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镉诱导HL-7702细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3的表达
镉是一种有毒的重金属元素,易在体内蓄积,镉对机体毒性效应十分复杂.肝脏是镉损伤的主要靶器官之一,目前对镉致肝细胞损伤机制尚不十分清楚.镉可诱导多种细胞发生凋亡,如大鼠肝细胞、人肝癌细胞株和原代培养的鼠肺上皮细胞等[1-6].
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严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒刺突蛋白基因片段的表达及其初步应用
严重急性呼吸综合征(SARS)病毒为冠状病毒科.该病毒主要引起以破坏呼吸道肺上皮细胞为主的全身性疾病,引发免疫抑制和全身感染.同时,SARS病毒感染与全身血管病变有关.目前,在我国SARS感染后的免疫学诊断尚无完善的方法,细胞培养的抗原面临纯化困难和操作的危险性.我们利用基因重组的方法,表达了SARS冠状病毒S1蛋白的C端部分,此区域包含主要中和抗原位点[1].利用原核表达系统快速高效的特点,可以迅速表达重要的新病原活性蛋白,为进一步建立特异性诊断方法、疫苗动物试验、中和抗体诱导、基因工程疫苗的研制提供实验手段和依据.同时也为疫苗研究提供了新的战略思路.
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H3 K27 me3去甲基化酶Jmjd3调节胎鼠肺上皮细胞增殖和分化
目的：分析H3K27me3特异去甲基化酶Jmjd3（KDM6B）在胎鼠肺生长发育过程中的作用。方法 HE染色、PAS染色和免疫组化方法检测E19.5 Jmjd3基因敲除胎鼠肺生长发育情况。结果与野生型（ Jmjd3＋／＋）胚胎比较，杂合型敲除（ Jmjd3＋／－）胚胎的肺发育稍差，但纯合型敲除（ Jmjd3－／－）胚胎肺发育明显不良，支气管的纤毛上皮细胞和Clara细胞以及肺泡的Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞分化不良。 Jmjd3－／－胚胎肺上皮细胞增殖指数高于野生型和Jmjd3＋／－组，未发现Jmjd3－／－胚胎肺上皮细胞凋亡异常。结论 Jmjd3对胎鼠肺上皮细胞的增殖和分化具有重要调节作用。
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部分细胞因子及一氧化氮对肺炎链球菌黏附气道上皮细胞的影响
肺炎链球菌是慢性支气管炎、肺炎、中耳炎、败血症或脑膜炎的主要病原菌.Cundell等[1]发现,有0.1%的肺炎链球菌可黏附于静息状态非活化的血管内皮细胞上,肿瘤坏死因子(TNF)α及白细胞介素(IL)-1β可分别增加肺炎链球菌黏附于血管内皮细胞190%和91%,IL-1则增加肺炎链球菌黏附于肺上皮细胞35%.本研究通过观察TNFα、IL-1β及一氧化氮(NO)对肺炎链球菌黏附于气道上皮的影响,探讨其在肺炎链球菌黏附于气道上皮细胞中的作用.
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无心跳供体肺的研究现状
肺移植作为晚期肺部疾病的一种有效治疗方法,在世界范围内得到广泛的开展,但病例数却一直得不到显著的提高,其中一个重要原因就是满意的供体肺的严重短缺.在传统的肺移植中,人们使用的移植肺都来自循环完整的脑死亡患者.1986年,Lechner等用从尸体中获得的肺上皮细胞进行培养,获得了成功[1].这一结果提示:血液循环停止后,完整肺功能具有可恢复性.
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大气细颗粒物PM2.5诱导肺上皮MLE-12细胞的氧化应激和自噬
目的 研究大气细颗粒物PM2.5对小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞的氧化应激和自噬的影响.方法 用采集和处理的2009年北京市细颗粒物PM2.5 25,50,100和200 mg· L-1暴露处理MLE-12细胞24和48 h,用MTT比色法测定细胞存活率,双乙酰基二氯荧光素(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧类(ROS)自由基生成,Western蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3Ⅰ蛋白(LC3 Ⅰ)和LC3Ⅱ表达,激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体的形成.结果 与细胞对照组比较,PM2.5100和200 mg· L-1处理24 h组细胞存活率明显降低,分别降低28％和33％(P＜0.01);暴露处理48 h,PM2.5 25 ～200 mg·L-1组细胞存活率均明显下降(P＜0.01),并呈浓度效应关系(R2=0.4940,P＜0.01).PM2.5 100和200 mg·L-1处理MLE-12细胞3h,胞内ROS水平较细胞对照组显著升高,分别升高27.6％和60.7％(P＜0.01).此外,PM2.5100 mg·L-1处理细胞12,24和48 h及PM25 50,100和200 mg·L-1处理细胞24 h细胞自噬标志物LC3 Ⅱ蛋白表达均明显增强,呈现明显的时间效应(R2=0.9150,P＜0.01)和浓度效应(R2=0.6338,P＜0.01)关系.PM2,5100 mg·L-1处理24 h细胞内自噬体荧光强度明显升高(P＜0.05),细胞核周边有明显的自噬泡环绕.结论 PM2.5诱导肺泡Ⅱ型上皮MLE-12细胞的氧化应激,并引发细胞自噬.
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人参皂苷Rg1通过作用于炎性因子和糖皮质激素受体
本文旨在探讨人参皂苷Rg<,1>体外对金葡菌感染肺上皮细胞所致病变的作用及其可能的机制.实验采用体外大鼠原代肺上皮细胞感染模型.RT-PCR和weslem b10t方法观察肺细胞中integrin β1,NF-κB和糖皮质激素受体(GR)等相关因子的表达.结果表明人参皂苷Rg<,1>可以明显抑制金葡菌感染后肺上皮细胞整合素integrin β1的表达,下调炎性因子NF-κB,ICAM-1,TNF-α,IL-2和IL-6,上调GR的表达.人参皂苷Rg<,1>可以明显抑制金葡菌感染肺上皮细胞后的炎性因子,从而对肺脏起到一定的保护作用.
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香烟烟雾提取物对肺上皮影响的研究进展
香烟烟雾中含有多种化学成分，绝大部分有致癌作用，能增加罹患肺癌的风险。除此之外，大量的研究表明，吸烟可诱导细胞凋亡、氧化应激、促炎症反应等，是慢性阻塞性肺疾病发病的主要影响因素，可见吸烟对肺功能有直接的影响。研究香烟烟雾对肺上皮的影响可从细胞水平或分子水平上揭示各种肺部疾病的发病机制，从而为疾病的预防和治疗奠定基础。
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姜黄素对铜绿假单胞菌诱导人肺上皮细胞产生细胞因子的影响及其分子机制研究
目的 探讨姜黄素对铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,Pa)感染的肺上皮细胞的体外抗炎效应.方法 体外培养肺上皮细胞系NCI-H292,加入姜黄素和培养的Pa感染不同时间.Western blot检测和实时定量PCR分别检测NCI-H292细胞中红素氧合酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)mRNA和蛋白表达情况;ELISA检测IL-1β和IL-8的产生.同时采用RNA干扰HO-1表达后,观察对Pa诱导IL-1β和IL-8产生的影响.结果 Pa感染NCI-H292细胞后,IL-1β和IL-8含量分别为(87.52±7.96)pg/mL和(205.63 ±34.25) pg/mL,50 μg/mL姜黄素孵育8h后,其含量分别降至(15.78±10.74)pg/mL和(49.82±14.28)pg/mL,处理前后差异有统计学意义(P＜0.05).同时,姜黄素能在转录翻译水平分别调控HO-1 mRNA和蛋白表达,其中50 μg/mL姜黄素能将HO-1 mRNA增高19倍,蛋白表达水平提高4.8倍(P＜0.05).HO-1 siRNA沉默HO-1表达后,与Pa组相比,IL-1β和IL-8分泌进一步增高.结论 姜黄素可能通过上调HO-1的表达而发挥对肺上皮细胞的抗炎作用.
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牙龈卟啉单胞菌对感染流感病毒肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响
目的 观察牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)对感染流感病毒(H1N1)肺上皮细胞一氧化氮合酶的影响,以期为探讨牙周病在肺疾病发病机制中的作用提供临床依据.方法 利用不同MOI值P.gingivalis与MOI值为2的H1N1共同感染于肺上皮细胞,未感染的细胞作为阴性对照.利用硝酸还原酶法测定上清液中NO的浓度;Westernblot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平.结果 各组细胞在4h、8h、12 h、24h内NO生成均有增加.4h、8h、12 h、24 h后E组NO的量分别为41.404± 3.079、78.945±3.001、592.983±1.690、2360.660±4.199μmol/L,8h、12 h、24h与对照组比较差异有显著性(P＜0.05).12 h、24 h P.gingivalis促进H1N1感染的肺上皮细胞iNOS蛋白水平的表达,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05).结论 P.gingivalis与H1N1共同作用于肺上皮细胞能够促进iNOS的表达,终促进NO的生成.
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miRNA200a调控二氧化硅诱导小鼠肺上皮细胞Wnt/β-catenin信号通路的相关基因表达
目的 观察过表达miRNA200a(miR-200a)重组慢病毒对二氧化硅(SiO2)诱导的小鼠肺上皮细胞株MLE-12细胞中Wnt/β-catenin信号通路的相关基因表达的影响.方法 实验分为SiO2对照组(SiO2)、病毒对照组(SiO2+Lv-NC)、miR-200a病毒组(SiO2+Lv-miR-200a组).各组细胞均用终浓度为200 μg/ml的SiO2刺激,培养18 h后,用实时荧光定量PCR(realtime-PCR)和蛋白免疫印迹技术(western blot)检测各组细胞β-链蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、T细胞因子4(TCF-4)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA和蛋白表达水平.结果 miR-200a病毒组MLE-12细胞的miR-200a表达明显高于SiO2对照组和病毒对照组,差异有统计学意义(P<0.05).与SiO2对照组和病毒对照组比较, miR-200a病毒MLE-12细胞的β-catenin、MMP2、MMP9、TCF-4和Cyclin D1 mRNA和蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 过表达miR-200a能够抑制SiO2诱导的小鼠肺上皮细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达.
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机械牵张对人肺上皮细胞转分化的影响
目的 研究周期性机械牵张刺激对人肺上皮细胞BEAS-2B向间质转分化的影响.方法 应用FX-5000T细胞牵张加载系统对BEAS-2B细胞以0.33 Hz频率分别施加10％或20％牵张应力24、48和72 h,相差显微镜下观察细胞形态变化；应用免疫荧光双标染色和实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测牵张前后E-钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞角蛋白-8(CK-8)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白及mRNA表达情况.结果 ①20％病理牵张48 h后,BEAS-2B细胞开始由鹅卵圆形变为长梭形,牵张72 h细胞间隙明显增宽,细胞长梭形改变更明显.10％生理牵张下细胞形态无明显改变.②免疫荧光双标染色结果显示,20％牵张72 h时CK-8蛋白表达明显下调,E-cadherin表达明显下调,α-SMA蛋白表达明显增强.③与未牵张对照组(作为1)相比,20％牵张组E-cadherin mRNA表达在牵张48 h和72 h分别下调至0.388±0.056和0.247±0.064(均P＜0.05),CK-8 mRNA表达在牵张72 h下调至0.436 ±0.060 (P＜0.01),α-SMA mRNA表达在牵张48 h和72 h分别上调至1.437±0.267和1.261±0.247(均P＜0.05),VimentinmRNA表达在牵张48 h上调至1.679±0.172(P＜0.05).10％牵张组E-cadherin mRNA表达在牵张72 h下调至0.387±0.081(P＜0.05),Vimentin mRNA表达在牵张48 h上调至1.688±0.179(P＜0.05)；其余各指标变化不明显,差异无统计学意义.结论 持续过度牵张能诱导人肺上皮细胞BEAS-2B发生上皮向间质转分化.
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盐酸刺激与机械牵张对人肺上皮细胞 向间质转分化的影响
目的：探讨盐酸（HCl）刺激与机械牵张诱导人肺上皮细胞向间质转分化以及对透明质酸（HA）分泌的影响。方法体外培养人肺上皮细胞株BEAS-2B，取对数生长期的细胞分为磷酸盐缓冲液（PBS）+静止组、HCl+静止组、PBS+牵张组、HCl+牵张组。采用FX-5000T细胞应力加载系统向两个牵张组BEAS-2B细胞持续48h施加20%振幅、频率0.33Hz、正弦波的机械牵张。分别于牵张前后用倒置显微镜观察细胞形态变化；用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测细胞上皮标志物E-钙黏蛋白和细胞角蛋白-8（CK-8）以及间质标志物波形蛋白和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的蛋白表达；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清中HA分泌量。结果①镜下观察显示：PBS+静止组BEAS-2B细胞呈卵圆形，且细胞紧密相连，细胞间存在极性；单纯HCl刺激后细胞形态无明显变化；而单纯给予机械牵张48h后细胞由卵圆形变成长梭形，细胞间隙明显增大；给予HCl刺激和机械牵张双重打击后细胞形态改变更为显著。②WesternBlot显示：与PBS+静止组比较，单纯或联合HCl和机械牵张48h后BEAS-2B细胞E-钙黏蛋白、CK-8表达均下调，波形蛋白、α-SMA表达均上调，以HCl+牵张组表达变化更为明显〔以PBS+静止组表达量（灰度值）为基数1，E-钙黏蛋白为0.16±0.08比1，CK-8为0.10±0.03比1，波形蛋白为3.35±0.38比1，α-SMA为3.10±0.45比1，均P＜0.01〕。③ELISA试验显示：与PBS+静止组比较，单纯HCl刺激或机械牵张均可诱导BEAS-2B细胞分泌HA（μg/L：55.763±0.687、63.005±0.493比49.876±1.867）；而HCl与机械牵张联合刺激后细胞培养上清液中HA分泌量增加更为显著（μg/L：78.220±1.085比49.876±1.867，P＜0.01）。结论 HCl或机械牵张均能诱导人肺上皮细胞发生上皮向间质转分化，同时增加HA的分泌量；HCl刺激和机械牵张双重打击可使人肺上皮细胞向间质转分化更为明显，同时进一步增加HA的分泌量。
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基因激活在呼吸机相关性肺损伤中的作用机制研究进展
机械通气是临床上危重患者重要的治疗措施，但其并发症之一呼吸机相关性肺损伤（VILI）是重症监护中重要的临床问题。VILI的机制包括炎症、气道屏障破坏、肺泡水肿、细胞损伤和凋亡［1］，并涉及多个交互的病理生理学机制，如在组织学水平，机械通气可引起气压伤、容量伤、萎陷伤；在细胞水平，通过应力变化对肺上皮细胞和血管内皮细胞产生生物伤［2］。目前除应用小潮气量机械通气外，几乎没有任何有效的临床策略来阻止VILI的进展。但对VILI的分子生物学和基因学基础已经进行了深入研究［3］，发现基因激活在许多病理生理反应如早期诱导基因、毛细血管通透性改变、细胞凋亡、纤维蛋白沉积、炎性细胞因子释放、氧化应激反应、血管生成和中性粒细胞浸润中都发挥着重要作用。一些研究已经从实验室转化为临床，旨在提供更多可行的治疗手段。现将基因激活在VILI中的作用进展综述如下。
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中性粒细胞防御素与肺部疾病的研究进展
人中性粒细胞肽(human neutrophil peptides,HNPs)主要是由活化的中性粒细胞释放的阳离子多肽,因具有多种生物学特性而受到广泛关注.越来越多的研究证明,HNPs与中性粒细胞在中性粒细胞气道炎症中共同参与肺组织的损伤与修复.本文就HNPs的结构特点、生物学特性及功能、与中性粒细胞的相互关系、对肺上皮细胞的影响及其在中性粒细胞相关的炎症性肺疾病中的表达情况进行了综述,为临床研究提供新的方向.
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大气总悬浮颗粒物对大鼠肺损伤机制的研究
流行病学研究表明,城市空气中大气总悬浮颗粒物(TSP)的污染程度与人群慢性呼吸道炎症、肺气肿、肺癌的发病率明显相关.动物实验研究证实,TSP使肺巨噬细胞存活率下降、吞噬功能降低,在吞噬异物或毒物的同时,释放出一系列细胞因子和前炎症因子,如肿瘤坏死因子、核转录因子,作用于肺上皮细胞、内皮细胞等,使各种炎症细胞聚集,导致炎症发生[1].本文通过大鼠气管染尘,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞数,测定血清和BALF中生化指标的水平及酶的活性,从而探讨TSP对呼吸系统的损害及其机制,为治理大气污染、保护人群健康提供科学依据.
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广佛手对脂多糖诱导的人肺上皮细胞炎症细胞因子调控的影响
目的:探讨广佛手对脂多糖诱导的肺上皮细胞炎症细胞因子的调控作用.方法:不同浓度广佛手水提取物和醇提取物作用于肺上皮细胞A549细胞后,采用CCK8法检测广佛手水提取物和醇提取物对A549细胞活力的影响;以脂多糖(10μg/mL)作用于培养的A549细胞,同时加入广佛手提取物,24 h后ELISA法测定上清液IL-8和IL-10的含量.结果:广佛手水提取物和醇提取物对A549细胞活力影响无统计学意义(P>0.05);脂多糖作用肺上皮细胞后,IL-8和IL-10释放均增加(P<0.01),广佛手水提取物和醇提取物可减少脂多糖诱导的IL-8释放增加(P<0.01),广佛手水提取物在LPS诱导后IL-10分泌明显增加(P<0.01),而广佛手醇提取物对LPS诱导的IL-10分泌增加呈抑制作用(P<0.01).结论:广佛手水提取物和醇提取物对肺上皮细胞无损伤作用,对脂多糖造成的急性肺损伤模型有抑制促炎因子的释放和增加抗炎因子的释放双重保护作用.
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MnTMPyP通过抑制线粒体凋亡通路对百草枯诱导肺上皮细胞损伤的保护作用
目的 探讨MnTMPyP(Mn)通过抑制氧化应激和线粒体凋亡通路对百草枯(PQ)诱导肺上皮细胞损伤的保护作用.方法 体外培养人肺泡Ⅱ型上皮样细胞A549细胞,以超氧化物歧化酶(SOD)的模拟物Mn为干预因素.实验分为四组:①对照组:加入RPMI 1640培养液;②Mn组:加入Mn 10μmol/L;③PQ组:加入PQ 750 μmol/L;④PQ+Mn组:Mn 10 μmoVL预处理90min,再加入PQ 750 μmol/L.各组细胞处理24h后检测相关指标.MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位、活性氧(ROS);分光光度法检测Caspase-3;Western blotting检测线粒体凋亡蛋白Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 与对照组比较,Mn组检测指标无统计学意义;PQ组细胞活性降低,细胞凋亡率增加有统计学意义(P＜0.01),线粒体膜电位降低有统计学意义(P＜0.01),ROS的产生显著增加,Caspase-3活性增高,Western blotting显示线粒体凋亡途径中抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低,促凋亡蛋白Bax表达增强.与PQ组比较,PQ+Mn组细胞活性增加,细胞凋亡率降低,线粒体膜电位增强,ROS的产生减少,Caspase-3活性降低,Western blotting显示Bcl-2蛋白表达量增强,Bax蛋白表达降低.结论 Mn有效减轻PQ诱导肺上皮细胞的损伤,其机制是和拮抗PQ引起的氧化应激诱导的线粒体凋亡途径有关.
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二氧化硅刺激A549细胞水通道蛋白-1表达:体外研究
[目的]研究二氧化硅(SiO2)粉尘刺激对人肺泡上皮A549细胞水通道蛋白-1(AQP-1)的表达及意义.[方法]将A549细胞分为对照组、染毒组及抑制剂组.其中染毒组细胞利用50mg/L的SiO2混悬液刺激细胞,SiO2分别刺激0.5、1、2、4、8h后检测mRNA表达;SiO2分别刺激3、6、12、24h后检测蛋白表达.抑制剂组则先加入AQP-1特异性的通道抑制剂氯化汞(HgCl2)孵育3min后再加SiO2刺激2h检测mRNA,刺激6h检测蛋白表达.各组采用实时聚合酶链反应法检测AQP-1 mRNA表达水平,Western blot、免疫细胞化学检测AQP-1蛋白表达水平. [结果]AQP-1mRNA表达:与对照组相比,SiO2刺激后的0.5、1、2、4h A549细胞AQP-1 mRNA的表达量分别是对照组的2.78、3.52、3.85、1.98倍,8h时回到对照组水平(P＜0.01);抑制剂组的表达水平为相同刺激时间SiO2染毒组的65％.AQP-1蛋白表达:①免疫印迹检测结果显示,与对照组相比,SiO2刺激后的3、6、12、24h A549细胞的表达量分别为对照组的1.44、2.56、1.93、1.35倍(P＜0.05或P＜0.01);抑制剂组的表达水平低于相同刺激时间SiO2染毒组,为其70％(P＜0.01).②免疫细胞化学结果显示,与对照组相比,SiO2刺激后的3、6、12、24h A549细胞的表达量分别为对照组的1.17、1.49、1.29、1.07倍(P＜0.05或P＜0.01).抑制剂组的表达水平低于相同刺激时间SiO2染毒组,为其71％(P＜0.01). [结论]SiO2刺激使A549细胞的AQP-1表达增高,其特异性抑制剂氯化汞可抑制SiO2刺激引起的AQP-1的表达增高,推测AQP-1可能参与了矽肺的发生发展过程.
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高氧诱导新生鼠肺上皮细胞凋亡损伤与肺表面活性蛋白的变化
目的：探讨高浓度氧致新生鼠肺损伤时肺表面活性蛋白C、D（SP-C、SP-D）以及肺泡上皮细胞凋亡率的变化。方法生后24 h内的新生大鼠，随机分为空气组和高氧组；空气组常规饲养，高氧组置常压高氧箱内吸入浓度为90%的氧；两组分别于实验第1、3、7、10、14天，取8只新生鼠的肺组织进行苏木精-伊红（HE）染色并观察其病理变化，采用末端标记法检测肺上皮细胞凋亡率。采用酶联免疫法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中SP-C、SP-D。结果空气组新生鼠随日龄增加肺泡逐渐形成，形态规则，大小均匀；高氧组新生鼠随日龄增加肺泡数量逐渐减少，小血管扩张，出血增多，间质细胞增多，肺组织水肿。空气组新生大鼠BALF中的SP-C随日龄增长逐渐降低；高氧组第1天SP-C低于空气组，第3天SP- C高于空气组，第7天达高峰，第10天SP-C的含量开始下降，第14天下降更加明显。空气组SP-D的含量随日龄的增长亦逐渐降低；高氧组第1天SP-D的含量与空气组无明显差异，第3天SP-D的含量开始增加，第7天达到峰值，第10天SP-D的含量开始下降，第14天下降显著。结论长期吸入高浓度氧抑制肺泡发育，随吸入高浓度氧时间的延长，肺上皮细胞凋亡率增加，肺组织中SP-C、SP-D先增高后下降。
