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异种移植领域猪内源性逆转录病毒的研究进展
供体器官来源不足严重阻碍和困扰着器官移植手术的推广和应用,随着免疫学、基因工程与克隆技术的迅速发展,转基因猪的出现,异种移植有望解决器官短缺的问题,但猪内源性逆转录病毒种间传播的可能性必须进一步深入研究,本文就近期相关研究作一综述.
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脱细胞异种(猪)真皮基质临床应用与研究进展
创面处理贯穿烧伤治疗的全过程,皮肤移植是覆盖烧伤创面的重要手段,但严重烧伤常致自体皮源不足.寻找永久的真皮替代品成为研究的热点.1995年Wainwright研制出无细胞真皮基质(ADM)充当永久性真皮替代物并成功应用临床[1].近年来脱细胞异种(猪)真皮在临床开始广泛应用并取得一定成效.本文将就脱细胞异种(猪)真皮基质的临床应用与研究进展作一综述.
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重组合异种骨修复良性骨肿瘤术后骨缺损的疗效观察
目的:观察一种复合异种骨修复良性骨肿瘤手术切除后骨缺损的临床疗效.方法:重组合异种骨(RBX)治疗36例良性骨肿瘤手术后的骨缺损,其中男20例,女16例;年龄8～62岁,平均31岁.观察手术后的并发症及骨愈合情况.结果:获得随访32例,平均随访时间12个月,短10个月,长24个月.有一例并发术后感染,26例在第9个月经X线片和CT证实获得骨性愈合,在随访期内未发生肿瘤复发.结论:RBX是一种较为理想的骨缺损修复材料,对良性骨肿瘤术后骨缺损的修复具有较为可靠的疗效.
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三种移植骨材料修复骨缺损能力的比较研究
目的研究单纯异种无机骨、复合骨髓异种无机骨以及自体皮质骨修复骨缺损的能力.方法取健康6月龄纯系新西兰大白兔22只,制作兔桡骨节段性骨缺损(1.5cm)模型.根据植入物的不同,随机分为自体皮质骨组(10肢),单纯异种无机骨组(10肢),复合骨髓的异种无机骨组(20肢)和空白对照组(4肢).术后2、4、6、8、12周进行放射线片和组织学观察.结果单纯异种无机骨植入组,直至12周,仍为缓慢的骨传导过程,周边骨小梁向无机骨内爬行替代,异种无机骨内大部分为纤维组织,只有少数中心区域有新骨形成.而复合骨髓的异种无机骨植入后2周即有新骨形成,8周无机骨基本吸收替代完毕,12周髓腔形成、塑形改造,基本相当于自体皮质骨移植的融合速度.结论复合骨髓的异种无机骨的成骨能力明显优于单纯异种无机骨,与自体皮质骨相当.
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猪骨-rhBMP-2复合重组人工骨的研制及临床应用研究
目的 选择猪骨作为rhBMP-2的载体,经去抗原处理,复合重组人工骨,观察该种人工骨临床应用骨缺损修复,促进骨折愈合及诱导成骨的能力.方法 选择猪骨经透析冻干法脱脂、脱蛋白及部分脱钙处理后与成品rhBMP-2按一定比例组成具有生物活性的猪骨-rhBMP-2复合人工骨,先行动物模型实验,随后以自愿随机的原则,临床应用32例,术后1,4,8,12周进行X线检查,观察临床表现,功能恢复情况.结果 临床32例,34块骨,35处植入.随访31例,随访率96.7%,长24个月,短3个月;骨的愈合及缺损修复满意,临床无不良反应.结论 经透析冻干法处理的猪骨能成为rhBMP-2的理想载体,与rhBMP-2复合后具有良好的成骨诱导活性,无免疫排斥反应,具有广泛的临床应用前景.
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脱蛋白牛松质复合骨在脊柱后外侧融合术中的应用
比较观察脱蛋白牛松质复合骨和自体髂骨移植融合脊柱后外侧疗效。方法随机分治疗组60例和对照组59例，治疗组接受脱蛋白牛松质骨复合自体红骨髓治疗，对照组接受自体松质骨治疗。结果随访20个月，两组脊柱后外侧部的融合率及各种并发症均无显著性差异（P＜0．05），对照组手术时间明显长于治疗组（P＜0．05），且供骨部有30％左右出现疼痛并有1例感染。结论应用脱蛋白牛松质骨复合自体红骨髓移植融合脊柱后外侧部，其疗效、安全性和自体骨移植相同，且能减少手术时间和取髂骨后所产生的并发症。
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异种骨髓移植后苏木水提物诱导供者特异性免疫耐受的实验研究
目前,治疗移植排斥反应通常运用免疫抑制疗法,但由于免疫抑制剂的作用是非特异性的,且药物的毒副作用较大,如环孢素A等,因此在免疫抑制的治疗过程中,虽然使得异体器官长期存活,却严重降低了受体对感染和肿瘤的抵抗能力.因此,高效、低毒、能够诱导机体产生免疫耐受的药物是治疗中的首选.中药苏木具有明显的免疫抑制作用,作用较雷公藤为强,其毒副作用远较雷公藤为低.在针对器官移植的众多研究中,诱导受体产生对同种的特异性免疫耐受则是理想的途径.笔者用苏木水提物联合亚致死剂量照射的方法成功地在小鼠到大鼠的骨髓移植中诱导了供者特异的免疫耐受,现报道如下.
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脱蛋白联合冷冻干燥法制备异种骨的实验研究
目的通过脱蛋白联合冷冻干燥的方法制备异种骨，探讨其能否在保持其生物力学特性的同时良好地消除异种骨的抗原性，以满足骨移植的需求。
方法取牛股骨上端去除表面筋膜、结缔组织和皮质骨部分，制备成骨粒和圆柱形骨棒。将十二烷基苯磺酸钠（ABS）和脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠（AES）以及蒸馏水以重量比13：7：80的比例配制复合表面活性剂。将牛骨粒或者骨棒与复合表面活性剂以重量比1：10的比例置于烧瓶中，超声振荡清洗，去除其抗原性，电镜下观察其结构。骨粒和骨棒经乙醇和乙醚脱水、脱脂，冷冻干燥。骨粒用作溶血试验和细胞毒性检测，骨棒进行新西兰大白兔的长期骨植入实验（4、12、26、52周）检测其生物相容性。乙醇抽吸法检测脱蛋白-冻干骨与未脱蛋白的单纯冻干骨的孔隙率。并且比较牛松质骨骨粒与脱蛋白-冻干松质骨骨粒的生物力学特性差异。
结果电镜下观察，制备的异种骨材料为天然多孔结构，保留了骨组织的三维结构，骨小梁间有200~650μm 骨髓腔。溶血率检测未超过5%，判定溶血率合格。细胞毒性检测为1级，极低细胞毒性，材料合格。长期骨植入实验表明，植入4周即有植入的骨棒与兔自身骨出现融合，未见严重炎症反应；52周时，植入骨已完全吸收。孔隙率检测表明，脱蛋白-冻干骨与未脱蛋白的单纯冻干骨相比无显著性差异，均可达到60%以上，符合骨移植材料的要求。脱蛋白-冻干骨以及未脱蛋白的单纯冻干骨的力学特性与新鲜松质骨块相比均有显著降低，但两者之间无显著性差异。结论通过脱蛋白联合冷冻干燥的方法制备的异种骨，能够在保持其生物力学特性的同时良好地消除抗原性；满足骨移植的需求。 -
鞘氨醇激酶通过调控血管发生促进肝癌转移
目的 确定鞘氨醇激酶(SPK)在肝癌转移中的作用.方法 用 Ad-SPK1 腺病毒感染肝癌细胞 LM-3 使其 SPK过表达,Western blot 检测 SPK1 表达及激活情况;Transwell、划痕实验检测肝癌细胞迁移情况.体外管状结构形成实验检测 SPK 对脐静脉内皮细胞(HUVEC)管状化形成的影响.建立 SPK 过表达裸鼠模型,体内检测肝癌迁移情况.结果 在体外 SPK 对肝癌细胞的迁移无显著影响;Ad-SPK 能够促进 HUVEC 管状结构形成;裸鼠皮下移植瘤结果 显示 Ad-SPK 促进肿瘤生长和转移.结论 鞘氨醇激酶通过调控血管发生促进肝癌转移.
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人脐血源性内皮祖细胞血管发生活性及其参与人恶性胶质瘤细胞异种移植瘤血管新生的作用
目的 观察人脐血源性内皮祖细胞(EPC)血管发生能力和在恶性胶质瘤血管新生过程中的作用.方法 应用密度梯度离心法分离新鲜人脐血的单个核细胞,接种于EGM-2培养液中培养获得EPC.取生长到第7～10天的细胞进行CD34和VEGFR-2免疫荧光双标染色.检测血管内皮生长因子(VEGF)刺激下EPC增殖活性、迁移能力和体外形成小管样结构的能力.采用人恶性胶质瘤细胞系U87在免疫缺陷小鼠进行皮下移植,于接种肿瘤后第7天经尾静脉注射EPC(每只5×103),并于接种肿瘤后第28天取材检测肿瘤微血管和EPC组织分布及定位,采用抗人CD31和抗鼠CD31免疫荧光双标记肿瘤微血管,计算人源性EPC来源的血管占肿瘤血管网的比例.结果 培养的细胞在第7～10天时可见条索样结构,生长并逐渐融合形成铺路石样排列的单层细胞,表达内皮细胞标记物CD34和VEGFR-2.在VEGF刺激下EPC具有较强的增殖活性、迁移能力和体外形成小管样结构的能力.外源性EPC能特异性归巢到异种移植瘤组织并形成新生血管,占肿瘤血管网的(18.68±1.32)%.结论 EPC在体内外具有形成血管能力,并参与异种移植瘤血管新生,提示其在恶性肿瘤血管新生过程中具有重要作用,并可能参与肿瘤微血管构筑表型异质性.
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猪内源性逆转录病毒体外感染人胚肾细胞系HEK-293的初步研究
目的对猪内源性逆转录病毒(PERV)体外感染人胚肾细胞系HEK-293的能力进行检测.方法建立体外感染人胚肾细胞系HEK-293的方法,用免疫电镜的方法观察PERV粒子,聚合酶链反应(PCR)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测与PERV共培养24 h后 HEK-293细胞基因组中PERV前病毒基因的整合、表达并对PERV亚型进行鉴定,激光共聚焦显微镜检测PERV-gag蛋白的表达并进行定量分析.结果电镜下可观察到PERV的圆形病毒粒子;与PERV共培养24 h后HEK-293细胞基因组中检测到PERV前病毒DNA,且mRNA也有效表达,PERV亚型为PERV-A,B型;激光共聚焦显微镜观察到PERV-gag蛋白在感染细胞HEK-293的胞质表达,但表达量下降.结论PERV具有体外感染人胚肾细胞系HEK-293的能力,病毒蛋白可以有效表达,因此在猪到人的异种器官移植研究中对PERV可能引起的人兽共患病进行安全性评价是极有必要的.
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异种输血对大鼠内脏功能的影响
目的 观测静脉输注人、猪、豚鼠全血对大鼠存活及内脏功能的影响,为今后研究供体特异性输血诱导异种免疫耐受奠定基础.方法 大鼠阴茎背静脉输注人、猪、豚鼠全血,每只大鼠每天1ml.输人血的45只大鼠平均分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,其相应输血总量分别为1ml,6ml,10ml,观察大鼠一般情况,存活率,并在输血后第10天,第60天分别处死7只、8只,行PaO2、PaCO2、A-aDO2、GPT、GOT、TP、LDH、Cr、BUN以及心、肝、肾、肺、脾脏、胃、血管病理形态检查.输注猪、豚鼠血大鼠仅观察一般情况,存活率.结果 输注人、猪、豚鼠血大鼠精神好,全部存活.输人血前及输血后第10天,第60天大鼠组及各组间PaO2、PaCO2、A-aDO2、GPT、GOT、TP、LDH、Cr、BUN比较差异无显著性(P＞0.05).心、肝、肺、肾、脾、胃、血管病理检查无异常发现.结论 大鼠接受异种全血静脉输注不会损伤大鼠内脏功能.
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五指山小型猪胰岛对糖尿病大鼠的治疗作用
目的:探讨小型猪胰岛治疗糖尿病大鼠的作用和功效.方法:成年健康♂五指山小型猪和普通家猪作为胰岛供体.胰腺获取后经胶原酶消化后进行胰岛提取纯化,纯化后的胰岛通过门静脉移植到糖尿病SPF大鼠的肝内,术后每天肌注环孢菌素(20 mg/kg)作为免疫抑制剂,并通过检测糖尿病大鼠的血糖变化和肝脏组织学检查来判定胰岛移植后的存活情况和纠正胰岛移植的效果.结果:五指山小型猪胰腺消化后胰岛产量为4 608 IEQ/g±593 IEQ/g,纯化后为3 820 IEQ/g ±718 IEQ/g,纯度为85％,取自屠宰场猪胰岛产量为纯化前为3 500 IEQ/g±625 IEQ/g,纯化后为2 720 IEQ/g±435 IEQ/g,纯度为80％.两组84.6％糖尿病大鼠在移植术后第1天,血糖降至正常.维持时间:小型猪胰岛术后存活时间为3-5 d(中位存活时间:4.5 d),普通家猪胰岛存活时间为2-4 d(中位存活时间:3.7 d).经Kaplan-Meier分析,两组胰岛存活时间无差别.结论:封闭群五指山小型猪分离纯化后的胰岛产量高,功能良好,可以纠正糖尿病大鼠的高血糖,适合作为异种胰岛移植的理想供体.
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异种移植的研究进展
供体器官和细胞的匮乏限制了临床同种移植的发展.开展以猪为供体的异种移植研究是缓解供体短缺的重要方法.目前,猪的胰岛细胞、神经元细胞、肝细胞和角膜移植已初步应用于临床,但实体器官移植,如心脏、肝脏、肾脏等仍存在较大的免疫障碍和生理屏障,距离临床应用尚有不小的差距.随着表达一种或多种人的免疫和凝血调节基因猪的出现,异种移植研究取得显著进展,受体和移植器官的存活时间明显延长,而种间交叉感染的风险也较低,但免疫排斥和生理屏障仍是阻碍异种移植进入临床应用的大障碍.本文就当前异种移植临床前研究的新进展作一综述,希望能为相关研究者提供一些参考.
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胰岛移植的现状与未来(文献综述)
阻碍胰岛移植的关键因素仍是:供体数量的不足,自体、同种异体间及异种间的免疫排斥、随时间而呈现的移植物功能的退化.基因工程技术、异种移植以及胰岛干细胞移植等将可能有效地解决供体数量的不足和功能的减退,本文仅就胰岛移植在上述领域的现状及发展作一简要的综述.
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异种器官移植病毒感染的研究状况(文献综述)
介绍异种器官移植存在的病毒类型,评价这些病毒在人类宿主引起疾病的风险.
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异种移植临床前研究进展
猪是人体异种器官移植的理想供体,但由于种属差异,猪-人异种移植面临着巨大的免疫学障碍及动物病原体跨种传播的危险,使之难以应用于临床.但随着移植免疫学、基因工程学以及转基因技术的迅速发展,异种移植领域的研究也取得了显著进展,本文就近年来猪-非人灵长类动物异种移植的研究进展做一综述.
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血管化组织工程骨修复骨缺损的研究进展
随着我国经济的发展,交通事故、建筑事故等创伤,以及先天畸形、骨肿瘤、创伤后感染等引起临床骨缺损患者数量呈逐年上升趋势.目前主要采用自体骨、异体骨或人工骨移植修复骨缺损.但以上方法仍存在种种不足:自体骨移植来源有限,取骨增加了患者痛苦:同种异体骨有传播肝炎、艾滋病等疾病的危险:异种异体骨移植一直存在免疫排斥这一难题.单纯人工骨移植往往只能起骨传导作用.
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腹腔镜微囊化猪胰岛小网膜腔内异种移植的临床研究
目的探讨腹腔镜技术应用于海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊包裹猪胰岛小网膜腔内异种移植术的可行性.方法采用腹腔镜技术对5例6人次Ⅰ型糖尿病病人进行了APA微囊新生猪胰岛小网膜腔内异种移植治疗,观察病人移植前后空腹血糖、C肽和胰岛素用量变化.结果全部病例均未出现手术并发症.术后受体C肽较术前升高3～23倍,胰岛素用量明显减少,其中1例完全停用胰岛素,成为胰岛素不依赖者达31个月.结论腹腔镜技术用于临床微囊化新生猪胰岛小网膜腔移植术治疗Ⅰ型糖尿病安全可行、有较高的临床应用价值.
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TNF-α和IL-10在非协调性异种肝移植中的作用探讨
目的探讨细胞因子TNF-α和IL-10在异种肝移植中的作用.方法建立豚鼠到大鼠原位肝移植模型,用RT-PCR方法检测移植肝内TNF-α mRNA和IL-10 mRNA的表达,并通过应用FK506改变上述细胞因子mRNA的表达探讨其不同作用.结果非协调性异种肝移植后移植肝内有TNF-α mRNA和IL-10 mRNA的表达,FK506可以上调IL-10 mRNA的表达并下调TNF-αmRNA的表达,并减轻受体超急性排斥反应的程度.结论细胞因子在异种肝移植的免疫排斥反应中有重要作用,抗炎和促炎因子的平衡对排斥反应有缓和作用.
