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高迁移率族蛋白1通过诱导线粒体分裂促进成纤维样滑膜细胞迁移
目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对成纤维样滑膜细胞(FLS)迁移的影响及线粒体分裂在其中的作用.方法:膝关节液分别取自RA患者(RA组)及正常人(normal组).ELISA检测关节液中HMGB1水平.FLS分离自正常人膝关节滑膜组织,用膝关节液或者重组HMGB1刺激FLS,观察其迁移和线粒体分裂的变化.结果:RA组膝关节液中HMGB1水平较normal组明显升高,并且RA组膝关节液刺激的FLS细胞迁移和线粒体分裂较normal组明显增多.重组HMGB1可促进FLS细胞迁移及线粒体分裂.而线粒体分裂蛋白DRP1的抑制剂(Mdivi)可以抑制HMGB1诱导的线粒体分裂和FLS细胞迁移.结论:RA患者膝关节液中高水平的HMGB1可以通过诱导线粒体分裂促进成纤维样滑膜细胞迁移.
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高迁移率族蛋白1(HMGB1)在慢性疼痛中的研究进展
研究表明高迁移率族蛋白1在慢性疼痛中发挥重要作用,其存在多种相关分子机制.为进一步明确慢性疼痛的发病机理,寻求更多有效的药物治疗靶点,本文将就高迁移率族蛋白1参与慢性炎性痛,神经病理性痛及其他慢性疼痛的相关信号通路、信号分子进行探讨.
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HMGB1在慢性阻塞性肺疾病患者中的水平变化及相关性分析
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive plumonary disease,COPD)患者急性加重期治疗前后血清高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)的水平变化及其与肺功能的相关性.方法 选取2014年10月-2015年6月COPD急性加重期患者72例,依据肺功能将其分为两亚组:GOLD 1、2级患者36例,GOLD 3级患者36例,另选取对照组36例,采用ELISA法分别测定所有对象的血清HMGB1水平,并行肺功能检测,计量资料比较采用t检验,相关关系采用Pearson相关性分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 COPD急性加重患者治疗前及治疗后血清HMGB1表达水平均明显高于对照组[(5.47±1.69)、(3.41±0.99)、(1.95±0.16)μg/L],对比差异均有统计学意义(均P＜0.05).GOLD 3级COPD患者治疗前及治疗后血清HMGB1表达水平明显高于GOLD 1、2级COPD患者治疗前及治疗后[(6.84±1.21)、(4.11±0.70)、(4.17±0.85)、(2.66±0.32)μg/L],对比差异均有统计学意义(均P＜0.05).COPD患者血清HMGB1水平与FEV1％pred呈显著负相关(r=-0.749,P＜0.05).结论 血清HMGB1在COPD患者中表达水平明显升高,且与病情严重程度呈显著相关,提示检测血清HMGB1对COPD病情严重程度的判断有一定意义.
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HMGB-1在肝缺血再灌注损伤中的作用及其与细胞凋亡的关系
目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB-1)在临床肝脏手术缺血再灌注损伤中的作用及其与肝细胞凋亡的关系.方法:收集行肝切除手术治疗的肝癌患者40例,均采用Pringle法阻断肝门,分别于肝门阻断前、肝门阻断开放前、术毕关腹时取患者的肝组织,采用RT-PCR法、免疫组织化学法分别检测肝组织中HMGB-1 RNA、蛋白的表达情况,采用TUNEL法检测肝组织细胞的凋亡情况.结果:术毕关腹时肝组织中HMGB-1 RNA、蛋白表达均显著高于肝门阻断开放时、肝门阻断前(P＜0.05),肝门阻断开放时显著高于肝门阻断前(P＜0.05).术毕关腹时肝组织中细胞凋亡指数显著低于肝门阻断开放前、肝门阻断前(P＜0.05),肝门阻断开放时显著低于肝门阻断前(P＜0.05).HMGB-1 RNA、蛋白表达与肝癌患者的肝组织细胞凋亡指数均呈负相关(P＜0.05).结论:肝脏缺血再灌注早期,肝组织中HMGB-1RNA、蛋白表达水平显著增高,提示其与肝脏缺血再灌注损伤具有一定的关系,同时其水平增高具有一定的抑制细胞凋亡的作用.
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血清IL-26、HMGB1与带状疱疹疼痛相关性研究
目的: 探讨血清IL-26和高迁移率族蛋白1(HMGB1)与急性带状疱疹疼痛(AHP)和后遗神经痛(PHN)之间的关系.方法: ELISA方法检测带状疱疹患者57例(AHP 40例,PHN17例)和健康对照组30例血清中IL-26、HMGB1的水平.结果: AHP 组和PHN组IL-26平均水平分别为(15.97±2.48)pg/mL、(13.90±3.86)pg/mL,高于对照组的(8.00±0.38)pg/mL,有统计学差异(P<0.05);PHN组HMGB1平均水平为(7.91± 9.29)ng/mL,明显高于AHP 组(3.80± 6.30)ng/mL和健康对照组(4.03±5.45)ng/mL(P<0.05).AHP 组中疼痛VAS评分与血清IL-26浓度有相关性(r=-0.435,P<0.05),与HMGB1无相关性(r=0.109,P>0.05).PHN组中疼痛VAS评分与IL-26和HMGB1水平均无相关性(P>0.05).结论: IL-26可能与AHP的发病机制有关.
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癫痫患儿血清HMGB1、IL-2、INF-γ 水平变化及其意义
目的 观察儿童癫痫患者血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)、白细胞介素1(IL-2)、干扰素-γ(INF-γ)变化,并探讨其意义.方法 选择10例儿童癫痫患者为观察组,30例健康儿童为对照组.观察组癫痫频发29例,持续状态22例,非频发或持续状态38例.采用双抗体酶联免疫吸附法检测两组血清HMGB1、IL-2及INF-γ水平.结果 观察组血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平高于对照组(P均<0.05).观察组癫痫频发、处于持续状态患儿血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平高于非频发或持续状态患儿(P均<0.05),癫痫频发患儿血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平与持续状态患儿相比,P均>0.05.结论 癫痫患儿血清HMGB1、IL-2、INF-γ水平升高.检测HMGB1、IL-2、INF-γ可能有助于儿童癫痫的诊断及病情评估.
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急性胰腺炎患者血清HMGB1、TLR4、TLR9、DAO水平变化及意义
目的 观察急性胰腺炎(AP)患者血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)、TOLL样受体(TLR)4、TLR9、二胺氧化酶(DAO)水平变化,并探讨其临床意义.方法 选择起病24h内AP患者59例,根据病情分为轻型AP(MAP)组26例、中度重症AP(MSAP)组17例、重症AP (SAP)组16例,同期选择健康体检者20例作为对照组.于入院24、48、72 h采用双抗体夹心免疫发光法测定血清HMGB1、TLR4、TLR9、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、DAO.结果 入院24、48 h,AP各组血清HMGB1、TLR4、TLR9、DAO、TNF-α、IL-6水平均高于对照组(P均＜0.05);入院72 h,MAP组血清HMGB1、TLR4、TLR9、DAO水平与对照组比较差异无统计学意义(P均＞0.05),但MSAP组、SAP组以上指标仍高于对照组(P均＜0.05).AP各组血清TNF-α、IL-6水平在入院24 h达峰值,血清HMGB1、TLR4、TLR9、DAO水平在入院48 h达峰值.SAP组各时间点血清HMGB1、TLR4、TLR9、TNF-α、IL-6、DAO水平均高于MSAP组与MAP组(P均＜0.05).AP患者血清HMGB1水平与DAO呈正相关(r=0.942,P＜0.05).结论 血清HMGB1、TLR4、TLR9、DAO水平可反映AP患者病情变化,HMGB1与DAO可能协同参与肠黏膜屏障损伤.
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沉默HMGB1基因对非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的影响及作用机制
目的 探讨沉默高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因对非小细胞肺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制.方法 取传3代非小细胞肺癌A549细胞,随机分为si-HMGB1组、阴性对照组、空白组.si-HMGB1组、阴性对照组分别转染HMGB1 siRNA序列、阴性对照siRNA序列,空白组不予转染.各组继续孵育72 h,检测HMGB1 mRNA表达.收集各组孵育72 h细胞,采用Western blotting法检测EMT相关蛋白(E-cadherin、VDR、N-cadherin、Vimentin)和TGF-β/Smad信号通路相关蛋白(Snail、NF-κB p65、p-NF-κB p65)表达.结果 si-HMGB1组HMGB1 mRNA相对表达量明显低于阴性对照组和空白组(P均＜0.05),而阴性对照组与空白组比较P＞0.05.si-HMGB1组E-cadherin、VDR蛋白相对表达量明显高于阴性对照组和空白组(P均＜0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量明显低于阴性对照组和空白组(P均＜0.05),而阴性对照组与空白组各EMT相关蛋白相对表达量比较P均＞0.05.si-HMGB1组Snail、p-NF-κB p65蛋白相对表达量明显低于阴性对照组和空白组(P均＜0.05),而阴性对照组与空白组比较P均＞0.05.三组间NF-κB p65蛋白相对表达量比较P均＞0.05.结论 沉默HMGB1基因能够逆转非小细胞肺癌细胞EMT,其机制可能与阻断Snail/NF-κB信号通路有关.
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miR-451对心肌细胞缺氧再复氧损伤的保护作用及其机制
目的探讨miR-451对心肌细胞缺氧再复氧损伤的保护作用及其心肌细胞高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达变化.方法 培养乳鼠心室肌细胞,制备缺氧再复氧模型,并随机分为对照组(Con组)、缺氧再复氧组(AR组)、AR+Ad-GFP组(空病毒组)、AR+Ad-miR-451组(miR-451上调组)、AR+Ad-asmiR-451组(miR-451下调组).检测五组心肌细胞存活率、凋亡率以及HMGB1 mRNA、HMGB1和激活细胞凋亡蛋白酶3(caspase-3)表达水平.利用荧光素酶检测法在HEK293细胞中进一步确认miR-451对HMGB1作用靶点.结果 与Con组比较,AR组、空病毒组、miR-451上调组、miR-451下调组心肌细胞存活率降低、凋亡率增高,心肌细胞HMGB1 mRNA、HMGB1、激活caspase-3表达增高(P均< 0.05).与AR组比较,Ad-miR-451组心肌细胞存活率增高、凋亡率降低,心肌细胞HMGB1 mRNA、HMGB1、激活caspase-3表达降低(P均< 0.05).miR-451识别HMGB1 mRNA的3′端非编码区并以此为作用靶点抑制HMGB1表达.结论 上调miR-451对心肌细胞缺氧再复氧损伤有保护作用,此作用是通过miR-451抑制HMGB1 mRNA表达而实现的.
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病毒性肝炎患者高迁移率族蛋白1的水平及其临床意义
目的 研究晚期炎症介质高迁移率族蛋白1(HMGB1)在慢性肝炎及重型肝炎中的临床意义.方法 选择慢性乙型病毒性肝炎患者56例、重型乙型病毒性肝炎患者28例、健康对照者20例,应用ELISA法检测血清HMGB1水平;同时检测相关生化指标、肝纤维化指标、凝血酶原时间(PT).结果 重型肝炎组HMGB1水平高于慢性肝炎组及正常对照组(P<0.01),且慢性肝炎组高于正常对照组(P<0.01);慢性肝炎组HMGB1水平随病情严重程度增加而增高(P<0.01).HMGB1水平与谷丙转氨酶、总胆红素、天冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶、透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原、PT水平呈正相关,与白蛋白水平呈负相关.结论 血清HMGB1含量可作为评价慢性病毒性肝炎病情严重程度的可靠指标.
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HMGB1、Th17/Treg在慢性阻塞性肺疾病中作用的研究进展
慢性阻塞性肺疾病是一类免疫相关性疾病,自身免疫体系的调节异常是其发生的基础,T细胞介导的免疫应答参与其发生、发展.辅助性T细胞17(Th17)以及调节性T细胞(Treg)为CD4+T细胞的亚群,二者彼此拮抗,但又处于动态平衡.平衡状态的保持可使机体免疫系统正常发挥功能;出现失衡则可能导致各类免疫系统疾病的发生.高迁移率族蛋白1(HMGB1)是一类拥有促炎效用的核内非组蛋白,慢性阻塞性肺疾病患者痰液及血液中HMGB1表达均明显升高.目前慢性阻塞性肺疾病免疫发病机制的研究热点主要涉及Th17、Treg及HMGB1.
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HMGB1和S100对矽肺模型小鼠肺成纤维细胞增殖影响
目的 初步探讨HMGB1、S100对矽肺模型小鼠肺成纤维细胞增殖的影响.方法 模型制备:染尘采用气管切开染毒的方式注入SiO2悬液,剂量为200 mg/Kg,每只注入量为0.1 mL.对照组在相同条件下注入生理盐水0.1 mL.指标检测:荧光免疫细胞化学法检测肺成纤维细胞内HMGB1和S100的表达;CCK8法检测外源性HMGB1和S100干预前后成纤维细胞增殖情况.结果 HMGB1表达量随着染尘时间的延长逐渐升高(P＜0.05);S100表达量在3d与正常对照组无差别,其余时段光密度值逐渐升高(P＜0.05);三种干预方式的增殖快慢依次为:HMGB1干预＞不加干预＞S100干预;时间因素(3、7、14、21、42 d)对增殖影响也不同;二者存在交互作用.结论 HMGB1和S100可能参与矽肺炎症的形成;外源性HMGB1促进矽肺模型小鼠肺成纤维细胞增殖;而外源性S100则抑制其增殖.
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双抗体夹心酶联免疫吸附试验法在肺结核患者血清HMGB1水平检测中的应用
目的 应用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺结核患者抗结核治疗前后血高迁移率族蛋白1(HMGB1)水平变化研究,以探讨其临床诊断意义.方法 采用ELISA法检测患者血清HMGB1的水平,同时测定活动组患者在抗结核治疗前、治疗后1个月、治疗后3个月及30例好转组的血清HMGB1水平.结果 活动组患者比对照组、稳定组的血清HMGB1浓度水平升高,差异具有统计学意义(P＜0.05),稳定组患者比对照组的血清HMGB1浓度水平升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);治疗后1个月、治疗后3个月的血清HMGB1浓度水平比治疗前均有所降低,差异无统计学意义(P＞0.05),但其中治疗3个月后有30例活动性肺结核患者病情好转(好转组)比治疗前显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 动态监测肺结核患者血清HMGB1水平,对活动性肺结核的辅助诊断及疗效观察有重要意义.
关键词： 双抗体夹心酶联免疫吸附试验法 肺结核 活动性 高迁移率族蛋白1 -
高迁移率族蛋白1在乙型重型肝炎患者中的表达水平及其临床意义
目的 探讨血清高迁移率族蛋白1(high mobility group-box protein 1,HMGB1)在重型肝炎患者中的表达水平及其临床意义.方法 对32例乙型重型肝炎患者、22例慢乙肝初治患者、10例急性乙肝患者血清HMGB1水平进行检测分析,与16名健康人进行对照研究,分析其与患者肝功能生物化学指标的相关性.结果 重型肝炎患者血清HMGB1水平高于健康人,差异具有统计学意义(P＜0.05),重型肝炎组与慢乙肝初治组、重型肝炎组与急性乙肝组、慢乙肝初治组与急性乙肝组、慢性乙肝组与正常人组、急性乙肝与正常人组均无统计学意义(P＞0.05),重型肝炎患者血清HMGB1水平与ALT水平呈正相关,差异具有统计学意义(r=0.942,P＜0.05).结论 重型肝炎患者血清HMGB1水平较正常人高,可能成为评价重型肝炎的一个指标,这可能具有一定的临床意义.
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甘草甜素通过抑制癫痫幼鼠高迁移率族蛋白1减轻神经元损伤的研究
目的 探讨甘草甜素(GL)预处理对幼鼠癫痫模型急性期海马组织、血清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达水平及慢性期海马CA1区、CA3区神经元核特异蛋白(Neu-N)表达的影响.方法 52只21日龄SD大鼠按随机数字表法分为对照组(12只)、模型Ⅰ组(16只)、模型Ⅱ组(24只).模型Ⅰ组用海人酸(KA)诱导癫痫发作,模型Ⅱ组在用KA前30 min腹腔注射GL,模型Ⅰ组根据观察时间点不同分为3h、12 h、24h、7d4个亚组,模型Ⅱ组根据GL不同剂量分为10 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg 3个亚组,每个亚组3只.行为学表现按照Racine评分量表进行评分,实时荧光定量PCR及Western blot检测急性海马区HMGB1 mRNA及蛋白的表达,ELISA检测血清中HMGB1蛋白的表达,免疫组织化学检测慢性期(7 d)海马Neu-N的表达.结果 模型Ⅱ组与模型Ⅰ组比较,癫痫发作时间明显延长[(24.08±1.98) min比(33.39±2.66) min],差异有统计学意义(t=9.231,P＜0.05);模型Ⅰ组与对照组比较,随着观察时间(3h、12 h、24h)的延长,HMGB1的基因表达升高,在12h时达到峰值,差异有统计学意义(H=10.532,P＜0.05),HMGB1的蛋白表达改变不明显,差异无统计学意义(H=5.227,P＞0.05),血清中HMGB1水平升高,其中在12 h时升高明显,差异有统计学意义(H=6.897,P＜0.05);在12 h时间点,模型Ⅱ组与模型Ⅰ组比较,HMGB1的基因表达降低(H=10.721,P＜0.05)(100 mg/kg组明显),血清中HMGB1的水平降低(H=6.967,P＜0.05)(100 mg/kg组明显);在7d时间点,模型Ⅰ组与对照组比较,海马区神经元丢失减少(P＜0.05),模型Ⅱ组与模型Ⅰ组比较,海马区神经元的丢失减少(P＜0.05)(CA1区100 mg/kg组明显,CA3区50 mg/kg明显).结论 在幼鼠的颞叶癫痫模型中,GL可能通过抑制HMGB1基因的合成及释放,降低胞外HMGB1水平,抑制炎性反应的发生,从而减少神经元的丢失,发挥一定的神经保护作用.
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脂多糖预处理对癫痫幼鼠Toll样受体4/高迁移率族蛋白1基因表达及海马硬化的影响
目的 探讨脂多糖(LPS)预处理对癫痫幼鼠Toll样受体4/高迁移率族蛋白1(TLR4/HMGB1)基因表达及慢性期海马星形胶质细胞增生的影响.方法 将出生21 d的SD大鼠随机分为对照组、模型Ⅰ组和模型Ⅱ组,模型Ⅰ组用海人酸(KA)诱导癫痫发作,模型Ⅱ组在应用KA前2h腹腔注射LPS.观察幼鼠癫痫行为学表现并评分,采用荧光定量PCR检测癫痫持续状态(SE)后3h和24 h各组大鼠海马TLR4和HMGB1基因的表达,应用免疫组织化学观察SE后21 d各组大鼠海马星形胶质细胞的增生,检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况.结果 SE后3h模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马TLR4的基因表达均显著多于对照组,差异均有统计学意义(t =4.806、4.954,P均＜0.05);模型Ⅱ组显著多于模型Ⅰ组,差异有统计学意义(t=2.362,P＜0.05).SE后24 h模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马TLR4的基因表达均显著多于对照组,差异均有统计学意义(t=3.924、3.792,P均＜0.05);模型Ⅱ组与模型Ⅰ组比较差异无统计学意义(t=0.589,P＞0.05).SE后3h模型Ⅰ组、模型Ⅱ组HMGB1基因表达较对照组显著增加,差异均有统计学意义(t=3.626、5.255,P均＜0.05),但2个模型组比较差异无统计学意义(t=0.569,P＞0.05);SE后24h模型Ⅰ组、模型Ⅱ组比对照组显著增加,差异均有统计学意义(t=4.046、2.836,P均＜0.05),2个模型组比较差异无统计学意义(t=0.691,P＞0.05).慢性期海马CA1、CA3区GFAP阳性细胞数在对照组仅有少量表达,在模型Ⅰ组与模型Ⅱ组表达量均显著增多.结论 幼年大鼠癫痫急性期海马TLR4/HMGB1基因表达增加,LPS预处理可增加TLR4基因的表达,并导致慢性期海马星形胶质细胞增生.
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高迁移率族蛋白1在阿尔兹海默病患者血清和脑脊液中的表达
目的 探讨高迁移率族蛋白1 (High-Mobility Group Box 1,HMGB1)在阿尔兹海默病患者血清和脑脊液中的表达水平.方法 收集2014-06-2015-11在本院就诊的16例阿尔兹海默病患者的血清和脑脊液标本,另选取16例健康体检人员的血清和脑脊液作对照,采用HMGB1抗体试剂盒检测患者血清和脑脊液中HMGB1的表达量.结果 与正常对照组相比,阿尔兹海默病患者血清中HMGB1的表达量(0.42±0.12)显著高于正常对照组(0.15±0.05)(P＜0.001),Spearman相关分析显示血清中HMGB1的表达量与阿尔兹海默病患者的MMSE评分存在显著负相关性(r2=0.48,P＜0.001).但阿尔兹海默病患者脑脊液中HMGB1的表达量(0.18±0.17)与正常对照组(0.14±0.07)无显著差别(P＞0.05).结论 HMGB1在阿尔兹海默病患者血清中的表达量显著升高,有可能对阿尔兹海默病的早期诊断和治疗具有重要临床意义.
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腹腔注射脂多糖对幼鼠癫痫发作及海马TLR4/HMGB1/P-IκB-α表达的影响
目的 探讨脂多糖(LPS)预处理对幼鼠癫痫发作及海马炎症介质Toll样受体4/高迁移率族蛋白1/磷酸化核因子抑制蛋白α(T L R4/H M GB1/P-IκB-α)表达的影响.方法 出生21 d的SD鼠随机分为生理盐水组(对照组),模型Ⅰ组和模型Ⅱ组,模型Ⅰ组采用海人酸(KA)诱导癫痫发作,模型Ⅱ组在应用KA前2 h腹腔注射LPS,观察幼鼠癫痫发作的行为学表现,荧光定量PCR检测癫痫持续状态(SE)后3 h和24 h各组海马TLR4和HMGB1基因的表达,Westernblot法检测SE后3 h、24 h各组海马TLR4、HMGB1、P-IκB-α蛋白的表达.结果 与对照组相比:模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马TLR4基因在SE后3 h表达均显著增加(t=4.806,P<0.05;t=4.954,P<0.05),S E后24 h也显著增加(t=3.924,P<0.05;t=3.792,P<0.05),模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马TLR4蛋白表达在SE后3 h均显著增加(t=7.804,P<0.05;t=8.385,P<0.05),SE后24 h也显著增加(t=4.256,P<0.05;t=4.262,P<0.05);模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马HMGB1基因在SE后3 h表达均显著增加(t=3.626,P<0.05;t=5.255,P<0.05),SE后24 h也显著增加(t=4.046,P<0.05;t=2.836,P<0.05),模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马HMGB1蛋白在SE后3 h均无显著性增加(t=0.389,P>0.05;t=0.213,P>0.05),SE后24 h也无显著性增加(t=0.106,P>0.05;t=0.279,P>0.05).模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马P-IκB-α蛋白表达在SE后3 h均显著增加(t=4.383,P<0.05;t=6.627,P<0.05),SE后24 h也显著增加(t=14.521,P<0.05;t=19.458,P<0.05).模型Ⅱ组与模型Ⅰ组相比,LPS预处理可显著增加海马TLR4基因在SE后3 h的水平(t=2.362,P<0.05),及SE后3 h TLR4蛋白表达(t=4.284,P<0.05);且显著增加SE后3 h、24 h P-IκB-α蛋白表达(t=4.249,P<0.05;t=9.120,P<0.05);但对SE后3 h、24 h HMGB1基因水平无显著性影响(t=0.569,P>0.05;t=0.691,P>0.05),对SE后3 h、24 h HMGB1蛋白表达也无显著性影响(t=0.168,P>0.05;t=0.385,P>0.05).结论 LPS预处理加重幼鼠癫痫发作,使TLR4/P-IκB-α表达升高,对HMGB1表达无显著改变.
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慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响及机制研究
目的 探讨慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响并对其机制进行研究.方法 取对数生长期的Y79细胞,将转染miR-34a的慢病毒载体、转染高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)载体、共转染miR-34a+HMGB1的慢病毒载体及培养液接种至Y79细胞构建转染miR-34a细胞系.按照接种载体分组,将Y79细胞株分为4组,分别为转染miR-34a组、转染HMGB1组、共转染miR-34a+HMGB1组及阴性对照组.用qRT-PCR检测miR-34a的表达,采用Capase3检测试剂盒检测Caspase3活性.采用流式细胞仪及单丹磺酰尸胺(monodansyl cadaverin,MDC)试剂盒在488 nm荧光下检测MDC荧光率,利用透射电子显微镜观察自噬超微结构.结果 miR-34a转染结果显示,转染miR-34a组miR-34a的相对表达量(2.04 ± 0.46)显著高于阴性对照组(1.03 ± 0.21)(P＜0.05),共转染miR-34a+HMGB1组的HMGB1的相对表达量(0.42 ± 0.08)显著低于转染HMGB1组(1.08 ± 0.16),差异有统计学意义(P＜0.05).Caspase3活性测试显示,转染miR-34a组Caspase3活性(10.75 ± 2.87)明显高于阴性对照组(3.48 ± 0.74),转染HMGB1组Caspase3活性(2.46 ± 0.94)低于共转染miR-34a+HMGB1组(6.21 ± 1.74),差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示,转染miR-34a组MDC阳性率(56.94%)明显高于阴性对照组(2.15%), 共转染miR-34a+HMGB1组的MDC阳性率(43.11%)明显高于转染HMGB1组(10.32%)(P＜0.05).透射电子显微镜观察自噬超微结构显示,阴性对照组无明显改变,共转染miR-34a+HMGB1组可见Y79细胞双层膜结构,转染miR-34a组可见自噬溶酶体结构.结论 miR-34a促进视网膜母细胞瘤的自噬凋亡,其机制可能为抑制HMGB1的表达.
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子痫前期患者胎盘和母血中高迁移率族蛋白1及TLR4的表达
目的:探讨高迁移率族蛋白(HMGB)1和Toll样受体(TLR)4与子痫前期的关系.方法:选取60例子痫前期患者(其中轻度30例,重度30例)作为研究对象,以30例正常晚孕妇女作为正常对照,采用RT-PCR及免疫组化法测定胎盘组织中HMGB1及TLR4 mRNA和蛋白的表达,ELISA法测定母血血浆中HMGB1和TLR4蛋白水平.结果:HMGB1主要定位于滋养细胞的胞质中,TLR4主要定位于胎盘合体滋养细胞的胞膜及胞质中.3组胎盘组织中HMGB1、TLR4 mRNA和蛋白的表达水平、母血中2种蛋白的水平差异均有统计学意义(F=79.143、35.155、6.030、10.080、12.493和11.856,P均<0.05);轻、重度子痫前期患者胎盘组织中HMGB1及TLR4 mRNA和蛋白的表达水平、母血中HMGB1和TLR4蛋白水平均高于正常晚孕妇女(P<0.05),但轻、重度子痫前期组之间差异无统计学意义(P<0.05).子痫前期患者胎盘组织中HMGB1与TLR4 mRNA相对表达量、母血中2个蛋白的表达水平呈正相关(r分别为0.862和0.783,P<0.001),胎盘组织中2个蛋白的表达亦呈正相关(rs=0.825,P<0.001).结论:HMGB1和TLR4表达增高与子痫前期发病密切相关,可能是子痫前期的发病机制之一.
