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两种细菌鉴定仪对临床分离细菌鉴定结果的比较
目的 比较并评价两种细菌鉴定仪,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱Bruker MAEDI Biotyper系统和Vitek 2 Compact在临床分离菌株鉴定中的应用.方法 收集2015年8-9月海军总医院分离自血液、尿液、脑脊液、分泌物和痰液等临床标本的常见细菌558株,应用Vitek 2 Compact和Bruker Biotyper两种细菌鉴定仪对其进行鉴定,比较两种仪器的鉴定结果.结果 对于558株临床分离菌,Bruker Biotyper鉴定结果为28个属,Vifek2 Compact鉴定结果为24个属,两仪器菌属鉴定一致的有22个属;鉴定结果菌种一致的符合率占91.0％(508株),菌属一致的符合率占94.8％(529株),其中沙门氏菌属占0.2％(1株)两种仪器只鉴定到属;革兰阴性菌鉴定到种的符合率与革兰阳性菌和真菌无明显差异(P＞0.05).结论 Bruker Biotyper系统鉴定细菌快速、准确、操作简单、成本低,适合于临床细菌的常规鉴定,但数据库仍需进一步完善.
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高发区早期食管癌及癌前病变血清蛋白研究
目的：应用质谱技术构建高发区食管癌及癌前病变血清蛋白质指纹图谱模型，为食管癌早期诊断寻找生物指标，并探讨差异蛋白在食管癌发生发展中的作用及意义。方法收集食管癌、癌前病变血清样本共254例，根据病理分为低级别上皮内瘤变（LGIN）、高级别上皮内瘤变（HGIN）、进展期食管鳞癌（AEC）、健康对照组。采用弱阳离子交换纳米磁珠（WCX）对血清蛋白进行纯化，MALDI-TOF-MS质谱进行检测，构建诊断模型并进行盲法验证。结果三组病变组与对照组以及各组间比较有统计学差异蛋白峰146个，由14个蛋白峰建立食管癌及癌前病变血清蛋白指纹图谱模型，蛋白峰分别是32721、3403、1772、1071、1414、33312、32023、31043、4662、2245、1307、10013、6868、1234。对早期食管癌及前病变的特异性为90.91%（30/33），对LGIN的灵敏度为100%（31/31），HGIN灵敏度为89.66%（52/58），AEC的灵敏度为81.26%（26/32），盲法预测验证结果表明；该模型对食管癌前病变及癌的特异性为95.652%（22/23），对LGIN的敏感性为95.455%（21/22），HGIN敏感性为94.118%（32/34），AEC的敏感性为95.238%（20/21）。经ExPasy数据库检索蛋白峰为32023，1234，1307，推测为ZAG（zinc alpha2 glycoprotein），Glycosyltransferase-like protein LARGE2，Fibrinogen alpha chain。结论采用MALDI联合WCX建立诊断模型具有高的灵敏度及特异性。根据各组间差异蛋白变化，推测食管癌的发生可能起始于LGIN或更早，提示对于表达与肿瘤相关差异蛋白峰的个体应给予定期随访。
关键词： 食管肿瘤 癌前病变 蛋白质组学 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 -
MALDI-TOF-MS分析新疆食管鳞状细胞癌的蛋白组学
目的:分析新疆食管鳞状细胞癌和食管正常上皮细胞的差异表达蛋白.方法:运用激光捕获显微切割技术(LCM)分别获取食管鳞状癌细胞和食管正常上皮细胞,应用二维凝胶电泳技术(2-DE)分离纯化细胞,Imagemaster 2D软件比较分析两者电泳图谱的差异,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定分析两者表达的差异蛋白.结果:建立了食管鳞状癌细胞和食管正常上皮细胞的2-DE图谱,获得43个差异蛋白点,通过质谱鉴定出17种蛋白,其中15种蛋白如Trangelin2、HSP27、S100A11、GSTP等在食管鳞状癌细胞中表达明显增高,2种蛋白如SCCA1,在食管鳞状癌细胞中表达明显降低.结论:提示17种差异蛋白可能与食管鳞状细胞癌的发生和发展有关,为筛选食管鳞状细胞癌的特异性分子标志物奠定基础.
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HBV相关性肝细胞癌及肝硬化患者外周血单个核细胞质谱分析
目的:建立HBV相关性肝细胞癌(HCC)及肝硬化(LC)患者外周血单个核细胞(PBMC)的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定其差异表达的蛋白质.方法:利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离HBV相关性HCC(n=16)及LC患者(n=12)PBMC的总蛋白质,凝胶经蓝银显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点.结果:得到了分辨率较高、重复性较好的HBV相关性HCC及LC患者PBMC双向凝胶电泳图谱,HBV相关性HCC及LC患者PBMC凝胶的平均蛋白质点数分别为1186±43及1013±41;组内的平均匹配率分别为91.6%,90.2%.对27个差异蛋白质点进行了质谱分析,鉴定出16个蛋白质,在HBV相关性HCC患者PBMC中表达明显增强的有热休克蛋白质(HSP)27、ras癌基因家族(RAB14)、肌动蛋白、α1-抗胰蛋白及RNA结合蛋白调节亚基等13个蛋白点;而PDX6、HSPA8及锰超氧化物歧化酶(MnSOD)在HCC患者PBMC中低表达.这些差异蛋白质点包括蛋白质合成与分解、分子伴侣、解毒和DAN修复相关蛋白质、三大代谢相关酶类、细胞结构相关蛋白质以及信号传导相关蛋白质六类.结论:建立了分辨率高且重复性较好的HBV相关性HCC及LC患者PBMC双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出了一些与HBV相关性HCC癌变相关的差异表达的蛋白质.
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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在细菌耐药机制检测中的应用进展
细菌耐药现象十分严重,已成为全球共同面临的难题.常规细菌耐药性检测方法,如纸片法、稀释法等不仅耗时长且无法明确具体的耐药机制,不能满足临床对药物敏感性指导的需求.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)用于细菌耐药性和耐药机制的检测,克服了传统方法的缺点,具有广阔的应用前景.本文将对近年来MALDI-TOF MS在细菌耐药机制检测中的方法及其适用范围作一阐述.
关键词： 细菌 耐药机制 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 -
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在医院感染暴发期间环境污染调查中的应用与评价
目的 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对医院环境表面细菌污染状况开展调查,对其应用价值进行评价.方法 2014年6月某院ICU发生鲍氏不动杆菌感染疑似暴发,采用无菌棉签进行环境和物体表面涂抹采样,现场接种麦康凯、厌氧营养琼脂平板,典型菌落采用MALDI-TOF MS技术鉴定.结果 采集环境与物体表面样本121份,其中 93份表面有菌生长,细菌检出率为76.9％;医护办(站)和卫生更衣区域的物体表面细菌检出率较高,分别达94.7％和93.3％,患者和诊疗室区域物体表面的细菌检出率则明显低于上述两个区域,差异有统汁学意义(x2=8.011,P＜0.05);ICU环境和物体表面共鉴定出细菌种类19科、47种、247株,鉴定出前3位的细菌分别是葡萄球菌属(1属11种100株)占40.5％、微球菌属(1属2种67株)占27.1％和假单胞菌属(1属5种20株)占 8.1％.结论 MALDI-TOFMS技术可以快速、准确鉴定细菌种类,且人力与耗材成本较低,能在较短时间内为采取感染暴发控制措施提供依据.
关键词： 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 鲍氏不动杆菌 环境污染 -
经修饰CHROMagar不动杆菌显色培养联合MALDI-TOF-MS快速筛查肠道耐碳青霉烯鲍氏不动杆菌的研究
目的 探讨初步建立经修饰的CHROMagar不动杆菌显色培养联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的方法用于快速筛查肠道耐碳青霉烯鲍氏不动杆菌(CRAB).方法 采集2017年4－6月入住医院ICU的319 名患者直肠拭子并接种至含 4 μg／ml美罗培南的 CHROMagar 不动杆菌显色培养基, MALDI-TOF-MS鉴定可疑菌株.快速筛查结果用 recA 基因测序分析及美罗培南MIC值进行验证.结果 快速筛查到18 1.8%(58／319)的患者肠道携带CRAB . recA 基因测序分析显示该58株菌全为鲍氏不动杆菌,且有57株对美罗培南耐药,符合率高达98 .28%(57／58).结论 经修饰的CHROMagar 不动杆菌显色培养联合MALDI-TOF-MS可快速筛查肠道耐碳青霉烯鲍氏不动杆菌,特异性高、稳定性好,对医院感染早期监测与积极防控具有重要的应用价值.
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Vitek MS与Bruker MS对光滑念珠菌复合体鉴定能力评估
目的：评估中国医院侵袭性真菌监测网（CHIF‐NET）2010－2014年收集的光滑念珠菌复合体原始鉴定、Vitek MS与Bruker MS鉴定结果。方法收集CHIF‐NET 2010－2014五年中12株 Candida nivariensis和1株Candida bracarensis及来自CHIF‐NET 2010－2014连续五年参加的11所医院的光滑念珠菌411株，所有菌株均经过分子生物学方法进行复核鉴定确认；以复核鉴定结果作为金标准，评估各医院原始常规方法鉴定结果，并评估Vitek MS和Bruker MS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI‐TOF MS）对光滑念珠菌复合体的鉴定性能。结果与分子生物学复核鉴定结果相比，光滑念珠菌的原始鉴定准确率为90．3％，9．7％的菌株被显色培养基、ID 32C、API 20C或 Vitek 2 Compact错误鉴定为近平滑念珠菌、白色念珠菌等；常规方法无法鉴定 C ．nivariensise和C ．bracarensis ；Vitek MS和Bruker MS对光滑念珠菌的鉴定准确率分别为97．6％和100．0％；Vitek MS 2．0数据库中无C ．nivariensise和C ．bracarensis的参考谱图，故无法鉴定；Bruker Biotyper 3．1数据库中有这两种菌的参考谱图，但1株C ．bracarensis无鉴定结果，12株C ．nivariensise全部鉴定正确，鉴定分值为1．708～1．944。结论该研究率先在国内评估了Vitek MS与Bruker MS鉴定光滑念珠菌复合体的性能，两者对于光滑念珠菌的鉴定比较可靠；对于少见念珠菌菌种的鉴定，Bruker MS优于Vitek MS。
关键词： 光滑念珠菌复合体 鉴定 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 -
Bruker MS与VITEK-MS鉴定近平滑念珠菌复合体的性能对比
目的 评估中国医院侵袭性真菌监测网(CHIF-NET) 10和11收集的近平滑念珠菌复合体原始鉴定、Bruker MS与VITEK MS鉴定结果.方法 经中心实验室分子生物学方法复核鉴定确认,CHIF-NET 10和11从全国22所医院共收集到近平滑念珠菌复合体352株,包括近平滑念珠菌305株,似平滑念珠菌36株,拟平滑念珠菌11株;以复核鉴定结果为金标准,评价各单位原始常规方法鉴定结果,并评估Bruker MS和VITEK MS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对近平滑念珠菌复合体的鉴定性能.结果 与分子生物学鉴定结果相比,近平滑念珠菌的各医院原始鉴定准确率为90.8％,9.2％的菌株被API 20C或VITEK-2错误鉴定为光滑念珠菌、季也蒙念珠菌等;常规方法无法鉴定似平滑念珠菌和拟平滑念珠菌;Bruker MS和VITEK MS对305株近平滑念珠菌鉴定准确率分别达到了98.4％和97.7％;Bruker Biotyper 3.0数据库中有似平滑念珠菌和拟平滑念珠菌参考图谱,但鉴定准确率仅分别为33.3％和27.3％;VITEK MS V2.0没有两种菌的参考图谱而无法鉴定.结论 该项研究率先在国内评估了BrukerMS和VITEK MS鉴定近平滑念珠菌复合体的性能,证明二者对于近平滑念珠菌的鉴定是比较可靠的.
关键词： 近平滑念珠菌复合体 鉴定 ITS测序 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 -
不同亚型人乳头状瘤病毒感染合并细胞学异常者宫颈上皮内瘤变2级或3级及以上病变的患病风险评估
目的 研究不同亚型人乳头状瘤病毒(HPV)感染合并宫颈细胞学异常状态者宫颈鳞状上皮内瘤样病变2级及以上(CIN 2+)或3级及以上(CIN3+)的患病情况.方法 2008—2010年在深圳和周边地区开展的两项以人群为基础的宫颈癌筛查横断面研究,共12097名25~59岁的妇女参加.通过液基细胞学联合多种高危型人乳头瘤病毒(hrHPV)检测方法进行筛查,对细胞学结果为意义不明的不典型鳞状上皮细胞(ASC-US)及以上者或任一种HPV检测结果阳性者行阴道镜下宫颈组织活检.终10805名具有完整第二代杂交捕获技术(HC2)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI)HPV分型检测结果及细胞学、病理结果的妇女纳入分析.结果 CIN2+和CIN3+中,HPV感染率前6位的亚型为HPV16、HPV52、HPV58、HPV33、HPV31和HPV18.CIN2+和CIN3+中细胞学构成比高的为高度鳞状上皮内病变(HSIL).感染HPV16、HPV31、HPV58、HPV33、HPV18、HPV52者CIN2+的发生率分别为41.3%、31.5%、30.6%、28.7%、28.2%和17.7%,CIN3+的发生率分别为33.5%、20.5%、19.4%、15.7%、19.2%和8.3%;无宫颈上皮病变或恶性细胞(NILM)、ASC-US、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、非典型鳞状上皮-不除外高度病变(ASC-H)、HSIL、非典型腺上皮细胞(AGC)人群中,其CIN2+的发生率分别为0.4%、6.9%、11.1%、36.4%、82.0%和16.7%;CIN3+的发生率分别为0.2%、3.1%、4.2%、22.7%、64.8%和0.0%.NILM合并HPV16、HPV18、HPV31、HPV334种亚型感染人群CIN2+的发生率分别为12.6%、13.3%、15.8%和11.5%;CIN3+的发生率分别为10.3%、11.1%、7.9%和7.7%.ASC-US合并各hrHPV感染的人群中,其CIN2+发病率前6位为HPV31(35.7%)、HPV33 (26.9%)、HPV16(26.5%)、HPV58(22.4%)、HPV52(18.6%)和HPV68(15.4%);CIN3+发病率前6位为HPV16(20.4%)、HPV31(14.3%)、HPV33(11.5%)、HPV58(8.6%)、HPV68(7.7%)和 HPV52 (5.8%).结论 细胞学联合HPV 亚型分析能更有效地评估CIN2+和CIN3+的患病风险;HPV31、HPV33、HPV52和HPV58的流行率高,在合并NILM与ASC-US状态时,患CIN2+和CIN3+的风险大,或有必要行阴道镜检查.
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侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的蛋白质差异表达
目的 建立分辨率高和重复性好的侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出其差异表达的蛋白质.方法 利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的总蛋白质,凝胶经银染显色后,运用ImageMaster 2D图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及数据库搜索鉴定部分差异蛋白质点.结果 得到了分辨率较高、重复性好的侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的双向凝胶电泳图谱.比较分析图谱,初步对其中30个点进行了肽质指纹图分析,鉴定出一些与细胞周期调控、信号传导等有关的差异蛋白质.结论 建立了分辨率较高且重复性较好的侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出一些侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的差异表达的蛋白质,为进一步筛选侵袭性垂体腺瘤的蛋白质表达数据库提供了基础.
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皮肤细胞蛋白质组质谱分析方法的建立及肽质量指纹图谱的构建
目的 建立人皮肤细胞蛋白质组学研究所需的质谱分析方法,并获得皮肤细胞蛋白质肽质量指纹图谱.方法体外培养人皮肤成纤维细胞与角质形成细胞,采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离其总蛋白质,凝胶经染色后,在图谱上选取2个角质形成细胞蛋白点与1个成纤维细胞蛋白点,进行胶内酶切、基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱分析鉴定.结果获得3个点的肽质量指纹图谱,经Mascot软件搜索人非冗余蛋白质数据库后,鉴定为细胞骨架Actin gamma1、tubulinα2及热休克蛋白HSP70.结论 皮肤细胞基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱分析技术的建立为皮肤蛋白质组学的进一步研究提供手段.
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应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱研究白色念珠菌血流感染的血清多肽指纹图谱
目的 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)分析白色念珠菌所致血流感染的血清多肽指纹图谱,寻找差异多肽峰并建立相应的诊断模型.方法 建立ICR小鼠白色念珠菌血流感染模型,收集血清标本,经弱阳离子磁珠纯化,MALDI-TOF MS检测及BioExplorer软件分析白色念珠菌感染与正常对照组的血清多肽指纹图谱,同时分析大肠埃希菌感染组、金黄色葡萄球菌感染组和白色念珠菌感染组的血清多肽指纹图谱.结果 比较白色念珠菌感染组和正常对照组共得到135个多肽峰,其中表达上调的多肽有5个,表达下调的多肽有6个,表达呈先上调后下调的多肽有7个,组合m/z 1610.9、1742.3、2666.4、2778.0、3345.1、4528.8这6个峰建立诊断模型,该模型区分白色念珠菌感染的正确率为80.0％.综合比较大肠埃希菌感染组、金葡菌感染组和白色念珠菌感染组的血清多肽指纹图谱发现,有5个多肽峰在感染组中共同出现,分别为m/z 1513.8、2910.8、3538.1、3884.9和5007.3.结论 利用MALDI-TOFMS可有效区分白色念珠菌感染和正常血清的多肽峰,同时感染中共同出现的多肽峰有望成为辅助诊断血流感染的标志物,通过建立相应的诊断模型能早期辅助诊断真菌性血流感染,为临床合理用药及标志物寻找提供依据.
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潜艇密闭环境下军人皮肤表面微生物分布特征研究
目的：研究潜艇密闭环境下军人皮肤表面微生物分布特征和变化特点，为潜艇艇员针对性卫勤保障提供依据。方法利用样本采集拭子采集潜艇艇员皮肤表面标本122份，进行细菌培养，分纯后通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（ MALDI-TOF-MS）鉴定。结果共分离细菌52种229株，真菌2种2株，主要优势条件致病菌为鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌，优势栖居菌为滕黄微球菌、奥斯陆莫拉菌、乌尔新不动杆菌、表皮葡萄球菌和黏质沙雷菌。任务中后期与任务前期相比，优势条件致病菌和栖居菌均明显增多。结论获得了潜艇密闭环境下军人皮肤表面微生物菌谱，平战时需进行针对性药品配备并采取战创伤救治措施。
关键词： 潜艇 皮肤 微生物菌群 条件致病菌 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 -
关键词：
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MALDI-TOF MS在感染性疾病诊断中的应用
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)用于临床感染性疾病的诊断具有操作简单、鉴定快速、通量高、灵敏度好、准确性高的优点,已成为目前临床微生物实验室方便快捷的实验技术.该文依据现有文献综述了MALDI-TOF MS在临床感染性疾病诊断中的新应用,介绍了MALDI-TOF MS用于微生物鉴定的基本原理和现状,以及在抗生素耐药性检测和临床标本直接测试中的应用.
关键词： 感染性疾病 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 微生物鉴定 -
miR-26a-1基因多态性与食管癌淋巴结转移危险因素的研究
目的 研究中国汉族人群中miR-26a-1 rs7372209 C＞T多态性与食管癌淋巴结转移危险因素关系.方法 采用以医院为基础的病例-病例研究方法,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术分析85例有淋巴结转移的食管癌和270例无淋巴结转移的食管癌miR-26a-1 rs7372209 C＞T基因多态性,计算各种基因型与食管癌淋巴结转移的发生风险及其95%可信区间.结果 miR-26a-1 rs7372209 C＞T多态三种基因型CC、CT、TT在食管癌淋巴结转移组和无淋巴结转移组的频率分别为55.3%、36.5%、8.2%和48.5%、43.7%、7.8%,与携带miR-26a-1 rs7372209 CC基因型的个体相比较,miR-26a-1 rs7372209 TT等位基因型与食管癌淋巴结转移的危险因素无关.结论 miR-26a-1 rs7372209 C＞T基因多态性可能与食管癌淋巴结转移无明显相关.
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MALDI-TOF-MS测定天然白芨多糖相对分子质量的研究
目的 考察基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)用于检测天然多糖相对分子质量的可行性及条件.方法 以2,5-二羟基苯甲酸(DHB)为基质对精制后的天然白芨多糖(未分级)相对分子质量进行测定.条件采用DHB-白芨多糖为1.5:1,室温液滴自然干燥法;线性正离子谱模式,激光强度:1500～2500单位.结果 白芨多糖相对分子质量分布在6×104～3×105,其分散性较大.结论 采DHB与白芨多糖样品比例为1.5:1,直接液滴干燥法效果好,能获得较好的图谱效果.
关键词： 白芨多糖 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 基质 相对分子质量 -
飞行时间质谱技术在卵巢癌诊治中的研究进展
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)作为一种新的质谱技术成功检测出许多与疾病相关的新型生物标记物,尤其在肿瘤的诊治方面,其可以快速检测出癌症患者体内特异的蛋白表达,辅助制定个体化的治疗方案,预测治疗效果以及复发的可能性.近年来,国内外学者开展了多项MALDI-TOF-MS在卵巢癌差异蛋白检测、化疗耐药相关分子检测方面的研究.综述MALDI-TOF-MS技术的起源与现状,及其对卵巢癌诊断治疗的研究进展,所面临的挑战和应用前景,为卵巢癌的防治、诊断及治疗等提供新的思路和方法.
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液体芯片飞行时间质谱技术在肿瘤临床研究中的应用
液体芯片飞行时间质谱技术(ClinProt系统)是近年开发的蛋白质组学新技术,其利用纳米磁珠俘获肿瘤患者与对照者体液中低丰度或低相对分子质量特异蛋白/多肽.经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定和软件分析,建立由两者差异表达蛋白/多肽组成的质谱图模型,用于预测未知样品的归属.该系统具有良好的特异性、灵敏性和重复性.高通量,操作简单、快捷等优点,能对所获得的差异蛋白/多肽进行蛋白鉴定,是极具潜力的临床肿瘤早期诊断工具.本文将就目前ClinProt系统在临床肿瘤研究中的应用进行综述.
