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鼻咽癌组织RNF168的表达与鼻咽癌放疗敏感性的关系探讨
目的 探讨RNF168在鼻咽癌中的表达与鼻咽癌放射敏感性的关系.方法 选取2012年6月～2018年12月在南华大学附属郴州医院治疗的鼻咽癌患者72例作为研究对象,按放射治疗效果将其分为放射治疗敏感组和放射治疗抵抗组,免疫组化染色检测两组RNF168蛋白的表达.结果 两组在性别、年龄、肿瘤分期等方面比较,差异无统计学意义(P>0.05),放射治疗敏感组和放射治疗抵抗组的RNF168表达存在差异.结论 RNF168蛋白的表达和表达强度与鼻咽癌的放疗抵抗有关,提示可根据RNF168的表达帮助预测鼻咽癌的放射治疗效果.
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非小细胞肺癌放疗抵抗细胞模型的建立与鉴定
目的 体外建立非小细胞肺癌A549放疗抵抗模型,为进一步研究放疗抵抗的机制和治疗提供实验基础.方法 摸索接种细胞数量及诱导照射剂量;采用间歇照射诱导建立放疗抵抗细胞模型RA549;倒置显微镜观察细胞形态;克隆形成实验鉴定RA549的放疗抵抗性.结果 照射后RA549细胞形态较亲本A549细胞变长、变大,但传代5代后又可恢复;RA549细胞的存活分数明显大于亲本细胞.结论 间歇照射诱导可以成功建立稳定的、具有放疗抵抗性的肺癌细胞模型.
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耐放疗宫颈癌Caski细胞ALDH-1表达的研究
目的 研究耐放疗宫颈癌Caski细胞亚群转染醛脱氢酶基因(ALDH-1)表达的情况,以了解ALDH-1能否作为宫颈癌干细胞的标记物,为今后宫颈癌干细胞的研究提供方向.方法 使用两种照射方案(2 GY组:2 GY×10次;4 GY组:4 GY×5次),对宫颈癌Caski细胞进行β射线照射诱导出耐放疗细胞亚群;并检测Caski细胞照射前后的群体倍增时间、细胞凋亡、放射敏感性和ALDH-1表达的情况.结果 与无照射组(对照组)相比,2 GY组、4 GY组的细胞群体倍增时间明显延长(P均<0.05);细胞凋亡率、SF2、ALDH-1阳性率均有明显升高(P均<0.01).结论 放疗诱导宫颈癌Caski细胞凋亡,导致细胞生长延缓.耐放疗宫颈癌Caski细胞亚群的ALDH-1表达明显升高,提示ALDH-1可能可以作为宫颈癌干细胞的标记物之一.
关键词： 宫颈癌Caski细胞 放疗抵抗 细胞凋亡 乙醛脱氢酶-1 -
鼻咽癌组织Raf-1的表达与鼻咽癌放疗敏感性的关系探讨
目的 探讨鼻咽癌组织Raf-1的表达与鼻咽癌放疗敏感性的关系.方法 选取72例鼻咽癌患者,根据患者放疗疗效分为放疗敏感患者37例(放疗敏感组),放疗抵抗患者(放疗抵抗组)35例,采用免疫组化染色检测两组Raf-1蛋白表达情况.结果 两组患者性别、年龄、临床分期、组织分型及分化类型比较差异无统计学意义(P>0.05);放射敏感组Raf-1蛋白阳性表达率为29.73%,低于放射抵抗组的91.43%(P<0.05);放射敏感组Raf-1蛋白表达总体强度明显弱于放射抵抗组(P<0.05);Raf-1蛋白阳性表达预测鼻咽癌患者放疗抵抗的灵敏度为97.14%,特异度为70.27%,阳性预测值为75.56%,阴性预测值为96.29%.结论 Raf-1蛋白阳性表达率和表达强度与鼻咽癌放疗抵抗有关,对预测鼻咽癌放疗疗效有一定价值.
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自噬调节与肿瘤治疗相关的研究进展
目的:总结自噬及其调节机制的文献,探讨自噬与肿瘤的关系和调节自噬在肿瘤治疗中的作用.方法:应用PubMed文献检索系统和中国生物医学文献服务系统(SinoMed),以“自噬、肿瘤形成、耐药和放疗抵抗”为关键词,检索2007-01-2012-03有关自噬的发生和调节及其在肿瘤治疗中作用的文献.纳入标准:1)自噬的过程和调节机制；2)自噬与肿瘤的关系；3)调节自噬与肿瘤治疗.根据纳入标准,符合分析的文献37篇.结果:抑癌基因和自噬相关基因的突变常导致自噬调节障碍,并且与肿瘤形成密切相关.应用自噬抑制剂和基因干扰技术调节自噬使细胞内自噬活动维持在合适的水平,对于肿瘤的预防和提高放、化疗敏感性具有积极的作用.结论:自噬可以作为肿瘤治疗的潜在干预靶点,调节自噬能为肿瘤治疗研究提供新的策略.
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乳腺癌细胞株MDA-MB-231获得性放疗抵抗机制探讨
目的 探讨乳腺癌细胞株MDA-MB-231产生获得性放疗抵抗的可能机制.方法 采用CCK8及流式细胞术检测产生乳腺癌细胞株MDA-MB-231获得放疗抵抗能力后细胞增殖及细胞周期的变化,采用蛋白质印迹法检测放疗抵抗后相关信号通路蛋白的变化,初步探讨乳腺癌细胞产生放疗抵抗的可能机制.结果 CCK8法检测结果显示,第1天实验组吸光度值为0.305 7±0.013 1,明显高于对照组的0.277 8±0.011 8,差异无统计学意义,F=7.571,P=0.051;第2天实验组为0.401 7±0.048 0,明显高于对照组的0.289 0±0.020 9,差异有统计学意义,F=13.907,P=0.020;第4天实验组为0.635 7±0.026 1,明显高于对照组的0.434 2±0.080 6,差异有统计学意义,F=16.994,P=0.015;第6天实验组为1.5347±0.0391,显著高于对照组的1.075 7±0.036 8,差异有统计学意义,F=218.953,P＜0.001.提示231/RR10细胞株在获得放疗抵抗能力的同时,增殖能力也增强,差异有统计学意义,P＜0.05.流式细胞术检测结果显示,放疗抵抗细胞株中,G0～G1及S期的细胞比例减少,但差异无统计学意义,P值分别为0.083和0.165;Gz～M期的细胞比例明显增加,差异有统计学意义,P值分别为0.002和＜0.01.蛋白质印迹法检测结果显示,抑癌基因PTEN的表达明显减少,表皮生长因子的活化状态pEGFR的表达明显增加,AKT蛋白的表达水平无变化,而AKT磷酸化蛋白的表达明显增加.结论 乳腺癌细胞株MDA-MB-231中EGFR/AKT信号通路激活,促进细胞生长和生存,从而导致放疗抵抗的产生.这一信号通路可能由抑癌基因PTEN负性调控.
关键词： 乳腺癌 放疗抵抗 PTEN EGFR/AKT信号通路 细胞周期 -
EGFR表达与放疗抵抗的关系及西妥昔单抗用于直肠癌术前放疗增敏的研究进展
术前放疗是目前局部进展期直肠癌患者标准治疗方案,但放疗抵抗导致直肠癌放疗并不理想.研究显示,EGFR高表达与放疗抵抗密切相关,因此,EGFR通路阻断药物西妥昔单抗从机制上有潜在提高局部进展期直肠癌术前放疗效果的作用.自2006年以来共17项临床研究探讨了西妥昔单抗用于直肠癌术前放疗增敏的潜在价值,17项研究共纳入患者636例,西妥昔单抗主要联合氟尿嘧啶类化疗药物用于术前放疗增敏,其中有8项研究在此基础上加用奥沙利铂或伊立替康,结果显示636例患者中80例患者病理完全消失(总pCR 12.58％),加入奥沙利铂4项研究总共177例患者病理完全消失16例(总pCR9.04％),加入伊立替康137例患者中17例病理完全消失(总pCR 12.41％).因此加入西妥昔单抗并没有显著提高常规同步放化疗效果,原因在于西妥昔单抗与化疗药物作用机制不同,研究西妥昔单抗用于术前放疗增敏的分子筛选标志物及其与化疗结合的佳术前放化疗方案以充分发挥术前放疗效果是未来发展的重要方向.
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肿瘤干细胞的放化疗抵抗相关机制
肿瘤干细胞是潜伏在肿瘤细胞中的特殊亚群细胞,具有持续自我更新、多向分化潜能等干细胞特征.肿瘤干细胞是许多恶性肿瘤产生放化疗抵抗的重要原因,使肿瘤的临床治疗面临重大挑战.肿瘤干细胞可通过ATP酶结合盒转运蛋白、DNA损伤修复、细胞周期阻滞、细胞内减毒物质、凋亡抑制、上皮间充质转化、乏氧效应等分子机制逃避或衰减放射线、化疗药的杀伤效应,终导致肿瘤的复发、侵袭及远处转移.目前肿瘤被认为是一种干细胞疾病,深入了解肿瘤干细胞放化疗抵抗的相关机制,将为未来肿瘤的治疗开阔新思路.
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HIF-1α/β-catenin信号通路参与介导人前列腺癌放疗抵抗现象的实验观察
目的 探究缺氧诱导因子1 α(HIF-1α.)促使前列腺癌(PCa)放疗抵抗的作用机制.方法 应用人前列腺癌细胞LNCaP,分设3个组:未处理细胞(对照)组、HIF-1α过表达细胞(HIF-1α)组、HIF-1α过表达后进一步使用ShRNA敲低β-联蛋白(catenin)基因表达的细胞(ShRNA)组.体外放疗条件下,对比分析这3组细胞在增殖侵袭、周期分布以及DNA修复能力方面的差异;动物实验:应用3组细胞建立LNCaP原位瘤模型,并接受放射治疗,对比各组瘤体的生长趋势.上述所有试验用C4-2B细胞再重复一遍.结果 (1)HIF-1α转染能够诱导β-catenin核易位;(2)HIF-1α组细胞发生了典型的上皮细胞间质转化(EMT),细胞增殖和侵袭能力显著增强,这些变化在ShRNA组细胞中全部逆转;(3)与未处理细胞相比,HIF-1α组细胞接受体外射线辐照后,Sub-G1期分布显著减少、G0/G1期和S期分布明显增多、细胞克隆形成数量明显较多、DNA碎片数量明显较少,细胞周期调控蛋白的表达(p21、P-CDK1、P-Chk1、P-Chk2、P-Rb),细胞凋亡蛋白表达明显下降[半胱天冬酶(Caspase)-3、cleaved-Caspase-3、Caspase-7、cleaved-Caspase-7、cleaved-PARP-1),抗凋亡蛋白表达增加(Bcl-2、Bcl-xl),DSB标志蛋白表达下调(γH2AX),DNA修复蛋白表达显著增加(Ku70、Ku80、DNA-PKCs),这些变化在ShRNA组细胞中全部逆转;(4)动物实验结果表明:接受放疗后,HIF-1α组瘤体生长快、体积大、质量大,而ShRNA组瘤体对射线辐照的敏感性明显改善,瘤体体积显著缩小[(5.87E+ 07 ±8.58E +06) pho/sec与(7.15E+ 06±1.17E+06) pho/sec,P=0.000 3,21d-LNCaP;(380.8±75.7) mm3与(81.1±18.2)mm3,P＜ 0.000 1,21 d-C4-2B]、瘤体质量明显降低(0.36±0.05)g与(0.10 ±0.06) g,P =0.017 5,21 d-LNCaP;(0.65 ±0.14)g与(0.29 ±0.09) g,P=0.022 1,21 d-C4-2B).结论 HIF-1 α诱导β-catenin核易位,进而促使细胞DNA修复能力、增殖能力及抗凋亡能力增强,终导致PCa获得放疗抵抗特性.
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microRNAs在前列腺癌精准放疗中的研究进展
放射治疗(放疗)是前列腺癌(CaP)早期或进展期的一种非常重要的治疗手段,而放疗抵抗是当前放疗面临的主要挑战.研究放疗抵抗的机制和开发新的克服放疗抵抗的治疗方法具有非常重要的意义.在CaP患者中,microRNAs(miRNAs)通常异常表达,而放疗可以显著改变miRNAs表达水平.越来越多的证据表明miRNAs和肿瘤放疗抵抗密切相关.miRNAs调节放疗抵抗的作用机制非常复杂,其可能的作用机制包括DNA损伤反应、细胞周期检查点激活、凋亡和自噬、肿瘤干细胞、乏氧等.有研究结果显示,miRNAs具有作为CaP放疗预后生物标志物和治疗靶点的潜力.以miRNAs为靶点的新技术联合放疗有望克服CaP放疗抵抗,有助于实现精准放疗,给患者带来希望.
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基于生物信息学筛选乳腺癌放疗抵抗相关微小RNA的研究
目的 筛选乳腺癌放射治疗(放疗)抵抗相关微小RNA(miRNAs),为乳腺癌患者放疗抵抗的基础研究与临床应用研究提供实验基础.方法 从基因表达综合数据库(GEO)中下载乳腺癌放疗患者相关miRNAs微阵列数据集GSE 107743,利用GEO2R分析工具筛选放疗后局部复发患者的差异表达miRNAs,mirDIP数据库预测差异表达miRNAs的靶基因,DAVID数据库对靶基因分别进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.后采用实时荧光定量PCR在人乳腺癌细胞MCF-7中进行差异表达验证.结果 采用GEO2R分析工具筛选出9种与放疗抵抗相关的差异表达miRNAs,其中3种miRNAs(hsa-miR-600、hsa-miR-525-3p、hsa-miR-591)表达上调,6种miRNAs(hsa-miR-488-5p、hsa-miR-582-3p、hsa-miR-520h、hsa-miR-488-3p、hsa-miR-744-3p、hsa-miR-103b)表达下调.靶基因预测结果显示,9种差异表达miRNAs的潜在靶基因共134个.靶基因显著富集在细胞周期、细胞凋亡、干细胞分化等相关生物学过程(均P＜0.05)以及转化生长因子-β、磷脂酰肌醇3-激酶\蛋白激酶B信号通路等信号通路中(均P＜0.05).实时荧光定量PCR检测结果表明,6种miRNAs (hsa-miR-600、hsa-miR-525-3p、hsa-miR-591、hsa-miR488-5p、hsa-miR-582-3p、hsa-miR-520h)在经5 Gy 137Csγ射线辐照后的MCF-7细胞中表达差异改变与GEO2R分析结果完全一致.结论 利用生物信息学从乳腺癌放疗患者局部复发临床样本中筛选出的差异表达miRNAs可能与乳腺癌患者的放疗抵抗密切相关,有望成为放疗抵抗治疗的新靶点.
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miR-200b抑制鼻咽癌CNE-2细胞放疗抵抗的作用观察
目的 探讨miR-200b介导鼻咽癌放疗抵抗,揭示miR-200b作为抑癌基因作用.方法 Real-time PCR检测miR-200b在鼻咽癌细胞系中的含量;将miR-200b模拟物转染CNE-2,miR-200b抑制剂转染CNE-2R,采用MTS检测其对CNE-2细胞生长的影响.结果 miR-200b在CNE-2R细胞中表达下调.特异性miR-200b模拟物具有逆转CNE-2R细胞的辐射抗性作用,而转染miR-200b抑制剂可增强CNE-2细胞的辐射抗性.过表达miR-200b可抑制鼻咽癌细胞的生长.结论 miR-200b参与了鼻咽癌细胞的放射抵抗,miR-200b可能成为一种新的用于合理治疗鼻咽癌的治疗策略.
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肿瘤干细胞与放疗抵抗的研究进展
肿瘤放疗耐受和抵抗常常是导致某些肿瘤侵袭、转移和复发的重要原因之一.越来越多的研究表明,肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是肿瘤内一群具有干细胞特性的异质细胞,可以抵抗多种抗肿瘤治疗方法.CSCs通过DNA修复、调整细胞周期、清除活性氧和维持特定的肿瘤微环境等多种途径来逃避放射治疗对其的杀伤作用,其中涉及多种基因和信号通路.研究CSCs放疗抵抗机制,可以通过改进放疗技术或设计靶向治疗药物解除放疗抵抗效应.本文对CSCs放疗抵抗机制及提高放疗敏感性的相关研究进展进行综述.
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肿瘤干细胞(CSCs)放疗抵抗机制的研究进展
近年来越来越多的研究表明肿瘤治疗后复发的根源在于肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)的存在,它能抵抗各种治疗方法并终导致治疗失败.CSCs在放疗中的作用和意义也成为研究热点之一,其特殊的DNA损伤修复机制、和周围小生境相互依存的特殊关系及DNA损伤后其损伤修复信号通路的开放等都是肿瘤放疗抵抗和复发的根源.探明CSCs产生放疗抵抗的机制将为肿瘤治疗带来新的希望.
关键词： 肿瘤干细胞(CSCs) 放射治疗 放疗抵抗 -
特异性抑制乏氧诱导因子-1α表达的siRNA筛选
筛选有效抑制乏氧诱导因子-1α(HIF-1 α)表达的小干扰RNA (siRNA)序列,并观察其对细胞中HIF-1α表达的抑制作用.设计针对HIF-1 α的6对(siRNA1217,siRNA1612,siRNA2258,siRNA2752,siRNA3724,siRNA3168)及一条阴性对照siRNA(称为NC).在Lipofectamine 2 000介导下转染人鼻咽癌细胞系CNE2.同时采用RT-PCR法和Western blot方法检测细胞中HIF-1α含量,以β-actin蛋白做内参照.结果:Lipofectamin 2 000在2μL转染40 pmol/L时,能实现大转染效果.与其他各组相比,转染了siRNA3724,siRNA3168基因序列的人鼻咽癌细胞中,编码HIF-1α mRNA的含量明显减少.成功设计了针对HIF-1α的siRNA,并从中筛选出HIF-1 αsiRNA1612,siRNA3724,siRNA3168能够有效抑制人鼻咽癌表达,为肿瘤的放射治疗及其临床应用奠定了基础.
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ACSS2上调参与食管鳞癌细胞缺氧诱导的放疗抵抗
目的:研究乙酰辅酶A合成酶2(ACSS2)上调对食管鳞癌细胞缺氧诱导的放疗抵抗效应形成的影响及潜在的分子作用机制.方法:免疫组化及免疫荧光技术细胞共定位检测65例食管鳞癌患者组织切片中ACSS2和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达和活化水平;将食管鳞癌ECA-109细胞分为对照组、ACSS2 siRNA组、缺氧组和缺氧+ACSS2 siRNA组,利用克隆形成实验检测不同处理组细胞对不同照射剂量(0、2、4、6、8 Gy)的放射敏感性;选择8 Gy照射处理后,采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡,蛋白质印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3/caspase 3、 Bcl-2的表达及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、 p-mTOR、核糖体蛋白S6激酶(p70S6)等信号通路蛋白的表达. 结果:食管鳞癌病理切片中ACSS2高表达,细胞密集区域尤为明显,与p-mTOR呈显著正相关(r=0.707, P<0.01);细胞克隆实验表明缺氧组细胞的存活分数比对照组明显下降(P<0.01),放疗敏感性降低,下调ACSS2可以逆转这一趋势;缺氧环境诱导的ACSS2升高促进了ECA-109细胞Bcl-2表达上调、抑制了cleaved-caspase 3的表达,同时细胞凋亡率下降(P<0.01);在缺氧条件下,下调ACSS2可以抑制mTOR信号通路相关蛋白mTOR、 p-mTOR、p70S6的活化.结论:缺氧条件下的ACSS2累积通过活化mTOR通路促进放疗抵抗效应.
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MTDH促进头颈鳞癌细胞放疗抵抗的实验研究
目的 探讨星形胶质细胞上调基因1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1,又称MTDH)对头颈部鳞状细胞癌(简称头颈鳞癌)放疗抵抗的影响.方法 Western blotting检测放射线照射后头颈鳞癌细胞MTDH蛋白表达的改变.通过脂质体转染的MTDH cDNA和慢病毒介导的MTDH shRNA,分别在不同头颈鳞癌细胞中过表达和抑制MTDH,平板集落形成实验检测头颈鳞癌细胞放疗抵抗能力的改变,细胞免疫荧光染色检测DNA双链损伤指标γH2AX的表达.结果 MTDH在头颈鳞癌细胞中的表达随着放射性照射剂量的增加和时间的延长逐渐升高.在CNE-2细胞中过表达MTDH,其体外集落形成能力增强;相反,在Tu686细胞中抑制MTDH的表达,其体外集落形成能力减弱.同时,细胞免疫荧光显示Tu686细胞在MTDH抑制后,其DNA双链损伤指标γH2AX的表达增加,表明DNA双链损伤修复过程受阻.结论 MTDH能促进头颈鳞癌细胞放疗抵抗的形成,与其对DNA双链损伤修复的调控作用相关.
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骨桥蛋白和E-钙粘素与宫颈癌放疗抵抗的相关性
目的 探究骨桥蛋白(Osteopontin)和E-钙粘素(E-cadherin)及其联合检测对放疗抵抗及预后的意义.方法 回顾性分析132例初始放射治疗的局部进展期宫颈鳞癌(LACSCC)患者,将无进展生存期(PFS)＜36个月的患者(n=47)归为放疗抵抗组,PFS≥36个月的患者(n=85)归为放疗敏感组,使用治疗前石蜡包埋组织,采用免疫组织化学的方法检测Osteopontin及E-cadherin表达情况.结果 放疗抵抗组和放疗敏感组肿瘤组织中,Osteopontin高表达率分别占87.2％和30.6％,组间差异具有统计学意义(P=0.000);E-cadherin低表达率分别占72.3％和57.6％,组间差异不具有统计学意义(P=0.094);Osteopontin高表达且E-cadherin低表达表型分别占72.3％和18.8％,组间差异具有统计学意义(P=0.000).多因素Cox回归分析显示LACSCC的不良预测因素包括Osteopontin表达,Osteopontin高表达且E-cadherin低表达和肿瘤大小.Osteopontin高表达和Osteopontin高表达同时E-cadherin低表达的患者无进展生存期更短.结论 高表达Osteopontinhe和高表达Osteopontin同时低表达E-cadherin提示放疗抵抗及预后不良,联合检测Osteopontin和E-cadherin有望成为预测放疗疗效和患者预后的指标.
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鼻咽癌放疗抵抗的分子机制研究进展*
鼻咽癌（NPC）是我国南方及东南亚地区常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居头颈恶性肿瘤之首。放射治疗（简称放疗）是NPC的首选治疗方式，但放疗抵抗严重地影响NPC的放疗效果，所以开展NPC放疗抵抗的分子机制研究，以降低NPC放疗抵抗性、增强其放疗敏感性成为目前医学工作者研究的重点。近年来，学者们从基因组学、蛋白质组学和micro RNA组学等方面对NPC放疗抵抗产生的原因及分子机制进行大量研究，该文就其研究进展予以综述。
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MiR-183抑制胶质母细胞瘤放射抵抗等恶性行为
目的:探讨miR-183对胶质母细胞瘤放射抵抗等恶性行为的调控作用及其机制.方法:利用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测15例胶质母细胞瘤及瘤周正常脑组织及4株胶质母细胞瘤细胞株(U87、U251、M059J、M059K)中miR-183表达水平;采用阳离子脂质体法瞬时转染构建miR-183过表达的细胞体系;应用MTT细胞增殖实验检测细胞增殖能力;利用平板克隆形成实验检测辐射敏感性;采用划痕实验和Transwell实验检测miR-183对胶质母细胞瘤细胞侵袭及迁移能力的调控作用;利用蛋白印迹(Western blot)实验检测miR-183对上皮间质转化(EMT)相关基因表达水平的调控作用.结果:miR183在胶质母细胞瘤及胶质母细胞瘤细胞株中低表达.随后通过构建过表达miR-183的细胞系,发现miR-183高表达状态的胶质母细胞瘤细胞对射线的敏感程度增加,增殖能力、迁移能力和侵袭能力都有所下降,而且上调了上皮细胞表型相关E-钙黏蛋白的表达,下调了间质细胞表型相关波形蛋白的表达.结论:miR-183可能通过抑制EMT过程从而影响胶质母细胞瘤的恶性行为.
