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脑海马神经元接受化疗与未化疗的差异
背景:研究认为化疗药物能穿过血脑屏障引起神经毒性作用而损伤神经细胞.目的:观察化疗脑海马神经元的表达情况及形态的变化,探讨化疗脑对海马神经再生的影响的机制.方法:收集恶性肿瘤化疗人脑标本(＜60岁,n=3;＞60岁,n=3)和未化疗人脑标本(＜60岁,n=3;＞60岁,n=3),免疫组织化学检测海马CA1、CA2和CA3区特异抗体阳性神经元的形态及数量的变化情况.结果与结论:①不同年龄组免疫组织化学染色结果显示,与未化疗脑相比,化疗脑海马CA1、CA2和CA3区:NeuN+细胞、DCX+细胞、PV+细胞阳性数量明显降低,并且PV细胞胞体较小,突起减少并缩短;细胞表达明显减少;②免疫荧光染色结果显示,＜ 60岁化疗脑NeuN阳性神经元和DCX阳性神经元共表达数量显著较未化疗脑低,而＞60岁化疗脑与未化疗脑无明显差异;③结果表明,药物化疗使海马未成熟神经元的表达降低;药物化疗使海马成熟神经元的数量降低;药物化疗使PV神经元形态发生改变,细胞数量降低;药物化疗降低海马未成熟神经元向成熟神经元的转化.
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触觉剥夺后豚鼠桶状皮质DCX阳性细胞的实验研究
目的:观察豚鼠单侧触觉剥夺后豚鼠两侧桶状皮质的DCX阳性细胞数量的差别,探讨触觉剥夺对豚鼠桶状皮质神经发生的影响.方法:12只健康豚鼠随机分为2组,每组6只,制作豚鼠单侧(右侧)触觉(胡须)剥夺模型,之后常规饲养1月和2月灌注取材,用免疫组化和免疫荧光双标法观察同一只豚鼠两侧桶状皮质的DCX阳性细胞情况并比较其数量差异.结果:DCX免疫组织化学染色显示两实验组大脑皮层barrel区DCX阳性细胞数实验侧均明显多于对照侧；NeuN免疫组织化学染色显示两实验组动物大脑皮层barrel区两侧NeuN阳性细胞数差别无统计学意义；DCX和NeuN免疫荧光双标染色显示两实验组大脑皮层barrel 区均可见双标细胞存在.结论:触觉剥夺后豚鼠两侧桶状皮质的DCX阳性细胞数具有明显差异性,可能是神经再生的表现.
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神经元特异的抗原NeuN与Fox3的研究现状
NeuN作为神经元的标志,是一种神经组织特异的蛋白,可能参与神经系统的发育、分化和功能,但是其具体作用机制还不清楚.目前Neun在神经系统发育、病理诊断以及神经元退化、坏死等方面得到广泛应用.近在免疫组化、基因沉默等研究中发现,Neun与Fox3基本重合,因此认为NeuN属于Fox1基因家族,命名为Fox3.
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大鼠皮层神经元中磷酸化的细胞周期相关蛋白在发育过程中的表达
目的 观察正常Wistar大鼠发育过程中皮层神经元的细胞周期相关蛋白及其磷酸化蛋白的表达,探讨发育过程中皮层神经元的细胞周期变化以及磷酸化细胞周期相关蛋白在其中的调控作用.方法 采用免疫荧光方法 观察不同发育时期CyclinD1、CDK2、P27以及磷酸化CDK2、磷酸化CDC2、磷酸化Rb表达的规律.结果 在各年龄组NeuN阳性细胞数量随着年龄增加而逐渐减少.细胞周期相关蛋白(CyclinD1、CDK2、P27)在皮层神经元中广泛表达,各组间差异无显著性;磷酸化CDK2、磷酸化Rb阳性细胞的数量随着年龄增加而逐渐增多,各组间差异有显著性;磷酸化CDC2阳性细胞在各年龄组神经元中均无表达.结论 随着年龄的增长,磷酸化CDK和Rb逐渐增多,使得进入细胞周期的皮层神经元增加.细胞周期相关蛋白的磷酸化调控作用可能与衰老时皮层神经元的凋亡有关.
关键词： 磷酸化细胞周期素依赖激酶K 磷酸化Rb 细胞周期蛋白D1 p27 NeuN -
加味温胆汤对抑郁模型大鼠神经可塑性的影响
目的:探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠神经可塑性的影响.方法:将192只大鼠随机分成空白组、模型组、中药组(灌胃加味温胆汤)、西药组(灌胃氟西汀),每组48只.以孤养结合慢性不可预见性应激造大鼠抑郁模型,在实验第7、14、21、28天,检测各组大鼠海马突触结构的体视学变化以及神经元再生情况.结果:在抑郁形成过程中,21天时,与空白组比较,模型组大鼠不仅突触活性区长度、突触后致密物质厚度明显减少,突触间隙宽度增加明显,而且NeuN/BrdU、B-tubulinⅢ/BrdU双标阳性细胞数均显著减少(P＜0.01).中药组抑郁大鼠突触活性区长度、突触后致密物质厚度、双标阳性细胞数减少的趋势,以及突触间隙宽度上升的趋势均得到抑制,与模型组比较,在21天时,差异均有显著性意义(P＜0.05),28天时,差异增大(P＜0.01).结论:加味温胆汤通过增加抑郁模型大鼠海马神经元再生,恢复海马的结构与功能,从而发挥其抗抑郁的作用,且随着治疗天数的增加,其效应不断增强,21天时开始显效,28天时效应进一步加强.
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人参皂苷Rb1对阿尔茨海默病模型鼠海马区神经元NeuN表达的影响
目的 观察人参皂苷Rb1对阿尔茨海默病(AD)模型鼠海马区神经元NeuN表达的影响,探讨人参皂苷Rb1对AD的治疗作用.方法 选用10月龄SAMP8鼠作为实验鼠,对照鼠为SAMR1鼠,等量分至给药组(SAMP8+GSRb1组和SAMR1+GSRb1组)和未给药组(SAMP8组和SAMR1组).给药组腹腔注射2.5 mg/kg人参皂苷Rb1 1次/d,连用4周,未给药组腹腔注射同等剂量生理盐水.第1周后所有鼠腹腔注射50 mg/kg Brdu 2次/d,连续3周注射后,10%水合氯醛麻醉后灌注取脑,脑组织固定脱水,用冰冻切片机切片后孵育一抗二抗,激光共聚焦扫描显微镜扫描,采用免疫荧光和免疫荧光双标方法观察各组海马区齿状回Brdu/NeuN表达情况.结果 与SAMR1+GSRb1组(0.25±0.10)比较,SAMP8+GSRb1组(0.50±0.10)Brdu/NeuN表达明显增多,差异有统计学意义(t=3.95,P=0.005 2);与SAMR1组(0.54±0.08)比较,SAMP8组(0.40±0.08)Brdu/NeuN表达减少,差异有统计学意义(t=4.06,P=0.003 6).与SAMP8组比较,SAMP8+GSRb1组Brdu/NeuN表达明显增多,差异有统计学意义(t=2.82,P=0.022 4).与SAMR1组比较,SAMR1+GSRb1组Brdu/NeuN表达增多,差异有统计学意义(t=6.97,P=0.0001).结论 人参皂苷Rb1可以增加AD模型鼠海马齿状回NeuN表达,证明人参皂苷Rb1可促进神经元NeuN再生,增强神经元抗损伤与凋亡的能力,为AD治疗提供可靠依据.
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NeuN与GFAP在正常大鼠、小鼠、猫脊髓内的表达
目的 探讨特异识别大鼠的NeuN、GFAP抗体对小鼠、猫脊髓神经元和星形胶质细胞的识别程度.方法 选取正常大鼠、小鼠、猫的脊髓,运用免疫组化二步法分别行NeuN与GFAP染色,观察两种抗体在三种动物脊髓中的表达情况.结果 NeuN特异识别大鼠、小鼠脊髓神经元,但不识别猫脊髓神经元.GFAP可特异识别大鼠、小鼠脊髓的星形胶质细胞,部分识别猫脊髓的星形胶质细胞.结论 特异性识别大鼠的NeuN、GFAP抗体对小鼠、猫脊髓的识别程度存在一定差异.
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巴曲酶对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区的影响
目的通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注不同时段,巴曲酶对海马CA1神经元及星形胶质细胞数目、形态等方面的影响,从而探讨巴曲酶对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞(MACO)2h、不同再灌注时间段(3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d)的大鼠短暂局灶性脑缺血(transient focal cerebral ischemia)模型,随机设立巴曲酶组(Bat)、生理盐水对照组(N.S)、假手术组(sham-operated),通过HE染色及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异核抗原(NeuN)的免疫组化染色,观测CA1区神经元和星形胶质细胞的形态、数目的动态变化.结果巴曲酶能显著提高再灌注早期(6～24h)CA1区GFAP阳性细胞的数目,再灌注7d组存活锥体细胞的数量较盐水对照组有明显提高,提示局灶性脑缺血后早期反应性星形胶质细胞的增多对维持神经元的存活有积极意义,巴曲酶对短暂局灶性脑缺血再灌注引起的海马CA1区延迟性神经元坏死(DND)有一定的抑制作用.
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APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株的表达
目的 探讨APC和NeuN在肺腺癌A549细胞株中的表达及意义.方法 体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化;取第1代培养后1d、5d的细胞,用免疫组化检测APC和NeuN在肺腺癌细胞株A549的表达及计处阳性染色细胞的变化.结果 APC和NeuN在体外传代培养的肺腺癌A549细胞株中有表达,且随着细胞的生长,APC的表达减少,NeuN的表达增多.结论 APC可能在其早期形成中就发挥一定的作用;A549、NeuN的表达增A549肺腺癌细胞可能存在向神经细胞分化的潜力.在肺腺癌A549细胞表达减少.
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胎鼠海马神经元培养及其鉴定
目的 建立胎鼠海马神经元体外培养方法,观察细胞生长情况,免疫组织化学染色鉴定神经元特异性.方法 取胎鼠海马,分裂获得细胞悬液,接种于24孔板,经2 h差速帖壁去除成纤维细胞,将细胞液转移并继续培养,以获娶纯度较高的海马神经元.培养第5 、11、15天观察细胞和突起生长情况,用NeuN抗体以免疫组化SP二步法染色鉴立神经细胞.结果 培养头3 d.细胞生长缓慢,5 d时细胞开始生长,可见突起,11 d时突起连成网状.经Neun染色培养细胞呈阳性反应,证明是神经元.结论 本方法获取生长良好,纯度较高的海马神经元.
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成年恒河猴和大鼠脊髓神经元及星型胶质细胞的特异识别
目的 研究成年恒河猴和大鼠脊髓神经元及星型胶质特异标记核蛋白(NeuN)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在两类动物脊髓的分布及其特异性.方法 取成年恒河猴和大鼠脊髓组织,冰冻切片,用NeuN抗体和GFAP抗体行免疫组织化学SP法染色,观察NeuN和GFAP在大鼠和猴脊髓的免疫反应分布,探讨抗体标识特异性.结果 猴和大鼠脊髓灰质神经元胞浆、突起和胞核均有NeuN阳性染色,但大鼠脊髓染色强于猴脊髓染色,特异性更高.GFAP在大鼠和猴脊髓星型胶质细胞均有分布,白质强于灰质,两者类似.结论 识别鼠类的神经元核蛋白抗体NeuN和GFAP抗体可于灵长类脊髓染色,能有效标示灵长类脊髓神经元和星型胶质细胞.
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红景天苷对大鼠脑缺血再灌注氧化应激损伤的保护作用
目的:探讨红景天苷(SAL)对大鼠脑缺血再灌注损伤(IRI)的神经保护作用.方法:建立大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型.实验分为假手术组、IRI模型组、SAL预处理+IRI组(每日10g/kg,溶于生理盐水,浓度为1.5 g/ml,连续灌胃14 d),于再灌注24 h应用试剂盒检测大鼠缺血脑组织中丙二醛(MDA)、活性氧簇(ROS)及超氧化物岐化酶(SOD)的表达水平;应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色方法评定脑梗死体积,计算梗死体积百分比;用Western Blot和免疫荧光染色方法观察大鼠缺血侧脑组织神经元表达的变化.结果:与假手术组相比,IRI模型组MDA、ROS的表达水平明显升高,SOD的表达水平明显降低(P＜0.01),脑梗死体积百分比增大(P＜0.01),NeuN的表达降低(P＜0.01);与IRI模型组相比,红景天苷预处理+IRI组MDA、ROS的表达明显降低,SOD的表达明显升高(P＜0.05),脑梗死体积百分比明显减小(P＜0.01),NeuN的表达升高(P＜0.05).结论:红景天苷可通过抑制脑缺血再灌注损伤大鼠的氧化应激来减少脑梗死体积而发挥神经保护作用.
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抑郁模型大鼠海马神经元再生变化及加味温胆汤的干预研究
目的:探讨加味温胆汤对抑郁模型大鼠海马神经元再生变化的影响.方法:以孤养结合慢性不可预见性应激抑郁模型大鼠为研究对象,在实验第7、14、21、28 d,采用免疫荧光双标技术检测各组大鼠海马神经元增殖与分化的再生变化情况.结果:在抑郁形成过程中,大鼠海马神经元NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU双标细胞数逐渐降低,至21、28 d时模型组NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU双标阳性细胞数明显减少,经中、西药治疗后,大鼠海马神经元NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU双标阳性细胞数下降趋势得到抑制,与模型组比较增加明显(P＜0.05或P＜0.01).结论:抑郁形成过程中海马神经元增殖与分化减少的再生障碍渐次加重,加味温胆汤可逆转此现象.
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3-HB协同bFGF诱导促进神经干细胞向神经元方向分化
目的 研究3-羟基丁酸(3-HB)与bFGF或EGF协同作用对神经干细胞(NSCs)活力及分化的影响.方法 分离培养孕14～15d大鼠胚胎脑皮质NSCs,以不加处理的实验组为对照,在bFGF(10ng/mL)或EGF(20ng/mL)处理条件下分别以不同浓度3-HB(0、0.02、0.2、2mmol/L)处理P3代NSCs.分别检测细胞活力,免疫细胞化学染色MAP2观察NSCs 向神经元方向的分化情况,RT-qPCR检测转录因子SOX2、PAX6和神经元核定位因子NeuN的mRNA表达水平.结果 3-HB协同bFGF处理NSCs能够提高NSCs的细胞活力.0.02mmol/L 3-HB处理组NSCs分化的MAP2阳性细胞比例增加,PAX6和NeuN的mRNA水平升高.外源添加bFGF的条件下,0.02mmol/L处理组3-HB促进NSCs向神经元方向分化的效果更明显.结论 低浓度3-HB能够促进NSCs向神经元方向的分化,0.02mmol/L的3-HB与bFGF协同作用对NSCs向神经元方向分化的促进作用更明显,其可能通过影响SOX2、PAX6及NeuN的表达而发挥此调控作用.
