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人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注丘脑及下丘脑巢蛋白表达的影响
目的:探讨大鼠脑缺血再灌注后丘脑及下丘脑巢蛋白的表达以及人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1,GRb1)对巢蛋白表达的影响.方法:阻塞大鼠大脑中动脉2 h制备脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为缺血再灌注组(I/R组)和GRbl给药组(GRbl组).两组按不同的再灌注时间(3h、12h、1d、2d、3d、5d、10d)分为7个亚组,应用免疫组织化学技术检测丘脑和下丘脑巢蛋白的表达.结果:给予人参皂甙Rb1后的丘脑和下丘脑缺血侧巢蛋白阳性细胞明显增多,细胞形态呈神经元样.结论:人参皂甙可上调缺血再灌注大鼠丘脑和下丘脑巢蛋白表达水平,促进神经干细胞增殖,并向神经元方向分化.
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三七三醇皂苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织Nestin表达的影响
目的:了解局灶性脑缺血再灌注后Nestin的动态变化,以及三七三醇皂苷对其表达的影响.方法:采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞2h、不同再灌注时间段(3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d、14d)的大鼠短暂局灶性脑缺血模型,应用免疫组织化学技术检测巢蛋白的表达.结果:脑缺血再灌注后24h,PTS(三七三醇皂苷)组缺血侧Nestin即有增加,并持续至7d,较之盐水对照组差异显著,至再灌注14d Nestin表达已明显回落.结论:PTS可使缺血再灌注大鼠的Nestin表达上调,这可能是其发挥脑保护作用的机理之一.
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三七三醇皂苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠细胞增殖的影响
目的:了解局灶性脑缺血再灌注后梗死区周围细胞增殖的动态变化,以及三七三醇皂苷(PTS)对其表达的影响.方法:采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞(MACO)2h、不同再灌注时间段(3d、7d、14d、28d)的大鼠短暂局灶性脑缺血(transient focal cerebral ischemia)模型.应用5-溴脱氧尿嘧啶(5-bromodeoxyuridine,Brdu)和Brdu/Nestin免疫双标记法观察再灌注损伤后3、7、14、28d时大鼠神经前体细胞的增殖情况.结果:脑缺血再灌注后14d细胞增殖水平达到峰值,至再灌注28d细胞增殖水平已明显回落,但仍较正常水平高.PTS组细胞增殖水平于再灌注后7d～28d均较相同时间段对照组增强(P＜0.05).再灌注7、14d,PTS组Brdu+/Nestin阳性细胞比例高于N.S 组(P＜0.05).结论:PTS可促进缺血再灌注后细胞的增殖水平.
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BMSCs移植联合电针治疗对脑出血大鼠巢蛋白表达的影响
目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植联合电针(electroacupuncture,Ea)治疗对脑出血大鼠脑内巢蛋白(Nestin)表达的影响.方法 取健康SD大鼠110只,随机分为正常组、假手术组、生理盐水组、电针组、BMSCs移植组和BMSCs移植联合电针治疗组.通过向SD大鼠尾壳核注射Ⅰ型胶原酶和肝素制备脑出血模型,并通过BMSCs移植和电针刺激进行治疗,采用免疫组织化学法观察大鼠脑内Nestin的表达.结果 正常组、假手术组、生理盐水组Nestin均有少量表达,三组之间无明显差异.相同时相点电针组、BMSCs组、BMSCs-Ea组Nestin表达依次升高,均高于生理盐水组(P<0.01);各治疗组出血侧较正常侧高(P<0.01);在正常侧,同一时相点各治疗组高于对照生理盐水组(P<0.01).结论 BMSCs移植联合电针治疗脑出血大鼠可上调大鼠脑内Nestin的表达,从而有助于神经组织的修复.
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Nestin在EAE大鼠脑中的表达及意义
目的研究神经干细胞标记蛋白--神经巢蛋白(Nestin)在实验性变态反应性脑脊髓炎(Experimentalallergic encephalomyelitis,EAE)大鼠脑中的表达及意义.方法以豚鼠脑脊髓匀浆加完全福氏佐剂作为抗原,给予Wistar大鼠四足皮内注射,建立EAE模型.应用免疫组织化学技术检测EAE大鼠脑中Nestin的表达,与对照组比较,并做成组t检验分析其表达是否具有统计学意义.结果Nestin在EAE大鼠脑室管膜下区和皮质中表达增多,与正常对照组比较有显著性差异(P＜0.01).结论Nestin表达显著性增强,表明神经干细胞在EAE大鼠脑中有增殖,增殖的神经干细胞可以为神经系统的结构和功能修复提供一定的物质基础.
关键词： 神经干细胞 巢蛋白 实验性变态反应性脑脊髓炎 -
脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖与Bcl-2的相关性研究
目的 探讨脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖与抗凋亡因子Bcl-2基因表达的相关性.方法 成年健康Wistar大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)和脊髓损伤组(SCI组),采用动脉瘤夹压迫法建立脊髓损伤模型,根据BBB评分标准评价运动功能结果.脊髓损伤组分别在术后1d、3d、7d、14d、21 d不同时期,选取脊髓损伤组织切片并将其分组,分别行Nestin、Bcl-2免疫组化染色,统计分析脊髓损伤后不同时期损伤脊髓组织中Nestin及Bcl-2的表达情况,然后对Nestin及Bcl-2表达情况进行相关性分析.结果 30只实验Wistar大鼠均进入结果分析,sham组中有极少量Nestin的表达;SCI组在损伤后第1天见Nestin表达量较少,第3天时开始逐渐增加,第7天后能够见到Nestin表达量基本达到峰值,主要位于室管膜周围及灰质中,第14天时表达逐渐减少,第21天后Nestin阳性表达明显减少.SCI后各组均可见Bcl-2阳性表达的细胞,1d时表达就比较明显,脊髓灰、白质均有分布,3d时表达阳性细胞达到高峰,7d时阳性细胞开始减少,在损伤后14d、21 d处于较低水平.统计学分析大鼠脊髓损伤后Nestin、Bcl-2阳性细胞表达数量,两者的表达具有正相关性.结论 大鼠脊髓损伤后的一段时间内Bcl-2、内源性干细胞均有表达,并且Bcl-2的增殖可能促进内源性干细胞的反应性增殖.
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人胚胎胰腺发育中巢蛋白阳性细胞表达的变化
目的:探索人胚胎发育过程中胰腺巢蛋白(nestin)阳性细胞表达的变化.方法:应用免疫组织化学EnVision法,检测30例人胚胎胰腺组织中巢蛋白阳性细胞的表达及分布变化.结果:各胎龄段(10～37w)胰腺均有巢蛋白阳性细胞表达,存在于胰岛、间充质和血管中,在腺泡、导管中未发现阳性细胞,胚胎发育晚期阶段(29～37w)巢蛋白阳性细胞高于其它胎龄组.结论:在人胚胎胰腺组织中存在着巢蛋白阳性细胞,该细胞主要分布于胰岛和间充质中.随着胎龄的变化,胰腺巢蛋白阳性细胞数也发生了变化.
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补阳还五汤对大鼠脊髓损伤修复与运动功能康复的作用研究
目的 探讨中医补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后脊髓组织星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和巢蛋白(Nestin)表达的影响及其促进脊髓损伤修复的作用机制.方法 大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、补阳还五汤低剂量组(L-BYHWD组)、补阳还五汤中剂量组(M-BYHWD组)和补阳还五汤高剂量组(H-BYHWD组).Model组、补阳还五汤低、中、高4组大鼠行脊髓左侧半横断损伤;模型组不行药物干预,补阳还五汤低、中、高3组分别使用不同剂量补阳还五汤连续灌胃.用免疫组织化学法检测不同组大鼠经补阳还五汤治疗后不同时间段损伤区脊髓组织内GFAP和Nestin表达情况,BBB评分评估大鼠后肢运动功能.结果 补阳还五汤干预后大鼠BBB评分明显高于同时期Model组大鼠(P＜0.05).脊髓损伤后大鼠脊髓组织GFAP表达出现明显上调,补阳还五汤干预后GFAP表达出现下调.M-BYHWD组和H-BYHWD组大鼠脊髓组织GFAP表达明显低于同时期Model组(P＜0.05);H-BYHWD组大鼠GFAP表达在术后3～7d明显低于同时期M-BYHWD组(P＜0.05),而术后14～28d二者无显著差异(P＞0.05).补阳还五汤干预的脊髓组织Nestin表达水平均高于同时期Model组(P＜0.05);中、高剂量组Nestin表达水平明显高于同时期低剂量组和Model组(P＜0.05),而中、高剂量组之间Nestin表达水平无显著差异(P＞0.05).结论 补阳还五汤能促进大鼠脊髓损伤的修复和运动功能的康复,其作用机制可能与抑制GFAP表达减少瘢痕形成、上调Nestin表达促进神经修复有关.
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维甲酸对缺氧缺血性脑损伤新生鼠内源性神经干细胞巢蛋白表达的影响
[目的]研究维甲酸对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生鼠内源性神经干细胞(NSCs)巢蛋白(Nestin)表达的影响. [方法]将56只7日龄HIBD新生SD乳鼠随机分为生理盐水组(对照组,n=28)及维甲酸治疗组(治疗组,n=28).根据处死时相点每组分成3、7、14、21 d 4个小组,每小组7只.HIBD模型建立通过结扎7日龄新生SD乳鼠血管左颈总动脉后置于8%氧浓度的低氧环境中2.5 h.HIBD的维甲酸治疗组在模型后开始每天腹腔注射维甲酸500 μg/kg 1次,对照组腹腔注射生理盐水.对各时相的神经功能缺损进行评分;采用免疫组织化学染色以及光镜技术分别对SD大鼠脑组织中的NSCs进行检测,Nestin阳性细胞标志神经干细胞,其数量增加表明神经干细胞的增殖.[结果]维甲酸治疗与对照组在各时相上的神经功能缺损评分比较差异均有显著性(P＜0.01);第3、7、14 d和21 d在HIBD后的伤侧皮质及海马周围检出巢蛋白阳性细胞,分别在3、7 d达高峰,随病程的延长而减少:维甲酸治疗组在巢蛋白阳性表达增高与对照组同时相上比较差异显著(P＜0.01).[结论]维甲酸具有促进HIBD新生鼠内源性神经干细胞巢蛋白阳性表达保持在较高水平的作用.
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丹参酮ⅡA对脑出血大鼠灶周Nestin、Neun表达的影响?
目的：：观察丹参酮ⅡA 对脑出血大鼠灶周 Nestin、Neun 阳性细胞数影响。方法：78只Sprague Dawley大鼠被随机分为4组,其中正常组6只,假手术组24只,对照组24只,治疗组24只,治疗组腹腔注射丹参酮ⅡA,立体定向仪自体血注入法制备大鼠脑出血模型,免疫组化染色观察正常组及假手术组、对照组、治疗组术后第3d、7d、14d、28d灶周Nestin、Neun的表达及神经功能评分并进行比较。结果：脑出血灶周 Nestin 阳性细胞数从造模后即增多,第7天时明显增多,随后持续升高,并于第14d时数量达到峰值,随后逐渐减少,第28天时仍高于正常水平；治疗组与对照组同期比较,在第7天(P<0.05)及第14天(P<0.01)差异显著。Neun阳性细胞数在造模后3 d 即有明显增多,至第7天时达高峰,此后逐渐下降,至第28天时仍高于正常水平；治疗组与其他组同期比较,有明显差异(P<0.01)。治疗组大鼠神经功能恢复较对照组有明显改善(P<0.05)。结论：丹参酮ⅡA 可诱导脑出血大鼠灶周内源性神经干细胞增殖分化并改善神经功能。
关键词： 脑出血/中医药疗法 丹参酮ⅡA/治疗应用 动物实验 大鼠 巢蛋白 -
CD133和巢蛋白阳性细胞在脑胶质瘤中的表达及分布特征
目的:探讨脑肿瘤干细胞标记物CD133、巢蛋白(Nestin)和CD34标记的微血管密度(CD34-MVD)在人脑胶质瘤中的表达情况,分析三者的关系及其意义.方法:应用免疫组化方法分析62例人脑胶质瘤中的CD133、Nestin和CD34-MVD的表达情况.结果:脑肿瘤干细胞标记物CD133、Nestin在正常脑组织中未见表达,在低级别脑胶质瘤中低表达,在高级别脑胶质瘤中高表达,各组之间表达有显著性差异(P＜ 0.05).CD133表达与Nestin表达之间有相关性,两者呈正相关(P＜0.05).CD133、Nestin均阳性染色组的CD34-MVD值高于两者均阴性组(P＜0.01).结论:CD133和Nestin表达呈正相关性,两者与人脑胶质瘤的病理分级呈正相关,与CD34-MVD在分布及数量上存在相关性.
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Olig2对胚胎干细胞向神经前体细胞分化过程中Nestin蛋白表达的影响
目的:探讨碱性螺旋-环-螺旋家族的少突胶质细胞转录因子2(Olig2)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向神经前体细胞(NPCs)分化过程中巢蛋白(Nestin)表达的影响.方法:将mESCs分为正常组、空载体组和Olig2转染组,用含有RA、Purmorphamine、bFGF和PDGF-AA的培养基将其诱导分化为NPCs;分别在诱导分化的第11d和14 d,用免疫细胞化学荧光染色和蛋白免疫印迹法检测其神经前体细胞特异性标记物巢蛋白(Nestin)的表达情况.结果:经Olig2-GV218慢病毒转染后的mESCs,Olig2蛋白的表达较正常组和空载体组明显增强;诱导分化后11d,三组细胞Nestin蛋白表达无明显区别;14 d时,正常组和空载体组仍能检测到较高的Nestin蛋白表达,而Olig2转染组Nestin蛋白的表达明显减弱.结论:mESCs向NPCs分化过程,过表达Olig2可降低Nestin蛋白的表达.
关键词： 小鼠胚胎干细胞 神经前体细胞 过表达 少突胶质细胞转录因子2 巢蛋白 -
巢蛋白在不同发育阶段人胚胎脊髓中的表达变化
目的:研究人胚胎脊髓生长发育过程中巢蛋白(nestin)的变化趋势.方法:采用免疫组织化学方法对不同发育时期(3周～8个月)的人胚胎脊髓中巢蛋白(nestin)的表达及变化进行了研究.结果:Nestin阳性细胞在神经上皮贯穿整个发育过程,5周基板、翼板形成后即可见到阳性物,而边缘层6周出现.中央管、基板、翼板、边缘层内nestin阳性细胞达高峰的时间分别是6周、7周、8周、9周,而表达明显减少的时间分别是8周、9周、10周、11周.随着脊髓的发育成熟,灰、白质内nestin阳性产物逐渐减少,而中央管的阳性细胞数至3月后较为稳定.结论:在脊髓不同部位神经干细胞出现时间和达到高峰的时间均不同,提示在脊髓的不同部位神经干细胞增殖、分化并不同步.
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巢蛋白和血管内皮生长因子在脑胶质瘤患者中的表达
目的:探讨巢蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)在脑胶质瘤患者中的表达.方法:应用免疫组织化学法检测低级别人脑胶质瘤20例(低级别组)、高级别人脑胶质瘤23例(高级别组)和正常人30例(对照组)脑组织的巢蛋白表达及用酶联免疫吸附法检测血清VEGF在各组人群中的表达水平.结果:人脑组织巢蛋白的阳性细胞数在对照组、低级别组和高级别组分别为5.15 ±0.37、8.20±1.32和9.65 ±1.47,三组之间差异均有统计学意义(P＜0.05);血清VEGF浓度在对照组、低级别组和高级别组分别为(134.05±21.57) pg/ml、(411.75±11.29) pg/ml和(456.23±18.34) pg/ml,三组之间差异均有统计学意义(P＜0.05);并且脑胶质瘤患者血清VEGF浓度和其脑组织nestin的表达成正相关(r=0.363,P＜0.05).结论:人脑胶质瘤的分级越高,nestin和VEGF的表达就越强,两者均可成为判断脑胶质瘤患者预后的指标.
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Nestin在高温致畸神经管的表达及多种维生素和微量元素对神经管畸形的保护作用
本研究旨在探讨高温致神经管畸形(NTD)中巢蛋白(nestin)的表达规律及多种维生素和微量元素对NTD的保护作用.孕鼠随机分为实验组和对照组.实验组又进一步分为3组,A组:孕前第8 d开始灌服多种维生素和微量元素;B组:孕后第1 d开始灌服;C组:不灌服.孕鼠分别于孕第8 d高温处理,对照组不灌服多种维生素和微量元素,也不进行高温处理.对以上各组胎鼠进行形态学观察,计算神经管畸形发生率;利用免疫荧光染色观察neslin在胚胎不同发育时期的神经上皮细胞中的表达规律.结果显示,在实验组中,C组神经管畸形发生率高,为77.5%;各组鼠胚神经上皮细胞胞质中nestin呈阳性染色,实验C组的染色明显弱于其它组;不同发育阶段各组染色强度不同.结果提示,nestin低表达是神经管畸形发生的重要因素,多种维生素和微量元素对高温致神经管畸形有保护作用.
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成年大鼠基底前脑nestin阳性神经元的性别差异
为了探讨成年雌雄大鼠基底前脑nestin阳性神经元的性别差异及其意义,本实验应用免疫组织化学方法对正常成年雌雄SD大鼠及去势2周和4周的雌雄SD大鼠基底前脑的内侧隔核(MS)、斜角带垂直支(vDB)及斜角带水平支(hDB)的nestin阳性神经元的变化进行了比较研究.结果显示:正常雌雄大鼠MS、vDB及hDB的nestin阳性神经元数十分接近(P＞0.05);而去睾丸2周大鼠组MS、vDB、hDB的nestin阳性神经元数则明显高于去卵巢2周大鼠组(P＜0.05,P＜0.01);去睾丸4周大鼠组vDB、hDB的nestin阳性神经元数依然明显高于去卵巢4周大鼠组(P＜0.05),但两组MS间的nestin阳性神经元数差别不大(P＞0.05);各组大鼠的nestin阳性神经元的胞体和树突均相似.以上结果表明,正常成年雌雄大鼠基底前脑的nestin阳性神经元数不存在性别差异,无论去势与否,nestin阳性神经元的形态始终不存在性别差异;而去势后nestin阳性神经元数却存在着明显的性别差异.提示基底前脑nestin阳性神经元的性别差异不仅与雌激素和雄激素在雌雄个体中所发挥的不同作用密切相关,而且还可能是促使学习记忆出现性别差异的形态学基础.
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巢蛋白在体外培养的大鼠骨骼肌卫星细胞发育过程中的表达--免疫细胞化学研究
为了观察巢蛋白(nestin)在骨骼肌卫星细胞发育过程中的分布状况以进一步探讨nestin在肌细胞发育中的作用,本实验对新生Wistar大鼠股部骨骼肌传代培养后,在不同发育期进行nestin单克隆抗体的ABC免疫组织化学反应,并以抗actin,desmin单克隆抗体作同期对照;计算阳性肌卫星细胞数量并进行统计学分析.结果发现:actin,desmin,nestin三组间在同一培养时间点上的阳性肌卫星细胞数量无差异(P＞0.05),但在时间点之间的比较上,4 h组较2 h组的阳性肌卫星细胞数量有所增加(P＜0.05),其余各时间组的阳性肌卫星细胞数量则显著高于2 h组、4 h组(P＜0.01).提示:nestin在体外培养的骨骼肌卫星细胞发育过程中有表达.
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成人海马内Nestin免疫阳性细胞的分布
为探讨成人海马内Nestin免疫阳性细胞的分布,本实验采用331B、10C2、Rat401、NSE、GFAP、Vimentin抗体对成人海马了进行免疫组织化学研究.结果显示,海马内Nestin免疫阳性细胞可分为三类:一类细胞位于门区及齿状回颗粒下层,胞体为卵圆形,无突起,胞浆深染,此类细胞不与NSE呈交叉反应;第二类细胞也位于门区及齿状回颗粒下层,胞体较小发出少量放射状突起,与GFAP及Vimentin抗体无交叉反应,在海马裂及海马伞中也存在少量的此类神经细胞;第三类为Nestin免疫阳性细胞,体积较大,形态与星形胶质细胞相似,并分别位于齿状回分子层及颗粒层,其突起常常跨越齿状回颗粒细胞层.Nestin免疫阳性神经细胞不被GFAP抗体标记.成人海马内未见Vimentin免疫阳性细胞.结论:人海马内存在神经前体细胞及放射状胶质样Nestin免疫阳性细胞.
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巢蛋白在成年大鼠海马神经元的表达及巢蛋白阳性神经元的生后发育
本文采用免疫组织化学方法对成年大鼠海马巢蛋白阳性神经元及其出生后的发育变化进行了研究.结果显示,在成年大鼠海马CA1、CA2和CA3区锥体层某些特定部位的神经元呈巢蛋白阳性反应.巢蛋白阳性神经元出生后3周开始在海马中出现,并且到12月龄大鼠海马内仍有存在.双重反应结果显示,巢蛋白与GABA在海马神经元内无共存.成年大鼠海马锥体层神经元表达巢蛋白的生物学意义尚不清楚.
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脑nestin-ir神经元的发现--形态、化学、投射和功能
巢蛋白(nestin)属于中间丝蛋白家族,由于其主要在胚胎期和成年的神经前体细胞表达的特性,自发现以来,一直被视为神经前体细胞的标志物.然而,本实验室首次观察到,正常成年大鼠和成人一些脑区内的神经元也呈nestin免疫阳性反应[1,2].关于这些nestin免疫反应阳性神经元(nestinir神经元)的许多特性尚需阐明,如这些nestin-ir神经元的化学属性是什么?是否为投射神经元?投射的靶区何在等.近几年来,本实验室针对这些神经元的分布、形态及其可能的特性和功能进行了一些相关的研究,现将已取得的研究成果作一综述.
