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降纤酶与精制蝮蛇抗栓酶治疗脑梗塞的疗效对比研究
降纤酶是由蝮蛇毒经现代生物工程提纯,精制而成的丝氨酸蛋白酶单成分制剂,它具有降低血纤维蛋白原浓度;促使组织型纤维蛋白溶酶原激活剂(t-pA)由内皮细胞释放并增强其活性;降低t-pA抑制因子的活性;增强活性纤维蛋白溶酶;抑制红细胞的凝集力,改善微循环等诸多作用.而精制蝮蛇抗栓酶(精氨酸酯酶)也具有降低血浆纤维蛋白原;降低血液粘度和血小板聚集等作用.两者均可用于治疗缺血性心脑血管疾病.
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HCV NS3蛋白单克隆抗体的制备及其识别区域的分析
目的制备针对丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3全长蛋白的单克隆抗体(MAb),并分析获得的单抗识别表位所在区域,为建立以NS3蛋白为靶位的抗HCV研究提供抗体工具.方法用原核表达的HCV 非结构区NS3全长蛋白作为免疫原,采用小鼠腹股沟皮下NC膜包埋法免疫小鼠,按常规杂交瘤细胞的制备方法,经细胞融合、克隆化制备抗NS3 蛋白的MAb.用间接免疫荧光法和Western blot鉴定其特异性.分别构建NS3丝氨酸蛋白酶(NS3蛋白的N末端1/3)编码基因的真核表达质粒pcDNA3.1(-)-ns3p、NS3解旋酶(NS3蛋白的C末端2/3)编码基因的真核表达质粒pcDNA3.1(-)-ns3h,将其瞬时转染COS-7细胞后,以获得的单克隆抗体作为一抗,通过免疫荧光分析获得单抗识别表位所在的区域.结果获得了2株抗NS3蛋白的单克隆抗体,这2株MAbs均特异识别NS3蛋白,并确定了它们的结合区域.结论获得了针对NS3蛋白的单克隆抗体,并对其单抗识别表位所在的区域进行了分析,为下一步进行以NS3蛋白为靶位的抗HCV研究奠定了良好的基础.
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丝氨酸蛋白酶对心血管涤纶生物材料上细菌生物膜形成影响的研究
研究丝氨酸蛋白酶(SspA)对心血管涤纶生物材料上细菌生物膜(Bacterial biofilm, BF)形成的影响.自金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, SA)膜表面提取、纯化SspA,用于影响SA在涤纶生物材料(Dacron)上的细菌黏附和BF的形成.利用激光共聚焦扫描显微镜(Confocal laser microscopy,CLSM)测定不同浓度梯度下SspA对SA在心血管涤纶生物材料表面BF的形成.发现SspA能有效抑制SA在心血管生物材料涤纶片上BF的形成,其抑制作用的强度与 SspA 剂量呈正相关性.实验表明 SspA 的作用可为临床治疗以生物材料为中心的感染(Biomaterial centered infection, BCI)提供帮助.
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基质金属蛋白酶及其抑制剂与肺癌
恶性肿瘤细胞可由局部向四周浸润和转移,这些作用依赖于其对细胞外基质(ECM)及基底膜的渗透和诱导新生血管的形成.ECM在调节肿瘤细胞的基因表达、行为,影响其生长、转移、增生及代谢中有重要作用.恶性肿瘤组织通过产生或诱导产生各种蛋白酶降解ECM而向周围浸润和转移,与之相关的基质降解酶类包括基质金属蛋白酶(MMPs)、丝氨酸蛋白酶及组织蛋白酶,而MMPs在其中有重要的作用.以下就MMPs及其抑制剂组织金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)的相关研究和在肺癌中的应用作一综述.
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大劣按蚊丝氨酸蛋白酶AdSP3的组织定位和定量研究
目的 对大劣按蚊丝氨酸蛋白酶3(AdSP3)的表达进行组织定位和定量研究.方法 首先利用RT-PCR方法对大劣按蚊血淋巴细胞、唾液腺和蚊胃进行AdSP3的扩增,然后利用Realtime PCR对大劣按蚊感染约氏疟原虫后不同时相点的血淋巴细胞AdSP3表达水平进行定量研究.结果 从血淋巴细胞和唾液腺均成功扩增出目的片段;Reatime PCR的结果显示,吸血后24 h,感染组AdSP3在血淋巴细胞的转录水平显著高于正常对照组,吸血后5 d是AdSP3的表达高峰.结论 大劣按蚊血淋巴细胞和唾液腺可表达AdSP3,AdSP3可能参与了大劣按蚊抗约氏疟原虫感染的入侵和黑化反应.
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基质金属蛋白酶-2和-9与妇科肿瘤浸润及转移
浸润和转移是恶性肿瘤的典型特征,是导致肿瘤患者死亡的主要原因.肿瘤的浸润与转移是一个动态的、复杂的、多步骤的过程,其中细胞外基质(extracelluar matrix,ECM)包括基底膜(Basement Membrane,BM)和间隙结缔组织成分的降解是肿瘤浸润正常组织及开始转移的基本途径.细胞外基质降解酶系主要有丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)等,而基质金属蛋白酶被认为是重要的一类.MMPs是一组锌离子依赖性蛋白水解酶超家族,迄今为止,已发现至少19个成员,根据他们作用的底物不同,可分为间质胶原酶、Ⅳ型胶原酶(包括MMP-2和MMP-9)、基质溶解素、膜型基质金属蛋白酶MT-MMP以及其他MMPs[1-2].
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黄芪多糖联合顺铂抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤生长及其机制
目的 观察黄芪多糖(APS)及联合顺铂(DDP)对Lewis肺癌(LLC)移植瘤小鼠凋亡蛋白细胞色素C(CytC)和高温必需丝氨酸蛋白酶A2(Omi/HtrA2)表达的影响.方法 90只C57BL/6J小鼠,随机分为正常组、模型组、(50、100、200) μg/mL APS处理组、6 mg/kg DDP处理组、3mg/kg DDP联合(50、100、200) μg/mL APS处理组,每组10只.除正常组外,其余80只均接种1x107 LLC细胞0.2mL于右前肢腋窝皮下,建立荷瘤小鼠模型.造模次日起,治疗组的小鼠给予腹腔注射0.3mL药物.每周注射1次DDP,其余药物每天1次,正常组和模型组注射等体积生理盐水,连续20d,于第21天处死.采用HE染色观察肿瘤组织病变情况;免疫组织化学染色和图像分析法检测移植瘤细胞中的CytC及Omi/HtrA2的表达和定位.结果 (100、200) μg/mL APS处理及3 mg/kg DDP联合(100、200)μg//mL APS的荷瘤小鼠肿瘤质量减轻.与模型组小鼠比较,200 μg/mL APS联合3mg/kg DDP小鼠的肿瘤细胞坏死为明显,各处理组的肿瘤组织中CytC、Omi/HtrA2蛋白水平均增加,200μg/mL APS联合3mg/kg DDP小鼠的肿瘤组织增加明显.结论 APS及联合DDP能抑制小鼠Lewis肺癌细胞的生长,可能与肿瘤细胞CytC、Omi/HtrA2表达增加有关.
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犬小孢子菌胞外酶活性研究
目的观察感染不同部位的犬小孢子菌胞外酶活性.方法将20株犬小孢子菌临床株按采集的部位分为头癣株和体癣株,分别进行胞外酶丝氨酸蛋白酶和脂肪酶的活性检测.结果犬小孢子菌头癣株丝氨酸蛋白酶活性显著高于体癣株(P<0.01),而两者的脂肪酶活性无显著性差异(P>0.05).结论不同感染部位的犬小孢子菌存在着种内差异,其致病活性有明显不同.
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釉基质蛋白酶与氟牙症的发病机制
目前认为,釉原蛋白降解延迟和清除障碍是氟牙症形成的关键.一些研究表明,氟可减少在釉原蛋白被水解、清除过程中发挥重要作用的釉基质蛋白酶的表达.釉基质蛋白溶解酶包括基质金属蛋白酶(MMP-20)和丝氨酸蛋白酶(KLK4).本文从分子结构和生物学功能等方面对两种酶的研究现状进行了系统回顾,同时分析了氟对釉基质蛋白酶的可能影响及其与氟牙症发病机制间的关系.
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尿激酶型纤溶酶原激活物与类风湿关节炎
关节正常结构和功能的破坏是慢性炎性关节病的一个主要特征,类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)滑膜衬里细胞的过度增殖及大量炎性细胞的浸润导致血管翳形成,终导致关节软骨和骨的破坏,这些被破坏的软骨和骨组织被认为是由于过度增殖的滑膜细胞分泌大量的蛋白裂解酶而引起的.参与基质降解过程的蛋白裂解酶有四类:金属蛋白酶(明胶酶、胶原酶);胱氨酸蛋白酶(如组织蛋白酶B、D、H、L);天冬氨酸蛋白酶(如组织蛋白酶D);丝氨酸蛋白酶(如纤溶酶原激活剂及它们所激活的产物纤溶酶).
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免疫测定用前列腺特异性抗原国家标准品的定值研究
目的:制备并标定免疫测定用前列腺特异性抗原国家标准品.方法:使用英国国家生物标准与检定所(NIBSC)来源的前列腺特异性抗原(PSA)国际标准品进行量值传递,使用化学发光法、酶联免疫法、时间分辨免疫荧光法3种反应原理的8种试剂盒进行联合标定,同时进行了均匀性和稳定性评价,对定值的不确定度做了分析和估计.结果:本次换批制备PSA国家标准品定值为190 ng·mL-1;不确定度为±27ng·mL-1;瓶间精密度为0.98%;4℃保存11周,经t检验直线斜率<t0.95,6*S(b1),样品稳定;37℃保存11周,经t检验直线斜率>0.95.6*S(b1),样品中总前列腺特异性抗原(tPSA)显著降解,游离前列腺特异性抗原(fPSA)浓度显著升高.结论:本次换批制备的PSA国家标准品定值过程合理,具有较好的均匀性和稳定性,适用于tPSA免疫检测相关试剂盒的产品研究及质量评价,该标准品高温条件保存不稳定,运输过程应保持冷链.
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丝氨酸蛋白酶在脑损伤继发病损中的作用
在中枢神经系统中,氧气,二氧化碳和一些基本营养物质可以通过血脑屏障,而其他血液组分和大分子蛋白则不能通过.卒中、脑创伤等均可破坏血脑屏障完整性,使血清白蛋白之类的大分子通过血脑屏障进入脑组织间隙.脑血管病变时,中枢神经系统中的血源性丝氨酸蛋白酶,如凝血酶、组织纤维蛋白溶酶原激活剂和纤溶酶等的出现很有意义.目前发现丝氨酸蛋白酶类与胶质瘢痕形成、水肿、癫痫发作和神经组织坏死等过程相关.