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mTOR信号通路在乳腺癌拉帕替尼耐药细胞系中的作用
目的 建立乳腺癌拉帕替尼耐药细胞系,探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在其中的作用.方法 拉帕替尼逐步增加剂量诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞构建耐药细胞系rMDA-MB-231；四甲基偶氮唑盐(MTT)细胞毒实验检测拉帕替尼对细胞的生长抑制作用；Western印迹检测蛋白的表达改变；Lipofectin 2000转染小分子双链RNA干扰序列沉默rMDA-MB-231细胞mTOR基因的表达；异硫氰酸荧光素(FITC)-膜联蛋白V和碘化丙啶双染流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化.结果 MTT细胞毒实验结果显示拉帕替尼对MDA-MB-231和rMDA-MB-231细胞的半数抑制率(IC50)值分别为(6.1±0.6)和(34.9±2.7)μmol/L(P ＜0.01),耐药5.68倍(P＜0.01).Western印迹检测显示rMDA-MB-231细胞中p-mTOR蛋白的表达水平明显高于MDA-MB-231细胞.mTOR靶向小干扰RNA (siRNA)特异性的下调了rMDA-MB-231细胞中mTOR的表达.对照组、阴性RNA干扰对照组、mTOR特异性RNA干扰组分别在20 μmol/L拉帕替尼作用48 h后,细胞的凋亡率分别为:13.4％±2.5％、14.2％±2.8％、34.6％±5.8％,对照组和mTOR特异性RNA干扰组之间差异有统计学意义(P＜0.01),对照组和阴性对照之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乳腺癌拉帕替尼耐药细胞rMDA-MB-231出现了mTOR信号通路的激活,siRNA干扰mTOR基因表达可显著提高拉帕替尼对rMDA-MB-231致凋亡作用,为拉帕替尼耐药的防治和临床用药的选择提供了理论依据.
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子宫内膜息肉与mTOR信号通路之间的关系研究进展
子宫内膜息肉是妇科常见的良性疾病,但是该病具有向恶性发展的潜质.PI3K/Akt/mTOR是重要的细胞内信号转导通路,在多种细胞反应中发挥重要作用.近年来研究发现子宫内膜息肉与mTOR信号通路之间存在着密切的联系,可通过该通路的激活,调节细胞黏附分子、血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶以及凋亡相关因子等,从而影响子宫内膜息肉及增生,并同时受到激素的调控,促进子宫内膜息肉向恶性发展,与子宫内膜息肉的发生发展及恶变具有密切的相关性.
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mTOR信号通路与非小细胞肺癌研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)在细胞生长、增殖、分化、周期调控等多个方面扮演重要角色.mTOR信号通路的调控异常与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的发生、发展,特别是治疗及转归密切相关.在很多NSCLC患者中,存在mTOR信号通路的异常激活.多项令人鼓舞的临床前试验及临床试验数据提示,mTOR抑制剂在NSCLC的靶向治疗中显示出良好的应用前景.
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mTOR信号通路对T淋巴细胞调控的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（ mTOR）是一种重要的细胞能量代谢信号通路。此通路能够整合来自细胞内外能量、营养及各种生长因子信号，参与调节细胞生长、增殖、代谢和存活等，是细胞生长的中心调控因子。雷帕霉素是一种大环内酯类药物，为此信号通路的主要抑制剂。经抗原识别，初始T细胞进行快速扩增和活化。这种扩增所需求的能量是巨大的，且T细胞激活伴随着细胞代谢的变化。而mTOR信号调控多种代谢过程，因此其在诱导T细胞功能和分化中起到关键作用。本文通过具体的分子机制来讨论mTOR在T细胞增殖、分化及激活中的作用。
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mTOR信号通路与肿瘤靶向治疗研究进展
mTOR接受上游信号激活后通过调控其下游的靶分子4E-BP1和p70S6K而发挥作用,该信号通路在调节细胞生长、细胞周期进程及蛋白质合成等过程中发挥重要作用.该通路的异常也与恶性肿瘤的活化及形成密切相关.目前,针对该通路的靶向抑制剂已应用于临床,因此对mTOR信号通路的深入研究对恶性肿瘤的靶向治疗中具有重要的意义.
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慢性乙醇中毒对雌雄小鼠海马mTOR通路相关蛋白影响
目的 探讨慢性乙醇中毒对雌雄小鼠认知影响的差异,明确mTOR信号通路相关蛋白的变化,揭示慢性乙醇中毒引起脑损伤的机制.方法 将120只8周龄昆明种雌雄小鼠随机分为对照组(蒸馏水灌胃)、12.5％、25％、50％乙醇给药组(0.1 mL/10 g),给药9周.Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,Western blot法检测各组小鼠p-mTOR及p-Akt蛋白表达.结果Morris水迷宫定位航行结果表明:雌鼠及雄鼠对照及低中高剂量乙醇实验组第5d逃避潜伏期分别为[(24.49±8.20),(28.34±9.88),(29.13±12.55),(34.46±13.13),(24.46±5.05),(36.02±9.17),(38.76±6.63),(43.06±8.06)s]较第1 d[(54.64±5.23),(55.22±4.62),(56.25±3.43),(58.33±0.85),(54.16±3.91),(55.69±4.16),(56.89±2.80),(58.34±1.44)s]明显缩短(P＜0.05).空间探索结果表明:50％乙醇组雌鼠及25％、50％乙醇组雄鼠有效区停留距离分别为[(20.88±2.73),(20.19±3.07),(10.33±3.07)cm]较其对照组[雌(37.72±1.78)cm;雄(37.65±6.31)cm]明显缩短(P＜0.05).50％乙醇组雄鼠有效区停留距离[(10.33±3.07)cm]较同浓度组雌鼠[(20.88±2.73)cm]明显缩短(P＜0.05).Western blot结果表明:50％乙醇组雄鼠海马p-Akt(2.75±0.42)、p-mTOR(0.59±0.10)蛋白水平较对照组(1.20±0.51,0.34±0.14)明显升高(P＜0.05),但雌鼠却没有明显变化.结论 慢性乙醇中毒对学习记忆的影响存在性别差异,mTOR信号通路可能参与此过程.
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AM激活mTOR信号通路对人卵巢癌细胞增殖的影响
目的 探讨肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)通过激活mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)信号途径对人卵巢癌细胞H08910增殖的影响.方法 应用AM及mTOR拮抗剂(雷帕霉素)诱导卵巢癌细胞,CCK8法检测AM及雷帕霉素对卵巢癌细胞增殖的影响,进一步采用Western印迹法,测定AM对mTOR磷酸化的激活作用.结果 AM可促进卵巢癌细胞的增殖,并呈剂量依赖关系及受体依赖关系,而这种促增殖作用可被mTOR信号通路的拮抗剂雷帕霉素所抑制;随着AM浓度的增加,卵巢癌细胞mTOR磷酸化水平随之升高.结论 AM介导的mTOR信号通路促进卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的分子靶向治疗提供新的思路.
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mTOR信号通路与支气管肺发育不良
mTOR信号通路是在进化上高度保守的细胞内信号通路,参与多条信号通路的传导,主要包括 PI3K/AKT/mTOR 通路、AKT/TSC1-TSC2/Rheb/mTOR 通路、LKB1-AMPK-TSC-mTOR 通路和 FGF-10-Spry2-mTORC1-STAT3/HIF-1α-VEGF-A通路。该信号通路从多个水平多个方面参与肺发育及肺部多种疾病的调控过程,可能与支气管肺发育不良( bronchopulmonary dysplasia,BPD)有关。 BPD是早产儿十分常见的一种慢性肺疾病( chronic lung disease,CLD),是各种理化因素对发育不成熟肺造成急性肺损伤及损伤后异常修复、肺纤维化的过程。该文总结了mTOR信号通路与肺发育、急性肺损伤及肺纤维化可能存在的关系,探索mTOR信号通路在BPD形成过程中的作用,以期为BPD的防治提供新的切入点。
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生酮饮食的抗癫(痫)机制研究进展
生酮饮食用于癫(痫)治疗已达90年之久,引进我国也已10余年.生酮饮食临床疗效已得到一致认可,但其抗癫(痫)机制至今仍不明确.该文从离子通道、神经递质、神经保护、腺苷及mTOR通路、免疫因素的角度来阐述其可能的抗癫(痫)机制.
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雷帕霉素激活自噬改善嘌呤霉素氨基核苷诱导的足细胞损伤
目的:通过观察雷帕霉素对PAN诱导的足细胞损伤及自噬相关蛋白表达的影响,探讨自噬在雷帕霉素保护PAN诱导的足细胞损伤中的作用及可能机制.方法:构建PAN诱导的足细胞损伤模型,将足细胞分成对照组(Control组), PAN组(加入50 μg/ml PAN),雷帕霉素组(RAP组:分别加入100、200、300 ng/ml雷帕霉素),PAN+雷帕霉素组(PAN+RAP组:细胞在用含PAN的培养液培养前1 h,分别用100、200、300 ng/ml雷帕霉素进行预处理1 h).采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,透射电镜观察自噬小体,Western blot检测LC3、p62、4EBP1、P70S6K、mTOR蛋白表达.结果:与对照组比较,PAN组足细胞凋亡增加,自噬体减少,LC3Ⅱ蛋白表达下调,p62上调,mTOR、4EBP1、P70S6K 磷酸化水平上调;与PAN组比较, PAN+RAP组足细胞凋亡率下降,自噬体增加,LC3Ⅱ蛋白表达上调,p62下调,mTOR、4EBP1、P70S6K 磷酸化水平下调.结论:PAN可以抑制足细胞自噬,促进足细胞凋亡;雷帕霉素可通过激活自噬改善PAN诱导的足细胞损伤,这种作用可能与雷帕霉素抑制mTOR/4EBP1、P70S6K信号通路有关.
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自噬与帕金森病研究进展
目前对自噬和神经变性疾病的许多研究，但自噬对神经元细胞死亡是否促进，或起保护作用仍有争议。目前在研究自噬方面虽然已经取得了一定的成绩，但在神经退行性疾病中仍然有很多问题还未解答，本文对自噬和帕金森病（ PD）作一综述。
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雷帕霉素对雄性小鼠生殖能力的影响及相关机制探讨
目的:探讨免疫抑制剂雷帕霉素对雄性小鼠生殖能力的影响及相关机制.方法:将29只不同日龄的SPF级B6雄性小鼠作为实验动物,将其中12只8 w的小鼠分为对照组小鼠(6只)与喂食组小鼠(6只).将雷帕霉素加入小鼠的饲料中,为喂食组小鼠喂食4周.为对照组小鼠喂食正常的饲料.采用Western blot结合RT-PCR法检测mTOR信号通路重要组分蛋白在不同日龄的小鼠睾丸中表达的水平.采用睾丸和附睾HE染色法观察两组小鼠睾丸的大小、生精细胞的发育状况及附睾内精子的数目.采用CASA检测仪检测两组小鼠成熟精子的活力.采用western blot法检测对照组和喂食组小鼠睾丸组织中mTOR通路重要组分蛋白表达的水平.结果:mTOR和Raptor在21 d的小鼠睾丸中呈高表达,Rictor在14 d的小鼠睾丸中呈高表达.与对照组小鼠相比,喂食组小鼠睾丸重量减小(t=7.907,P=0.001).与对照组小鼠相比,喂食组小鼠的精子活力减弱,其精子中快速、中速及慢速运动精子的占比均降低,其精子中不运动精子的占比升高(P<0.05).与对照组小鼠相比,喂食组小鼠睾丸中各级生精细胞的排布较混乱,其附睾中精子的细胞数量减少,其睾丸组织中mTOR信号通路重要组分蛋白Raptor/Rictor表达的水平下降,其下游直接作用蛋白p-S6、p-S473-AKT、p-T308-AKT表达的水平也下降.结论:免疫抑制剂雷帕霉素能够导致雄性小鼠睾丸和附睾的结构异常,影响其睾丸中成熟精子的生成.此药可通过影响mTOR信号通路的功能干扰雄性小鼠精子发生的过程.
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mTOR信号通路参与系统性红斑狼疮发病机制的研究进展
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种常见自身免疫性疾病,常累及皮肤、肾脏、肺脏等全身各器官系统.其发病机制多与免疫耐受功能紊乱有关,但具体机制尚不明确.哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其信号通路在细胞代谢、生长、增殖及分化等方面起重要作用.近年来已有文献报道mTOR信号通路参与SLE发病机制中的免疫细胞分化、自噬、炎性细胞因子分泌、氧化应激等过程.因此,进一步阐明mTOR信号通路在SLE发病中的作用,对其诊断及靶向治疗具有重要意义.本文就近期mTOR信号通路在SLE中的研究进展作一综述讨论.
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石菖蒲对抑郁模型大鼠海马组织mTOR信号通路相关蛋白表达的影响
目的：探讨石菖蒲对抑郁模型大鼠海马组织mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。方法：采用孤养结合慢性不可预见应激方法造成大鼠抑郁，在7、14、21、28 d时，检测各组大鼠旷场实验中水平运动、垂直运动得分，并用Western印迹法检测各组大鼠海马组织mTOR信号通路相关蛋白的表达变化。结果：21 d、28 d时，与对照组比较，模型组垂直运动和水平运动得分减少（P＜0．01）；与模型组比较，中、西药组垂直运动和水平运动得分增加（P＜0．05、0．01）。21 d、28 d时，与对照组比较，模型组大鼠海马Akt、mTOR、p70S6K和elF-4E蛋白的表达下调（P＜0．01）；与模型组比较，中、西药组大鼠海马Akt、mTOR、p70S6K和elF-4E蛋白表达增加（P＜0．01）。结论：石菖蒲的抗抑郁效应可能通过激活mTOR信号通路相关蛋白的表达而实现。
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mTOR信号通路活化促进门静脉高压大鼠肠系膜血管新生的实验研究
目的：探讨mTOR信号通路在门静脉高压大鼠肠系膜中的活化状态，研究mTOR信号通路的激活参与门静脉高压大鼠肠系膜血管新生，及其可能机制。方法：雄性SD大鼠随机分为假手术组和模型组，采用胆道结扎离断和部分静脉结扎制备门静脉高压症模型。通过组织病理学和血流动力学分别评估肠系膜血管新生和门静脉压力。采用Western印迹法分别测定血管新生标志物血管内皮生长因子（VEGF）和mTOR信号通路标志物P70S6K和4EBP1的表达。结果：术后3周，两种大鼠模型脾脏肿大、肠系膜血管新生和门静脉压力显著增高（P<0.01）；VEGF蛋白表达量、P-P70S6K和P-4EBP1的相对表达量也显著增高（P<0.01）。结论：mTOR信号通路活化促进门静脉高压大鼠肠系膜血管新生，阻断该通路可能有助于抑制侧支循环的建立，降低内脏血流高动力循环。
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mTOR抑制剂雷帕霉素对早期肝硬化门静脉高压症大鼠的治疗作用
目的:研究雷帕霉素阻断mTOR信号通路在早期肝硬化门静脉高压症中的治疗作用,并探讨其可能机制.方法:雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组和模型干预组.采用胆道结扎离断3周制备早期肝硬化门静脉高压症模型,模型干预组于术后1周给予雷帕霉素[2 mg/(kg·d)]腹腔注射2周.通过组织病理学、形态学和血流动力学评估肝纤维化和门静脉压力.应用RT-PCR测定肝纤维化基因PC-α1、α-SMA 、TGFβ1和PDGF的转录,采用Western印迹法测定mTOR信号通路标志物P70S6K和磷酸化P70S6K (p-P70S6K)的表达.结果:模型组大鼠肝内胆管细胞和α-rSMA阳性细胞活化增殖显著,肝脾明显增大,门静脉压力也显著增高;肝脏促纤维化基因明显上调,p-rP70S6K蛋白表达量明显增高;而雷帕霉素通过阻断mTOR信号通路显著改善了肝功能、肝纤维化、门静脉压力及脾肿大.结论:mTOR信号通路是早期肝硬化门静脉高压症形成的重要调控机制,阻断该通路可能成为早期肝硬化门静脉高压症治疗的新靶点.
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藓生马先蒿苯乙醇苷通过激活mTOR信号通路改善高原记忆损伤
目的 探讨藓生马先蒿苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides,PhGs)改善高原记忆损伤的机制,明确其是否通过激活mTOR信号通路来实现的.方法 清洁级雄性Wistar 大鼠60只,随机分为常氧对照组、缺氧组、PhGs低、中、高剂量组(50、200、400 mg/kg灌胃给药),常氧对照组和缺氧组给予等体积的灭菌注射用水,连续给药7 d.给药第4天,缺氧组和PhGs低、中、高剂量组置于大型低压氧舱模拟高原低压低氧环境(7 500 m,3 d).采用SYBR Green 实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测海马组织中mTOR、P70S6K和4E-BP1 mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测海马组织中p-mTOR、p-P70S6K和p-4E-BP1 蛋白表达.结果 与常氧对照组比较,缺氧组海马组织中mTOR、P70S6K mRNA表达分别下调达22.50%、26.00%(P<0.05,P<0.01),4E-BP1 mRNA表达上调达41.28%(P<0.01);p-mTOR和p-P70S6K蛋白表达分别降低42.28%和11.70% (P<0.05,P<0.01),p-4E-BP1蛋白表达升高111.86%(P<0.01).与缺氧组比较,PhGs低剂量组4E-BP1 mRNA表达下调达77.33%(P<0.01),p-P70S6K蛋白表达升高32.53%(P<0.01),p-4E-BP1蛋白表达降低82.4%(P<0.01);PhGs中、高剂量组海马组织中mTOR、P70S6K mRNA表达分别上调达64.56% 、60.76% 和14.86%、20.27%(P<0.01),4E-BP1 mRNA 表达分别下调达72.67%、71.57%(P<0.01),p-mTOR、p-P70S6K蛋白表达分别升高65.12%、94.17%和56.63%、78.31%(P<0.01),p-4E-BP1蛋白表达分别降低57.6%和40%(P<0.01).结论 藓生马先蒿苯乙醇苷能够改善高原记忆损伤,其保护机制可能是通过激活mTOR信号通路实现的.
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烟雾病患者血清microRNA表达谱的初步筛选与分析
目的 筛选并分析烟雾病microRNA(miRNA)表达谱,探讨其可能的发病机制.方法 采用基因芯片检测10例烟雾病患者和10例正常对照血清,获得miRNA差异表达谱,用RT-PCR进行结果验证.通过目标预测程序TargetScan进行预测并得到差异表达的miRNAs.进一步通过基因本体论(GO)分析与通路分析诠释关键信号通路和可能参与烟雾病发病机制的miRNAs.结果 根据基因芯片结果,发现有94个差异表达的miRNAs,其中上调50个,下调44个,若干个重要的miRNA家族亦同时被检测到.RT-PCR验证了miRNA-106b、miRNA-130a、miRNA-126、miRNA-125a-3p的差异表达,证明基因芯片筛查可靠.通路分析表明富集程度高的是mTOR信号通路,具有16个潜在功能靶点.结论 利用基因芯片初步筛选出烟雾病患者血清miRNA表达谱；生物信息学分析提示mTOR信号通路可能与烟雾病发病相关.
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FKBP12蛋白RNA干扰与回复表达细胞系的建立
目的 建立FKBP12蛋白(FK506 binding-protein 12,基因名FKBP1A)RNA干扰和回复表达的人肺癌细胞系A549,并初步探索FKBP12的功能.方法 设计3条核心序列位于FKBP1A 3 'UTR区域的siRNA,它们仅靶向内源性的FKBP12.利用pLKO.1-puro载体包装相应的shRNA慢病毒感染A549,得到FKBP12表达调低的细胞系.使用带neo基因筛选标记的pcDNA3.1载体回复表达FKBP12,并筛选得到不受shRNA干扰的回复表达细胞系.用实时荧光定量PCR和Western blotting检测调低和回复表达效果,并初步分析细胞系表型.结果 FKBP12在mRNA和蛋白质水平上的表达均被抑制,干扰效率在75％以上(P＜0.01).FKBP12不影响A549的细胞形态和增殖效率,而下调mTORC1(mammalian target of Rapamycin complex 1)下游转录调控相关蛋白4E-BP1 (eIF4E-binding protein 1)的表达.结论 成功构建了FKBP12蛋白敲低和回复表达的A549细胞系,为后续探究FKBP12的功能奠定了基础.
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哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路上的miRNA调控
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(the mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在细胞增殖、凋亡、细胞周期进程和代谢中发挥重要作用.人类肿瘤中常常发生mTOR信号通路的异常,使得mTOR通路成为抗肿瘤治疗的主要靶点.近年来研究发现miRNA(微小RNA,microRNA)参与多种生物学过程的调控.miRNA可以通过直接或间接作用调控mTOR通路,使得mTOR信号也成为miRNA抗肿瘤治疗的潜在靶点.
