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细胞色素P450 2C9药物代谢酶体外酶学活性检测新方法的建立
目的 建立一种基于COS-7细胞的细胞色素P450 2C9(CYP2C9)体外酶学活性检测的新方法.方法 以野生型CYP2C9*1基因的全长cDNA为模板,通过定点诱变方法获得突变型CYP2C9*2、*3及*13的cDNA全长,分别与分泌型荧光素酶Gluc内参基因一起导人pIRES载体的A、B多克隆位点,构建成双表达载体pIRES-Gluc-CYP2C9.利用Lipofectamine 2000瞬时转染COS-7细胞,48h后弃培养基,加入含100μmol/L Luciferin-H荧光底物的新鲜培养基,继续培养8h后利用Promega CYP2C9活性试剂盒及NEB Gluc检测试剂盒分别检测CYP2C9各型及内参Gluc的活性,用Western blot检测两种蛋白的表达量.结果 本研究成功构建了pIRES-Gluc-CYP2C9*1及其突变体*2、*3、*13的表达载体,通过检测CYP2C9特异性荧光素底物Luciferin-H的分解产物的荧光信号与分泌型荧光素酶Gluc的内参荧光信号的比值作为CYP2C9的体外酶学活性值,研究结果显示突变体CYP2C9 *2、*3、*13的体外酶学活性分别为野生型CYP2C9*1的43.12％、8.15％和1.49％.结论 本研究成功建立了一种基于COS-7细胞的CYP2C9体外酶学活性检测的新方法,该方法操作简便、实验周期短,适于新突变体CYP2C9的快速活性检测及其代谢新药物或抑制剂的相关性研究.
关键词： CYP2C9 Western blot 体外活性分析 -
环磷酰胺在动物模型体内抗肿瘤影响及抑瘤机制的研究
目的 探讨环磷酰胺(CTX)在动物模型体内抗肿瘤影响及抑瘤机制.方法 建立小鼠实体瘤模型和腹水瘤模型:分别在昆明系小鼠皮下接种S180肉瘤细胞、腹腔接种鼠源性H22肝癌细胞,同时给予环磷酰胺处理小鼠,其后观察各组肿瘤生长大小,小鼠存活率的变化;应用Western blot技术检测凋亡抑制基因(Bcl-2)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)含量、抑癌基因P53及P21的蛋白表达.结果 环磷酰胺组肿瘤重量明显低于模型组(P<0.05),其抑瘤率为88.55%;小鼠存活天数均较模型组长,其生命延长率为57.73%;环磷酰胺町明显诱导P53的表达,抑制BCL-2的表达,从而促进肿瘤细胞的凋亡,但对P21没有作用;对瘤体组织中VEGF蛋白表达水平亦有抑制作用.结论 环磷酰胺可通过激活抑癌基因P53,抑制抗凋亡基因Bcl-2和促血管生成因子VEGF等多种途径,发挥抗肿瘤活性,为抗肿瘤动物模型尤其为调节抗肿瘤相关基因表达方面的阳性药物对照提供重要的实验依据.
关键词： 环磷酰胺 Western blot S180肉瘤 H22肝癌细胞 抗肿瘤相关基因 -
CD147在甲状腺乳头状癌中的表达及意义
目的 探讨CD147在甲状腺乳头状癌和周围正常甲状腺组织中的表达及意义.方法 采用RT-PCR和Western blot方法检测43对配对甲状腺乳头状癌组织和周围正常甲状腺组织中CD147的表达情况.结果 甲状腺乳头状癌组织中CD147 mRNA的表达量(0.96±0.04)明显高于周围正常甲状腺组织中的表达量(0.53±0.03),两组比较差异有统计学意义(P<0.05).CD147蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达量(0.81±0.05)明显高于在周围正常甲状腺组织中的表达量(0.43±0.04),同时在有淋巴结转移组(0.98±0.03)明显高于无淋巴结转移组(0.69±0.04),两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 CD147在甲状腺乳头状癌组织中的表达量明显高于周围正常甲状腺组织,同时其与淋巴结转移密切相关 (P<0.05),而与性别、年龄、肿块大小无相关性(P>0.05).提示CD147与甲状腺乳头状癌的发生和发展密切相关.
关键词： 甲状腺 乳头状癌 CD147 Western blot RT-PCR -
大鼠仙台病毒ELISA、间接免疫荧光和免疫印迹三种检测方法比较
目的 比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno- fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异.方法 仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELISA方法对20份无菌大鼠、227份SPF大鼠以及63份清洁级大鼠送检血清样品进行检测,阳性及可疑样品用WB方法进行了验证.结果 20份无菌大鼠血清样品被3种方法检测为仙台病毒抗体阴性;SPF级大鼠样品被IFA方法判定为阴性,1.32%(3/227)被ELISA方法判定为阳性,其中有2/3被 WB确认为阳性;ELISA、IFA和WB在清洁级大鼠样品中检出仙台病毒的阳性率分别为为18.12%、11.34%和15.87%.结论 三种检测方法灵敏度从高到低依次为ELISA、WB和IFA.WB方法可作为IFA和ELISA难以确定结果的替代方法.
关键词： 仙台病毒 ELISA IFA Western blot -
工频磁场辐照导致细胞连接蛋白Cx43的异常移位
目的研究50Hz正弦磁场对细胞连接蛋白Cx43移位的影响,以探索极低频磁场(ELFMF)抑制细胞间隙连接通讯(GJIC)的机制.方法用50 Hz、0.8 mT的正弦磁场和(或)十四酰基咐哌醇酯(TPA,5 ng/ml)对培养的中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)处理抖h(其中TPA处理1 h).采用间接免疫荧光细胞化学法和激光共聚焦显微镜进行连接蛋白Cx43定位的测定;采用Western blot方法检测胞浆和核内Cx43蛋白的含量.结果正常组细胞胞间连接处有明亮的点状标记,连接成线;TPA处理组、0.8 mT正弦磁场单独作用组及0.8 mT正弦磁场联合TPA处理组细胞的连接处标记斑点均较正常组减少,大量Cx43蛋白标记斑点出现在胞浆内,且在核附近聚集.各组核内Cx43蛋白条带很淡,而胞浆内Cx43蛋白含量ELF组(2.03±0.89)和TPA组(2.43±0.82)明显增加,与正常组(1.04±0.17)相比,差异有显著性(P＜0.01).结论50 Hz正弦磁场直接和(或)协同TPA抑制体外培养细胞GJIC功能与细胞连接蛋白Cx43内移至胞浆有关.
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AMPA受体和相关蛋白在束缚应激大鼠相关脑区的表达变化及逍遥散对其影响
目的:观察海马及杏仁核α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基和相关调节蛋白在束缚应激状态下蛋白表达变化及逍遥散的调节作用.方法:使用每天捆绑3 h的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21 d后用western blot方法检测各组大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)和杏仁核的AMPA受体亚基GluR2/3及N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)蛋白表达的情况.结果:7 d应激可使DG和杏仁核的GluR2/3、NSF表达显著降低(P均<0.1315),使PICK1在CA1区的表达量显著增多(P<0.05),逍遥散对PICK1变化显示出一定调节作用.21 d应激可使CA1区的GluR2/3、NSF表达升高,其中GluR2/3有显著性差异(P<0.01),而在杏仁核表达有降低趋势,逍遥散对其均有显著调节作用(均为P<0.05),21 d应激使杏仁核PICK1表达量出现升高趋势,逍遥散可显著降低其表达(P<0.05).结论:AMPA受体在短期重复应激和慢性应激状态下反应不同,海马和杏仁核反应相反,逍遥散对慢性应激状态下AMPA受体表达的调节作用较短期重复应激强.
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CD151在垂体腺瘤中的表达及意义
目的:探讨CD151在垂体腺瘤中的表达及意义.方法:收集36例垂体腺瘤标本,5例正常垂体组织,通过Real time-PCR、Western blot及免疫组化方法,从mRNA和蛋白水平检测CD151在36例垂体腺瘤、5例正常垂体组织的表达.结果:Real time-PCR及Western blot、免疫组化发现CD151在垂体肿瘤组织中表达显著高于正常垂体组织(P＜0.01),在非侵袭性腺瘤和侵袭性腺瘤中的蛋白及mRNA表达量两者之间有显著差异(P＜0.01).结论:CD151的表达与肿瘤大小及侵袭程度相关,表明CD151的表达与肿瘤的发生、发展密切相关,检测CD151有可能预测垂体腺瘤预后的重要指标.
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失血致低血容量性休克大鼠心脏G蛋白表达及纳络酮的影响
目的:探讨纳络酮对失血致低血容量性休克大鼠的治疗作用及其对休克大鼠心脏组织G蛋白含量的影响.方法:颈总动脉放血,使平均动脉压降至6 kPa(1 kPa=7.5 mmHg)稳定1小时完成失血致低血容量性休克大鼠模型.21只大鼠随机均分为:休克组(HS组)、纳络酮治疗组(NAL组)和正常对照组(NS组).在观察动脉血压、血气等指标的同时,采用Western blot技术测定大鼠伤后6小时心脏组织中Gsα、Giα、Gqα、Goα的含量.结果:纳络酮能提升休克大鼠的血压和改善心肺功能.休克后心脏膜组织Gsα两条带较对照组显著降低(P<0.05和P<0.01).Giα和Gqα带较NS组则显著升高(P<0.01和P<0.05),Goα降低(P<0.05).纳络酮治疗后,Gsα两条带较HS组显著升高(P均<0.01),Giα和Gqα带较HS组显著降低(P<0.05和P<0.01),Goα降低更明显(P<0.01) .结论:纳络酮在改善休克的同时,也改变了G蛋白的水平,提示休克大鼠的心脏收缩舒张功能及NAL的治疗作用可能有G蛋白参与.
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Wip1在甲状腺癌细胞中表达的临床及生物学意义
目的：探讨野生型p53诱导的磷酸酶1（wild-type p53-induced phosphatase 1，Wip1）在甲状腺癌中的表达意义及其导入靶向Wip1的siRNA对甲状腺乳头状癌K1细胞的生物学影响。方法：采用免疫组织化学方法、逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）检测73例甲状腺癌组织及距其癌组织边缘5 cm以上的镜下未见浸润的正常组织中蛋白、mRNA的表达情况。通过脂质体介导将Wip1基因siRNA瞬时转染甲状腺乳头状癌K1细胞，采用RT-PCR及Western blot检测转染后K1细胞内Wip1基因的表达水平，MTT比色法及流式细胞术（FCM）观察细胞增殖、凋亡、周期变化情况。结果：Wip1蛋白在甲状腺癌组织及正常甲状腺组织中的表达阳性率分别为80.8%、9.6%，较正常甲状腺组织明显升高（χ2=47.036，P<0.05）。Wip1 mRNA在甲状腺癌组织及正常甲状腺组织中的表达相对量分别为0.665±0.046、0.225±0.039，较正常甲状腺组织明显升高（t=12.637，P<0.05）。Wip1蛋白、mRNA表达与甲状腺癌患者性别、年龄及肿瘤大小无关（P>0.05），而与淋巴结转移、肿瘤临床分期及肿瘤分化有关（P<0.05）。RT-PCR及Western blot证实，siRNA沉默的K1细胞中Wip1 mRNA、蛋白的表达水平较未转染组明显降低（t=17.039，t=14.637，P<0.05）。MTT、细胞凋亡及周期结果表明，siRNA沉默的K1细胞其增殖能力明显减弱、细胞凋亡明显增加，G0+G1期细胞数比例升高，而G2+M期和S期细胞数比例降低（P<0.05）。结论：甲状腺癌组织中Wip1蛋白和mRNA的表达均升高，且与甲状腺癌淋巴结转移、肿瘤临床分期以及肿瘤分化有关，Wip1参与甲状腺癌细胞增殖、凋亡、周期这一生物学过程。
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食管癌组织中MT-1-2与-3的表达差异及临床意义
目的:金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类广泛存在于生物体体内的低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质.本研究旨在明确MT-1、-2和MT-3在食管癌中的表达差异以及MT-1、-2和MT-3的表达量与各临床病理特征的关系.方法:随机选取2008年7月至2009年7月河北医科大学第四医院胸外科行手术治疗的食管癌患者114例,其中,男64例,女50例;年龄40～75岁,平均年龄61岁.胸上段食管癌21例,肠中段食管癌58例,肠下段食管癌35例.依据国际抗癌联盟(UICC)食管癌TNM分期(2009年):Ⅱa期34例,Ⅱb期36例,Ⅲ期31例,Ⅳ期13例.组织类型均为鳞癌;组织学分级为高分化59例,中分化癌36例,低分化癌19例.应用Western blot检测肿瘤组织及切缘正常组织中MT-1、-2和MT-3的表达情况,对MT-1、-2和MT-3的表达量与临床病理参数,以及MT-1、-2与MT-3表达的关系进行分析.结果:MT-1、-2和MT-3在食管癌组织中的表达量均高于切缘正常组织(MT-1、-2 t=5.214,P<0.01),(MT-3 t=4.287,P<0.01),且均与肿瘤组织病理分期(MT-1、-2 rs=0.896,P<0.01),(MT-3 rs=-0.501,P<0.01),分化程度(MT-1、-2 rs=-0.548,P<0.01),(MT-3 rs=0.664,P<0.01)有关,与肿瘤部位(MT-1、-2 rs=0.253,P>0.05),(MT-3rs=0.172,P>0.05)无关.结论:MT-1、-2和MT-3在食管癌组织中均存在高表达,其表达水平与食管癌的发生、发展及组织分化密切相关,而且MT-3在食管癌组织中的表达规律与MT-1,-2有显著不同.
关键词： 食管癌 金属硫蛋白-1 金属硫蛋白-2 金属硫蛋白-3 Western blot -
高迁移率族蛋白HMGB1在宫颈鳞癌组织中的表达
目的:探讨宫颈鳞癌组织中高迁移率族蛋白HMGB1表达情况及其与肿瘤分化程度、大小、浸润和转移的关系.方法:应用组织芯片免疫组织化学方法检测了30例宫颈原位癌,90例无转移的宫颈癌,30例有转移的宫颈癌和30例正常宫颈鳞状上皮中HMGB1表达情况,并应用western blot技术定量检测其表达情况.结果:HMGB1在宫颈鳞癌组织中呈强阳性表达58.7%(88/150),正常宫颈鳞状上皮中弱表达,差异具有显著性(P＜0.01),HMGB1阳性率与肿瘤的大小、浸润及转移呈正相关(P＜0.01);与肿瘤分化程度无关(P＞0.05).结论:HMGB1在宫颈鳞癌组织中尤其是发生转移的宫颈鳞癌组织中呈强阳性表达,可作为宫颈鳞癌浸润、转移及预后的重要判定指标之一,并有望成为基因治疗的靶点.
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精氨酸增加大鼠海马脑片可溶性淀粉样前体蛋白的释放
目的:观察兴奋性神经递质精氨酸对于可溶性淀粉样前体蛋白(sAPP)释放的影响.方法:雄性SD大鼠断头取海马后于0～4℃Krebs-Ringer液中快速振动切片,切片于37℃预孵育后置含精氨酸或不含精氨酸Krebs-Ringer液(对照)中孵育后于1 5 000 g离心取上清液,应用二辛可宁酸法测定上清液总蛋白含量;释放入孵育液中的sAPP以West-ern blot方法测定.结果:正常孵育的海马脑片能够分泌基础量的sAPP,精氨酸刺激能够导致海马脑片释放sAPP增加,但是没有导致新蛋白的产生.结论:精氨酸在10-9～10 μmol/L浓度范围内,均能够导致海马脑片分泌sAPP增加.
关键词： 精氨酸 可溶性淀粉样前体蛋白 阿尔茨海默病 海马脑片 Western blot -
膜联蛋白A5在人宫颈鳞癌不同分化型的表达及临床意义
目的:检测膜联蛋白A5(ANXA5)在不同分化的宫颈癌细胞中的表达差异,探讨其作为宫颈鳞癌组织分化标志物的可行性.方法:将收集的宫颈鳞癌组织52例HE染色后分为高分化型12例,中分化型25例,低分化型15例.RT-PCR法和Western Blot法分别在mRNA转录水平和蛋白水平检测ANXA5在各分化型宫颈鳞癌的表达情况；用免疫组织化学法对其在细胞内的定位以及表达量进行检测.结果:随着癌细胞分化从高到低,ANXA5在mRNA水平的表达逐渐增高,且组间多重比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).在蛋白水平,高分化型组表达低于中、低分化型组(均P＜0.01),中、低分化组之间差异无统计学意义(P＞0.05).ANXA5主要定位于宫颈癌细胞的细胞质中.结论:ANXA5具有作为临床宫颈癌细胞分化标志物的潜在可能.
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弥漫性脑损伤后SD大鼠内耳HO-1、iNOS蛋白与mRNA的表达
目的 利用Western Blot、RT- PCR技术,探讨SD大鼠弥漫性脑损伤后,耳蜗HO-1、iNOS蛋白与mRNA表达及对ABR的影响.方法 建立弥漫性脑损伤大鼠模型并随机分组,采用听性脑干反应测定、Western Blot、RT- PCR技术,观察各组动物听性脑干反应变化及耳蜗HO-1与iNOS的表达.结果 外伤后各组ABR阈值及各波潜伏期、波间期比较差异有统计学意义(P＜0.05).HO-1、iNOS蛋白与mRNA在外伤后各组耳蜗内表达变化明显,光密度值比较均有统计学意义(P＜0.05).结论 耳蜗功能的改变可能与HO-1与iNOS蛋白与mRNA表达升高有关,认为HO-1、iNOS基因与蛋白水平的改变,在内耳损伤与抗损伤机制中二者共同构成了重要调节机制.
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抑癌蛋白维生素D3上调蛋白1在肺癌组织中的表达及意义
目的 探讨肿瘤抑制蛋白维生素D3上调蛋白1(vitamin D3 up-regulated protein 1,VDUP1)在肺癌组织中的表达及其与肺癌临床、病理之间的关系和意义.方法 应用RT-PCR及Western blot分别检测35例肺癌患者的癌组织及癌旁正常组织VDUP1 mRNA和蛋白表达水平,进一步按照癌细胞分化程度及肺癌TNM临床分期进行分层比较.结果 VDUP1 mRNA和蛋白在肺癌组织中表达显著低于癌旁正常组织(P=0.000).在肺癌原发灶中,VDUP1的表达与TNM分期和细胞分化程度密切相关(P值均<0.05),但与吸烟、性别、病理类型无关.多重分析结果显示高、中、低分化肺癌中VDUP1的表达量分别为1.17±0.07、0.91±0.26、0.83±0.26,三者问差异具有统计学意义(P=0.023);Ⅰ、Ⅱ期病例中VDUP1的表达量为1.03±0.20,明显高于Ⅲ、Ⅳ期(0.79±0.24,P=0.004).结论 VDUP1在肺癌中低表达,与肺癌TNM分期及细胞分化有关,可能作为判断肺癌进展和预后的一种有效指标.
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妊娠相关蛋白在多囊卵巢综合征早期自然流产患者的表达及临床意义
目的 探讨妊娠相关蛋白(glycodelin)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)早期自然流产患者的表达及临床意义.方法 选择2012年4月-2013年4月妊娠<12周的PCOS流产患者77例为试验组,同期正常妊娠<12周要求人工流产者68例为对照组.2组均于孕3~5周、孕6~8周和孕9~11周采用酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测外周静脉血中glycodelin、人性激素结合球蛋白(SHBG)、空腹胰岛素、空腹血糖、睾酮和游离睾酮,同时采用Western blot方法检测蜕膜组织中glycodelin的表达,分析glycodelin与PCOS早期自然流产的关系.结果 试验组孕3~5周和孕6~8周母体外周血中glycodelin的水平与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).将β-actin作为内参照,试验组蜕膜组织中glycodelin蛋白的表达显著低于对照组,试验组不同孕周蜕膜组织中glycodelin蛋白的表达显著低于对照组(P＜0.05).试验组孕3~5周和孕9~11周空腹血清胰岛素水平及孕3~5周空腹血糖显著高于同孕周对照组(P＜0.01),但孕6~8周血清胰岛素水平及孕6~8周和孕9~11周空腹血糖与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).不同孕周试验组睾酮和游离睾酮均显著高于对照组(P＜0.01),而SHBG水平显著低于对照组(P＜0.05).结论 PCOS早期自然流产患者血清中glycodelin、SHBG水平降低以及流产蜕膜组织中glycodelin蛋白表达的减少,提示子宫内膜上皮及间质功能障碍可能是PCOS患者发生流产的重要环节.
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Wnt/β- catenin 在 IgA 肾病中的表达及意义
目的：探讨 Wnt／β- catenin 及其下游靶基因在 IgA 肾病中的表达，分析其与患者的临床病理参数的相关性。方法：根据肾小管间质病变程度分组，采用 RT - PCR、Western blot 和 EnVision -免疫组化技术检测各组 IgA 肾病患者以及正常对照组患者肾活检组织中 Wnt／β- catenin 及其下游靶基因 snail、基质金属蛋白酶-7（MMP -7）、α-平滑肌动蛋白（α-SMA）的表达，各组之间进行比较。结果：IgA 肾病患者肾活检组织中β- catenin、snail、MMP -7、α- SMA mRNA 和蛋白表达水平较正常对照组升高（P ﹤0．05）。β- catenin、snail 在伴有轻度肾小管间质病变的 IgA 肾病患者肾活检组织中表达水平高于无肾小管间质病变的 IgA 肾病患者（P ﹤0．05），其后随着肾小管间质病变程度的加重逐渐下降。MMP -7、α- SMA 在 IgA肾病患者肾活检组织中的表达水平与肾小管间质病变的严重程度相一致。结论：Wnt／β- catenin 及其下游靶基因在 IgA 肾病中表达异常，可能参与 IgA 肾病的发生发展。
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去乙酰化酶6在胃癌中的表达
目的：研究去乙酰化酶6(Sirtuin 6,SIRT6)在胃癌组织中的表达及其重要意义。方法应用Western blot免疫印迹法检测25例胃癌组织及癌旁正常组织中SIRT6的表达水平；选择Western blot中癌旁组织与癌组织中SIRT6差异有统计学意义的17例患者中的胃癌组织及对应癌旁正常黏膜组织,提取相应组织中的总RNA,逆转录成cDNA,采用实时荧光定量PCR ( qRT-PCR)方法检测SIRT6 mRNA的表达情况。结果25例中有17例患者的SIRT6在胃癌组织中的表达水平低于癌旁正常组织；qRT-PCR方法检测胃癌组织中SIRT6的mRNA表达水平显著低于癌旁正常黏膜组织,差异有统计学意义( P<0.01)。
关键词： 胃癌 去乙酰化酶6 Western blot 实时荧光定量聚合酶链反应 -
抗华支睾吸虫CAg噬菌体抗体表达与活性鉴定
目的对从抗华支睾吸虫噬菌体抗体库中筛选到的阳性克隆进行诱导表达和鉴定.方法对阳性克隆株B05、C10和E38用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹试验(Western blot)观察有无Fab抗体条带.然后,用卫氏并殖吸虫(Pw)、肝片吸虫(Fh)、姜片吸虫(Fb)、华支睾吸虫(Cs)、日本血吸虫(Si)脱脂全虫粗抗原和华支睾吸虫代谢抗原(Cs-MAg)进行SDS-PAGE,并分别和B05、C10和E38噬菌体抗体进行Western blot,鉴定抗体活性.结果 Western blot结果表明,3株阳性克隆的培养上清和细菌冻融上清在约50 kD和27 kD处均有特异抗体条带出现.B05噬菌体抗体与Cs-MAg和Cs-Ag在约25 kD处出现特异性反应条带,而与其它4种吸虫抗原无反应条带的出现.C10除与Cs-MAg和华支睾吸虫全虫抗原CsAg)在约38 kD处出现反应条带外,还与Sj-Ag在该处有弱阳性反应;而与其它3种吸虫抗原无反应条带出现.E38与Cs-MAg和Cs-Ag在约16 kD处出现特异性反应条带,而与其它4种吸虫抗原无反应条带出现.结论3株阳性克隆均可表达抗华支睾吸虫循环抗原(CAg)噬菌体抗体,其中B05和E38具有特异结合Cs-CAg活性.
关键词： 华支睾吸虫 循环抗原 噬菌体抗体 Western blot -
中药血竭乳剂对DM小鼠右后肢肌肉组织中GSK-3β表达的影响
目的:观察血竭乳剂(Dragon's blood)对四氧嘧啶造模糖尿病小鼠肌肉组织中糖原合成酶激酶(GSK-3β)表达的影响.方法:将120只远交系昆明小鼠分为6组,A组为正常对照组,B组为糖尿病模型组,C、D、E组分别为血竭乳剂低、中、高剂量用药组,F组为盐酸二甲双胍(C4H11N5·HCL)用药组,每组20只,A组饲料为标准颗粒饲料,B-F组饲料为高糖高脂饲料.造模成功后,C、D、E组血竭乳剂低、中、高剂量用药分别按125、250、500(mg/kg·d)小鼠体重给予灌胃,B组给予生理盐水等体积灌胃,F组C4H11N5·HCL按100mg/(kg·d)小鼠体重溶于等体积生理盐水给予灌胃,1次/d,连续给药7天.检测空腹血糖(FPG)、肌糖原含量及GSK-3β含量.结果:在给予血竭乳剂低、中、高剂量后,小鼠肌肉组织中GSK-3β蛋白表达比DM模型组下降(P＜0.05),比正常对照组升高(P＜0.05).结论:血竭乳剂可增加四氧嘧啶造模糖尿病小鼠肌糖原含量,降低GSK-3β表达水平.
关键词： 血竭 糖尿病 GSK-3β Western blot
