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小动物PET及PET-CT及其在分子影像学中的应用
阐述小动物PET及PET-CT技术特点及在分子影像学中的应用.小动物PET及PET-CT采用多项新技术,分辨率明显提高,结合小动物CT实现了图像融合.小动物PET及PET-CT实现了在活体上非侵人性分子水平显像,是研究分子影像的尖端设备.
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心肌缺血性疾病基因治疗及分子影像监测进展
心血管疾病是严重危害人类健康的疾病,目前已成为导致死亡的主要疾病之一.随着对心血管病发病的分子机制的研究进展,以及心血管病基因治疗的实验研究,基因治疗已成为心肌缺血治疗具有前景的有效方法,其中有些已经进入临床试验以验证其可行性和有效性.而如何在活体内无创性监测治疗基因的表达及其治疗效果也成为当今亟待解决的课题.
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反义寡脱氧核苷酸技术在分子影像中的应用
反义寡脱氧核苷酸(ASODN)技术是根据核酸杂交原理,设计针对特定靶序列的ASODN,从而抑制特定基因的表达.分子影像学是一门在细胞与分子水平对活体生物过程进行描述和测量的新兴交叉学科.ASODN技术以分子影像为技术平台,通过图像达到无创、实时、活体、特异、精细地直接显示细胞或分子水平的生理和病理过程.该文主要阐述ASODN的作用机制、ASODN的化学修饰、ASODN技术的进展及其在分子影像领域的应用.
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侵袭性真菌感染分子诊断及病原谱的研究进展
侵袭性真菌感染在近些年的发病率和病死率显著上升,对人类尤其是免疫功能低下患者的健康构成了重大威胁.能够尽早确诊、绘制侵袭性真菌感染病原谱是提高侵袭性真菌感染治愈率、降低病死率的关键.分子生物学技术的进步为侵袭性真菌感染的诊断提供了新的思路,与传统方法相比,分子诊断技术大大缩短了诊断所需时间,同时提高了敏感性和特异性,且操作简便、易于重复.本文对研究较多的分子诊断技术如聚合酶链反应技术、基因测序等以及侵袭性真菌感染病原谱调查进行综述.
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新生儿早期凝血分子标志物检测的临床意义
弥漫性血管内凝血(DIC)早期是指临床上有DIC病因的存在,同时有凝血和纤溶反应的异常,但尚未达到DIC确诊标准的亚临床状态.检测早期凝血功能障碍或DIC早期相关分子标志物在新生儿(尤其早产儿、极低体重儿)疾病的早期即能反映凝血功能障碍,同时给予治疗可以避免发生出血、血栓形成以及DIC,可能会进一步提高新生儿(尤其早产儿、极低体重儿)疾病的抢救成功率.
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第二代分子诊断技术在检验医学中的研究进展
随着各种疾病机制研究的深入和分子生物学不断发展，分子诊断技术发展迅速。分子诊断技术是利用分子生物学的理论、技术和方法来研究人体内源性和外源性生物大分子及体系的存在与否及结构、表达情况，为疾病的预防、诊断、监测等提供依据，主要包括核酸诊断和蛋白质诊断。其先后经历了分子杂交技术、常规PCR等阶段，传统的分子诊断技术已不能很好的满足临床应用。随之第二代分子诊断技术应运而生。
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反转录-嵌套式聚合酶链反应检测乙脑病毒
为进一步发展JEV分子诊断技术,本文应用嵌套式RTPCR方法检测人用猪源性生物制品中外源性JEV,现将结果报告如下.
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基于 ssDNA适配子的慢性粒细胞白血病K562细胞检测方法的建立
目的 建立基于ssDNA适配子的慢性粒细胞性白血病K562细胞的检测方法.方法 利用Cell-SELEX(Systematic evolution of ligands bv exponential enrichment)技术获得针对K562细胞的高特异性ssDNA适配子,以双位点结合模式试验原理,结合生物素链霉亲和素磁珠技术,建立K562细胞的特异性检测方法,并验证其特异性及灵敏度.结果 利用建立的方法分别检测K562细胞、HL-60细胞及空白对照细胞,K562组与HL-60组和空白对照组荧光强度值差异有统计学意义(P＜0.01),HL-60组与空白对照组差异无统计学意义(P＞0.05),表明该方法特异性强;该方法能检测出数量小于100个的K562细胞,检测阈值低,灵敏度高.结论 已成功建立了基于ssDNA适配子的检测K562细胞的新方法,为慢性粒细胞性白血病的分子诊断提供了一种新方法,也为分离K562细胞表面物质提供了新的思路.
关键词： K562细胞 适配子 双位点结合试验 生物素-链霉亲和素磁珠 分子诊断技术 -
结直肠癌遗传异质性与相关信号通路研究进展
结直肠癌是消化道常见的肿瘤,近几年来发病率成逐渐上升的趋势,并且死亡率也较高.有临床实验研究表明,结直肠癌的发病有一定遗传因素,有明显的遗传异质性.本文主要论述的是利用分子诊断技术,对直肠癌患者的相关遗传异质因素进行分析,并且指导临床治疗.
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呼吸道病毒核酸检测技术的新进展及其在临床中的应用
呼吸道病毒感染由于其高致病率及致死率，长期以来一直是世界各国的一大负担。随着近几年来严重急性呼吸综合征（SARS）、H5N1、H7N9等病毒相继出现，快速诊断呼吸道病毒感染成为医务工作者面临的巨大挑战。分子诊断技术在过去十几年发展迅速，凭借出色的灵敏度和特异度，成为快速诊断呼吸道感染的首选手段。以核酸扩增为主的多种分子诊断技术，大大缩短了呼吸道病毒检测的时间，在许多临床实验室已逐步替代传统技术，成为病毒检测的新一代方法。
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个体化医学检验室间质量评价计划的建立与应用
以分子诊断技术为依托的个体化医学检测发展迅猛.癌症、遗传学、药物基因组学及微生物检测等项目相继在临床实验室开展并在个体化医疗中发挥着越来越重要的作用.临床分子诊断结果的准确可靠是真正实现个体化医疗的首要前提.室间质量评价(EQA)计划的实施是确保个体化医学检测结果准确、可靠的有效措施之一.如何科学地建立分子诊断EQA计划,及时地开发出新的EQA项目并覆盖分子检测全过程是今后分子诊断质量监管的重点.
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上海市临床检验中心召开2015年上海市分子生物学专业第一次质评会议
2015年1月27日下午，上海市临床检验中心（简称临检中心）召开了“2015年上海市分子生物学专业第一次质评会议”。
此次会议共分为2个部分。第一部分为上海市医学会检验分会分子学组2015年的第一次学术活动，此次学术活动的主题是“分子遗传产前诊断”，特邀复旦大学生命科学学院副院长卢大儒教授和中国福利会国际和平妇幼保健院生殖遗传科副主任陶炯作精彩的学术报告。卢大儒教授报告题目为“基因检测的研究与思考”，他详细介绍了近些年来基因检测技术的发展及应用，尤其对芯片技术、一代测序技术及高通量测序技术在科研及临床上的应用作了详细阐述。陶炯教授报告的题目为“染色体芯片在产前诊断中的应用”，她结合临床诊断中遇到的实际病例介绍了利用染色体芯片对产前诊断中拷贝数变异的检测。后，上海市医学会检验分会主任委员、上海交通大学医学院附属新华医院检验科主任沈立松教授作了总结发言，他对本次学术活动给于了高度肯定，2位专家的精彩报告让基层临床检测人员了解了国际和国内分子诊断技术的新进展，加强了理论知识，开拓了视野，希望今年的学组活动能够越办越好。 -
术中快速预测乳腺癌非前哨淋巴结转移模型的建立与验证研究
背景与目的:大部分前哨淋巴结(sentinel lymph node,SLN)阳性而接受腋窝淋巴结清扫术(axillary lymph node dissection,ALND)的患者,腋窝非前哨淋巴结(non-sentinel lymph node,nSLN)并没有发生转移,因此准确预测nSLN转移至关重要.该研究将建立基于分子诊断一步核酸扩增法(one-step nucleic acid amplification,OSNA)的术中快速预测乳腺癌nSLN转移的模型,以期有效指导乳腺癌后续治疗.方法:利用2010年OSNA临床试验入组的552例患者中SLN阳性、并接受ALND的103例患者数据,建立基于分子诊断的乳腺癌NSLN转移的预测模型,并利用2015年OSNA临床试验入组的327例患者中61例符合相同条件的患者数据进行验证.结果:原发肿瘤大小、SLN总肿瘤负荷、SLN阳性数及阴性数是NSLN转移的四个独立相关因素,利用这四个因素建立预测列线图,得出建模组患者的受试者工作特征(receiver operating characteristic curve,ROC)曲线的曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)为0.814,验证组患者的AUC为0.842.利用验证组61例患者影像学评估的肿瘤大小替代病理大小对本模型进行了验证,得出AUC为0.838,与模型验证性AUC相比差异无统计学意义(P=0.7406).结论:基于分子诊断的乳腺癌预测nSLN转移的模型既可以术中快速预测腋窝淋巴结转移风险,也可以术后常规预测,明显优于其他预测模型,对后续腋窝的处理及放疗靶区勾画具有更好的指导价值.
关键词： 乳腺肿瘤 前哨淋巴结活组织检查 分子诊断技术 -
血浆中检测FHIT、P16、MGMT和RASSF1A基因Ep基化在肺癌诊断中的价值
目的:探讨血浆中脆性组氨酸三连体基因(fragile histidine triad,FHIT)、p16基因、O<'6>-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(O<'6>-methyl-guanine-DNA methyltransferase,MGMT)及信号转导通路基因(rasassociationdomain family 1A,RASSF1A)等抑癌基因启动子异常甲基化及其联合检测在肺癌筛查及早期诊断中的价值.方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法,检测53例肺癌组织和对应的血浆标本以及24例肺良性病变组织中FHIT、p16、MGMT和RASSF1A/14种基因启动子区甲基化状态.结果:肺癌组织中脚FHIT、p16、MGMT和RASSF1A基因启动子区甲基化检出率分别为39.6%(21/53)、49.1%(26/53)、35.8%(19/53)和18.9%(10/53);其对应的血浆标本中这4个基因的甲基化检出率分别为35.8%(19/53)、49.1%(26/53)、28.3%(15/53)和17.0%(9/53),两组标本甲基化检出率存在着较好的一致性(P>0.05).24例肺良性病变组织标本和血浆标本中分别有同1例(0.04%)出现p16基因甲基化,与肺癌组比较差异有统计学意义(P<0.05).4项指标联合检测可显著提高肺癌检测的敏感度(73.6%)和特异度(95.8%).p16基因在血浆中甲基化检出率与患者吸烟指数有明显相关性(p<0.05).结论:血浆中多个肺癌相关基因甲基化联合检测有望成为肺癌筛查、早期诊断简便有效的指标.
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血浆Ras相关区域家族蛋白1A基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值
目的:建立一种可检测微量DNA标本中DNA甲基化的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并运用该技术探讨血浆Ras相关区域家族蛋白1A(Ras association domain family 1A,RASSFL4)基因甲基化检测在肝细胞癌(hepatocellutarcarcinoma,HCC)非侵入性诊断中的价值.方法:用MSRE Hba I消化DNA样品,再用qPCR技术分析酶切结果,建立检测RASSF1A基因甲基化的MSRE-qPCR方法.以45例肝组织(20对HCC患者手术切除肿瘤标本及匹配非癌组织和5例正常肝)为材料,测试该方法的应用价值;运用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)技术进行进一步验证,并与甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)方法相比较.再运用该技术检测150例血浆标本(包括72例HCC患者、37例肝硬化或慢性肝炎等良性病变患者和41例健康对照)的RA88F1A基因甲基化状态,并分析其与HCC患者临床病理参数的关系.结果:MSRE-qPCR法可定量检测低至1%以下的RASSF1A甲基化片段.20例HCC组织中有14例(70%)发生RASSF1A高甲基化,对应非癌组织中RASSF1A甲基化阳性率为25%,而5例正常肝组织均为阴性.MSRE-qPCR结果经BSP验证无误,且与MSP检测结果具有较好的一致性.HCC患者血浆RA88F1A甲基化阳性率(47/72,65.3%)显著高于健康对照(1/41,2.4%)和肝良性病变组(3/37,8.1%),差异均有统计学意义(P<0.000 1).联合检测血浆RASSF1A甲基化与血清AFP可显著提高HCC诊断效率.结论:建立的MSRE-qPCR方法要求样本少、操作简便、成本低廉,可定量检测RASSF1A基因甲基化水平.血浆RA88F1A甲基化分析对于HCC的非侵入性诊断具有重要价值.
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腺瘤性结肠息肉病基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值
目的:建立甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR (methylation-sensitive restriction enzyme-quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并应用该方法探讨血浆腺瘤性结肠息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因甲基化检测在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断中的应用价值.方法:用Hha Ⅰ消化DNA样品,qPCR 技术评估酶切效率,建立优化的MSRE-qPCR方法.用MSRE-qPCR法检测45例肝组织(20例HCC及其相应匹配的非癌组织和5例正常肝组织)中APC甲基化水平；应用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)对MSRE-qPCR检测结果进行验证,并与甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR,MSP)检测方法比较.运用MSRE-qPCR技术检测72例HCC、37例肝良性病变和41例健康志愿者血浆标本的APC甲基化状态.结果:建立的MSRE-qPCR方法可定量检测低至1％的APC甲基化片段.MSRE-qPCR和MSP检测结果均显示,HCC组织中APC基因发生高频率甲基化.MSRE-qPCR检测结果经BSP验证准确无误,且与MSP检测结果具有较好的一致性(Kappa=0.955,P＜0.000 1).HCC患者血浆APC甲基化水平高于肝良性病变及健康志愿者(P＜0.000 1).血浆APC甲基化分析与血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)联合检测可提高HCC诊断效率.结论:MSRE-qPCR可定量检测APC甲基化水平.血浆APC甲基化分析对于HCC的非侵入性诊断具有重要价值.
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上皮生长因子受体外显子21基因突变L858R的实时定量PCR检测
目的:应用实时定量PCR技术建立上皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)外显子21基因突变L858R的检测新方法.方法:根据Taqman-MGB原理设计野生型外显子21和L858R特异性探针,经过优化制备成试剂盒检测171例肺癌组织中的L858R基因突变,并将结果与基因测序进行对比分析.结果:171例肺癌组织经基因测序共检出L858R突变15例,突变率为8.8%.突变多见于女性、肺腺癌及腺鳞癌.定量PCR检测显示,15例突变型组织的R值平均为0.840±0.223,而156例野生型组织的R值平均为1.552±0.278,两组间差异具有统计学显著意义(P＜0.001).此外,以突变型为主的肺癌组织其R值(0.613±0.137)显著低于野生型占优势组织(0.992±0.103),两组间差异极为显著(P＜0.001).实验证明,定量PCR检测方法对L858R基因突变具有高度特异性,其低检测限度为突变型DNA占野生型DNA含量的12.5%.结论:本方法检测EGFR基因L858R突变具有敏感性高、特异性好、简便快速等优点,应用本方法不仅可以对野生型EGFR外显子21或突变型L858R进行诊断,而且还可以根据R值判断样本中突变型基因的比例.
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分子诊断技术和靶向治疗在乳腺癌个体化治疗中的应用
乳腺癌是一类由不同病理实体构成和具有多样临床行为表现的异质性疾病。乳腺癌分子诊断技术和靶向治疗由于特异性较强、疗效明确、不良反应相对较小，已成为继手术、放疗和化疗等传统治疗模式之后的一种全新治疗手段。本文阐述分子靶向治疗在乳腺癌个体化治疗中的现状和应用。
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HBV DNA相关检测的合理应用和结果分析
随着分子诊断技术的进展,临床已常规开展某些与HBV DNA相关的分子检测,对HBV感染的防治发挥了重要作用.但在实际应用中,也存在一些应用不当或对结果误判等问题.本文扼要介绍了HBV DNA定量检测、病毒基因分型、病毒基因逆转录酶区和其他区域序列分析等常用项目的应用价值,以及如何科学分析和评判检测相应结果.同时指出需要客观地评价某些仅适合于研究的分子技术,如HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测技术,不能夸大一些检测HBV变异的新方法的临床应用价值.
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Hutchinson-Gilford早老综合征
报告1例Hutchinson-Gilford早老综合征(HGPS).对1例患儿及其父母外周血LMNA基因11号外显子和侧翼序列进行测序.患者男,5岁,全身皮肤呈硬皮病样改变,生长迟滞,特殊面容,毛发稀少.髋、膝关节均不能完全伸直,呈“骑马样站姿”.患儿LMNA基因11号外显子c.1824C＞T杂合点突变,父母均未检测到该位点突变.文中还通过回顾性分析,探讨中国人群中通过基因学诊断的18例病例的疾病特点.我国基因学诊断的18例HGPS中,9例经典型HGPS均为散发病例,基因表型均上出现c.1824C＞T杂合突变.患儿均在1岁以内发病,出生时基本未表现出“异常”.患儿男女性别比例为2∶1,以男孩受累明显;非经典型患儿基本在家族内发病,男女受累情况类似,3个家庭中均发现c.1579C＞T纯合突变.
