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Tim4基因定量检测方法的建立及在消化道肿瘤中的初步应用
目的: 建立T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4(T cells immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecule 4,Tim4)基因表达的实时荧光定量PCR(实时RT-PCR)的检测方法,探讨Tim4基因在消化道肿瘤中的表达差异.方法: 构建包含Tim4基因片段的标准质粒,通过RT-PCR,实时RT-PCR等检测并比较Tim4基因在37例胃癌组织、19例结直肠癌组织与对应癌旁组织中的表达水平. 结果: 建立的Tim4基因定量检测方法准确可靠;在37例胃癌组织中,26例癌旁组织Tim4基因表达量高于对应癌组织(26/37),且在26例癌旁组织高表达的样本中,18例(69.2%)胃癌癌旁组织与癌组织表达比率大于2;在19例结直肠癌中12例癌旁组织表达高于对应的癌组织(12/19),其中癌旁组织高表达率(大于2)为 75.0%(9/12).结论: 成功建立了检测Tim4基因的实时RT-PCR方法,Tim4基因在结直肠癌和胃癌的癌组织中表达呈低趋势,这为深入探讨Tim4基因与肿瘤的关系提供了实验基础.
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荧光实时定量RT-PCR观察伤寒杆菌鞭毛z66和d/j抗原基因表达方法的建立
目的:构建荧光实时定量RT-PCR测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j 编码基因mRNA的方法.方法:根据伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j编码基因序列,设计引物扩增其读码框架内片段,克隆进pGEM-T Easy 质粒.质粒经PCR鉴定后,纯化并定量,作为荧光实时定量PCR的标准品,并制作标准曲线.利用不同渗透压下的鞭毛素基因表达差异,比较三种随机引物(6、8、10核苷酸)与特异性引物的逆转录效果,以确定一种佳的随机引物用于多基因表达观察.结果:标准曲线有较好的线性(r=0.999),cDNA和标准品的PCR产物溶解曲线峰值一致.用8核苷酸随机引物进行逆转录的敏感度高于6、10核苷酸随机引物,低于特异性引物,但用其观测z66抗原基因和d/j抗原基因在高、低渗时表达变化趋势与用特异性引物测得结果一致.结论:成功构建用8核苷酸随机引物进行逆转录同时测定伤寒杆菌鞭毛抗原z66和d/j 基因表达的荧光实时定量RT-PCR方法.
关键词： 实时荧光定量RT-PCR 伤寒杆菌 随机引物 -
丙型肝炎病毒核酸的荧光定量检测及其临床意义
目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV-RNA含量方法的临床应用价值.方法:在HCV基因组5'非编码区(5'-UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,PCR扩增目的片段并构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的巢式RT-PCR进行定性分析.结果:138例样本在HCV抗体阳性患者中,肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(P＜0.05),而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.91).结论:RFQ-RT-PCR检测HCV-RNA含量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HCV在体内的复制情况.
关键词： 丙型肝炎病毒 实时荧光定量RT-PCR 定量 -
非小细胞肺癌化疗药物敏感基因表达及其临床病理特征分析
目的 肺癌是全球癌症死亡的首要原因,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)约占肺癌总数的85%.目前化疗是晚期NSCLC常规治疗方案.文中分析几种常见化疗药物敏感性相关基因mRNA在中国人群中表达情况及其与临床病理特征的相关性以便进行个体化治疗.方法 应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测49例NSCLC石蜡组织标本中编码3型β微管蛋白的TUBB3基因、核苷酸切除修复交叉互补组1基因(excision repair cross complementation group1,ERCC1)、胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthetase,TYMS)、核糖核苷酸还原酶亚单位M1基因(ribonucleotide reductase M1,RRM1)mRNA表达水平.结果 TUBB3 mRNA在53.33% NSCLC组织中高表达;ERCC1 mRNA在40.00%NSCLC组织中高表达,其中肺腺癌高表达率为53.33%、肺鳞状细胞癌为8.33%,两者之间的表达差异有统计学意义,P=0.019;TYMS mRNA在76.19%NSCLC组织中低表达;RRM1 mRNA在78.57%NSCLC组织中低表达.TUBB3、ERCC1、TYMS、RRM1基因mRNA表达与NSCLC患者的性别、年龄、肿瘤分化程度无显著相关性.结论 多数中国人NSCLC肿瘤组织中TYMS、RRM1 mRNA低表达;肺腺癌ERCC1 mRNA表达明显高于肺鳞状细胞癌.研究结果提示,多数NSCLC患者对化疗药物吉西他滨、培美曲塞敏感,肺鳞癌患者较腺癌患者应用铂类抗癌药物更有效.
关键词： 非小细胞肺癌 药物敏感性 实时荧光定量RT-PCR 基因表达 -
胃癌患者外周血hTERT mRNA转录水平及临床意义
目的 研究胃癌患者外周血中hTERT mRNA的表达,探讨其作为胃癌肿瘤细胞标志物的可行性.方法 应用实时荧光定量RT-PCR技术检测96例原发性胃癌、50例胃溃疡和60例健康献血员血清中hTERT mRNA表达水平,并对阳性PCR产物进行克隆、测序.结果 胃癌组hTERT mRNA表达水平(12.78±0.97) copies/ml,显著高于良性胃溃疡组(0.93±0.23) copies/ml和健康对照组(0.29±0.17) copies/ml.多变量分析表明,hTERT表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤生长方式、肿瘤分化程度、淋巴管侵犯、静脉侵犯均无显著相关性(p>0.05),而与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、pTNM分期及CEA有显著相关性(p<0.05).结论 qRT-PCR具有快速、敏感和特异的特点.定量分析外周血hTERT mRNA转录水平可作为胃癌的肿瘤细胞标志物之一,用于早期诊断.
关键词： 胃癌 肿瘤标志物 hTERT mRNA 实时荧光定量RT-PCR -
实时荧光定量PCR检测大肠癌腹腔微转移及其临床意义
[目的] 应用实时荧光定量PCR技术检测大肠癌腹腔内游离癌细胞并探讨其临床意义.[方法] 2003年5月至2004年1月,收集在日本爱知癌症中心手术81例大肠癌病例的腹腔冲洗液,每个样本的cDNA均应用两种引物合成(随机引物和寡核苷酸引物),并在罗氏实时荧光定量PCR(LightCycler)上进行定量分析.每个样本同时进行常规细胞学检查.所有病例术后经过平均为1年的随访.[结果] CEA mRNA和CK-20 mRNA的阳性率和阳性值均与肿瘤的浸润深度(T)、分期以及淋巴结转移相关.在一个合理界定值上,CEA和CK-20检测的敏感度与特异度均为100%,而常规的细胞学检查则为33%和100%.[结论] CEA和CK-20 mRNA定量分析是检测大肠癌腹腔微转移的敏感和特异的方法,CEA和CK-20 mRNA水平的异常与术后的无瘤生存率显著相关.
关键词： 大肠肿瘤 癌胚抗原 细胞角蛋白20 实时荧光定量RT-PCR -
实时荧光定量RT-PCR检测人外周血单个核细胞中 FOXP3 mRNA的表达
目的:建立实时荧光定量逆转录 -多聚酶链反应(real-time fluorescence quantitative RT-PCR)检测人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA的方法,并研究其与CD4+CD25+ Treg细胞活性相关性.方法: 提取人外周血单个核细胞总RNA,将mRNA逆转录成cDNA,以 β-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR检测29例哮喘患儿及24例同龄对照FOXP3 mRNA的相对表达量,采用融解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性;同时采用流式细胞技术检测CD4+CD25 +Treg细胞含量,分析两者相关性.结果:哮喘患儿组 CD4+CD25+Treg细胞百分率明显低于同龄对照组, P＜0.01;FOXP3 mRNA的表达也显著降低,P＜0.05;FOXP3和β-actin的融解曲线分析表明均仅有单一峰,Tm值分别为82.4℃和87.8℃;琼脂糖电泳显示都仅有单一扩增产物.结论:应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR技术检测FOXP3 mRNA表达水平简便易行、结果稳定可靠.初步结果证实,外周血CD4 +CD25+Treg细胞数量和FOXP3 mRNA表达有相同的趋势,存在一定的相关性.
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不同血清群问号钩端螺旋体mce基因序列分析及表达模式的研究
目的:确定问号钩端螺旋体(简称钩体)株携带侵袭相关mce基因情况,原核表达mce基因并制备其抗血清,了解问号钩体感染细胞前后mce基因转录水平的变化.方法:采用PCR扩增13株问号钩体和1株双曲钩体全长mce基因片段,T-A克隆后测序.采用基因工程技术构建mce基因原核表达系统,SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图象分析系统检查目的重组蛋白rMce表达情况,采用Western Blot对表达的rMce进行鉴定.采用皮内免疫法制备兔抗rMce血清,免疫双扩散试验测定其效价.采用实时荧光定量RT-PCR,检测问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染J774A.1细胞前后mce基因转录水平的变化.结果:我国13株问号钩体株均携带mce基因,双曲钩体三宝垄群patoc型Patoc Ⅰ株则否.与报道的序列(GenBank accession No.:NP712236)比较,所克隆的mce基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.02%～100%和97.91%～100%.所构建的mce基因原核表达系统能表达rMce,其产量为细菌总蛋白的5%.问号钩体56601株全菌抗血清能有效识别rMce.问号钩体56601株感染细胞后mce基因转录水平明显上调.结论:mce基因仅存在于致病性的问号钩体中,且其转录水平呈细胞接触上调模式,表明该基因与问号钩体致病性密切相关.mce基因产物是序列保守的外膜蛋白.所构建的mce基因原核表达系统及所制备的rMce抗血清为深入研究该基因功能提供了有效的手段.
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定量RT-PCR检测结直肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达
目的:检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白20(CK20)mRNA的表达水平,并探讨其临床价值.方法:采用实时荧光定量RT-PCR法检测51例经病理学确诊的结直肠癌患者和30例健康对照者外周血CK20 mRNA的表达水平.结果:结直肠癌患者中CK20 mRNA阳性率为27.45%,而健康对照组阳性率为6.67%,两者相比差异有统计学意义(P<0.025).随着临床分期的提高,患者外周血中CK20 mRNA的表达率随之提高,但各分期间阳性率相比无显著统计学意义(P>0.05).Dukes'C期与D期患者中>10拷贝/ml者高于A期与B期患者.结论:检测结直肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达水平可发现早期脱落的肿瘤细胞,对肿瘤微转移的诊断有一定的提示意义.
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胃癌组织中hTERT mRNA表达的定量研究
目的 测定人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在胃癌组织中的表达水平并探讨其临床生物学意义.方法 应用实时荧光定量RT-PCR分析了96例手术切除的新鲜胃癌组织、癌旁正常胃黏膜组织及50例胃溃疡组织中hTERT mRNA的表达水平.结果 胃癌组织hTERT mRNA表达水平(17.38±1.28)copies/ml显著高于癌旁正常胃黏膜组织(0.24±0.10)copies/ml,(P<0.001)和良性胃溃疡组(1.04±0.28)copies/ml,(P<0.001).多变量分析表明,hTERT mRNA表达水平分别与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤生长方式、肿瘤分化程度、淋巴管侵犯及静脉侵犯均无显著性差异(P>0.05),而分别与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、pTNM分期及CEA有显著性差异(P<0.05).结论 hTERT高水平表达常意味着胃癌恶性程度较高且病期较晚,测定胃癌组织中hTERT的水平对判断胃癌浸润、转移及病期进展情况有一定诊断价值.
关键词： 胃癌 hTERT mRNA 实时荧光定量RT-PCR -
胃癌中ABCG2的表达及其甲基化探讨
目的 观察胃癌中三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP binding cassette transpoter G2,ABCG2)基因的表达及其启动子区CpG岛甲基化水平,探讨其在胃癌发生、发展中的作用.方法 采用实时荧光定量RT-PCR法检测6株胃癌细胞株和76例胃癌组织标本及其对应的癌旁组织中ABCG2 mRNA表达,应用免疫组化SP法检测ABCG2蛋白表达.应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测ABCG2基因启动子区的甲基化状态.结果 (1)实时荧光定量RT-PCR结果显示ABCG2在低分化胃癌细胞系HGC-27、MKN-45中呈高表达,而在高分化胃癌细胞系AGS及低分化胃癌细胞系MGC-803中呈低表达.胃癌组织中ABCG2 mRNA的表达下调,与患者性别、年龄、浸润深度、肿瘤大小、淋巴结转移无明显相关,但与胃癌分化程度相关.(2)免疫组化结果显示胃癌组织中ABCG2阳性率为41%,癌旁组织中ABCG2阳性率为35%,两组间差异无统计学意义.有淋巴结转移与无淋巴结转移的胃癌组织中ABCG2阳性率分别为54.5%、21.8%,差异有统计学意义.低分化腺癌与高+中分化腺癌组织中ABCG2阳性率分别为62.5%、16.7%,差异有统计学意义.(3)甲基化结果显示仅在胃癌细胞系MGC-803检测到ABCG2基因甲基化,胃癌组织中未检测到甲基化.结论 ABCG2的表达与胃癌的分化程度及侵袭能力有关,其甲基化不参与胃癌的发生、发展.
关键词： 胃肿瘤 ABCG2 DNA甲基化 甲基化特异性PCR 实时荧光定量RT-PCR -
双黄连抑制流感病毒甲1型基因的研究
目的 通过对实时荧光定量RT-PCR检测流感病毒甲.型多聚酶蛋白(PA)基冈,了解双黄连作用病毒的效应.方法 采用实时荧光定量RT-PCR法标准曲线测约物抑制甲1型PA病毒基因效应.结果 以实时荧光RT-PCR法,蓖复测7次取平均值.对照组病毒基因为3.62 X 106±0.90拷贝数/ug,试验组病毒基因为4.57 X 105±1.23拷贝数/mg.发现病毒对照组基因明显高于试验组(P<0.001).结论 提示双黄连可抑制流感病毒甲1基因.
关键词： 双黄连 流感病毒 实时荧光定量RT-PCR 基因 -
大黄素对乏氧鼻咽癌细胞的放射增敏性与DNA修复基因的关系
目的 研究广西何首乌中大黄素(emodin)对乏氧状态鼻咽癌CNE-1细胞KU70/80表达的影响,探讨其放射增敏作用与DNA修复基因的关系.方法 通氮乏氧条件下,应用实时荧光定量PCR技术检测放射增敏实验组和对照组鼻咽癌细胞中乏氧诱导因子(HIF-1α)和DNA双链断裂修复基因(KU70/KU80)mRNA的表达水平.结果 乏氧作用不同时间后HIF-1α mRNA表达都明显升高, 而单独药物组HIF-1α表达无明显变化;单纯放疗组能诱导KU70/KU80 mRNA表达上调,放疗联合乏氧组对KU70/KU80的上调作用比单纯放疗组更明显;而在乏氧情况下进行加药和照射处理后KU70/KU80 mRNA表达明显降低.结论 在乏氧环境下,大黄素联合放疗能有效下调HIF-1α和DNA双链断裂修复基因(KU70/KU80)mRNA的表达水平,这可能是其增敏作用的分子机制.
关键词： 大黄素 乏氧 修复基因 实时荧光定量RT-PCR 鼻咽癌 -
定量检测HCMV pp67 mRNA快速诊断人巨细胞病毒活动性感染
目的 建立实时荧光定量逆转录PCR(Real time RT-qPCR)方法,检测外周血中人巨细胞病毒(HCMV)pP67 mR-NA的拷贝数,用于临床快速诊断HCMV活动性感染.方法 采用RT-qPCR测定86份癌症患者外周血标本中的HC-MVpp67 mRNA拷贝数,并与HCMV pp65抗原血症检测及HCMV分离培养的实验结果进行比较.结果 86例癌症患者中,HCMV病毒分离检测阳性率3.49％(3例);实时荧光定量RT-PCR检测阳性率17.44％(15例),灵敏度为100％,特异性为85.54％;HCMV pp65抗原血症检测阳性率为10.47％(9例),灵敏度为66.7％,特异度为92.8％.两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).通过受试者工作特征(ROC)曲线分析,RT-qPCR检测每2×105个外周血白细胞中HCMV拷贝数的截断点值为201.5;此病毒拷贝数可作为诊断HCMV活动性感染的参考阈值.结论 应用RT-qPCR检测HCMV活动性感染,灵敏度高、特异性好;并能够为抗病毒治疗供重要的参考依据.
关键词： 人巨细胞病毒 pp67 mRNA 实时荧光定量RT-PCR 活动性感染 -
双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin抑制作用的研究
目的 建立实时荧光定量RT-PCR(real-time quantitative,RT-PCR)检测C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Delta giardin基因mRNA表达量的方法,分析双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达水平的影响.方法 分别采用100 μg/mL、200 μg/mL的双氢青蒿素改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2h、4h、8h、12h,提取总RNA,逆转录合成cDNA,实时荧光定量PCR检测Delta giardin基因mRNA表达情况.结果 100 μg/mL双氢青蒿素培养2h、4h、8h、12h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.44、0.26、0.25、0.02;200 μg/mL双氢青蒿素培养2h、4h、8h、12h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.30,0.26,0.11,0.02.药物对照组中C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达量明显低于阴性对照组.结论 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的防治效果.
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JEV入侵BHK-21细胞内吞途径的初步研究
目的 利用Real-time RT-PCR技术研究,对乙型脑炎病毒入侵细胞的内吞途径进行初步研究.方法 选用氯丙嗪、制霉菌素和细胞松弛素D3种药物分别处理细胞,以分别阻滞网格蛋白介导内吞途径、细胞膜穴样内陷途径和巨胞饮途径,然后进行JEV感染实验,通过Real-time RT-PCR方法测定感染后1h、12h、24 h细胞内的病毒拷贝数.结果 与仅实施感染实验、未进行药物处理的对照组比较,3种药物处理组的细胞内病毒拷贝数在感染后各时相点均呈现不同程度的下降,在感染1h、12h和24 h后,氯丙嗪处理组细胞内病毒拷贝数分别下降了59.58％,53.34％和61.35％；细胞松弛素D组细胞内病毒拷贝数分别下降了23.59％,30.77％和30.14％；制霉菌素组细胞内病毒拷贝数分别下降了35.56％,34.40％和34.40％.结论 乙型脑炎病毒主要利用网格蛋白介导内吞途径进入BHK-21细胞.
关键词： 乙型脑炎病毒 实时荧光定量RT-PCR 内吞途径 -
猪嵴病毒实时荧光定量RT-PCR方法的建立
目的 本研究根据GenBank中登录猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)株的3D蛋白序列基因特征,设计特异性引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测PKV的实时荧光定量RT-PCR方法.结果 该方法检测PKV的3D基因在6.42×102 ~ 6.42×108拷贝/μL范围内有很好的线性关系,其扩增相关系数为0.999,扩增效率为100%,扩增产物的融解曲线分析只出现1个单特异峰,融解温度为(84.94±0.24)℃,对传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合症病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒均检测不到荧光信号,特异性强.所建立实时荧光定量RT-PCR方法组内变异系数为0.26%~1.14%,组间变异系数0.63%~1.79%,重复性好.结论 本方法的建立为PKV的早期诊断及定量分析PKV感染水平和确定感染靶器官提供新的检测方法.
关键词： 猪嵴病毒 SYBR greenⅠ 实时荧光定量RT-PCR -
嗜肺军团菌lvgA基因分析及实时荧光定量RT-PCR对军团菌的检测
目的 确定不同嗜肺军团菌lvgA基因序列的差异性及其感染宿主细胞后转录水平的变化,建立基于lvgA基因检测嗜肺军团菌的荧光定量RT-PCR.方法 通过使用NCBI/Blast,Pfam,TMHMM Server v. 2.0等网络资源分析嗜肺军团菌lvgA基因编码蛋白的保守功能结构域、跨膜区域.根据参考序列设计引物,采用PCR技术从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增lvgA基因,将其连接入克隆载体pMD18-T进行测序,并用cltust软件比较不同嗜肺军团菌菌株lvgA基因的核苷酸、氨基酸序列.根据lvgA基因和嗜肺军团菌16SrDNA序列内的特异保守区域设计引物,以实时荧光定量RT-PCR检测嗜肺军团菌在感染人单核巨噬样细胞THP-1后lvgA基因转录水平的变化,同时,采用基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR对嗜肺军团菌患者血液样本进行检测.结果 研究表明,嗜肺军团菌lvgA基因为军团菌毒力基因,其产物定位于外膜表面.不同嗜肺军团菌菌株中lvgA基因的核苷酸序列和氨基酸序列保守,相似度分别达:99%,96%,96%和99%,98%,98%.在感染宿主细胞后lvgA基因的转录水平上调明显,高达4.3倍(P<0.05).基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法可有效地检测嗜肺军团菌患者血液样本中的嗜肺军团菌.结论 lvgA基因与嗜肺军团菌的毒力相关,建立的基于lvgA基因的荧光定量RT-PCR方法具有快速、敏感、稳定等优点,适用于嗜肺军团菌肺炎临床实验室的早期诊断.
关键词： 嗜肺军团菌 lvgA基因 实时荧光定量RT-PCR -
双氢青蒿素对 C2株蓝氏贾第鞭毛虫Alpha-7.3 giardin 基因 mRNA 表达水平的影响
目的：观察双氢青蒿素（dihydroartemisinin ，DHA）对C2株蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia）Alpha-7．3 giar-din （α-贾第素）基因mRNA表达水平的影响，探讨其对蓝氏贾第鞭毛虫骨架蛋白的损伤作用。方法用双氢青蒿素浓度为100μg/mL、200μg/mL的改良TYI-S-33培养基分别培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫2 h、4 h、8 h、12 h后，以不含药物组为对照，实时荧光定量RT-PCR检测药物作用后Alpha-7．3 giardin基因mRNA表达水平的变化。结果双氢青蒿素作用虫体后Al-pha-7．3 giardin基因mRNA表达水平明显低于对照组，二者有显著性差异。结论双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Al-pha-7．3 giardin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用，抑制效果与药物浓度和作用时间相关，提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫骨架蛋白具有损伤作用。
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人外周血单个核细胞中FOXP3 mRNA与T细胞CDA+CD25+Treg表达相关性探讨
目的 探讨人外周血单个核细胞中FOXF3 mRNA的表达与CD4+CD25+Treg表达的相关性.方法 提取人外周血单个核细胞总RNA.逆转录成mRNA,以B-actin为内参照,实时荧光定量RT-PCR检测29例哮喘患儿及24例同龄对照FOXP3 mRNA的相对表达量,采用融解曲线和琼脂糖电泳鉴定PCR产物特异性;同时采用流式细胞技术检测CD4*CD25q'reg的比例.结果 哮喘患儿组CD4+CD25+Treg细胞百分率明显低于同龄对照组,P＜0.01;FOXP3 mRNA的表达也显著降低,P＜0.05;FOXP3和βactin的融解曲线分析表明均仅有单一峰,Tm值分别为82.4c℃和87.8℃;琼脂糖电泳显示都仅有单一扩增产物.结论 应用SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR技术检测FOXP3 mRNA表达水平简便、经济、可行,哮喘患儿CD4+CD25+Treg明显降低可能参与哮喘发病,FOXP3表达降低可能是导致CD4+CD25+Treg发育障碍的重要因素.
