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珠子参对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制和诱导分化的研究
目的:观察珠子参对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制和诱导分化作用.方法:采用HL-60细胞株体外培养,MTT法观察不同作用时间的直接细胞毒作用;细胞涂片观察细胞形态学改变;试剂盒检测酸性磷酸酶(ACP)含量.结果:珠子参血清和珠子参煎液均有明显的细胞毒作用,72 h时抑制率分别为31.27%、34.23%,与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用后,达72.9%、75.22%.作用72 h后ACP活性高于对照组,分别为13.6107、16.0122(U/gprot.min)(P＜0.01),细胞形态学观察以中幼粒及晚幼粒为主,分别占36.8%、75.8%,向成熟细胞方向分化.结论:珠子参在体外对HL-60细胞株有细胞毒作用,且能提高5-FU的敏感性而与化疗药物起协同作用;珠子参有诱导HL-60细胞分化的功能.
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定清片对人白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究定清片对人白血病HL-60细胞增殖的影响及其作用机制.方法 制备定清片含药血清,并以不同浓度含药血清体外干预培养HL-60细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞术检测细胞周期及凋亡率.结果 不同浓度定清片(5％、10％、20％)作用于HL-60细胞,均能抑制细胞生长,其抑制作用随药物浓度增加呈递增趋势,相同浓度组24 h、48 h、72 h抑制率递增.流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,与正常对照组比较,定清片组G1期细胞停滞率及凋亡率明显升高,且药物浓度越高,G1期细胞停滞率和凋亡率越高.结论 定清片能抑制人白血病HL-60细胞增殖,其作用机制可能与影响细胞周期和诱导细胞凋亡相关.
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"金龙胶囊"抑制HL-60细胞生长并诱导细胞凋亡
目的:研究中药金龙胶囊冻干粉(Jin Long Capsules,简称JLC)对人白血病细胞的作用及其机制.方法:应用台盼兰拒染法观察0.01mg/ml、0.02mg/ml、0.04mg/ml JLC对HL-60细胞的抑制作用,光镜及透射电镜观察细胞结构变化,DNA电泳、流式细胞术等检测细胞凋亡.结果:1.JLC可抑制HL-60细胞的生长,这种作用呈剂量和时间依赖性;2.JLC作用后细胞出现典型的凋亡形态学改变,DNA片段化,流式细胞仪可检出亚G1期细胞;3.JLC作用后细胞阻滞于G0/C1期,S期细胞减少.结论:金龙胶囊冻干粉对白血病细胞有诱导凋亡作用,主要作用于S期.
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雄黄纳米微粒对于白血病细胞的诱导凋亡及坏死作用
目的:考察雄黄纳米微粒对于HL-60和K562细胞的增殖抑制作用与诱导凋亡及坏死作用,并初步探寻表现药理活性的化学物种.方法:采用"溶剂接力"法制备雄黄纳米微粒悬浮液,应用MTT法检测雄黄纳米微粒对HL-60和K562细胞的增殖抑制作用,通过Annexin V-PI双染流式细胞术和细胞形态学观察检测细胞凋亡和坏死,并以H3AsO3(As2O3在该溶液中的主要存在形式)作为阳性对照.结果:雄黄纳米微粒的平均粒径为159.0 nm.MIT实验结果显示,该制剂对于这2种细胞系均有明显的增殖抑制作用.双染实验表明,雄黄纳米微粒可诱导这2种细胞凋亡和坏死,此结果得到形态学观察的进一步证实.结论:雄黄纳米微粒对于HL-60和562这2种细胞系均具有诱导凋亡和坏死的双重作用,既含有As-0又含有As-S键的硫代亚砷酸盐可能是表现药理活性的主要化学物种之一.
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不同寄主红花桑寄生总黄酮提取物抗白血病细胞株HL-60的研究
目的:比较不同寄主来源的红花桑寄生总黄酮提取物体外抗肿瘤效果.方法:用80%乙醇提取、聚酰胺柱层析分离了从寄主分别为夹竹桃、桑树、无患子和桂花的红花桑寄生总黄酮,硝酸铝显色法测定其中的黄酮含量;MTT法分析不同寄主来源的红花桑寄生总黄酮提取物体外对人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制效果;AO/EB荧光染色观察和DNA片段化分析检测了寄主为夹竹桃的红花桑寄生总黄酮提取物对HL-60细胞凋亡的诱导,流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期分布.结果:寄主为夹竹桃的红花桑寄生总黄酮提取物对HL-60细胞增殖有很强的抑制作用,作用48 h的[C50值为0.60 nag·L-1,桑树寄生的效果次之,IC50值为2.49 mg·L-1,无患子寄生IC50值为83.89 mg·L-1,桂花寄生在检测的浓度范围内基本无抑制作用;夹竹桃寄生总黄酮提取物通过阻滞HL-60细胞周期于G0-G1期和诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用.结论:红花桑寄生总黄酮提取物抗肿瘤效果与其寄主相关,以寄主为夹竹桃者效果好.
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雄黄纳米微粒对人白血病细胞株HL-60的诱导分化作用
目的:探讨雄黄(As4S4)纳米微粒对于人急性早幼粒白血病细胞HL-60的抑制增殖和诱导分化作用.方法:采用MTT法观察低浓度雄黄对HL-60细胞增殖的影响,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,硝基四氮唑蓝(NBT)还原反应和流式细胞术抗原检测等鉴定细胞的分化.结果:细胞经雄黄处理后呈现明显的分化形态.经0.25～1.0μmol·L-1雄黄作用24 h后,NBT阳性率升高.用0.50μmol·L-1雄黄处理48 h,细胞表面分化抗原CD11b表达升高,细胞周期阻滞于G1期.结论:低浓度雄黄对HL-60细胞具有诱导分化作用.
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慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响
本研究旨在探讨慢病毒介导的CAV1过表达对HL-60细胞增殖与凋亡的影响.构建慢病毒重组表达载体pcDNA-EF1-CAV1,并与pPACK包装质粒混合物共转染至293TN细胞后,收集病毒液感染HL-60细胞,使CAV1基因在细胞中稳定转染并高表达.采用Western blot方法评价转染后HL-60 CAV1蛋白表达情况.采用CCK-8法、流式细胞术分别检测转染前后HL_60细胞的增殖活性和凋亡情况.结果表明:PCR阳性克隆筛选及核苷酸测序结果证实CAV1基因正确插入表达载体pcDNA-EF1-GFP中.重组慢病毒颗粒Lv-CAV1成功转染HL-60细胞,转染率达90％.Western blot检测结果显示,转染后48 h HL-60细胞中CAV1蛋白表达明显增高.CCK-8检测结果显示转染后48 h HL-60细胞增殖活性降低(P＜0.05),流式细胞仪检测结果显示转染后HL-60细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).结论:CAV1过表达对HL-60细胞具有抑制细胞的增殖活性、促进细胞凋亡的作用.
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黄芪多糖联合多柔比星抗白血病细胞HL-60/A耐药的机制研究
目的:探讨黄芪多糖联合多柔比星对耐药白血病细胞HL-60/A的协同抗肿瘤机制.方法:RT-PCR、Westem blot及CCK-8试验鉴定急性早幼粒细胞耐药株HL-60/A的耐药表型;然后通过CCK-8试验检测黄芪多糖协同多柔比星对HL-60/A的抗肿瘤作用;Annexin-Ⅴ细胞凋亡实验检测不同药物处理后的细胞凋亡情况;Westem blot检测细胞内caspase级联系统激活情况;实时定量PCR及Western blot实验分析黄芪多糖对多药耐药蛋白MRP的表达及功能影响.结果:与敏感细胞相比,HL-60/A表现出明显的耐药特征,对多柔比星的耐药倍数约为HL-60的27倍.CCK-8试验证实,黄芪多糖可有效促进多柔比星对耐药细胞HL-60/A的杀伤,且黄芪多糖与多柔比星联用可显著诱导HL-60/A细胞凋亡,同时伴随凋亡级联信号系统激活.进一步研究发现,黄芪多糖可降低HL-60/A细胞表面的MRP表达,进而抑制MRP的外排功能,增加进入耐药细胞中的药物浓度.结论:黄芪多糖联合多柔比星可有效发挥对耐药白血病细胞HL-60/A的协同抗肿瘤作用,该作用可能是通过黄芪多糖抑制HL-60/A细胞表面的MRP表达、抑制药物外排,从而增加耐药细胞内药物浓度,诱导HL-60/A细胞凋亡实现的.
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三氧化二砷对急性髓系白血病细胞HL-60Cdc20及Mad2的影响
目的:探讨三氧化二砷(As2 O3)对急性髓系白血病细胞HL-60增殖过程中Cdc20及Mad2的影响.方法:不同浓度As2O3处理HL-60细胞24、48、72 h后CCK-8法检测细胞增殖情况;Real-Time PCR及Western blot技术检测不同浓度As2O3作用于HL60细胞48 h后Mad2和Cdc20 mRNA及蛋白表达情况.结果:As2O3能显著抑制HL-60细胞增殖,并具有良好的时间剂量相关性.RT-PCR和Westem blot检测结果表明,As2O3 4、8、10 μmol/L作用于HL-60细胞后,Mad2表达上调,Cdc20表达下降(P＜0.05).结论:As2O3对人急性髓系白血病HL60细胞增殖具有较明显的抑制作用,其机制可能与上调Mad2表达和下调Cdc20表达有关.
关键词： 三氧化二砷 HL-60 有丝分裂纺锤体检验点 Mad2 Cdc20 -
地西他滨对白血病细胞DKK1基因去甲基化的实验研究
目的:探讨地西他滨对急性髓系白血病细胞株HL-60中DKK1的表达及其下游Wnt信号通路的影响.方法:采用流式细胞术(FCM)和DNA Ladder分析检测不同浓度地西他滨对HL-60细胞凋亡的影响,甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测DKK1基因甲基化状态,qRT-PCR方法检测mRNA表达水平,Western-blot方法检测蛋白的表达变化.结果:FCM检测结果表明,不同浓度地西他滨作用于HL-60细胞48 h后,地西他滨组的早期凋亡细胞数明显增多(P ＜0.05);DNA梯度检测结果发现,地西他滨组出现明显的细胞凋亡特异性梯度条带;MS-PCR检测发现,DKK1基因发生去甲基化,RT-PCR和Wertern blot检测显示mRNA表达水平增高,DKK1蛋白表达增加,β-catenin及C-MYC蛋白表达降低.结论:地西他滨可以通过DKK1基因去甲基化及抑制Wnt通路的作用,促进HL-60细胞凋亡.
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慢病毒载体Venus在HL-60细胞应用的可行性研究
随着对急性髓系白血病(AML)发生、发展的基因机制深入研究,构建转染效率高且对细胞无毒性作用的载体变得十分重要.为了研究补体C3a的受体蛋白C3aR1(complement component 3a receptor 1)在AML中的作用,构建了携带C3aR1的第三代慢病毒载体Venus.本研究主要观察Venus慢病毒载体在急性髓系白血病中应用的可行性.采用磷酸钙沉淀法将重组载体Venus-C3aR1转染包装细胞293T细胞,产生慢病毒颗粒,感染HL-60细胞,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)观察感染效率,用RT-PCR和流式细胞术鉴定感染后HL-60细胞C3aR1的表达情况.用CCK8法绘制细胞生长曲线、观察细胞诱导分化能力来判断慢病毒载体的细胞毒性作用.结果显示,流式细胞仪(FCM)检测慢病毒感染率＞95％,感染后HL-60细胞上C3aR1表达明显增加,病毒包装成功.慢病毒感染前后细胞生长曲线及诱导分化能力无明显变化,说明慢病毒载体不影响HL-60细胞的一般生物学特性,无明显的细胞毒性作用.结论:Venus慢病毒载体对AML细胞株HL-60的感染效率高,能够整合到细胞基因组中实现目的基因的稳定表达.慢病毒感染对细胞无明显的细胞毒性作用,不会干扰靶基因在细胞株中功能,因此慢病毒载体可以为白血病细胞的研究提供可靠的技术支持.
关键词： Venus慢病毒载体 HL-60 感染 AML 细胞毒性 -
Rheb过表达在白血病细胞株HL-60和K562中的作用
mTOR信号通路是细胞内重要的生命活动枢纽,它通过抑制细胞凋亡,促进细胞增殖来调控细胞生命活动.Rheb可以激活mTOR信号通路,进而参与多种肿瘤的发生发展.本研究以髓系白血病细胞株为研究对象,探讨Rheb在HL-60和K562中的作用及相关机制.本研究利用逆转录病毒技术使髓系白血病细胞株HL-60和K562过表达Rheb;利用Western blot和Real-Time PCR分别检测HL-60和K562细胞中Rheb的蛋白表达水平及mRNA表达水平；利用CCK-8法检测细胞活力；利用Annexin V-PE和7-AAD双染检测细胞凋亡.结果表明:成功构建了Rheb过表达的HL-60和K562细胞株,并发现Rheb过表达可以促进细胞生长；进一步研究发现,Rheb过表达加快细胞进入G2/M期(P＜0.01),但不影响细胞凋亡.结论:Rheb通过加快细胞周期进程促进HL-60和K562细胞增殖.
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白血病HL-60、HL-60A细胞Cyclin D1、hTERT表达和端粒酶活性及意义
本研究旨在现察cyclin D1、hTERT和端粒酶在正常人单个核细胞(MNC)、HL-60和HL-60A中的表达及活性,并探讨它们与白血病发生及耐药的关系.实验用正常人外周血MNC、耐药白血病细胞株HL-60和HL-60A,采用流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V-FITC+ PI染色法检测细胞凋亡,real-time PCR和Western blot检测细胞cyclin D1、hTERT mRNA及蛋白表达,TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性.结果表明:MNC、HL-60、HL-60A的S期细胞比例分别为(10.21±2.11)%、(44.93±3.00)%、(51.38±1.10)%;凋亡细胞比例分别为(16.14±2.13)%、(7.53±0.92)%、(4.15±0.96)%;cyclin D1、hTERT的mRNA和蛋白水平依次增高;HL-60、HL-60A端粒酶活性较正常MNC增强(p=0.000),HL-60与HL-60A之间无明显差别(p=0.232);cyclin D1、hTERT与端粒酶活性呈正相关(p<0.01).结论:与正常人MNC相比,HL-6O、HL-6OA的S期细胞增多,凋亡细胞减少,且以HL-60A更为明显,这可能与cyclin D1、hTERT、端粒酶活性上调有关.
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肿瘤相关基因fgfr3 mRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义
本研究旨在了解白血病细胞中fgfr3基因的表达水平及其和临床的关系.应用RT-PCR法检测4个白血病细胞系及96例白血病患者和14例对照者骨髓样本中fgfr3 mRNA的表达,并分析了其与临床指标及染色体异常的相关性.96例白血病患者包括36例AML,29例ALL和31例CML.结果表明:fgfr3基因在K562和U937细胞中有表达,而在HL-60和SHI-1细胞中无表达.AL组和CML组fgfr3基因的阳性率(分别为46.15%和51.61%)与对照组相比,差异有统计学意义(p＜0.05).AML组和ALL组fgfr3基因的阳性率(分别为44.44%和48.28%)均高于对照水平,差异有统计学意义(p＜0.05).fgfr3基因的阳性表达与外周血高白细胞计数(≥20×109/L)呈显著性正相关(P＜0.05).ALL患者中fgfr3基因的表达与bcr/abl融合基因的异常呈显著正相关(r=0.151,P＜0.05).而AL患者fgfr3基因的阳性表达与染色体预后分组无显著相关性.结论:AL和CML患者均存在fgfr3基因的过表达,提示fgfr3基因可能参与了AL和CML的发病.
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人参总皂甙对HL-60细胞凋亡相关基因bax、bcl-xl表达的影响
本研究探讨人参总皂甙对凋亡相关基因表达的影响及其诱导HL-60细胞凋亡的作用机制.用人参总皂甙0、100、200、400、800及1600μg/ml作用于HL-60细胞48小时.用荧光显微镜检测HL-60细胞形态的变化,流式细胞仪、DNA凝胶电泳检测HL-60细胞凋亡,RT-PCR检测bax、bcl-xl基因表述的变化.结果表明:人参总皂甙浓度在100-400μg/ml时,HL-60细胞凋亡逐渐增加,可见典型的凋亡细胞形态和明显的DNA梯度.在该浓度范围内,bax表达逐渐增加、而bcl-xl表达逐渐减少;当人参总皂甙浓度大于400μg/ml时,出现细胞坏死,细胞凋亡下降.结论:一定浓度的人参总皂甙能诱导HL-60细胞发生凋亡,且细胞凋亡率与人参总皂甙浓度呈一定的量效依赖关系,bax、bcl-xl基因的表达变化在人参总皂甙诱导HL-60细胞凋亡可能起重要作用.
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全反式维甲酸诱导NB4和HL-60细胞分化过程中髓系分化相关的转录因子表达变化
造血干细胞的自我更新、增殖、分化与成熟过程与转录因子调节密切相关.转录因子功能失调可能导致急性髓系白血病的发生.为研究急性髓系白血病细胞体外分化过程中转录因子表达变化,采用全反式维甲酸诱导NB4和HL-60细胞分化模型,瑞氏-姬姆沙染色现察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志CD11b的表达,定量RT-PCR检测转录因子PU.1,C/EBPα,ε,γ,GATA-1,GATA-2 mRNA的表达水平,用2(-△△CT)法对转录因子mRNA表达水平进行相对定量分析,并与对照组比较.结果表明:ATRA作用NB4细胞96小时,PU.1,C/EBPe mRNA表达水平显著上调,分别达到处理前的5.75倍和6.16倍;而C/EBPα,γ,GATA-1,GATA-2的mRNA表达水平均显著下调,仅为处理前的62%,31%,63%,8.7%,尤以GATA-2的表达水平下降为显著.在HL-60细胞,ATRA作用96小时,PU.1,C/EBPα,ε的mRNA表达水平上调,分别为处理前1.97,1.95,2.35倍,而C/EBPγ,GATA-1,GATA-2的mRNA表达水平均显著下调,仅为处理前的20%,21%,18%.结论:转录因子异常表达在急性髓系白血病的发病中起重要作用.
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DNA损伤时钠氢交换蛋白1在K562和HL-60细胞中的表达和对细胞凋亡的影响
本研究主要探讨在依托泊苷引起的DNA损伤下,BCR-ABL阳性细胞系K562中钠氢交换蛋白-1(NHE1)的表达变化情况,并初步探讨其在何种水平被调控.采用实时定量PCR技术检测NHE1在mRNA水平的表达;Western blot检测依托泊苷对细胞NHE1在蛋白水平的影响;流式细胞术测定细胞凋亡情况;构建NHE1启动子区荧光素酶报告载体,并测定不同依托泊苷浓度作用下的荧光素酶活性.结果表明:DNA损伤引起HL-60细胞NHE1在mRNA和蛋白水平升高(p<0.05),在K562细胞中未发现明显变化(P>0.05);依托泊苷对HL-60细胞有明显的促凋亡作用,阻止细胞内pH值的升高可以降低依托泊苷的促凋亡作用,依托泊苷对K562细胞凋亡率无明显影响;K562细胞在DNA损伤时,NHE1启动子区构建的荧光素酶表达载体活性升高.结论:依托泊苷造成的DNA损伤,促进HL-60细胞凋亡,并且依赖PHi的改变;在K562细胞中NHE1表达没有改变,但其转录活性升高.
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六种肿瘤细胞株BLM基因转录水平的研究
BLM基因的不同突变是导致Bloom综合征(Bloom's syndrome)的病因.BLM基因突变使姐妹染色单体互换率(sister chromatic exchange,SCE)增高,细胞DNA修复功能降低,这样受损的DNA很容易随细胞分裂而传入子细胞,细胞稳定性下降.临床表现为免疫缺陷,恶性肿瘤易患体质等等.本研究对BLM基因在肿瘤细胞株和正常人中表达的差异进行研究,以期发现肿瘤新的发生机制,为寻找新的特异分子治疗靶点提供线索.应用PT-PCR方法检测正常人造血细胞和六种肿瘤细胞株中BLM基因的mRNA水平,并作序列检测.结果表明,六种肿瘤细胞株均高表达BLM mRNA,但未见BLM基因结构异常,而正常人表达量很低(P＜0.01).结论:在本研究中的6种肿瘤细胞株高表达BLM mRNA,肿瘤细胞株和正常人BLM mRNA表达水平有显著差异性.BLM异常可能参与肿瘤的发生或是导致耐药的原因之一.
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白血病细胞可变铁池的检测及其意义
为了研究细胞可变铁池(1abile iron pool,LIP)的检测方法,用不同浓度的去铁胺(DFO)与K562及HL-60细胞共同培养0、6、12、24、48小时,用钙荧光素(caicein)负荷K562及HL-60细胞,荧光分辨仪检测细胞荧光量;用快速铁螯合剂螯合铁,使恢复荧光,然后计算2次荧光差值.结果表明:浓度为50和100μmol/L的DFO作用于K562及HL-60细胞12小时后,荧光值明显高于对照组(P＜0.05),且LIP的荧光差值(△LIP)随DFO作用时间的延长及浓度增加而降低,即呈一定的时间及剂量依赖性.结论:DFO通过螯合细胞内铁降低了白血病细胞LIP;calcein AM荧光可作为检测细胞LIP变化的比较可靠的方法.
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Bay 11-7082增强Fas介导的HL-60细胞凋亡作用
本研究观察NF-κB抑制剂Bay 11-7082对HL-60细胞Fas/FasL系统的作用及对Fas介导的HL-60细胞凋亡的影响.用RT-PCR和流式细胞术检测Bay 11-7082干预后HL-60细胞Fas、FasL和XIAP的mRNA和蛋白表达水平的变化;用ELISA方法检测Bay 11-7082干预前后sFasL水平的变化;流式细胞术检测Bay 11-7082干预前后CH-11(活性Fas抗体)诱导HL-60细胞凋亡的变化.结果表明:用Bay 11-7082干预后,HL-60细胞FasL和XIAP的mRNA和蛋白水平较对照组明显下降,差异具有显著性(p＜0.05),Fas的mRNA、蛋白水平的变化和sFasL水平的变化无显著的差异(p＞0.05);Bay 11-7082干预后HL-60细胞对CH-11诱导细胞凋亡敏感性显著增强.结论:Bay 11-7082可能通过下调FasL和XIAP水平增强HL-60细胞Fas介导的凋亡.
关键词： Bay 11-7082 Fas/FasL系统 HL-60 NF-κB
