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成人胰腺组织来源的巢蛋白阳性干细胞的生物学特性观察
目的:研究成人胰腺组织来源的巢蛋白阳性干细胞(NPSCs)的生物学特性.方法:分别于光镜及电镜下观察NPSCs的形态及超微结构,绘制细胞生长曲线,测定细胞周期的时相并进行NPSCs的染色体分析,同时应用免疫细胞化学染色分析及RT-PCR方法观察巢蛋白(nestin)的表达.结果:附壁的NPSCs呈梭形,电镜下见胞浆内粗面内质网较发达,线粒体丰富.对数生长期细胞的倍增时间大约为59.48h.细胞周期时相分析显示,G1期细胞占87.53%,G2+M期占3.11%,S期占9.35%.染色体核型分析,M期细胞为双倍体.细胞可传至20代(5个月).免疫细胞化学染色分析,95%以上细胞表达巢蛋白.结论:从成人胰腺组织中分离出的nestin阳性细胞,可以在体外传代并维持长时间增殖、分裂,具有干细胞的生物学特点.
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通窍活血汤对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡及血清巢蛋白的影响
目的：研究通窍活血汤对血管性痴呆（VaD）大鼠海马CA1区神经元凋亡及血清巢蛋白（Nestin）表达的影响，探讨通窍活血汤改善VaD大鼠空间记忆能力的作用机理。方法选取40只健康雄性SD大鼠，按随机数字表随机分为空白对照组、假手术组、VaD模型组、中药组、安慰剂组各8只，采用Olsson法建立VaD模型，造模成功后，中药组予以通窍活血汤灌胃，安慰剂组予蒸馏水灌胃。Morris水迷宫实验测试其学习记忆能力，TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡情况，ELISA法检测血清Nestin含量。结果中药组VaD大鼠海马CA1区神经元凋亡指数为（37.01±2.23）%，安慰剂组为（55.15±1.54）%，差异有统计学意义（P＜0.05）；中药组血清Nestin含量为（4.47±0.31）ng/L，安慰剂组为（3.42±0.43）ng/L，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。中药组VaD大鼠第3、4、5天逃避潜伏期[（32.07±13.43）s、（21.08±6.45）s、（19.53±7.52）s]较VaD模型组[（49.71±18.16）s、（34.37±7.42）s、（30.68±6.67）]明显缩短（P均＜0.01），穿越平台次数明显增多（5.02±1.34对3.77±1.07）次, t＝3.521，P＝0.001）。结论通窍活血汤能改善VaD大鼠空间记忆能力，可能与增加VaD大鼠血清Nestin表达和减少海马CA1区神经元凋亡相关。
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电针联合天麻多糖对脑缺血大鼠齿状回神经干细胞巢蛋白和干细胞因子表达的影响
目的:观察并比较电针联合天麻多糖与单独电针或天麻多糖治疗脑缺血大鼠对神经干细胞增殖的影响,探讨针药结合治疗脑缺血的机制.方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组、天麻多糖组和针药结合组,每组8只.以右侧大脑中动脉栓塞法制备脑缺血模型.造模后2周,天麻多糖组和针药结合组大鼠给予天麻多糖100 mg/kg灌胃,每天1次,连续2周;电针组和针药结合组大鼠给予“百会”、左侧“足三里”穴电针刺激,每次持续30 min,每天1次,连续2周.采用免疫组织化学染色法结合图像分析检测大鼠齿状回(DG)的内源性神经干细胞巢蛋白(Nestin)和干细胞因子(SCF)表达.结果:与正常对照组比较,模型组缺血侧DG的Nestin、SCF阳性表达增加(P＜0.05);与模型组比较,电针组、天麻多糖组和针药结合组缺血侧DG的Nestin、SCF阳性表达明显增加(P＜0.05);针药结合组阳性表达显著多于电针组或天麻多糖组(P＜0.05).结论:电针与天麻多糖结合可显著增加脑缺血大鼠缺血侧DG的Nestin、SCF表达,促进内源性神经干细胞增殖,且作用优于单用电针或天麻多糖.
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化瘀通络灸对血管性痴呆大鼠延迟回忆及海马神经新生的影响
目的:观察化瘀通络灸对血管性痴呆(VD)大鼠神经干细胞(NSCs)、内皮祖细胞(EPCs)移植后延迟回忆及海马巢蛋白(Nestin)、双皮质素(DCX)表达的影响,并探索其与脑内神经新生的关系.方法:Wistar大鼠采用Morris水迷宫筛选后随机分为假手术组、VD模型组、共植体艾灸组、共植体空白组.采用改良的缺血再灌注后结扎剪断法复制VD模型,NSCs、EPCs细胞培养后进行共植体构建,共植体艾灸组及共植体空白组大鼠于模型鉴定后3d进行共植体右侧侧脑室移植.共植体艾灸组于移植后3d进行化瘀通络灸治疗,取"百会""大椎""神庭"悬灸20 min,每天1次,7次为1个疗程,共3个疗程,每疗程结束后休息1 d.运用Morris水迷宫测试各组大鼠延迟回忆成绩,免疫荧光双标激光共聚焦检测大鼠右侧海马Nestin、DCX的表达.结果:Morris水迷宫结果显示,治疗前VD模型组、共植体空白组、共植体艾灸组逃避潜伏期均较假手术组延长,120 s内穿越原平台次数减少(P<0.008).治疗后除V D模型组大鼠逃避潜伏期较治疗前无明显变化外(P>0.05),假手术组、共植体艾灸组、共植体空白组大鼠逃避潜伏期均较治疗前缩短(P<0.05);且共植体艾灸组大鼠120 s内穿越原平台次数较治疗前增多(P<0.05).与假手术组相比,造模后大鼠逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少(P<0.008);共植体艾灸组大鼠逃避潜伏期较V D模型组缩短,穿越原平台次数较VD模型组增多(P<0.008);与共植体空白组相比,共植体艾灸组逃避潜伏期缩短(P<0.008).免疫荧光结果显示,共植体艾灸组治疗1、3个疗程后海马区Nestin的阳性表达多于共植体空白组(P<0.05);Nestin、DCX分别在治疗1、2个疗程后表达多(P<0.05).结论:化瘀通络灸可提高VD大鼠NSCs、EPCs移植后的延迟回忆,并通过上调海马区Nestin、DCX的表达,促进脑内神经新生.
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电针联合天麻多糖对脑缺血大鼠基底外侧杏仁核巢蛋白、脑源性神经营养因子表达的影响
目的:探讨电针联合天麻多糖(PGB)对局灶性脑缺血大鼠基底外侧杏仁核神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响及其作用机制.方法:40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、PGB组和针药联合组,每组8只.栓塞右侧大脑中动脉制备永久局灶性脑缺血大鼠模型.电针组和针药联合组大鼠给予“百会”、左侧“足三里”穴电针刺激,时间30 min,每天1次,连续14 d;PGB组和针药联合组大鼠给予PGB 100 mg/kg灌胃,每天1次,连续14d.采用Zea-Longa法对各组大鼠进行神经功能评分,免疫组织化学染色方法检测各组大鼠右侧杏仁核区巢蛋白(Nestin)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达.结果:与模型组比较,各治疗组神经功能评分均降低(P＜0.05),且针药联合组显著低于电针组及PGB组(P＜0.05).与正常组比较,模型组大鼠杏仁核区Nestin和BDNF的表达均增强(P＜0.05);电针组和PGB组的表达强于模型组(P＜0.05);针药联合组的表达强于电针组及PGB组(P＜0.05).结论:电针与PGB均能够上调脑缺血大鼠杏仁核区Nestin和BDNF的表达,且电针联合PGB的效果更为显著,提示其可能通过促进内源性NSCs的增殖,发挥对缺血区神经元的保护作用.
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针药结合对局灶性脑缺血大鼠海马CA 1和CA 3区神经干细胞增殖与分化相关蛋白表达的影响
目的:观察电针结合天麻素对局灶性脑缺血大鼠海马CA 1和CA 3区神经巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的影响,探讨针药结合对脑缺血后内源性神经干细胞(eNSCs)增殖与分化的作用.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、电针组、天麻素组和电针+天麻素组,每组10只.采用线栓法复制局灶性脑缺血大鼠模型.电针组电针左侧"合谷"穴和"曲池"穴,刺激30 min;天麻素组按10 mg/kg剂量腹腔注射天麻素注射液;电针+天麻素组给予电针与天麻素治疗.各组均每天治疗1次,共治疗14d.免疫组织化学方法检测缺血侧海马CA 1和CA 3区Nestin、GFAP及NSE的阳性细胞数.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA 1和CA 3区Nestin阳性细胞数增加(P＜0.05);与模型组比较,电针组、天麻素组和电针+天麻素组Nestin阳性细胞数均明显增加(P＜0.05);电针+天麻素组Nestin阳性细胞数较电针组及天麻素组增加(P＜0.05).与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA 1和CA 3区GFAP阳性细胞数增加(P＜0.05);与模型组比较,电针组、天麻素组和电针+天麻素组GFAP阳性细胞数明显减少(P＜0.05);电针+天麻素组GFAP阳性细胞数较电针组及天麻素组减少(P＜0.05).与正常对照组比较,模型组大鼠NSE阳性细胞数减少(P＜0.05);与模型组比较,电针组、天麻素组和电针+天麻素组NSE阳性细胞数均明显增加(P＜0.05);电针+天麻素组NSE阳性细胞数较电针组或天麻素组增加(P＜0.05).结论:电针与天麻素均可显著促进缺血侧海马CA 1和CA 3区eNSCs的增殖,抑制脑缺血后GFAP的过度表达,可能促进增殖的eNSCs向神经细胞分化,电针与天麻素结合作用更显著,这可能是针药结合治疗脑缺血有效的神经再生机制之一.
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龟羚帕安丸对帕金森病大鼠模型中脑黑质细胞Nestin蛋白,Nestin mRNA及DAT蛋白的影响
目的:观察龟羚帕安丸对帕金森病(PD)大鼠黑质细胞巢蛋白(Nestin),多巴胺转运体(DAT)及Nestin mRNA表达的影响.方法:大鼠黑质致密部注射6-羟基多巴胺(6-OHDA),后大鼠ip阿扑吗啡(APO)诱导旋转建立PD大鼠模型.PD大鼠随机分为模型组,多巴丝肼组,龟羚帕安丸高、中、低剂量组,同时设立假手术组,模型组.假手术组每日ig同等容积的生理盐水;多巴丝肼组ig多巴丝肼混悬液(10 mg·kg-1·d-1);龟羚帕安丸高、中、低剂量组ig龟羚帕安丸混悬液(4,2,1 g·kg-1·d-1),连续30 d.免疫组化法检测各组大鼠中脑黑质Nestin,DAT蛋白表达,原位杂交法检测各组大鼠中脑黑质Nestin mRNA的表达.结果:模型组黑质细胞Nestin,DAT蛋白,Nestin mRNA表达均显著低于假手术组(P＜0.01);各治疗组Nestin蛋白,Nestin mRNA,DAT蛋白表达均显著高于模型组(P＜0.01).结论:龟羚帕安丸治疗帕金森病的作用机制可能与上调Nestin,DAT表达,促进神经的修复和再生,增加多巴胺(DA)含量有关.
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绞股蓝总皂苷对糖尿病肾脏病大鼠巢蛋白的影响
目的:观察绞股蓝总皂苷对糖尿病肾脏病(DKD)大鼠巢蛋白的影响,探讨其降低蛋白尿、内生肌酐清除率、保护肾脏的机制.方法:150只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组,采用摘除单侧肾脏加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法改良复制DKD模型,灌胃4、6、8周后测定血糖(GLU)、24h尿蛋白(24h-UP),内生肌酐清除率(Ccr)、尿微量白蛋白排泄率(UAER),光镜观察肾小球结构改变,Western Blot检测巢蛋白(nestin)、波形蛋白(vimentin)、cdk5/p35蛋白的表达.结果:①治疗8周,与模型组比较,绞股蓝总皂苷高剂量对GLU、24h-UP、Ccr、UAER均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05);绞股蓝总皂苷中剂量组对GLU、24h-UP、UAER较模型组均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05);绞股蓝总皂苷低剂量组对Ccr、24h-UP、UAER较模型组均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05).②与模型组比较,绞股蓝总皂苷高剂量组可显著升高nestin的表达(P＜0.01),绞股蓝总皂苷高、中剂量组可升高vimentin的表达(P＜0.05),各治疗组均可降低cdk5/p35的表达(P＜0.01,P＜0.05).③光镜观察各治疗组肾小球系膜细胞增生减轻,炎性细胞浸润改善.结论:绞股蓝总皂苷可能通过上调nestin达到保护足细胞,降低蛋白尿及提高Ccr,延缓DKD进程的目的.
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电针结合天麻多糖对局灶性脑缺血大鼠丘脑腹后外侧核巢蛋白和干细胞因子表达的影响
目的:探讨电针结合天麻多糖治疗局灶性脑缺血继发丘脑损害的神经再生机制.方法:将40只成年SD大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、天麻多糖组和电针+天麻多糖组,每组8只.以线栓法建立右侧大脑中动脉栓塞脑缺血大鼠模型.造模成功后2周,正常组和模型组不予治疗;电针组给予电针“百会”和左侧“足三里”穴治疗,30 min/次,每天1次,共14 d;天麻多糖组给予天麻多糖(100mg/kg)灌胃治疗14d,每天1次;电针+天麻多糖组予以电针和天麻多糖联合治疗,每天1次,共治疗14 d.采用免疫组织化学方法检测各组大鼠丘脑腹后外侧核(thalamic ventroposterolateral nucleus,VPL)神经巢蛋白(nestin)和干细胞因子(stem cell factor, SCF)的表达.结果:模型组大鼠缺血侧VPI出现nestin阳性细胞,SCF阳性细胞数量较正常组增加(P＜0.05);电针组、天麻多糖组和电针+天麻多糖组缺血侧VPL中nestin和SCF阳性细胞数量均较模型组增加(均P＜0.05),免疫阳性产物单位面积平均灰度值均降低(均P＜0.05);电针+天麻多糖组nestin和SCF阳性细胞数量均较电针组、天麻多糖组增多(均P＜0.05).结论:电针结合天麻多糖可协同增加缺血同侧VPL中SCF的表达,共同促进神经干细胞增殖,可能是针药结合治疗脑缺血继发丘脑损害的神经再生机制之一.
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牛珀至宝微丸对局灶性脑缺血再灌注后 Nestin表达的影响
目的:探讨牛珀至宝微丸对局灶性脑缺血再灌注后神经干细胞Nestin表达的影响.方法:采用大脑中动脉线栓法造成局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学技术检测神经上皮干细胞巢蛋白(Nestin)的表达,观察牛珀至宝微丸对脑缺血后神经上皮干细胞巢蛋白的影响.结果:脑缺血再灌注后,牛珀至宝微丸组缺血侧室管膜、室管膜下区、皮层和纹状体Nestin阳性细胞数显著多于缺血对照组(P＜0.05),且神经病学评分明显低于缺血对照组(P＜0.05).结论:牛珀至宝微丸能持续上调脑缺血再灌注后Nestin的表达,这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一.
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HCMV感染抑制人海马神经干细胞分化
研究HCMV感染对体外培养的人海马源性神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)分化的影响.体外分离、培养人海马NSCs.应用免疫荧光方法检测其NSCs标记物-巢蛋白(Nestin)的表达.10%胎牛血清诱导NSCs贴壁分化,同时用MOI为5的HCMV AD169株感染NSCs,7d后使用激光共聚焦显微镜免疫荧光方法检测Nestin、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和HCMV即刻早期蛋白(IE)的表达,计算阳性细胞比率.本实验所培养的细胞(4～6代)95±8%表达Nestin;分化诱导7d后,感染组86±12%细胞表达IE,未感染组和感染组Nestin阳性率分别为50±19%和93±10%(t=6.03,P<0.01),GFAP阳性细胞率分别为81±11%和55±17%(t=3.77,P<0.01).以上结果表明分化过程中的NSCs是HCMV的容许细胞;HCMV感染可以抑制NSCs的分化.
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局灶性脑缺血预处理上调大鼠梗死区周围巢蛋白的表达
目的 观察局灶性脑缺血预处理(IP)对巢蛋白(NESTIN)表达的影响,探讨NESTIN与脑缺血耐受(BIT)的关系及可能的内源性神经保护机制.方法 45只SD雄性大鼠随机分为脑缺血预处理(CIP)组、大脑中动脉阻塞(MCAO)组、假手术(sham)组.采用TTC染色测定脑梗死体积,光镜下观察脑组织病理改变,免疫组织化学染色和图像分析评价各组NESTIN的表达.结果 再灌注24及72 h,CIP组脑梗死体积比分别为12.4％±3 2％、9.8％±1.9％,较MCAO组的18.5％±3.7％、l5 8％±3.5％明显减小(P＜0.05),免疫组化NESTIN阳性细胞数及Western blot测定缺血侧脑组织的NESTIN蛋白表达水平,均高于同时间段的MCAO组(P＜0 05).结论 CIP可有效减小局灶性脑缺血再灌注后的脑梗死体积,并促进梗死区周围脑组织表达敏感的胚性蛋白NESTIN,后者可能与BIT的脑保护机制有关.
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成年大鼠基底前脑隔-斜角带复合体的巢蛋白免疫阳性神经元至海马的纤维投射
目的观察大鼠基底前脑巢蛋白(nestin)免疫阳性神经元的纤维投射. 方法先用荧光素逆行追踪法显示基底前脑内投射至海马的荧光素标记神经元,观察摄片后再进行nestin免疫组织化学染色.对比荧光照片和免疫组织化学染色照片,辨认荧光素和nestin双标神经元. 结果在基底前脑注射侧的内侧隔核(MS)和斜角带核的垂直支(vDB)和水平支(hDB)均存在荧光素标记细胞,其中一部分为nestin免疫阳性.在MS、vDB和hDB,双标细胞占逆行标记细胞的比例分别为21.3%、25%和20.6%;占nestin阳性细胞的比例分别为26.6%、15.7%和16.3%. 结论大鼠基底前脑的nestin免疫阳性神经元发出神经纤维向海马投射.提示在基底前脑有一个平行于隔-海马胆碱能投射和GABA能投射的第3条通路.
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巢蛋白在成年C57小鼠和SD大鼠中枢神经系统中的分布及比较
目的观察巢蛋白(nestin)在成年C57小鼠和SD大鼠中枢神经系统中的分布,探讨并比较神经干细胞在两种啮齿类动物中分布的异同. 方法采用免疫组织化学ABC法和间接免疫荧光法,显示含神经干细胞特征性的标志物巢蛋白的阳性结构在上述两种啮齿类动物中枢神经系统中的分布. 结果在成年C57小鼠中枢神经系统中,巢蛋白在整个脑室系统周围均有表达,免疫阳性结构位于室管膜细胞胞体及其突起,并呈现由吻端向尾端渐次减少的趋势.在成年SD大鼠的脑室系统中,巢蛋白主要分布在侧脑室外侧壁及其周围脑区.此外,在两者的齿状回、穹窿下器、后区等脑结构中也有巢蛋白的表达.成年C57小鼠中枢神经系统中巢蛋白的表达,无论在免疫阳性结构的数量上还是在染色强度上都明显多于和强于成年SD大鼠. 结论巢蛋白在成年C57小鼠中枢神经系统中的广泛脑区均有表达,而在成年SD大鼠中仅见于有限的脑区,提示成年C57小鼠中枢神经系统可能具有较强的神经可塑性和损伤修复能力.
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成人基底前脑巢蛋白免疫阳性神经细胞的细胞化学观察
目的探讨巢蛋白(nestin)免疫阳性细胞在人基底前脑内的分布规律及化学特性. 方法采用nestin 331B、10C2、Rat 401抗体显示人基底前脑的nestin免疫阳性细胞,并应用NSE、p75NGFR、ChAT、GFAP抗体分别对nestin免疫阳性细胞进行了双标免疫细胞化学研究,同时还应用NADPH-d进行组织化学染色.结果在成人基底前脑有一个连续的nestin免疫阳性细胞带,胞体较大,呈卵圆形或梭形,有1～3个突起,分布于隔核、斜角带核、Meynert核、无名质及杏仁核群.双标染色显示,nestin阳性细胞被NSE抗体标记,并与ChAT、NGFR、NOS阳性神经元间杂分布,多数不呈交叉反应.约28%nestin免疫阳性细胞为ChAT阳性神经元,15%为NGFR阳性神经元,6%为NOS阳性神经元.此外,透明隔及隔区靠近软膜处有少量nestin免疫阳性细胞,其形态与星形胶质细胞相似,不与GFAP有交叉免疫阳性反应.结论成人基底前脑存在一个有别于ChAT、NGFR、N0S神经元的nestin免疫阳性神经元簇,其生物学意义值得进一步研究.
关键词： 巢蛋白 乙酰胆碱转移酶 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶 神经生长因子受体 基底前脑 -
巢蛋白阳性细胞在胎儿肝中的分布及形态学研究
目的观察巢蛋白(nestin)阳性细胞在发育早、中期胎儿肝中的形态及分布,探讨其在肝发育中的作用.方法取10～20周胎儿肝组织,常规石蜡切片,地高辛标记nestin寡核苷酸探针,原位杂交组织化学法显示netin阳性细胞.结果nestin阳性细胞主要分布在肝界板处或发育中的胆管周围,细胞体积较小,细胞核呈圆或卵圆形,核大,常见双核.结论肝内存在一定数量的nestin阳性细胞,该细胞具有较强的分裂增殖能力,可能是胚胎早期发育过程中隐藏在机体各种组织中的一类具有相同功能的细胞,在日后的肝细胞修复及肿瘤的发生中起着重要的作用.
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灵芝孢子降低维甲酸诱导的孕鼠胚胎神经管畸形的发生
目的 探讨灵芝孢子能否促进受维甲酸诱导,而停滞在G0/G1期的胚胎神经管神经上皮细胞重新进入细胞周期循环,继续增殖和分化,减少神经管畸形的发生.方法 于实验对照组和灵芝孢子组小鼠孕期胚胎E17.75d时一次性胃饲全反式维甲酸,造成这两组孕鼠的胚胎出现神经管畸形.然后,给予灵芝孢子组孕鼠胃饲灵芝孢子溶液.在孕期E10.5d时取出两组孕鼠的胚胎,分别计数胚胎的神经管畸形发生率.应用免疫荧光组织化学染色和流式细胞仪检测胚胎神经管神经上皮的巢蛋白(nestin)表达情况.应用DNA定量荧光染色和RT-PCR技术检测胚胎神经管依赖细胞周期蛋白激酶2(Cdk2) mRNA和Cdk4 mRNA的转录.结果 灵芝孢子组孕鼠胚胎的神经管畸形发生率显著低于实验对照组.神经管神经上皮细胞表达nestin的百分率也明显大于实验对照组.实验对照组孕鼠胚胎的神经管细胞在G0/G1期的比例则显著高于灵芝孢子组,但是实验对照组神经管细胞S期的比例低,低于灵芝孢子组形态正常的胚胎神经管细胞.RT-PCR检测发现,灵芝孢子组孕鼠胚胎神经管细胞能够正常转录Cdk4 mRNA,而实验对照组则低转录Cdk4 mRNA.结论 灵芝孢子能够减少维甲酸诱导的妊娠小鼠孕期E10.5d胚胎神经管畸形的发生.
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巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在大鼠2型星形胶质细胞中的表达
目的 观察1型和2型星形胶质细胞(T1A、T2A)是否表达神经干细胞的标志物、是否具有神经干细胞的特性.方法 取新生大鼠脑皮质,体外培养纯化的O-2A祖细胞、T1A和T2A,应用激光共焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)的表达;观察O-2A祖细胞、 T1A和T2A在碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的培养液中生长方式的改变.结果 巢蛋白在O-2A祖细胞和T2A中表达,T1A不表达;SSEA-1仅在T2A中表达.在干细胞培养基中培养10d,T2A形成能增殖和连续传代的细胞球,细胞球巢蛋白标记阳性,贴壁后分化细胞具有神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞样形态;但相同培养条件下的O-2A祖细胞和T1A生长方式无改变.结论 巢蛋白和SSEA-1在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,T2A具有神经干细胞的某些生物学特性.
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成年大鼠后区神经干细胞的检测及鉴定
目的 观察性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)和巢蛋白(Nestin)阳性表达细胞及溴脱氧尿密啶核苷(BrdU)阳性标记细胞在后区的分布.方法 成年雄性SD大鼠12只,6～8周龄,随机分为两组,每组6只.一组大鼠按照50mg/kg(0.3ml)腹腔注射BrdU,连续3d给药,每天2次；另一组注射等量生理盐水.4d后灌注大鼠,行免疫组织化学及免疫荧光检测.结果 免疫组织化学染色显示,SOX2阳性表达细胞在后区的腹侧部呈明显的V字形分布,背侧部呈带状分布,中央部散在分布.Nestin阳性表达细胞在后区的腹侧部呈明显的V字形强阳性分布,中央部呈弱阳性表达.在后区可见少量阳性BrdU标记细胞.SOX2/BrdU荧光双标染色显示,SOX2阳性表达细胞较密集分布,可见少量SOX2/BrdU双阳性细胞.SOX2/Nestin荧光双标染色显示,SOX2阳性表达细胞较密集分布,可见少量SOX2/Nestin双阳性表达细胞.结论 后区SOX2及Nestin阳性细胞密集表达,呈明显的区域分布；在后区内存在少量BrdU阳性标记细胞及SOX2/BrdU和SOX2/Nestin双阳性细胞；后区可能存在神经干细胞/祖细胞.
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巢蛋白及性别决定基因高迁移率组蛋白在SAMP8小鼠穹隆下器的表达及意义
目的 观察巢蛋白(Nestin)与性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)在快速老化小鼠SAMP8穹隆下器(SFO)中的表达.方法 成年8月龄SAMP8小鼠设为实验组,采用免疫组织化学和免疫组织化学荧光染色的方法观察Nestin及SOX2在穹隆下器中的表达,同时设正常老化小鼠SAMR1对照.结果 Nestin免疫组织化学染色发现,对照组免疫阳性细胞呈突起分布,放射丝状表达;实验组免疫阳性细胞染色深,丝状结构粗大,在血管周围密集分布,阳性细胞百分比(49.17±7.60)％较对照组阳性细胞百分比(16.33±4.41)％明显增多,差异有统计学意义(P＜0.01).SOX2免疫组织化学染色,对照组免疫阳性细胞散在分布,染色深浅不一;实验组大部分阳性细胞染色较深,在血管周围密集分布;阳性表达细胞百分比(62.17 ±20.27)％较对照组阳性表达细胞百分比(36.00±16.20)％明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05).荧光双标染色,对照组SOX2散在分布,其间可见Nestin阳性表达,室管膜下区可见少量SOX2/Nestin双表达细胞.实验组阳性表达强烈,SOX2/Nestin双表达细胞增多.结论 Nestin及SOX2在快速老化小鼠SAMP8穹隆下器的表达明显增强,表明阿尔茨海默病(AD)在一定时期可能引起穹隆下器神经干细胞/祖细胞的增殖或分化增强,进而可能影响穹隆下器的神经生发功能.
