大鼠随机分为3组:对照组(C组)、糖尿病高血压组(D组)、舒洛地特治疗组(S组),每组各6只.采用链脲佐菌素(STZ)+醋酸脱氧皮质酮(DOCA)+盐水建立糖尿病高血压大鼠模型.第8周测定尾动脉压、尿白蛋白.于第8周末处死动物,PAS染色观察肾小球病理改变,免疫组织化学法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测MCP-1蛋白及mR-NA表达改变.结果 第8周末D组尿白蛋白量及肾组织MCP-1表达显著高于C组(P<0.05),S组尿白蛋白量及肾组织MCP-1表达较D组降低(P<0.05).结论 舒洛地特可通过降低肾组织MCP-1表达,减轻糖尿病高血压大鼠病理损伤.
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小儿肾积水尿细胞因子IGF-1、ET-1、TGF-β1及MCP-1水平的检测及意义
目的 探讨尿细胞因子(胰岛素样生长因子IGF-1、内皮素ET-1、转化生长因子TGF-β及单核细胞趋化蛋白MCP-1)的检测在判定小儿肾积水病肾损害程度中的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测41例小儿肾积水病肾尿IGF-1、ET-1、TGF-β1>及MCP-1水平,并以健肾尿作对照.41例同时行病肾组织学检查分级,并与病肾尿IGF-1、ET-1、TGF-β1>及MCP-1水平作相关分析.结果 ①病肾尿IGF-1明显降低为(186.69±24.63)pg/ml,健肾测值为(279.45±31.57)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.01);②病肾尿ET-1、TGF-β1、MCP-1明显升高,分别为(49.81±9.08)、(395.91±83.52)、(486.59±89.72)pg/ml,健肾相应测值为(13.21±2.91)、(232.57±32.68)、(328.54±36.81)pg/ml,差异均有统计学意义(P<0.05);③病肾尿IGF-1与病理分级密切负相关,差异有统计学意义(r=-0.839,P<0.01);ET-1、TGF-β1及MCP-1水平与病理分级正相关,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 小儿肾积水病肾尿IGF-1水平是从尿细胞因子检测中判定病肾损害程度的理想指标之一.
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连花清瘟胶囊抑制急性放射性肺损伤大鼠MCP-1的表达与效应
目的：研究连花清瘟胶囊对大鼠急性放射性肺损伤的抑制作用及可能机制。方法将大鼠随机分为对照组、照射组和照射加连花清瘟组,对照组和照射组给予0.9%氯化钠溶液,照射加连花清瘟组给予连花清瘟0.9%氯化钠溶液。苏木精-伊红( HE)染色观察连花清瘟胶囊对大鼠急性放射性肺损伤肺组织的影响；定量逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)与酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测肺组织与血清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量；免疫组化法检测肺组织中巨噬细胞的数量。结果对照组、照射组及照射加连花清瘟组肺组织IL-6 mRNA相对表达水平分别为(0.0021±0.00020),(0.0066±0.00032),(0.0039±0.00022),TNF-αmRNA相对表达水平分别为(0.0037±0.00016),(0.0074±0.00033),(0.0055±0.00024),MCP-1 mRNA 相对表达水平分别为(0.0014±0.00015),(0.0054±0.00072),(0.0032±0.00017)；3组血清IL-6浓度分别为(35.2±10.9),(111.8±26.1),(68.2±15.2) pg· mL-1,TNF-α浓度分别为(229.3±28.5),(837.5±57.6),(566.9±39.8) pg·mL-1,MCP-1浓度分别为(96.85±8.20),(314.53±12.76),(191.32±10.97),每个高倍镜视野下巨噬细胞数目分别为(59.5±4.3),(503.9±25.8),(106.2±12.6)。连花清瘟胶囊能够减轻急性放射性肺损伤大鼠肺组织炎症反应,抑制巨噬细胞在肺组织中的聚集,减少炎症因子IL-6、TNF-α表达,降低MCP-1在大鼠肺组织与血清的含量,差异有统计学意义(P<0.05)。结论连花清瘟胶囊通过抑制MCP-1表达,从而抑制巨噬细胞向急性放射性肺损伤大鼠肺组织中的聚集,进而减轻炎症反应。
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中药及提取物调节单核细胞趋化蛋白1、肿瘤坏死因子-α对糖尿病肾病改善作用
糖尿病肾病(DN)是糖尿病的并发症之一,其发病机制与炎症密切相关.该文总结单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与DN的相关性及相关中药干预的相关文献,发现肾脏组织中MCP-1受到氧化应激、NF-κB依赖的信号通路等因素诱导而表达增加,导致巨噬细胞聚集、尿蛋白增加、肾纤维化、肾脏清除能力下降,进而导致肾损伤.临床及实验发现血清、尿液及肾组织中肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白水平与DN密切相关,可作为DN的标志物,对临床有一定的指导作用.MCP-1、TNF-α两个靶点对临床治疗DN提供了新的思路.雷公藤多苷等一些中药及提取物通过抑制这两个靶点对DN有缓解或治疗作用,值得在临床进一步验证或推广应用.
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单核细胞趋化蛋白1和血管内皮生长因子在膀胱癌组织表达的相关性
目的:探讨单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)与血管内皮生长因子(VEGF)在膀胱癌组织中的表达的相关性.方法:纳入膀胱癌组织标本68例,正常膀组织标本11例,分别检测MCP-1与VEGF在膀胱癌组织以及正常膀组织中的表达.此外,分析MCP-1与VEGF在膀胱癌组织中的表达与患者年龄、性别、是否原发、有无转移、临床分期、病理分级等关系,并进一步分析MCP-1与VEGF两者间的相关性.结果:①膀胱癌组织MCP-1检测率为66.18％,正常膀组织MCP-1检测率为18.18％ (P＜0.05).MCP-1与膀胱癌患者的临床分期、病理分级呈正相关(P＜0.05),与肿瘤的原发、复发无关(P＞0.05);②膀胱癌组织VEGF检测率为69.12％,正常膀组织VEGF检测率为9.09％ (P＜0.05).VEGF与膀胱癌患者的临床分期、病理分级呈正相关(P＜0.05),与肿瘤的原发、复发无关(P＞0.05).结论:MCP-1与VEGF表达与术前临床分期、病理分级有关,在膀胱癌中,MCP-1与VEGF可能通过协同作用参与了膀胱癌发生、发展的分子调控过程.
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miR-301a调节小鼠巨噬细胞中炎症因子的表达
目的 探讨miR-301a对巨噬细胞炎症因子表达水平的影响,从microRNA角度阐明动脉粥样硬化的发病机制,为动脉粥样硬化的防治提供新的思路.方法 高脂喂养ApoE-/-小鼠建立动脉粥样硬化模型,收集小鼠主动脉血管,利用real-time PCR检测组织中miR-301a的表达水平;利用脂质体在RAW264.7细胞中转染miR-301amimic和miR-301a inhibitor,用real-time PCR检测细胞中miR-301a水平,并检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达水平,用Western blot检测NF-κB抑制因子(NKRF)蛋白水平,用免疫荧光染色检测p65细胞定位.结果 在高脂喂养的ApoE.-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a的表达水平升高;在RAW264.7细胞中过表达miR-301a可抑制NKRF蛋白水平,促进p65细胞核定位,升高细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达;在RAW264.7细胞中低表达miR-301a可升高NKRF蛋白水平,促进p65细胞质定位,减少细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达.结论 在高脂喂养的ApoE-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a表达水平升高;在RAW264.7细胞中miR-301a通过调节NKRF的表达影响p65活性进而调控TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达,提示microRNA在动脉粥样硬化发病的炎症机制中具有重要作用.
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姜黄素对脂质运载蛋白2诱导人脐静脉内皮细胞损伤的影响
目的 研究姜黄素对脂质运载蛋白2 (LCN-2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及与p38 MAPK通路的关系.方法 以LCN-2不同质量浓度(0,5,10,20μmol/L)及不同时间(0,24,48,72 h)作用HUVEC,CCK-8法测细胞增殖,流式细胞仪测细胞凋亡,ELISA测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及白细胞介素6(IL-6)含量,比色法测乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blot测HUVEC中p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表达;分别加入10μmol/L姜黄素和25 μmol/L SB203580观察姜黄素的干预作用.结果 与对照组比较,LCN-2可显著抑制HUVEC增殖,上调HUVEC内Bax/Bcl-2蛋白比率而促进细胞凋亡,诱导HUVEC分泌MCP-1及IL-6,增加LDH活性(P＜0.05);与LCN-2组比较,姜黄素及SB203580均可显著减轻LCN-2诱导的HUVEC增殖抑制,下调Bax/Bcl-2蛋白比率而抑制HUVEC凋亡,减少LCN-2诱导的HUVEC分泌MCP-1及IL-6,降低LDH活性(P＜0.05).结论 姜黄素可通过抑制p38 MAPK通路,减轻LCN-2诱导的HUVEC损伤.
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RNA干扰LOX-1表达对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制
目的 构建血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因的RNA干扰慢病毒载体并转染人脐静脉内皮细胞.观察干扰LOX-1表达后对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞损伤的保护机制.方法 针对已经筛选确定的小干扰RNA有效干扰序列,合成慢病毒LV-si-OLR1佳干扰序列,测定滴度.转染人脐静脉内皮细胞96h后,通过荧光显微镜观察转染效率,逆转录聚合酶链反应和Western blot检测LOX-1的抑制效率.转染72 h后加入150 mg/L ox-LDL处理24h;噻唑蓝比色法检测细胞存活率;硝酸还原酶法检测各组内皮细胞培养液一氧化氮(NO)的含量;Western blot检测各组细胞间黏附分子1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、RhoA、Rho激酶1(ROCK1)、Rho激酶2(ROCK2)的表达.结果 测序结果证实,靶向人LOX-1的干扰慢病毒载体构建成功,包装后慢病毒滴度为6×1011 TU/L.转染组与未转染组比较,LOX-1 mRNA与蛋白的表达明显减少(P＜0.01).与正常对照组相比,ox-LDL处理组能明显减低内皮细胞的存活率及NO的生成量,增高ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达(P＜0.05);与ox-LDL处理组相比,干扰LOX-1表达后对ox-LDL诱导的内皮细胞存活率、NO生成量减低和ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2表达增高均有明显抑制作用(P＜0.05).结论 干扰LOX-1表达,对ox-LDL诱导内皮细胞引起的ICAM-1、MCP-1高表达和RhoA/Rho激酶信号通路的激活及细胞存活率、NO生成量的减低均有明显抑制作用,起到对内皮细胞损伤的保护作用.本研究为LOX-1作为靶基因治疗动脉粥样硬化提供了实验依据.
