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CD40L(CD154)及CD40研究进展
CD40L-CD40为体内特异性免疫反应系统重要的一对共刺激分子, 参与机体的体液免疫和细胞免疫反应.在B细胞的活化与增殖分化、抗体产生及同种类型转换中起关键作用, 在T细胞活化以及效应性细胞因子的分泌过程中也起重要调节作用.CD40L-CD40信号转导途径的异常可导致机体产生免疫病理反应, 应用抗CD40L的单抗(mAb)则可调控疾病的进程.我们就CD40L-CD40的研究进展进行了综述.
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检测人可溶性疱疹病毒侵入介体双抗体夹心ELISA的建立
目的:建立快速、灵敏的检测人可溶性疱疹病毒侵入介体(HVEM)双抗体夹心ELISA.方法:在获得HVEM重组蛋白的基础上,制备兔抗人HVEM多克隆抗体,以HVEM单克隆抗体(mAb)和HVEM多克隆抗体(pAb)为双抗体,建立双抗体夹心ELISA.结果:建立的检测人可溶性HVEM双抗体夹心ELISA低检出限为3.91 μg/L,标准曲线范围7.81-250 μg/L,线性方程为y=0.0021x+0.1852,R2=0.9944.回收率在89.7％～92.8％之间,平均回收率为91.4％.批内变异系数＜1O％,批间变异系数＜15％.结论:建立的双抗体夹心ELISA快速、灵敏、简单,可满足实际工作需要.
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BTLA 在T细胞上的表达和功能
目的:研究BTLA(B and T lymphocyte attenuator)在T细胞上的表达和功能.方法:分离纯化人外周血T细胞,流式细胞术检测BTLA在不同T细胞亚群上的表达.进一步用CD3抗体分别和游离、包被以及抗Fc段二抗交联的BTLA激发单克隆抗体(mAb)或HVEM-Fc融合蛋白共同刺激T细胞活化,MTT检测细胞增殖.结果:BTLA组成性表达于CD3+、 CD4+和CD8+T细胞表面.游离的BTLA mAb和HVEM-Fc融合蛋白均不能抑制CD3刺激的T细胞增殖,然而包被和交联后的BTLA mAb和HVEM-Fc融合蛋白则能够明显抑制T细胞增殖.结论:BTLA的活化能显著抑制CD3抗体所活化的T细胞的增殖.
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体外诱导扩增大鼠树突状细胞及其特性鉴定
目的: 体外诱导和扩增大鼠骨髓树突状细胞(DC)的方法, 并进行生物学特性鉴定. 方法: 将大鼠骨髓细胞培养48 h后, 去除悬浮细胞, 加入IL- 4和GM-CSF培养2 wk.在光镜和透射电镜下观察培养的DC的形态学特征.应用流式细胞仪检测DC表面分子MHC-Ⅱ类分子、 B7-1、 B7-2的表达水平.将DC与同种异体T细胞混合培养, 采用MTT比色法测定不同细胞密度的DC刺激同种T细胞增殖的能力.结果: 培养的DC胞浆突起大而长, 呈树突状, 具有DC的典型形态.培养2 wk的DC表面MHC-Ⅱ类分子表达的阳性率为74.2%, B7-1、 B7-2分别为81%、 76%.培养的DC具有明显刺激同种异体T细胞增殖的能力.结论: 将大鼠骨髓细胞经贴壁去除悬浮的细胞, 加入IL- 4和GM-CSF培养, 可获得足量、较高纯度的DC, 为研究DC的功能奠定了基础.
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IL-10对培养的树突状细胞影响的研究
目的探讨IL-10对培养的树突状细胞的影响.方法采用Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液从正常人外周血分离PBMC,以细胞贴壁法分离得单核细胞.在RPMI 1640培养液中加入rhGM-CSF和rhIL-4诱生树突状细胞(DC),分别在培养第8,第13 d时加入0,12.5,25,50,100 ng/ml浓度梯度的IL-10.作用2 d后,用倒置相差显微镜或荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞术分析DC表型.结果IL-10对成熟DC的表型表达无影响;IL-10抑制未成熟DC的共刺激分子CD 86和DC成熟特异标志CDla,CD83的表达,对CD 80的表达没有影响;对未成熟DC的Ⅱ类抗原HLA-DR的表达率无影响,但使其表达的平均荧光强度降低;IL-10能使未成熟的DC向耐受原性抗原提呈细胞(APC)转化.结论为过敏性疾病和自身免疫性疾病的预防和治疗提供了实验依据.
关键词： 树突状细胞 单核细胞 白细胞介素10 共刺激分子 人类白细胞Ⅱ类抗原DR -
寻常疣和跖疣患者外周血T淋巴细胞亚群及共刺激分子CD28,CD40的检测
目的 探讨寻常疣和跖疣患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及共刺激分子CD28,CD40的表达情况.方法 采用流式细胞仪检测实验组60例(寻常疣、跖疣患者各30例)和健康对照组30例的外周血T淋巴细胞亚群和CD28,CD40分子在淋巴细胞上的表达水平.结果 寻常疣组、跖疣组与健康对照组相比:外周血CD4+T淋巴细胞(34.57％,35.39％,42.02％)明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01)；CD4+/CD8+比值(1.38,144,1.72)降低,差异有统计学意义(P＜0.05)；淋巴细胞上CD28的表达(52.80％,51.87％,37.41％)明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01),CD40的表达(12.88％,11.94％,15.82％)减少,差异有统计学意义(P＜0.05).而寻常疣和跖疣两组间,外周血T淋巴细胞亚群及共刺激分子CD28,CD40的表达,差异无统计学意义(P＞0.05).实验组患者的疣体数量和外周血T淋巴细胞亚群及共刺激分子CD28,CD40的变化均无相关性(P＞0.05).结论 寻常疣和跖疣患者体内存在T淋巴细胞亚群改变和共刺激分子CD28,CD40表达异常,可能与其免疫功能紊乱和病程慢性化有关.
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共刺激分子在系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞中的表达
目的研究CD80、CD86及CD28共刺激分子在SLE发病中的作用.方法采用流式细胞仪检测40例不同病程系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞上CD80、CD86及CD28的表达水平.结果SLE活动组及静止组淋巴细胞上CD80及CD86的表达水平均明显高于正常对照组,活动组又显著高于静止组,且与SLE DAI呈正相关;而CD28的表达水平与正常对照组差异无显著性,且与SLE DAI亦无相关关系.结论SLE的发生与发展与B7/CD28共刺激途径异常有关.
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Beh(c)et病患者结节红斑组织中CD40/CD40L共刺激分子的表达
目的:探讨Beh(c)et病患者结节红斑中CD40/CD40L分子的表达及意义.方法:采用免疫组化方法对5例Beh(c)et病活动期患者腿或臂部结节红斑中CD4,CD8,CD19,CD68,HLA-DR,CD40和CD40L分子表达的情况进行了检测,并用双重染色方法探讨了细胞来源.结果:Behcet病结节红斑中表皮约90%的细胞表达CD40,但无CD40L表达.真皮和皮下表达CD4,CD8,CD19,CD68,HLA-DR,CD1a,CD40L和CD40的细胞均显著增多.双染结果显示,45%的CD4+T细胞表达CD40L分子.100%CD68+细胞表达CD40分子.59.2%的HLA-DR+细胞表达CD40分子.结论:CD40L分子主要表达于CD4+T细胞,CD40分子主要表达于单核巨噬细胞、抗原提呈细胞和角朊细胞.CD40/CD40L通路可诱导巨噬细胞和T淋巴细胞的功能和活性,对Beh(c)et病患者结节红斑的发生、炎症的持续和扩大起重要作用.
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肺表面活性物质对哮喘小鼠模型树突细胞功能的调节机制
目的: 研究外源性肺表面活性物质对小鼠哮喘模型的免疫调节作用及其对树突细胞(DC)功能的影响.方法:BALB/c小鼠50只,分为3组:哮喘组15只[采用卵蛋白(OVA)致敏和激发]、对照组15只(以生理盐水代替OVA致敏和激发)、治疗组20只[每次OVA激发后10 min以肺表面活性物质(PS) 20 g/L雾化吸入,时间为2,5,10,15和20 min].用HE染色方法评定哮喘模型.分离培养脾脏DC,用流式细胞仪(FACS)检测DC表面共刺激分子CD80的表达变化.取DC培养液3 mL,加入OVA,调整OVA浓度至10 mg/L.分别在2,4,6,12,24 h取DC培养液,1300 r/min离心5 min,取上清液,ELISA法检测IL-12 P70.结果: 哮喘组小鼠的肺组织表现为嗜酸细胞及淋巴细胞浸润为主的炎症变化,治疗组和对照组无此变化.哮喘组DC阳性表达率明显高于治疗组(P<0.01);吸入PS对DC表面共刺激分子的抑制作用在2 min时强.哮喘组DC上清液IL-12低于治疗组(P<0.01);治疗组DC上清液IL-12可以在高水平维持较长时间,而哮喘组的DC上清液IL-12含量降低,且维持时间较短.结论:小鼠哮喘模型中存在明显的DC功能缺陷;外源性吸入PS,能明显改善DC功能,从而保护哮喘发作时小鼠的肺功能.
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小鼠4-1BBLcDNA的克隆及其在COS-7细胞中的表达
目的: 克隆小鼠4-1BBL基因,构建其真核表达载体,并观察其在哺乳动物细胞中的表达. 方法: 取C57BL/6小鼠脾细胞,经PHA诱导后,以RT-PCR克隆4-1BBLcDNA,测序,构建pCDNA3.1(+)-m4-1BBL真核表达质粒,转染COS-7细胞,RT-PCR检测m4-1BBLmRNA表达,间接免疫荧光法和流式细胞仪检测4-1BBL蛋白的表达. 结果: 从小鼠脾细胞中克隆到m4-1BBLcDNA,经测序完全正确,所构建的m4-1BBL质粒在COS-7细胞中获得高效表达. 结论: 小鼠4-1BBLcDNA基因克隆、真核表达载体构建及其在COS-7中的表达均获成功,为进一步研究其功能奠定了基础.
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急性白血病细胞B7-1及MHC分子的表达
目的: 探讨共刺激分子B7-1(CD80)及MHC分子在急性白血病(acute leukemia, AL)中的表达. 方法: 应用一组mAb,采用免疫荧光法对AL 52例瘤细胞及34例正常人骨髓单个核细胞(BMMC)表面B7-1及主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)分子的表达进行了检测. 结果: 所有患者瘤细胞及正常人BMMC上MHCⅠ类分子表达强阳性,MHCⅡ类分子表达92%阳性,而B7-1表达差异较大,急性单核细胞白血病(M5)表达阳性率高(8/11),而急性粒细胞白血病(M1,M2,M3)均无表达. 结论: B7-1缺陷是白血病细胞逃避宿主免疫监视的重要原因,转染B7-1基因的瘤苗可能是免疫基因治疗的有效途径.
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大鼠共刺激分子B7 cDNA的克隆和骨肉瘤细胞转染
目的为了研究共刺激分子B7增强针对大鼠骨肉瘤的特异性细胞免疫反应，首先需获得大鼠B7分子的cDNA克隆. 方法应用反转录PCR的方法，从大鼠脾细胞mRNA中扩增特异性片段. 结果经测序表明，所获得的cDNA克隆与已经发表的B7-1和B7-2的cDNA序列完全一致，并将其表达载体转染UMR-106细胞系. 结论成功获得大鼠B7共刺激分子的cDNA克隆，其转染的UMR-106大鼠骨肉瘤细胞可用于免疫诱导研究.
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人外周血树突状细胞的诱导、培养及其表面标记的鉴定
0 引言树突状细胞(dendritic cells, DC)的特点及功能是目前肿瘤免疫研究的热点,本研究将在DC的培养及其表面标记等方面做进一步的探讨, 为DC的进一步研究奠定基础.
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α-干扰素对慢性粒细胞白血病来源的树突状细胞的免疫调节作用(Ⅰ)
目的于慢性粒细胞白血病(CML)来源的树突状细胞(DCs)无血清培养基中,加入α-干扰素(IFN-α),以探讨IFN-α对CML-DCs表达共刺激分子及分泌IL-10、IL-12 P70的影响.方法在诱导CML-DCs的培养基中,除加入SCF、GM-CSF、TNF-α及IL-4外,还加入不同浓度IFN-α.培养10～14 d后,流式细胞仪检测细胞免疫表型;G显带法显示Ph1染色体;噻唑蓝(MTT)法检测CML-DCs刺激正常人外周血淋巴细胞增殖状况;ELISA法检测培养上清IL-10及IL-12 P70含量.结果 IFN-α(300U*mL-1)组较无IFN-α组,CML-DCs的CD40、CD83、CD86及MHC-I类抗原的表达均升高一倍;异体混合淋巴细胞反应(MLR)中OD值增加一倍;Ph1染色体阳性比例、IL-10及IL-12 P70浓度均减低.结论 IFN-α能够部分纠正CML-DCs免疫表型及功能缺陷,同其解除了CML血清中IL-10对CML-DCs分化的抑制有关.
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血液系统恶性肿瘤细胞共刺激分子的检测及其临床意义
目的探讨共刺激分子B7-1(CD80)在血液系统恶性肿瘤发病学及免疫基因治疗中的重要作用.方法应用免疫荧光法检测了76例恶性血液病患者共刺激分子B7-1及MHCⅠ、MHCⅡDR分子的表达,并与自体瘤苗主动免疫治疗的疗效进行了相关分析.结果所有患者MHCⅠ类分子表达均阳性(100%),MHCⅡDR分子表达阳性率为95%.B7-1在急性单核细胞白血病(M5)及多发性骨髓瘤(MM)表达阳性率较高,分别为69%和100%,而在粒细胞起源的白血病几乎无表达.这与自体瘤苗免疫治疗的临床疗效基本符合,即疗效好的M5和MM病例,其B7-1表达均阳性,而B7-1阴性者几乎无疗效.结论缺乏共刺激分子(如B7-1)是血液肿瘤细胞逃避宿主免疫监视的重要原因,可能是人类血液肿瘤的发病机理之一;B7-1介导的免疫基因治疗将成为治疗人类血液系统恶性肿瘤尤其是急性白血病的一种有效方法,具有重要的临床应用价值.
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探讨慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子的表达变化及临床意义
目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子的表达变化及临床意义。方法选取南昌大学第一附属医院收治的慢性乙型肝炎患者40例作为观察组，所有患者均予以外周血T淋巴细胞表面CD4*、CD8*、CD4*/CD8*比值、CTLA-4等共刺激分子的表达变化测定，同时选取健康患者39例作为对照组，统计两组患者的测定结果。结果观察组中治疗组、治疗无效组、治疗有效组CD4*、CD8*T淋巴细胞亚群绝对表达量均明显下降，低于对照组(<0.05)；CD8*T淋巴细胞亚群相对表达量明显高于对照组(<0.05)，另外未治疗组、治疗无效组CD4*/CD8*比值明显高于治疗有效组、对照组(<0.05)。结论进行共刺激分子表达变化研究可以为慢性乙型肝炎治疗提供一定的依据，为深入评价细胞免疫功能提供了新的研究角度。
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共刺激分子在胃癌组织中表达的意义
免疫应答过程中,激发抗原特异性T细胞应答需2个信号介导,其中第2信号是协同刺激信号,主要由B7家族分子和CD28分子所介导.若缺乏协同刺激信号可导致T细胞功能丧失[1,2].B7基因的导入可能增加肿瘤细胞免疫原性,从而有效地激发T细胞的抗肿瘤效应[3,4].相关研究认为:B7基因表达减弱或缺失,可引起肿瘤细胞的免疫逃逸.本研究通过对共刺激分子的变化,探讨其在肿瘤发生、发展过程中的作用.
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急性非淋巴细胞性白血病细胞共刺激分子的表达
目的:检测急性非淋巴细胞白血病患者白血病细胞表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子的表达情况.方法:采集骨髓中白血病细胞大于70%的27例初诊或复发患者骨髓细胞,荧光抗体标记,应用流式细胞仪进行HLA-DR、CD80(B7-1)和CD86(B7-2)免疫标记检测.结果:27例病人除M3型表达明显低于其他各型外,HLA-DR抗原的表达均较高,其中M2型高为90%;CD80阳性率很低,高为M1型只有5%,其余均在1%～3%之间,CD86的表达高于CD80,高为M5型为48%,低为M6型为11%.结论:白血病细胞表面共刺激分子表达以CD80缺乏为主.
关键词： 肿瘤治疗学 急性非淋巴细胞性白血病 共刺激分子 -
小鼠4-1BBL基因真核表达载体构建及其在COS-7细胞中的表达
目的:构建含小鼠4-1BBL编码区cDNA序列的真核表达载体,并检测其在COS-7细胞中的表达.方法:将目的基因4-1BBL克隆入pUC19载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定. 亚克隆入真核质粒pIRES2-EGFP,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-m4-1BBL. 用脂质体法将重组质粒转入COS-7细胞,以RT-PCR和观察细胞内荧光的方法检测m4-1BBL的表达.结果:酶切鉴定和序列分析证实,重组质粒含有人4-1BBL全长cDNA编码序列,转染实验表明4-1BBL基因能在COS-7细胞中表达. 结论:鼠4-1BBL全长cDNA基因真核表达载体构建及其在COS-7中的表达均获成功,为进一步研究奠定了基础.
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CTLA-4Ig在诱导器官移植免疫耐受中的研究新进展
目前器官移植大障碍依然是术后排斥反应的发生.因此,寻找诱导免疫耐受的方法一直是器官移植领域的研究热点.抗原特异性T细胞的有效活化除需要TCR识别抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)提呈的MHC -肽作为第一信号外,还必需有APC和T细胞表面的共刺激分子之间相互作用所提供的共刺激信号作为第二信号才能顺利完成,阻断该第二信号而仅有第一信号则可以引起T细胞克隆无能甚至是凋亡,从而诱导器官移植免疫耐受.第一个发现可介导协同刺激信号的分子是T细胞表面的CD28分子和APC表面的B7分子,它们在移植后排斥反应的发生中起着非常重要的作用,体外阻断协同刺激反应,尤其是阻断CD28与B7分子的信号转导,可抑制T细胞活化,诱导T细胞克隆免疫无应答.现就利用CTLA-4Ig阻断CD28/B7通路来诱导抗原特异性免疫耐受的研究新进展做一综述.
