转录相关锌带蛋白基因在肾癌组织中的表达

目的 研究转录相关锌带蛋白基因(ZNRD1)在肾癌及肾脏正常组织巾的表达.方法 应用免疫组化法,检测71例肾癌组织和24例癌旁正常肾脏组织中ZNRD1蛋白的表达,并分析ZNRD1蛋白表达与肾癌Gleason分级和临床分期的关系.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法,分别检测20例肾癌及痛旁正常肾脏组织中ZNRD1 mRNA和蛋白的表达.结果 免疫组化染色结果 显示,ZNRD1蛋白主要定位于细胞核.ZNRD1蛋白在24例肾癌及其相应的癌旁正常肾脏组织中的阳性表达率分别为91.7%(22/24)和20.8%(5/24),差异具有明显的统计学意义(P＜0.01).ZNRD1蛋白的表达与肾癌Gleason分级和临床分期均无显著的相关性(均P＞0.05).RT-PCR检测结果 显示,ZNRD1 mRNA在肾癌组织中的相对表达量为0.6186,明显高于癌旁正常肾脏组织(0.4273,P＜0.01).Western blot检测结果 湿示,ZRND1蛋白在肾癌组织中的相对表达量为0.5623,亦明显高于癌旁正常肾脏组织(0.3885,P＜0.01).结论 ZNRD1可能在肾癌的发生发展中发挥着重要作用.

蛋白激酶Cα相互作用蛋白1在结直肠腺癌中的表达及其意义

目的 探讨蛋白激酶Cα相互作用蛋白1(PICK1)在结直肠腺癌中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学及Western blot方法检测PICK1在结直肠腺癌、腺瘤、增生性息肉及癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果 免疫组织化学结果显示,102例结直肠腺癌组织中PICK1的阳性表达率为72.5％(74/102),其中高表达率为30.4％(31/102),腺瘤组织中的PICK1高表达率为22.2％(8/36),较癌旁组织中的高表达率0(0/40)增高(P＜0.05);36例增生性息肉组织PICK1的高表达率为5.6％(2/36),与癌旁组织比较差异无统计学意义(P＞0.05).Western blot结果显示,PICK1在结直肠腺癌组织中的表达(1.10±0.04)明显高于癌旁组织(0.75±0.07)(P＜0.05).在结直肠腺癌组织中,PICK1的高表达与肿瘤的发生部位、分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(均P＜0.05),与年龄及性别无关(均P＞0.05).结论 PICK1与结直肠腺癌的发生、发展和侵袭转移有关,并有助于患者预后的判断.

慢性脑灌流不足老年大鼠脑组织Neurexin家族蛋白Caspr2的表达

目的 观察慢性脑灌流不足(chronic cerebral hypoperfusion,CCH)老年大鼠脑组织Caspr2表达的变化.方法 建立老年大鼠CCH模型,采用免疫荧光组织化学与Western blot法,对大鼠CCH后2周及1、3个月脑组织Caspr2的表达变化进行组织定位与半定量分析.结果 脑内Caspr2主要表达于皮质下白质,特别是胼胝体等神经纤维束密集区域,皮质表达较弱;CCH后Caspr2表达数量及强度与对照组相比显著下降,且其定位模式在白质纤维结构中出现分布紊乱;CCH后2周及1、3个月时其表达与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 慢性缺血缺氧导致Caspr2表达显著降低与定位改变,可能是白质结构损害及相关功能减退的重要环节和分子基础.

Alterations in embryonic neural stem cells play crucial roles in the pathogenesis of amyotrophic lateral sclerosis. We hypothesized that embryonic neural stem cells from SOD1G93A individuals might be more susceptible to oxidative injury, resulting in a propensity for neurodegeneration at later stages. In this study, embryonic neural stem cells obtained from human superoxide dis-mutase 1 mutant (SOD1G93A) and wild-type (SOD1WT) mouse models were exposed to H2O2. We assayed cell viability with mitochondrial succinic dehydrogenase colorimetric reagent, and measured cell apoptosis by lfow cytometry. Moreover, we evaluated the expression of the adenos-ine monophosphate-activated protein kinase (AMPK)α-subunit, paired box 3 (Pax3) protein, and p53 in western blot analyses. Compared with SOD1WT cells, SOD1G93A embryonic neural stem cells were more likely to undergo H2O2-induced apoptosis. Phosphorylation of AMPKαin SOD1G93A cells was higher than that in SOD1WT cells. Pax3 expression was inversely correlated with the phosphorylation levels of AMPKα. p53 protein levels were also correlated with AMPKαphosphorylation levels. Compound C, an inhibitor of AMPKα, attenuated the effects of H2O2. These results suggest that embryonic neural stem cells from SOD1G93A mice are more susceptible to apoptosis in the presence of oxidative stress compared with those from wild-type controls, and the effects are mainly mediated by Pax3 and p53 in the AMPKα pathway.

To stop the progression of Alzheimer’s disease in the early stage, it is necessary to identify new therapeutic targets. We examined striatal-enriched phosphatase 61 expression in the brain tissues of 12-month-old APPswe/PSEN1dE9 transgenic mice. Immunohistochemistry showed that al-enriched phosphatase 61 protein expression was significantly increased but phosphorylated N-methyl-D-aspartate receptor 2B levels were significantly decreased in the cortex and hippocam-pus of APPswe/PSEN1dE9 transgenic mice. Western blotting of a cel model of Alzheimer’s disease consisting of amyloid-beta peptide (1-42)-treated C57BL/6 mouse cortical neurons in vitro showed that valeric acid (AP5), an N-methyl-D-aspartate receptor antagonist, significantly inhibited amyloid-beta 1-42-induced increased activity of striatal-enriched phosphatase 61. In addition, the phos-phorylation of N-methyl-D-aspartate receptor 2B at Tyr1472 was impaired in amyloid-beta 1-42-treated cortical neurons, but knockdown of striatal-enriched phosphatase 61 enhanced the phosphorylation of N-methyl-D-aspartate receptor 2B. Col ectively, these findings indicate that striatal-enriched phosphatase 61 can disturb N-methyl-D-aspartate receptor transport and inhibit the progression of learning and study disturbances induced by Alzheimer’s disease. Thus, al-enriched phosphatase 61 may represent a new target for inhibiting the progression of Alzheimer’s disease.

A preliminary study from our research group showed that picroside II inhibited neuronal apop-tosis in ischemic penumbra, reduced ischemic volume, and improved neurobehavioral function in rats with cerebral ischemia. The aim of the present study was to validate the neuroprotective effects of picroside II and optimize its therapeutic time window and dose in a rat model of ce-rebral ischemia. We found that picroside II inhibited cell apoptosis and reduced the expression of neuron-speciifc enolase, a marker of neuronal damage, in rats after cerebral ischemic injury. The optimal treatment time after ischemic injury and dose were determined, respectively, as fol-lows:(1) 2.0 hours and 10 mg/kg according to the results of toluidine blue staining;(2) 1.5 hours and 10 mg/kg according to early apoptotic ratio by lfow cytometry;(3) 2.0 hours and 10 mg/kg according to immunohistochemical and western blot analysis;and (4) 1.5 hours and 10 mg/kg according to reverse transcription polymerase chain reaction. The present ifndings suggest that an intraperitoneal injection of 10 mg/kg picroside II 1.5-2.0 hours after cerebral ischemic injury in rats is the optimal dose and time for therapeutic beneift.

β-catenin蛋白在成人脑干和幕上胶质瘤中的表达及其意义

目的 通过检测β-eatenin蛋白在正常脑组织、脑干和幕上胶质瘤中的表达,探讨Wnt/β-catenin信号转导途径在脑干和幕上胶质瘤发生中的作用.方法 采用免疫组织化学和Western blot方法检测β-catenin在6例正常脑组织、10例Ⅱ级脑干胶质瘤和10例Ⅱ级幕上胶质瘤中的表达.结果 β-catenin在正常脑组织中为胞膜表达,在脑干和幕上胶质瘤中为胞质表达.半定量分析β-catenin电泳条带表明其在三组中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Wnt/β-catenin信号转导途径虽然参与了脑干和幕上胶质瘤的发生,但尚不能认为其是导致脑干胶质瘤患者较幕上胶质瘤患者预后差的决定性因素.

γ射线诱发的小鼠急性淋巴细胞白血病中MDM2的表达研究

目的观察MDM2在γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病组织细胞中的表达变化,探讨MDM2在辐射致癌中的作用及可能的分子机理.方法用γ射线照射BALB/c小鼠诱发白血病发生,建立辐射致癌动物模型;分别应用Western blot和原位杂交技术,从蛋白水平和mRNA水平检测小鼠胸腺和骨髓组织中MDM2的表达情况;运用免疫沉淀技术(IP)检测MDM2蛋白的磷酸化水平;PCR-SSCP及银染技术用于检测基因突变.结果癌变组和辐射未癌变组胸腺细胞/骨髓细胞MDM2蛋白表达水平都高于对照组(P＜0.05);而癌变组和辐射未癌变组之间MDM2蛋白水平差异无显著性(P＞0.05).γ射线照射后早期辐射组骨髓MDM2蛋白表达水平也明显高于对照组.原位杂交结果显示:癌变组织中MDM2阳性反应和阳性率均明显高于对照组.在癌变组组织中发现有MDM2磷酸化比其他组都明显升高(P＜0.05).辐射组和对照组均未检测到基因突变.结论MDM2可能参与γ射线诱发的小鼠淋巴细胞白血病的发生和发展过程,作用机理可能与过表达及高磷酸化所致活性增强有关.MDM2的基因突变在辐射致小鼠白血病发生不起主要作用.

谷氨酸增加大鼠海马脑片可溶性淀粉样前体蛋白的释放

目的观察兴奋性神经递质谷氨酸对于可溶性淀粉样前体蛋白(sAPP)释放的影响.方法雄性SD大鼠断头取海马后,于0～4℃Krebs-Ringer液中快速振动切片,37℃预孵育后,置含谷氨酸或不含谷氨酸Krebs-Ringer液(对照)中孵育,于15 000g离心,取上清,用二辛可宁酸法测定总蛋白含量.以Western blot法测定,释放入孵育液中的sAPP.结果正常孵育的海马脑片能够分泌基础量的sAPP,谷氨酸刺激能够导致海马脑片释放sAPP增加,但没导致新蛋白的产生.结论谷氨酸在10-15～10-3mol*L-1浓度范围内,均能导致海马脑片分泌sAPP增加.

谷氨酸对皮质与海马脑片sAPP释放促进作用的差异

目的观察谷氨酸对皮质与海马脑片可溶性淀粉样前体蛋白(sAPP)释放促进作用的差异.方法♂SD大鼠断头取皮质与海马后于0～4℃Krebs-Ringer液中快速振动切片,切片于37℃预孵育后置含50μmol·L-1的谷氨酸或不含谷氨酸Krebs-Ringer液(对照)中孵育后于15 000g离心取上清,应用二辛可宁酸法测定上清总蛋白含量;释放入孵育液中的sAPP以Western blot方法测定.结果 50μmol·L-1的谷氨酸作用于皮质与海马脑片后,其释放的sAPP均在97～116KD 之间,sAPP含量都非常低.而皮质中sAPP含量相对较高,且50μmol·L-1的谷氨酸对于其影响较影响海马大.结论 50μmol·L-1的谷氨酸促进sAPP的释放作用对皮质脑片的影响较其对海马脑片的影响显著.

苯丙胺对大鼠额叶皮质AKT信号通路调控分子的影响

目的:探讨苯丙胺对额叶皮质部位AKT信号通路上游信号分子的影响.方法:选取健康雄性成年SD大鼠50只,分为空白组、生理盐水组和苯丙胺(AMPH)组.用旷场(open field)系统测试大鼠的行为学变化,用Western blot分析AKT信号通路上游信号分子的变化,用免疫组织化学观察相应分子阳性细胞的变化.结果:注射苯丙胺后大鼠活动度增加,且出现刻板行为.AMPH组大鼠额叶皮质pmTOR含量比空白组及生理盐水组减少,且pmTOR阳性细胞的数量也相应减少,而pPP2A和PHLPP没有显著性变化.结论:苯丙胺抑制AKT信号通路可能与减少pmTOR的表达密切相关.

帕罗西汀对抑郁模型大鼠空间学习记忆和海马ERK-CREB通路的效应

目的 探讨帕罗西汀对应激抑郁模型大鼠海马依赖性学习记忆和细胞外信号调节激酶CAMP反应序列结合蛋白(ERK-CREB)通路的效应.方法 将成年雄Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为6组:对照组(Ⅰ)、抑郁模型组(Ⅱ)、抑郁模型+给药1次组(Ⅲ)、抑郁模型+给药1周组(Ⅳ)、抑郁模型+给药2周组(Ⅴ)和抑郁模型+给药4周组(Ⅵ),每组动物12只,抑郁模型为强迫大鼠游泳.帕罗西汀的剂量为10 mg·kg-1,给药方式为灌胃.应用Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆情况.采用Western blot检测各组大鼠海马ERK和CREB的磷酸化及总蛋白(p-ERK和ERK,p-CREB和t-CREB)水平.结果 在Morris水迷宫定位航行实验中,各组的平均逃避潜伏期(EL)比较无统计学差异(P>0.05);记忆保留实验中,Ⅱ组和Ⅲ组EL显著大于对照组(P<0.05);Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组平均EL与对照组比较无统计学差异(P>0.05),各用药组EL随用药时间的延长呈现缩短趋势;各组空间探索实验和可见平台实验的成绩比较无统计学差异(P>0.05).Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组大鼠海马pERK44和pERK42水平显著低于Ⅰ组和、Ⅵ组(P<0.05),后两组比较无统计学差异(P>0.05).各组之间ERK44和FRK42比较均无统计学差异(P>0.05).Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组大鼠海马p-CREB水平明显低于对照组(P<0.01),Ⅴ和Ⅵ组大鼠海马p-CREB水平与对照组比较无统计学差异(P>0.05);各组t-CREB水平比较无统计学差异(P>0.05).结论 帕罗西汀长期用药明显改善抑郁模型大鼠长时记忆的损害,逆转抑郁模型大鼠海马降低的ERK和CREB磷酸化水平.

人VEGF基因杆状病毒表达载体的构建及生物学活性鉴定

目的 构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定.方法 用Hind Ⅲ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用Hind Ⅲ酶切回收,与VEGF片段连接.NcoI酶切鉴定方向,得到正向连接重组载体pFast/VEGF;将其转化DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、四环霉素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-VEGF,PCR扩增鉴定得到单一VEGF条带.将该病毒载体转染sf9细胞,用噬斑筛选及SDS-PAGE和Western blot检测VEGF表达,并通过MTT法检测VEGF促内皮细胞生长活性.结果 病毒液在稀释到10-7时出现噬斑,Western blot检测出现单一条带,MTT检测促内皮细胞生长率为19.44%.结论 成功构建了含VEGF基因的杆状病毒表达载体,且表达产物具有显著的促内皮细胞生长作用.

原发性肝癌中β-葡萄糖醛酸酶mRNA及蛋白的同步表达及意义

目的 同步探讨原发性肝细胞癌组织中β-葡萄糖醛酸酶(B-G)mRNA及蛋白的表达和肿瘤分级的关系.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和Western blot法,对25例原发性肝细胞癌组织和10例正常肝脏组织进行检测.结果β-G mRNA在正常肝及肝癌组织中均有表达.但在不同分化程度肝癌组织中的表达有显著差异,分别是高分化组(2.24±1.12),中分化组(3.91±1.32)和低分化组(5.86±1.69);β-G蛋白在上述组织中的表达同样呈显著差异,分别是高分化组(0.24±0.08).中分化组(0.49±0.12)和低分化组(0.96±0.18),两者均随着肿瘤恶性程度的增加而表达呈递增趋势.结论 β-G与原发性肝细胞癌密切相关,随着癌细胞恶性程度的增加,β-G其表达量呈逐步递增.提示β-G可能参与肝细胞的癌变过程.

干扰素诱导跨膜蛋白抗小儿流感的效果研究

目的：探讨干扰素诱导跨膜蛋白抗小儿流感的效果。方法采用实时荧光定量 PCR法、Western blot 检测流感NS蛋白对人肺癌A549细胞中IFITM1、2、3表达水平的变化。结果 IFITM1、IFITM2、IFITM3蛋白能够抑制流感病毒NS蛋白的表达。结论 IFITM1、IFITM2、IFITM3蛋白能够抑制流感病毒NS蛋白的表达，值得临床进行更深入的研究。

Mylpf基因在自发性糖尿病长爪沙鼠6种组织中的表达水平分析

目的 分析Mylpf基因在糖尿病长爪沙鼠6种组织中的表达水平,进而探究长爪沙鼠糖尿病发生的分子机制.方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常沙鼠各6只,使用Real-time PCR和Western blotting技术分别检测动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织中Mylpf的mRNA和蛋白表达水平.结果 Real-time PCR的结果表明,在骨骼肌、心脏和脑组织中,Mylpf在糖尿病组mRNA表达水平高于对照组.在脂肪组织和肝脏组织中糖尿病组mRNA表达水平低于对照组.在肾脏组织中两组mRNA表达水平基本相同.Western blotting结果显示,在骨骼肌中Mylpf在糖尿病组蛋白表达水平高于对照组,且有统计学差异,在心脏和脂肪组织中Mylpf在糖尿病组蛋白表达水平低于对照组,在肾脏组织中蛋白表达水平基本相同,在肝脏和脑组织中没有检测出.结论 Mylpf与长爪沙鼠糖尿病的发生有一定相关性,该基因对长爪沙鼠糖尿病的影响可能主要发生在骨骼肌和心脏组织中.

Nf-κb在遗传性糖尿病长爪沙鼠多种组织中的表达状况

目的 探讨糖尿病长爪沙鼠6种组织中Nf-κb基因mRNA和蛋白的表达水平,以期探索长爪沙鼠糖尿病模型中Nf-κb的作用和靶器官.方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常血糖沙鼠各6只,分别采集动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织,用Q-PCR和Western blotting检测Nf-κb在各组织中mRNA和蛋白表达水平.结果 与对照动物相比,在糖尿病长爪沙鼠的肌肉、肾脏和脑组织中,Nf-κb基因的mRNA水平表达有升高趋势,脂肪中则显著降低,肝脏和心脏中仅有降低趋势.检测蛋白水平发现除肝脏外,其他组织的结果均与mRNA水平一致.结论 糖尿病长爪沙鼠脂肪组织是Nf-κb作用的靶器官.

Western blot在大鼠心肌缺血炎性因子研究中的应用

目的 急性心肌梗死是一个严重威胁人类健康的高死亡率的疾病.炎症在急性心肌梗死损伤与修复中有着重要作用.本文探讨Western blot在大鼠心肌缺血炎性因子研究中的应用.方法 Western blot技术.结果 在大鼠心肌缺血炎性因子Western blot的有关研究中心肌组织裂解匀浆比例、定蛋白稀释比例、转膜条件的文献均较少,与其他组织的Western blot比较,有其特殊性.炎性因子(IL-6,IL-1β,TNF-α和NF-κB)参与了心肌缺血的病理生理过程.结论 炎性因子参与了心肌缺血的病理生理过程.

乳腺浸润性导管癌Mus81表达的检测及其意义

目的 研究乳腺浸润性导管癌组织中Mus81的表达及意义.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测39例乳腺浸润性导管癌病灶组织及其对应的癌旁组织、15例乳腺纤维腺瘤组织中Mus81 mRNA和蛋白的表达情况.结果 乳腺浸润性导管癌病灶组织中Mus81阳性率为66.67％(26/39),低于癌旁组织(100％),差异有统计学意义(P＜0.05).乳腺纤维腺瘤组织中Mus81阳性率(100％)与癌旁组织无差别.乳腺浸润性导管癌病灶组织Mus81 mRNA和蛋白平均表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(t=-6.546,P＜0.01;t=-4.264,P＜0.01);乳腺浸润性导管癌病灶组织Mus81mRNA和蛋白平均表达水平低于乳腺纤维腺瘤组织,差异有统计学意义(t=-6.117,P＜0.01;t=-3.566,P＜0.01);癌旁组织Mus81 mRNA和蛋白平均表达水平低于乳腺纤维腺瘤组织,差异无统计学意义(t=-0.519,P＞0.05;t=-2.128,P＞0.05).Mus81表达水平与乳腺癌TNM分期有关,处于TNM分期0、Ⅰ期的乳腺浸润性导管癌组织Mus81 mRNA和蛋白平均表达水平高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期,差异有统计学意义(t=2.297,P＜0.05;t =2.763,P＜0.05);Mus81表达水平与患者年龄、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移无关(P＞0.05).结论 Mus81在乳腺浸润性导管癌中表达下调且与肿瘤TNM分期相关,检测Mus81的表达情况有助对乳腺浸润性导管癌的病情评估.

hSesn1基因真核表达载体构建及蛋白的表达和定位

目的 构建人源的Sesn1真核表达载体同时检测融合蛋白在COS-7细胞系内的表达和定位.方法 提取工具细胞系HeLa的mRNA,进而反转录成为cDNA.聚合酶链反应方法扩增人源Sesn1基因的cDNA全长片段,将其克隆于pEGFP-C1真核表达载体中.进一步将已构建好的重组表达载体进行双酶切以及测序鉴定,继而转染到工具细胞系COS-7中,进行Western blot方法检测.后应用激光共聚焦扫描显微镜方法来观察pEGFP-hSesn1在COS-7细胞中的定位情况.结果 hSesn1基因cDNA全长片段克隆至pEGFP-C1真核表达载体中,酶切鉴定片段大小为1479bp,测序证实成功.Western blot方法检测出GFP-hSesn1融合蛋白的成功表达,分子质量(Mr)约为80kDa.pEGFP-hSesn1在COS-7于细胞中主要定位在细胞质及核周.结论 成功构建了pEGFP-hSesn1真核表达载体,进而检测到融合蛋白的表达,并且在COS-7细胞中主要定位于核周及细胞质.