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mTOR及PTEN、PHLPP、VEGF、p53蛋白在结肠癌中的表达及意义
目的 检测结肠癌组织中mTOR、PTEN、PHLPP及VEGF和p53蛋白表达,探讨结肠癌发生、发展可能的分子机制及临床意义.方法 选择2011年3月至2012年10月65例结肠癌癌组织标本及25例腹部外伤者的正常结肠组织标本,分别采用免疫组化法及Western-blot方法检测mTOR及PTEN、PHLPP、VEGF、p53蛋白的阳性表达率及相对表达量,并对检测结果进行比较.结果 mTOR、PTEN、PHLPP、VEGF、p53蛋白在正常结肠组织中的阳性率分别为12.0％、96.0％、92.0％、12.0％、8.0％,在结肠癌组织中综合阳性率为78.5％、23.1％、20.0％、92.3％、67.7％.结肠癌组mTOR、VEGF、p53阳性表达率高于正常对照组,PTEN、PHLPP低于正常对照组(P均＜0.01).Western-blot检测结果显示,TNM分期越晚,mTOR蛋白及VEGF表达水平越高(P ＜0.05,P＜0.01),PTEN、PHLPP蛋白表达水平越低(P ＜0.05,P＜0.01),而p53蛋白表达水平在肿瘤TNM不同分期无明显变化.结论 mTOR通路蛋白及抑癌基因PTEN、PHLPP、p53可能参与结肠癌发生、浸润、转移的信号传导.提示mTOR通路蛋白抑制剂可用于结肠癌的治疗.
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ACSS2上调参与食管鳞癌细胞缺氧诱导的放疗抵抗
目的:研究乙酰辅酶A合成酶2(ACSS2)上调对食管鳞癌细胞缺氧诱导的放疗抵抗效应形成的影响及潜在的分子作用机制.方法:免疫组化及免疫荧光技术细胞共定位检测65例食管鳞癌患者组织切片中ACSS2和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达和活化水平;将食管鳞癌ECA-109细胞分为对照组、ACSS2 siRNA组、缺氧组和缺氧+ACSS2 siRNA组,利用克隆形成实验检测不同处理组细胞对不同照射剂量(0、2、4、6、8 Gy)的放射敏感性;选择8 Gy照射处理后,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡,蛋白质印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3/caspase 3、 Bcl-2的表达及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、 p-mTOR、核糖体蛋白S6激酶(p70S6)等信号通路蛋白的表达. 结果:食管鳞癌病理切片中ACSS2高表达,细胞密集区域尤为明显,与p-mTOR呈显著正相关(r=0.707, P<0.01);细胞克隆实验表明缺氧组细胞的存活分数比对照组明显下降(P<0.01),放疗敏感性降低,下调ACSS2可以逆转这一趋势;缺氧环境诱导的ACSS2升高促进了ECA-109细胞Bcl-2表达上调、抑制了cleaved-caspase 3的表达,同时细胞凋亡率下降(P<0.01);在缺氧条件下,下调ACSS2可以抑制mTOR信号通路相关蛋白mTOR、 p-mTOR、p70S6的活化.结论:缺氧条件下的ACSS2累积通过活化mTOR通路促进放疗抵抗效应.
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叶酸抑制血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞去分化
目的:探究叶酸是否通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/P70S6K信号通路抑制血小板源生长因子(PDGF)-BB诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)的去分化.方法:取SD大鼠的主动脉VSMCs原代细胞进行培养鉴定,第3~第7代细胞用于实验.VSMCs分为5组:Control组、PDGF-BB(浓度为10 ng/mL)组、PDGF-BB+1μmol/L叶酸组、PDGF-BB+10μmol/L叶酸组、PDGF-BB+100μmol/L叶酸组.用MTT法检测各组VSMCs的增殖情况;划痕法和Transwell法用于检测各组VSMCs的迁移情况;用Western blot法检测各组VSMCs中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、调宁蛋白(Cal)、骨桥蛋白(OPN)以及mTOR、p-mTOR、P70S6K和p-P70S6K的表达情况.结果:与Control组相比,PDGF-BB组的VSMCs的增殖和迁移能力增加(P<0.05),OPN、p-mTOR、p-P70S6K的表达增加,α-SMA、Cal表达减少(P<0.05).与PDGF-BB组相比,叶酸+PDGF-BB组的VSMCs的增殖和迁移能力减小(P<0.05),OPN、p-mTOR、p-P70S6K的表达减少,α-SMA、Cal表达增加(P<0.05),叶酸浓度越高抑制去分化作用越强.结论:叶酸可能通过抑制mTOR/P70S6k信号通路抑制PDGF-BB诱导的VSMCs的去分化.
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mTOR信号通路在癫痫发生中的作用
目前临床上用于癫痫治疗的药物均为对症治疗(anti-seizure),不能干预癫痫的发生(anti-epilepsy)及进程,即使服用这类药物,仍有1/3的患者得不到有效控制,因此,必须明确癫痫的发生机制以研发新型抗癫痫药物.mTOR信号通路调控细胞的生长、增殖、分化、凋亡和突触可塑性,近年来在癫痫发生中的作用得以广泛研究.mTOR抑制剂雷帕霉素亦成为癫痫治疗药物的强力候选者.明确mTOR信号通路在癫痫发生中的作用,以mTOR信号通路作为新型抗癫痫药物的作用靶点,将对癫痫治疗产生深远影响.
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雷帕霉素对哮喘缓解期小鼠模型气道炎症的作用
目的 探讨雷帕霉素对哮喘缓解期小鼠气道炎症的作用与机制.方法 将50只Balb/c小鼠随机分为5组:正常对照组、哮喘缓解组、哮喘模型组、地塞米松组和雷帕霉素组,每组10只.采用卵蛋白致敏与激发制备哮喘模型,休息3周后,采用卵蛋白再次激发1周,在小鼠休息期间治疗组采用雷帕霉素或地塞米松干预.采用Buxco无创肺功能仪检测气道高反应性;Luminex测定肺泡灌洗液IL-4、IL-5、IL-13、IL-17及INF-γ水平;肺组织HE染色评价观察小鼠肺组织气道炎症;Western blot检测肺组织p-S6、S6、AKT、p-AKT(S473)蛋白含量;流式分析测定肺泡灌洗液CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分率.结果 与正常组及哮喘缓解组比较:哮喘模型组气道反应性升高(P＜0.01),灌洗液IL-4、IL-5、IL-13及IL-17水平增加(均P＜0.01),肺组织气道炎症评分增高(P＜0.01),肺组织mTORC1信号通路下游蛋白p-S6蛋白增加(P＜0.01),灌洗液Treg细胞比例上升(P＜0.01);与模型组比较:雷帕霉素在乙酰甲胆碱浓度为6.25mg/ml时,可降低Penh值(P＜0.01),同时降低肺泡灌洗液IL-4水平(P＜0.01),并抑制肺组织炎症细胞浸润(P＜0.01),而肺组织mTORC1信号通路下游蛋白p-S6蛋白下降(P＜0.01),但雷帕霉素可降低肺泡灌洗液Treg细胞比例(P＜0.01).结论 在哮喘缓解期应用雷帕霉素,其可通过mTORC1信号通路显著抑制哮喘急性发作时气道炎症;在哮喘缓解期应用雷帕霉素,对控制哮喘再次发作具有积极作用.
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mTOR信号通路相关蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义
目的：探讨mTOR信号通路相关蛋白在胰腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学技术测定并比较mTOR信号通路相关蛋白Akt、mTOR及P70S6K在胰腺癌和非胰腺癌组织中的磷酸化水平，应用Spearman相关分析探讨mTOR信号通路相关蛋白磷酸化水平与胰腺癌患者年龄、性别、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及肿瘤分期的相关性。结果 p- Akt和p- mTOR蛋白阳性着色定位于细胞质内，而p- P70S6K蛋白阳性着色定位于细胞核。p- mTOR、p- Akt和p- P70S6K蛋白在胰腺癌组织中表达水平显著高于非胰腺癌组织（P均<0.01）。Spearman相关分析显示，p- Akt、p- mTOR和p- P70S6K蛋白表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、组织学分级无关（P均>0.05），与淋巴结转移和分期有关（P均<0.05）。结论 mTOR信号通路与胰腺癌的发生发展相关，但mTOR信号通路相关蛋白磷酸化水平在胰腺癌临床分型及转归中的意义不大。
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mTOR信号通路对造血干细胞调控作用研究进展
mTOR信号通路在调控细胞的生长、增殖、能量代谢和细胞周期中发挥着重要作用.近研究发现该信号通路过度活化可引起造血干细胞(HSCs)脱离静止状态,导致造血干细胞池的耗竭,抑制mTOR 信号通路能够恢复HSCs的自我更新和造血能力,深入研究mTOR信号通路对HSCs的调控作用将对HSCs的临床应用以及造血系统疾病发病机制研究提供新的思路.
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三七总皂苷联合三苯氧胺对人乳腺癌细胞的抑制作用及对PI3K-AKT-mTOR信号通路的影响
目的 探讨三七总皂苷(PNS)联合三苯氧胺(TAM)对人乳腺癌细胞的抑制作用及对PI3 K-AKT-mTOR信号通路的影响.方法 70只裸鼠于右胸部皮下接种乳腺癌LCC2细胞,选取造模成功的66只裸鼠随机分为6组,每组11只,分别为模型对照组、单纯5 mg· kg-1TAM组、100 mg·kg-1 PNS组、200 mg·kg-1 PNS组、5 mg·kg-1 TAM+100 mg·kg-1 PNS组、5 mg·kg-1TAM +200mg·kg-1 PNS组、连续给药30 d,每周记录裸鼠体质量,肿瘤抑制率,给药结束后分离瘤体并称重,观察瘤体病理组织学结果,采用免疫组化法检测HER-2,谷胱甘肽S转移酶(GST-л)及天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)的表达情况.结果 与TAM组相比较,5 mg·kg-1 TAM+ 100 mg·kg-1 PNS组和5 mg·kg-1 TAM +200 mg·kg-1PNS组肿瘤抑制率均大于单纯TAM组(P＜0.05),5 mg·kg-1 TAM+ 100 mg·kg-1 PNS组和5 mg·kg-1 TAM+ 200 mg·kg-1 PNS组HER-2及GST-л表达水平显著低于单纯TAM组(P＜0.05),Caspase-3表达显著高于单纯TAM组(P＜0.05).结论 PNS能显著增加TAM抗乳腺癌的作用,其机制可能与调控mTOR信号通路有关.
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补肾活髓颗粒对慢性再生障碍性贫血患者mTOR信号通路的影响
目的:观察补肾活髓颗粒治疗慢性再生障碍性贫血(CAA)的临床疗效,并从调控mTOR信号通路角度探讨其作用机制.方法:70例患者按随机数字表法分成两组,试验组在常规西药治疗的基础上加用口服补肾活髓颗粒治疗,对照组采用西药常规治疗,并设30例健康人为正常组.观察治疗前后临床症状、临床疗效及不良反应,并用RT-PCR方法检测CAA患者骨髓单个核细胞mTOR信号通路中的mTOR mRNA表达.结果:试验组总有效率83.33%,优于对照组的64.51%(P<0.05).两组治疗后血红蛋白(HGB)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)均有明显上升(P<0.01).CAA患者骨髓中mTOR表达水平低于正常水平(P<0.01),治疗后两组mTOR mRNA表达水平均有所提高,但试验组高于对照组(P<0.01).结论:补肾活髓颗粒可显著改善CAA患者临床症状,提高临床疗效,且安全、无不良反应.补肾活髓颗粒可显著提高HGB、WBC、PLT的数量.补肾活髓颗粒通过激活CAA患者mTOR信号通路活性增加骨髓造血细胞的增殖,提高骨髓造血细胞的数量,并改善恢复骨髓造血功能.
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紫杉醇在人胃癌细胞系SGC-7901中的抗肿瘤作用
目的:探讨紫杉醇对人胃癌细胞系SGC-7901增殖、迁移、凋亡及细胞周期的影响并探究其可能的作用机制.方法:根据培养基中紫杉醇的浓度将实验分为三组即对照组、0.25 μg/mL组、0.5 μg/mL组;CCK-8和克隆形成实验检测细胞活性,Transwell实验观察细胞的迁移及侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡及周期变化,Western blot分析mTOR及p-mTOR蛋白表达变化.结果:CCK-8及克隆形成结果表明紫杉醇可以降低SGC-7901的细胞活性,Transwell结果证明紫杉醇可以抑制SGC-7901的迁移及侵袭能力,流式细胞术分析显示紫杉醇可以诱导细胞凋亡,各实验组凋亡率分别为(6.77±0.51)％、(10.53±0.91)％、(13.97±1.92)％;细胞周期结果证实紫杉醇可使细胞周期阻滞于G2/M期,各实验组G2/M期比例分别为(10.81±1.23)％、(14.57±1.78)％、(15.54±2.17)％;Western blot结果证实紫杉醇还可以降低p-mTOR蛋白的表达,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:紫杉醇可以通过下调p-mTOR的表达抑制人胃癌细胞系SGC-7901的细胞活性并诱导其凋亡,可能是其抗肿瘤作用的分子学机制.
关键词： 紫杉醇 SGC-7901细胞 mTOR信号通路 -
L型氨基酸转运蛋白抑制剂BCH联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用
目的:探讨L型氨基酸转运蛋白抑制荆2-氨基双环-(2,2,1)-庚烷-2-羧酸(BCH)单用及联用顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞生长的影响及其可能的分子机制.方法:人卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的BCH及BCH联合顺铂处理后,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖活性；Western blot检测BCH对mTOR通路的影响.结果:单用BCH可显著抑制SKOV3细胞增殖,并呈现一定的时间-剂量依赖性.联用顺铂较之单独用药组,细胞活性明显降低(P＜0.01),且BCH在顺铂之后应用时抑制作用更为明显(P＜0.05).Westem blot显示BCH可抑制mTOR、p70 S6K和4E-BP1磷酸化,阻断mTOR通路.结论:L型氨基酸转运蛋白抑制剂BCH单用及联用顺铂均可显著抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖,且BCH在顺铂之后应用抑制作用更明显,呈协同作用.
关键词： L型氨基酸转运蛋白抑制剂 顺铂 SKOV3细胞 mTOR信号通路 -
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路与大肠癌
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,调节细胞存活、增殖、转分化、迁移和细胞周期.mTOR这些调节机制的异常与大肠癌的发生和发展密切相关.目前mTOR抑制剂治疗大肠癌已处于临床试验中,并取得了一定的进展.
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着丝粒蛋白F mRNA在肺腺癌细胞系、肺腺癌组织中的表达变化及相关调控信号通路分析
目的 观察着丝粒蛋白F(CENPF)mRNA在肺腺癌细胞系中的表达变化,分析CENPF mRNA在肺腺癌组织中的表达变化并探讨其相关调控信号通路.方法 ①采用实时定量PCR法检测肺正常上皮细胞系BEAS-2B、肺腺癌细胞系(A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975)CENPF mRNA.②采用癌症基因组图谱(TCGA)的肺腺癌数据集分析CENPF mRNA表达与肺腺癌临床病理参数、预后的关系,Cox回归模型分析肺腺癌患者预后的影响因素.③采用基因集富集分析(GSEA)法分析受CENPF调控的肺腺癌相关信号通路.结果 ①A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975、BEAS-2B细胞CENPF mRNA相对表达量分别为4.333±0.271、3.193±0.188、2.770±0.091、5.491±0.249、1.006±0.071,A549、NCI-H1650、NCI-H23、NCI-H1975细胞CENPF mRNA相对表达量均高于BEAS-2B(P均<0.05).②肺腺癌、癌旁正常组织CENPF mRNA的相对表达量分别为9.632±0.059、6.472±0.093,二者比较,P<0.001.CENPF mRNA表达与肺腺癌患者的性别、年龄、T分期、N分期及TNM分期相关(P均<0.05).生存分析结果显示,与CENPF mRNA低表达患者比较,CENPF mRNA高表达的肺腺癌患者的预后差(P=0.001).CENPF mRNA表达、临床TNM分期(HR分别为1.667,1.414;P均<0.01)是影响肺腺癌患者预后的因素.③与CENPF mRNA高表达有关的肺腺癌调控信号通路有G2M检查点(P<0.001,FDR<0.001)、有丝分裂纺锤体(P<0.001,FDR<0.001)、E2F靶基因(P<0.001,FDR<0.001)、MYC靶基因(P<0.001,FDR=0.001)、mTOR信号通路(P=0.002,FDR=0.005)、精子形成(P=0.002,FDR=0.009)、未折叠蛋白反应(P=0.002,FDR=0.020)及PI3K/Akt/mTOR信号通路(P=0.015,FDR=0.117)等.结论 肺腺癌组织及细胞系中存在CENPF高表达,CEN-PF高表达与肺腺癌患者的恶性病理特征及不良预后密切相关.CENPF mRNA高表达是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素.CENPF可能通过调节G2 M检查点、有丝分裂纺锤体、E2F靶基因、MYC靶基因、mTOR信号通路、精子形成、未折叠蛋白反应及PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺腺癌的发生、发展中起重要作用.
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二甲双胍联合顺铂对孕激素耐药子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡的影响及机制
目的 探讨二甲双胍联合顺铂对孕激素耐药子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法将Ishikawa细胞体外培养,取对数期细胞,应用甲羟孕酮诱导建立孕激素耐药体系.取耐药成功的Ishikawa细胞,随机分为5组,二甲双胍组:加入稀释后不同浓度(终浓度为1、2.5、5、10、15 mmol/L)的二甲双胍;顺铂组:加入浓度为5、12.5、25、50、75μmol/L的顺铂;联合用药组:二甲双胍联合顺铂以各自相应的终浓度按1:200进行给药;对照组:未添加任何药物的无血清培养液处理细胞;空白组:无药物及细胞的培养液.MTT法检测各组细胞增殖抑制率及联合指数(CI),计算二甲双胍及顺铂的半数抑制浓度(IC50),根据计算的IC50,后续研究中分别用10 mmol/L二甲双胍(二甲双胍组)、60μmol/L顺铂(顺铂组)、10 mmol/L二甲双胍+60μmol/L顺铂(联合用药组)处理细胞48 h.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法分析相关凋亡基因表达;同时,应用Western blot-ting法检测各组mTOR信号通路相关蛋白表达.结果二甲双胍在2.5～15 mmol/L、顺铂在12.5～70μmol/L浓度内孕激素耐药的Ishikawa细胞增殖受到抑制,且呈剂量依赖性效应,二者抑制作用随药物浓度的增高而逐渐增大,差异有统计学意义(P均<0.05).二甲双胍的IC50为(10.44±0.57)mmol/L、顺铂为(60.22±0.78)μmol/L.联合用药组二甲双胍终浓度为10、15 mmol/L时联合顺铂(对应终浓度为50、75μmol/L)对肿瘤细胞增殖的抑制程度高于二甲双胍组及顺铂组(P均<0.05).流式细胞仪结果显示,联合用药组的细胞凋亡率高于顺铂组、二甲双胍组,差异有统计学意义(P均<0.05);实时荧光定量PCR及Western blotting结果表明联合用药组Bcl-2相对表达产物含量低,其p-AMPK蛋白表达较二甲双胍组、顺铂组增加,而p-mTOR含量则降低(P均<0.05).结论二甲双胍联合顺铂对孕激素耐药的子宫内膜癌细胞有协同作用,可抑制肿瘤细胞增殖,促进其凋亡;机制可能与AMPK/mTOR通路相关.
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活性维生素D3调控肾小球系膜细胞增殖与凋亡机制研究
作为一种类固醇激素,活性维生素D3(1,25(OH)2D3)可抑制肾小球系膜细胞的增殖,而细胞的增殖又与mTOR信号传导通路相关,本文就1,25(OH)2D3通过mTOR信号传导通路调控肾小球系膜细胞增殖与凋亡的机制作一综述.
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鼻咽癌肿瘤干细胞中mTOR信号通路的激活及雷帕霉素对其的抑制作用
目的:研究鼻咽癌肿瘤干细胞中mTOR信号通路蛋白的表达,初步探讨雷帕霉素抑制鼻咽癌肿瘤干细胞增殖的机制.方法:用无血清培养法收集鼻咽癌肿瘤球细胞,用CCK8检测成球细胞及CNE2细胞的增殖活性,Western blot检测干细胞标记物蛋白CD44、OCT4、SOX2和mTOR及其信号通路下游相关蛋白P70S6、4EBP1的表达;CCK8法测不同浓度雷帕霉紊(0、0.1、1.0、10.0、100.0、1 000.0 nmol/L)对鼻咽癌肿瘤球细胞及CNE2细胞抑制率的差异,Western blot检测雷帕霉素作用肿瘤球细胞后mTOR及其信号通路下游相关蛋白P70S6、4EBP1的表达.结果:成球细胞在含血清培养液中增殖较CNE2细胞明显,与CNE2细胞相比,成球细胞OCT4、SOX2呈过度表达(均P＜0.05),而在CD44的表达上,2组间差异无统计学意义(P＞0.05);在mTOR、P70S6、4EBP1的表达上,2组细胞无明显差异(P＞0.05),而在各自激活态的磷酸化水平(P-mTOR、P-P70S6、P-4EBP1)的表达上,成球细胞较CNE2明显呈过表达状况(均P＜0.05);不同浓度雷帕霉素作用鼻咽癌成球细胞及CNE2细胞,对比两者半数抑制率浓度,成球细胞为27.59 nmol/L,CNE2细胞为78.12 nmol/L,雷帕霉素对成球细胞具有更强的抑制作用;不同浓度雷帕霉素作用成球细胞后,P-mTOR、P-P70S6、P-4EBP1的表达随浓度的升高而呈逐渐下降趋势,而mTOR、P70S6、4EBP1的表达差异无统计学意义.结论:鼻咽癌肿瘤干细胞mTOR信号通路蛋白呈过度表达,雷帕霉素可通过干预mTOR信号通路来抑制其增殖活性.
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MAP4K3-mTOR信号在甘草查而酮A诱导的鳞癌细胞自噬与凋亡中的作用研究
目的:探索MAP4K3-mTOR信号级联在甘草查而酮A诱导的人口腔鳞癌细胞自噬与凋亡中的作用.方法:分别采用0、25、50 μmol/L甘草查尔酮A刺激人口腔鳞癌SCC-25系细胞,并于刺激后0、6及24 h收集细胞,采用Western blot检测MAP4K3、AKT、mTOR通路分子,细胞自噬标识分子LC3-Ⅱ、beclinl,以及细胞凋亡标记分子caspase-3、caspase-9及bcl-2等的蛋白表达水平,采用Annexin V-PI染色检测细胞凋亡状况.结果:甘草查尔酮A可剂量及时间依赖性地降低SCC-25细胞MAP4K3、p-mTOR及p-p70S6蛋白的表达水平,促进其LC3-Ⅱ、beclin1、caspase-3及caspase-9蛋白表达水平,并抑制其bel-2蛋白表达水平(P＜0.05).采用慢病毒过表达MAP4K3后,p-mTOR、caspase-3及caspase-9蛋白表达水平显著增高,LC3-Ⅱ、beclin1及bcl-2蛋白表达水平则显著降低(P＜0.05).经甘草查尔酮A刺激后,SCC-25细胞早期凋亡数与晚期凋亡数均较对照组显著增多,该效应可被MAP4K3过表达处理显著增强(P＜0.05).结论:甘草查尔酮A可时间剂量依赖地抑制MAP4K3-mTOR信号级联,并促进人口腔鳞癌细胞的自噬与凋亡,当过表达MAP4K3活化mTOR信号级联后,鳞癌细胞自噬活动受到抑制,但其凋亡活动则显著增强.
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mTOR通路在卵巢癌卡铂耐药细胞模型中的作用
目的:建立卵巢癌卡铂(CBP)耐药细胞系,探讨mTOR信号通路在其中的作用.方法:卡铂逐步增加剂量诱导卵巢癌OVCAR细胞构建耐药细胞系OVCAR/CBP; MTT细胞毒实验检测卡铂对细胞的生长抑制作用；荧光定量PCR检测mTOR基因表达的变化；Western blot检测蛋白的表达改变.结果:MTT细胞毒实验结果显示卡铂对OVCAR和OVCAR/CBP细胞的IG50值分别为(2.27±0.14)和(22.31±1.05)μmol· L-1,耐药9.83倍(P＜0.01).荧光定量PCR和Western-blot 检测显示OVCAR和OVCAR/CBP细胞中mTOR细胞中蛋白的表达水平无显著改变(P＞0.05),但p-mTOR蛋白的表达水平在OVCAR/CBP细胞显著高于OVCAR细胞.结论:成功建立了卵巢癌卡铂耐药细胞,卵巢癌耐药细胞OVCAR/CBP出现了p-mTOR蛋白的表达水平升高,提示了mTOR信号通路卵巢癌卡铂耐药细胞中的激活.
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加味四君子汤通过mTOR信号通路延缓小鼠脑组织衰老的机制研究
目的 研究加味四君子汤通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路延缓小鼠脑组织衰老的作用及其可能机制.方法 将40只8周龄小鼠随机分为低剂量组、高剂量组、模型组和对照组,除对照组外各组小鼠分别予以腹腔注射D-半乳糖形成衰老模型,同时低剂量组和高剂量组予以加味四君子汤灌胃给药,对照组和模型组予以同等体积生理盐水灌胃,喂养42 d后处死小鼠.对小鼠的脑组织进行H E染色病理学观察,同时采取分子生物学方法检测mTOR信号通路调控因子PI3K和下游效应蛋白p70S6K和4E-BP1,并对其进行统计学分析.结果 与模型组比较,加味四君子汤可改善小鼠脑组织衰老的病理变化,使脑组织中SOD活性升高,MAO活性及MDA含量降低,差异有统计学意义(均P<0.05),PI3K、p70S6K表达均降低(均P<0.05);而4E-BP1的表达无差异(P>0.05).结论 加味四君子汤能延缓小鼠脑组织衰老,其机制可能与减少PI3K激活、抑制mTOR信号通路,降低p70S6K的表达有关.
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mTOR信号通路与动脉粥样硬化
mTOR是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,主要参与到两种信号通路的调节中.mTOR信号通路具有调控细胞生长、自噬、增殖和凋亡等生物学功能.mTOR可以调控动脉粥样硬化发生发展过程中内皮细胞的增殖与迁移、巨噬细胞的自噬和平滑肌细胞的增殖与迁移.通过不同时期抑制或激活mTOR可以稳定动脉粥样硬化易损斑块,防止动脉粥样硬化的发生发展.mTOR信号通路在动脉粥样硬化进展中发挥了多方面效应,本文主要针对mTOR信号通路与动脉粥样硬化做一综述,为临床治疗提供新的研究方向.
