免疫荧光法测定hs-CRP在新生儿感染中的应用

CRP(C反应蛋白)是急性感染和组织损伤时机体在应激状态下由肝脏合成的急性时相蛋白,是目前临床较常用的诊断细菌性感染的指标.由于新生儿(包括早产儿)的CRP基础水平往往很低,用一般的检测方法不能测出此微小的变化,因此应用一种高敏感性的测定方法就十分重要.现选用免疫荧光法和免疫浊度法作对比测定新生儿hs-CRP来反映各自的灵敏度,以选择高敏感性的测定方法配合临床需要.

免疫增强比浊法和免疫荧光法测定血浆和尿液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的比较及诊断脓毒症急性肾损伤的价值

目的 比较免疫增强比浊法和免疫荧光法在测定患者血浆和尿液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的差异,评估血浆和尿液NGAL值对诊断脓毒症患者发生急性肾损伤(AKI)的价值.方法 选择脓毒症患者35例,根据是否发生AKI分为脓毒症AKI组(n=12)和脓毒症非AKI组(n=23).另选取同期健康体检人群8例作为对照组.留取入院24h内的血浆和尿液标本.采用免疫增强比浊法和免疫荧光法分别测定血浆和尿液标本的NGAL值.绘制ROC曲线评估血浆NGAL值预测脓毒症AKI的诊断效率.结果 采用免疫增强比浊法进行测定,脓毒症组血浆和尿NGAL值均显著高于对照组(P＜0.01).脓毒症AKI组血浆NGAL显著高于脓毒症非AKI组(P＜0.05),但2组尿NGAL值差异无统计学意义(P＞0.01).采用免疫荧光法进行测定,脓毒症组血浆NGAL值显著高于对照组(P＜0.01),脓毒症AKI组血浆NGAL值显著高于脓毒症非AKI组(P＜0.05).ROC分析表明,免疫增强比浊法曲线下面积0.785 (95％ CI:0.642～0.928),免疫荧光法曲线下面积为0.853 (95％ CI:0.729～0.977),约登指数大时的判断点分别为0.575和0.567.结论 血浆NGAL值可判断脓毒症AKI的发生,免疫荧光法较免疫增强比浊法更为准确.

慢性肺心病右心衰患者血浆脑型钠尿肽水平的观察

已有较多文献报道了高血压或冠心病患者血浆脑型钠尿肽(brain natriuretie peptide,BNP)水平变化,并认为BNP与左心室负荷增加、左心衰及其严重程度有关.

iChroma免疫荧光法检测降钙素原的初步性能验证

目的 验证iChroma免疫荧光法测定降钙素原(procalcitonin,PCT)的方法学性能.方法 采用韩国Boditech公司生产的iChroma免疫荧光法检测PCT,选用质控品和临床血清样本,验证该方法的正确度、精密度、线性,并与参考方法罗氏电化学发光法进行比对,评价临床应用价值.结果 免疫荧光法测定PCT低(0.49 ng/mL)、高(9.41 ng/mL)浓度质控品的相对偏倚分别为4.08％、7.12％,正确度良好;PCT低(0.40 ng/mL)、中(12.62 ng/mL)、高(33.18 ng/mL)三个浓度标本的变异系数(CV)分别为10.00％、4.90％、6.60％,精密度符合要求;采用高浓度标本进行稀释回收试验,当PCT浓度在0.25～70 ng/mL范围内时,线性回归方程Y=1.052X-0.102(R2=0.9997),线性良好;收集病人血清样本(n=58),使用免疫荧光法与罗氏电化学发光法PCT比对检测,总符合率为86.2％(95％CI:75.1％～92.8％),Cohen's Kappa系数81.0％(95％CI:68.8％～93.2％),实验方法与参考方法具有较高符合率.结论 iChroma免疫荧光法检测PCT,快捷、准确、方便,适用临床进行快速诊断.

系统性红斑狼疮患者淋巴细胞CD126 的表达

我们分别采用流式细胞仪结合微量全血双标记免疫荧光法和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了33例SLE患者CD3+与CD19+淋巴细胞表面CD126表达水平和外周血单一核细胞(PBMC)内CD126 mRNA表达水平，现报道如下。

肠道病毒71型特异性单克隆抗体的制备及其在病毒鉴定中的应用

目的：建立肠道病毒71型（ EV71）特异性检测的免疫荧光方法用于病毒分离培养后的EV71鉴定，为EV71生物学特征研究和疫苗株的筛选奠定基础。方法：以EV71 VP1为免疫原制备单克隆抗体，用经测序鉴定的肠道病毒毒株建立EV71特异性免疫荧光方法；将不同地区收集的手足口病患儿的临床标本进行病毒分离，利用EV71特异性单抗进行分离培养后的病毒鉴定。结果：制备获得2株单抗，经鉴定其中1株3 E12为EV71特异性单抗；以此单抗建立的免疫荧光方法对EV71感染细胞呈阳性反应，而与柯萨基病毒A16和埃可病毒6等非EV71肠道病毒不反应。从104份手足口病临床标本中共分离到35株病毒，产生肠道病毒典型的细胞病变；用3E12特异性单抗免疫荧光鉴定分离病毒，其中29株为EV71，与RT-PCR验证结果完全一致。结论：成功制备获得EV71特异性单克隆抗体，以此单抗建立的EV71特异性免疫荧光方法敏感性高、特异性强，可用于分离培养EV71的鉴定。

甲肝病毒单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:为甲肝研究和诊断提供大量高效价标准化抗体.方法:用已培养的NJ-3株甲肝病毒(HAV)免疫BALB/c小鼠,经细胞融合技术、IFA筛选和有限稀释克隆法.结果:建立了6株能稳定分泌抗HAV-单克隆(McAb)的杂交瘤细胞.经鉴定,其上清和腹水的抗体效价分别为0.5×103～1×103及1×103～2×105.用免疫印迹法和间接ELISA分析,这6株抗体分别能与HAV的3个抗原位点结合.结论:成功的制备了抗HVA的McAb,在HAAg检测中,简化了操作步骤.

sICAM-1、sVCAM-1、降钙素原在小儿脓毒症中变化的临床研究

目的：探讨可溶性细胞间粘附因子-1（sICAM-1）、可溶性血管细胞粘附分子-1（sVCAM-l）、降钙素原（PCT）在小儿脓毒症中的变化及其与病情的关系。方法：选择脓毒症患儿38例其中严重脓毒症10例，一般脓毒症28例，同期入院感染达不到脓毒症诊断标准30例为一般感染组，同期健康体检儿童30例为对照组。采用ELISA法检测sICAM-1、sVCAM-1，免疫荧光法检测PCT并进行统计学分析。结果：（1）疾病期sICAM-1、sVCAM-1、PCT水平，脓毒症组高于一般感染组及对照组（P<0.05），一般感染组高于对照组（P<0.05）；（2）sICAM-1、sVCAM-1及PCT水平恢复期脓毒症组、一般感染组与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；（3）脓毒症组及一般感染组疾病期sICAM-1、sVCAM-1、PCT水平，高于脓毒症组及一般感染组恢复期（P<0.05）；（4）疾病期sICAM-1、sVCAM-1、PCT水平严重脓毒症组均高于一般脓毒症组（P<0.05），而恢复期严重脓毒症组与一般脓毒症组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：sICAM-1、sVCAM-1、PCT三个指标是小儿脓毒症比较理想的检测指标，开展三者联合检测，对小儿脓毒症的诊疗有重要临床意义。

ELISA法检测血清抗丝聚蛋白抗体对类风湿性关节炎的诊断价值

目的 探讨ELISA法检测血清抗丝聚蛋白抗体(AFA)对类风湿性关节炎(RA)的诊断价值.方法 分别采用ELISA法和免疫荧光法检测RA(RA组,50例)、系统性红斑狼疮(SLE组,20例)、强直性脊柱炎(AS组,20例)患者和健康者(C组,20例)的血清AFA,比较两种方法检测血清AFA对RA诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、正确率.结果 ELISA法和免疫荧光法检测AFA阳性率:RA组为74％和52％,SLE组为15％和0,AS组为5％和10％,C组均为0.ELISA法检测AFA对RA诊断的敏感度高于免疫荧光法(P＜0.05),两种方法检测AFA对RA诊断的特异度、阳性预测值、阴性预测值、正确率无统计学差异.两种方法检测AFA的结果密切相关(r=0.63,P＜0.05).结论 ELISA法检测血清AFA对RA有较高的诊断价值.

免疫荧光法分析在SARS血清学诊断中的应用

天台县1984～2002年肾综合征出血热监测结果

目的为掌握天台县肾综合征出血热(HFRS)流行规律与疫源地类型.方法采用间接免疫荧光法(IFAT)检测EHF病人血清中抗体,采用直接免疫荧光法(FAT)检测鼠肺汉坦病毒(HV)抗原.结果1984～2000年天台县共发病5620例,486例HFRS恢复期病人血清学分型结果为,Ⅰ型(汉滩型)占60.91%,Ⅱ型(汉城型)占32.51%,未定型占6.58%.夏季和冬春季有二个发病高峰,青壮年农民发病多.检测小兽汉坦病毒(HV)抗原20097只,阳性871只,带病毒率为4.06%.结论天台县是以Ⅰ型(汉滩型)为主的混合型HFRS疫区.

野外病死鼬獾狂犬病病毒检测结果

目的：了解病死鼬獾狂犬病病毒感染情况，为狂犬病防控提供依据。方法按国家和浙江省狂犬病监测方案，采集丽水市莲都区某乡村病死鼬獾脑组织标本，采用免疫荧光法检测狂犬病病毒抗原。结果一周内野外发现5只鼬獾病死，2份病死鼬獾脑组织标本狂犬病病毒抗原呈阳性。结论当地鼬獾中存在狂犬病病毒感染，应进一步加强鼬獾等野生动物狂犬病流行情况监测。

实时荧光定量PCR法与常规PCR法及细菌培养法检测沙门菌的比较

沙门菌是一种常见的重要人兽共患病原菌,在自然界中分布广泛,它极易污染水源、食品及畜产品,引起人食物中毒、急性胃肠炎和动物腹泻等疾病.目前国内外对该菌的快速检测主要集中在免疫酶试验、免疫扩散法、乳胶凝集试验和免疫荧光法及酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)技术等方法上[1～2].

整合素α5和α6亚基在硬皮病中的表达

目的：观察整合素α5和α6在硬皮病皮损区和正常人表皮中的表达情况。方法：运用免疫荧光法检测正常人和硬皮病患者皮肤中整合素α5和α6的表达。结果：α5亚基在正常人的表皮各层都有表达，基底层表达略增加，并且在胞膜和胞浆均有表达。硬皮病中各层均有α5亚基表达，基底层尤为明显，但在颗粒层为胞浆胞膜表达，在棘层和基底层基本表达在胞膜。α6亚基在正常人表皮中在表皮各层，胞膜胞浆均有表达，但以颗粒层及真表皮交界处明显。硬皮病中以棘层和真表皮交界处为主，棘层主要表达于胞膜。结论：在硬皮病皮损表皮中，整合素α5和α6亚基表达的部位和位置发生改变，从而造成细胞功能的异常。

中重度扩张性心肌病患者血浆BNP动态变化及其临床意义

目的:探讨扩张性心肌病(DCM)患者血浆钠尿肽(BNP)水平变化规律及其I临床意义.方法:采用荧光免疫法监测20例DCM患者(心功能Ⅲ·Ⅳ级)及40例正常人血浆BNP水平,并测定DCM患者的肺动脉压力一心胸比率及治疗前后的BNP水平,分析血浆BNP水平与心衰严重程度一心脏大小一肺动脉高压的关系,比较其治疗前后的变化.结果:①DCM患者血浆BNP水平明显高于正常对照组P

不同染色方法检测HBsAg阳性患者肾组织中乙肝抗原的效果比较

目的：探讨不同染色方法检测HBsAg阳性患者肾组织中乙肝抗原的效果。方法收集血清HBsAg阳性的肾穿刺患者77例，分别采用免疫荧光法和改良免疫组化法检测肾组织HBsAg及HBcAg阳性表达情况。结果继发于乙肝病毒感染相关的肾小球肾炎（HBV- GN）中，HBsAg免疫荧光法及改良免疫组化法敏感性为48.1%及100%；HBcAg免疫荧光法及改良免疫组化法敏感性为22.2%及70.4%，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。非乙肝相关性肾小球肾炎（NHBV- GN）中，HBsAg免疫荧光法及改良免疫组化法特异性为98%及96%；HBcAg免疫荧光法及改良免疫组化法特异性为100%及96%，两种方法特异性均较高，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。乙肝抗原血症者肾组织HBsAg及HBcAg改良免疫组化法平均阳性强度明显高于免疫荧光法（P＜0.01）。血清乙肝“大三阳”、DNA复制者HBsAg改良免疫组化法检测阳性强度均明显高于“小三阳”及DNA不复制者（P＜0.05或0.01）。结论改良免疫组化染色法提高了乙肝抗原血症者肾组织乙肝抗原的检出率及肾小球疾病尤其是HBV- GN诊断的准确性，同时HBsAg阳性强度还可预测乙肝感染严重程度。

冠心病患者血清中超敏C反应蛋白和IL-18的表达及相关性

目的 检测冠心病患者血清中超敏C反应蛋白(hs-CRP)和IL-18的表达情况,探讨其临床意义.方法 选取我院收治的81例冠心病患者(冠心病组)及20例体检健康成人<对照组),分别检测两组对象血清中hs-CRP(以免疫荧光法测定)及IL-18(以酶联免疫吸附实验法测定)的含量,并作组间比较及相关性分析.结果 冠心病组患者hs-CRP及IL-18含量均显著高于对照组(均P＜0.01).冠心病组中心肌梗死患者hs-CRP及IL-18含量均显著高于稳定型及不稳定型心绞痛患者(均P＜0.01),但稳定型与不稳定型心绞痛患者间hs-CRP及IL-18含量并无明显差异(均P＞0.05).线性相关分析结果显示,冠心病组患者hs-CRP与IL-18的表达呈明显正相关(t=0.402,P＜0.05),而对照组hs-CRP与IL-18的表达无相关性(P＞0.05).结论 hs-CRP及IL-18在冠心病患者中呈现高表达,在冠心病的发生、发展中发挥着重要作用,联合检测hs-CRP及IL-18对于判断冠心病患者的病变程度具有重要意义.

心力衰竭患者血浆BNP水平的检测及临床意义

目的 探讨B型钠尿肽与心力衰竭严重程度的关系及其临床意义.方法 采用快速免疫荧光法分别测定175例HF(NYHA Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)患者和59例健康对照组的血浆BNP水平,并进行对照分析.并对31例NYHA Ⅲ～Ⅳ级的患者于住院治疗5～10天重复测定,探讨B型脑钠肽在评价心力衰竭患者治疗效果和近期愈后中的价值.结果 HF组总体血浆BNP水平明显高于对照组(P＜0.01),NYHA Ⅰ级心功能时血浆BNP明显训于对照组(P＜0.01),且Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级组间血浆BNP依次递增(P＜0.01).HF在控制后明显低于HF在控制前(P＜0.01).其中好转出院的31例NYHA心功能Ⅲ～Ⅳ级的患者治疗后BNP平均浓度显著低于治疗前水平Ⅲ级(312.3±215.7 pg/ml和661.5±326.4 pg/ml,P＜0.01)、Ⅳ级564.8±314.5 pg/ml和1 169.6±565.1 pg/ml,P＜0.01).结论 血BNP浓度在心功能不全患者各组间两两比较均有显著性差异,随着心力衰竭严重程度加重,血液BNP浓度增加.血浆BNP的浓度变化对HF的诊断、严重程度和预后评价有重要价值.

两种方法检测C-反应蛋白的比较分析

目的 比较两种方法 检测C-反应蛋白的精密度、相关性、灵敏度和符合率.方法 采用免疫荧光法与速率散射比浊法测定60例各种炎性患者和40例健康体检者血清C-反应蛋白.对不同浓度C-反应蛋白血清标本作精密度分析,对炎性患者血清C-反应蛋白水平进行相关性分析.结果 两种方法 检测灵敏度均为98.3%,符合率分别为99.0%和98.0%,批内变异系数均<5%,相关性好(r=0.9897,P<0.01).结论 两种检测方法 均能较好的满足临床需求.

免疫荧光法运用在微生物快速检验中的应用研究

研究中使用免疫荧光检测法，对202例上呼吸道发生感染的患者鼻咽中所分泌物行快速检测，以此来分析患有呼吸道感染的患者，其感染病毒的种类和发生的概率。有176例患者感染病毒为阳性，感染率87.12%在所有检查的上呼吸道感染患者中，大多数都发生了病毒性感染，而腺病毒感染为严重。免疫荧光方法可以快速的检测出患者病毒感染种类，具有高敏感性，值得医院推广使用。