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新生儿缺氧缺血性脑病与母亲怀孕年龄及血清中HMGB1水平关系的研究
目的:探索新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)与母亲怀孕年龄及血清中HMGB1水平的关系.方法:随机选取2012年3月至2014年3月在我院新生儿科住院的HIE患者60例为实验组,以同期60例正常新生儿为对照组.采用ELISA法测定血HMGB1水平,并记录其母亲怀孕年龄,对结果进行统计分析.结果:实验组新生儿的母亲怀孕平均年龄显著高于对照组(t=3.01,P＜0.05),实验组高龄产妇的百分比(46.7％)显著高于对照组(11.7％)(P＜0.001),且妊高症的比例(45.0％)也显著高于对照组(23.3％),差异有统计学意义.出生后2h内实验组各种程度HIE患儿(重、中、轻)的血清HMGB1水平均显著高于对照组(P＜0.001).结论:新生儿缺氧缺血性脑病与母亲怀孕年龄及血清中HMGB1水平相关,母亲怀孕年龄越大越易导致HIE,且病情越严重,HMGB1在血清中的含量越高,可以作为临床检测HIE病情严重程度的指标之一.
关键词： 新生儿缺氧缺血性脑病 怀孕年龄 HMGB1 -
金纳多对突发性耳聋患者血流动力学的影响
目的:探讨金纳多对突发性耳聋患者血清hs-CRP、HMGB1、ADP、RES及血流动力学的影响.方法:将2009年8月～2012年5月收治的78例突发性耳聋患者随机分为对照组(常规治疗组)和观察组(加用金多纳组),每组各39例,将两组不同严重程度者治疗前及治疗后10 d、20 d血清hs-CRP、HMGB1、ADP、RES及血流动力学指标进行比较.结果:观察组轻度、中度及重度者治疗后基底动脉血流动力学指标异常率低于对照组,hs-CRP、HMGB1、ADP、RES改善幅度大于对照组,P均＜0.05.结论:金纳多可有效改善突发性耳聋者的hs-CRP、HMGB1、ADP、RES及血流动力学.
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干扰素对尖锐湿疣患者免疫应激及 HMGB 1、MIF、GM-CSF 的影响
目的：：观察干扰素治疗尖锐湿疣的疗效,及其对患者免疫应激、HMGB1、MIF、GM-CSF 表达的影响。方法：将240例尖锐湿疣患者随机分为两组,对照组和观察组各120例,所有患者均采用 CO 2激光法进行疣体清除,观察组患者在此基础上应用干扰素治疗。比较两组间疗效、复发情况差异,比较治疗前后两组患者间 T 细胞亚群变化及血清炎症细胞因子、HMGB1、MIF、GM-CSF 变化。结果：观察组治愈率高于对照组,观察组复发率低于对照组,差异均具有统计学意义(P <0.05)；治疗后3、6个月观察组 CD4+、CD4+/CD8+大于对照组,CD8+低于对照组；IL-2及 IFN-γ水平明显高于对照组,而 IL-4、IL-10水平则低于对照组；血清 HMGB1、MIF、GM-CSF 水平低于对照组,各项指标组间差异有统计学意义(P <0.05)。结论：干扰素能调节 T 淋巴细胞亚群,抑制炎症反应,改变机体的免疫应激状态,从而有利于提高 CA 患者的治愈率、降低其复发率。
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HMGB1、VEGF和MMP-7的相关性及其与结直肠癌侵袭转移关系
目的 探讨HMGB1、ⅦGF和MMP-7的相关性及其与结直肠癌侵袭转移关系,寻求某些检测指标作为结直肠癌侵袭转移及预后的标志物.方法 用免疫组化法监测20例结直肠正常组织、癌旁组织及70例结直肠癌组织中HMGB1、VEGF、MMP-7的表达情况.多因素分析三项指标与结直肠癌的关系并作相关性分析.结果 正常组织、癌旁组织不表达或低表达,结直肠癌组织高表达(P＜0.05),三项指标的表达与性别、年龄、直径无关,随恶化程度、转移呈递增性,与肿瘤侵袭转移有关(P＜0.05),且三者具有正相关性.结论 HMGB1、VEGF、MMP-7可作为结直肠癌侵袭转移、预后的标志物.
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HMGB1在过敏性紫癜患儿血清中的表达及其临床意义
目的:探讨高迁移率族蛋白1 (high mobility group protein,HMGB1)在过敏性紫癜患儿血清中的表达及其临床意义.方法:分别利用ELISA法检测183例过敏性紫癜患儿发病期和康复期血清HMGB1表达量以及real-time PCR法检测HMGB1mRNA相对表达.40例健康体检儿童作为对照组.结果:患儿发病期血清HMGB1蛋白浓度高于对照组(t=7.43,P=0.000);患儿康复期血清HMGB1蛋白较发病期降低(t=34.257,P=0.000).患儿发病期外周血HMGB1 mRNA相对表达量升高(t=10.362,P=0.000);康复期较发病期明显降低(t=4.651,P=0.000).患儿HMGB1蛋白在不同性别(t=0.032,P=0.974)、年龄(F=0.088,P=0.916)以及初发、复发(t=0.449,P=0.654)患儿血清中的浓度差异无统计学意义;在有无肾损伤(t=5.672,P=0.000)、有无关节症状(t=3.048,P=0.003)、有无消化道症状(t=2.050,P=0.042)患儿血清中的浓度有明显差异.有肾损伤、有关节炎症状、有消化道症状患儿外周血HMGB1 mRNA相对表达分别高于无肾损伤(t=2.867,P=0.005)、无关节炎症状(t=2.733,P=0.007)、无消化道症状(t=2.366,P=0.019)患儿.结论:HMGB1作为一种新的生物学指标,有助于诊断过敏性紫癜活动期及其并发症,有利于临床治疗选择.
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盐酸青藤碱诱导EA.hy926细胞自噬及其在抗炎中的作用
目的 探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞EA.hy926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用.方法 Western blot检测分别以终浓度为50、100 μg/mL的盐酸青藤碱处理12 h后的EA.hy926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子HMGB1表达变化情况；荧光显微镜观察吖啶橙染色的经盐酸青藤碱诱导后EA.hy926细胞酸性小体变化情况.结果 经终浓度为50、100 μg/mL的盐酸青藤碱处理EA.hy926细胞后,与对照组比较,100 μg/mL的盐酸青藤碱可使自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达(0.67±0.05)及ERK2的磷酸化水平(1.08 ±0.05)上调(P＜0.05),ERK抑制剂U0126可使LC3Ⅱ表达下调(P＜0.05)及EA.hy926细胞中酸性小体减少；盐酸青藤碱可抑制EA.hy926中LPS诱导的HMGB1表达,自噬抑制剂氯喹可逆转该细胞中盐酸青藤碱对LPS诱导HMGB1表达的抑制作用(P＜0.05).结论 盐酸青藤碱可通过ERK通路诱导EA.hy926细胞自噬,该自噬过程是盐酸青藤碱下调炎症细胞因子HMGB1进而发挥抗炎活性的机制之一.
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人高迁移率族蛋白的分子改建及原核表达
目的 构建人高迁移率族蛋白(high mobility group box 1 protein,HMGB1)突变体及表达与鉴定目的蛋白,为进一步通过HMGB1突变体蛋白与天然HMGB1竞争结合相应受体而抑制其致炎效应奠定了基础.方法 在已成功克隆和表达人HMGB1的基础上,采用一步反向PCR致突变法构建人HMGB1 cDNA的6个突变体,并分别克隆于原核表达载体pQE-80L上,表达6个相应的重组HMGB1突变体蛋白,并经Western blot鉴定.结果 获得人HMGB1 cDNA的6个突变体,并成功构建到原核表达载体pQE-80L上,诱导表达且经Western blot鉴定了目的蛋白.结论 成功构建人HMGB1突变体,并进行了目的蛋白表达的鉴定.
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人HMGB1的制备及功能鉴定
目的在克隆人HMGB1(high mobility group box-1)全长cDNA的基础上,用大肠杆菌进行表达并鉴定其生物学活性.方法用RT-PCR方法扩增人HMGB1 cDNA,克隆至载体pUC19行序列测定后,再构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,以IPTG诱导HMGB1蛋白表达,Ni2+-NTA和多粘菌素B亲和层析柱进行纯化后,用培养的人单核细胞系THP1检测重组蛋白活性.结果构建了人HMGB1蛋白的重组表达质粒pQE-80L/HMGB1,获得了纯度约96%的纯化蛋白产物,该蛋白能刺激THP1细胞产生TNF-α.结论成功制备了具有生物学活性的人HMGB1蛋白纯品,为进一步的功能研究奠定了基础.
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miR-223下调NLRP3炎性体表达抑制人血管平滑肌细胞分泌高迁移率族蛋白B1
目的 探讨microRNA-223(miR-223)下调人动脉平滑肌细胞(human arterial smooth muscle cells,HASMCs)高迁移率族蛋白B1 (high mobility group box 1,HMGB1)分泌的作用机制.方法 利用我院严重外伤截肢患者或健康器官捐献者的正常动脉组织,通过组织块贴壁法分离原代HASMCs并通过免疫荧光进行鉴定;利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPC R)及Western blot检测脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)联合腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)对HASMCs中NLRP3(NLR family pyrin domain containing 3)炎性体的激活作用;转染miR-223模拟物(miR-223mimic)进入HASMCs,利用RT-qPCR、Western blot检测靶基因NLRP3 mRNA、蛋白表达量及激活状态,利用双荧光素酶报告基因明确miR-223和NLRP3的调控关系,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测miR-223对HASMCs上清中HMGB1的含量影响.结果 LPS联合ATP可以激活HASMCs细胞内NLRP3炎性体(P＜0.05),促进HMGB1胞外分泌(P＜0.01);转染miR-223可以显著减少NLRP3mRNA及蛋白水平(P＜0.05),通过双荧光素酶报告基因明确NLRP3为miR-223的直接靶基因;转染miR-223可以明显下调HASMCs上清的HMGB1水平(P＜0.01).结论 miR-223可以通过转录后水平下调HASMCs内NLRP3炎性体的表达及激活,从而抑制HASMCs分泌HMGB1.
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HMGB1和VEGF-C/D在结肠癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系
目的探讨HMGB1和血管内皮生长因子C/D(VEGF-C/D)在人结肠癌组织中的表达及与淋巴结转移之间的关系.方法选择45例结肠癌标本,应用免疫组织化学染色方法,检测HMGB1和VEGF-C/D在人结肠癌组织中的表达,同时对其与临床病理参数的关系进行统计学分析.结果 HMGB1在结肠癌组织中的阳性表达率为73.3%,其中有淋巴结转移的表达率为85.2%,无淋巴结转移的表达率为55.6%,差异有统计学意义.VEGF-C结肠癌组织中的阳性表达率为60%,其中有淋巴结转移的表达率为74%,无淋巴结转移的表达率为38.9%,二者差异显著.而且,HMGB1表达与VEGF-C表达呈正相关.结肠癌HMGB1和VEGF-C的表达水平与肿瘤细胞淋巴转移相关,而与患者的年龄、性别、分化程度等无相关性.结论 HMGB1和VEGF-C的表达与结肠癌患者的淋巴结转移相关,可作为判断预后的一个观测指标.
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乳腺癌肿瘤微环境中HMGB1、miRNAs的检测及相关性分析
目的 检测miR-21-5p、miR-155-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p和HMGB1在乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤微环境中的表达水平,分析它们在乳腺癌发生、发展中的作用.方法 收集乳腺癌MCF-7荷瘤小鼠手术标本;实时荧光定量PCR检测18只乳腺癌荷瘤小鼠手术标本中miR-21-5p、miR-155-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p和HMGB1的mRNA的表达水平;Western blot法检测HMGB1在癌组织及癌旁组织中蛋白表达情况.结果 与癌旁组织相比,肿瘤组织中miR-21-5p、miR-222-3p表达上调(P＜0.05),miR-155-5p、miR-218-5p、miR-494-3p表达下调(P＜0.05);与癌旁组织相比,HMGB1在癌组织中高表达(P＜0.05).相关性分析发现,miR-21-5p、miR-222-3p与HMGB1的表达成正相关,而miR-155-5p、miR-218-5p、miR-494-3p与HMGB1的表达成负相关.结论 肿瘤微环境中miR-21-5p、miR-155-5p、miR-218-5p、miR-222-3p、miR-494-3p和HMGB1可能在乳腺癌的发生、发展中起一定作用.
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宫颈癌肿瘤微环境中MDSC与HMGB1检测及相关性分析
目的 检测HMGB1和髓系来源的免疫抑制性细胞(MDSC)在宫颈癌肿瘤微环境中的表达水平,分析它们在宫颈癌发生、发展中的作用及相互关系.方法 用人宫颈癌Hela细胞系建立裸鼠皮下瘤模型,成瘤后取荷瘤小鼠的脾脏、肿瘤组织及外周血制成单细胞悬液,通过流式细胞术检测脾脏、外周血中MDSC细胞的百分比.分别采用Western blot、RT-qPCR方法检测肿瘤组织中HMGB1蛋白和mRNA的表达水平.结果 与正常对照组相比,荷瘤鼠外周血和脾脏中CD 11 b+Gr-1 +MDSC的比例明显增高(P＜0.05).与癌旁组织对照组相比,荷瘤鼠肿瘤组织中HMGB1呈明显高表达,具有统计学意义(P＜0.05).荷瘤鼠脾脏中CD11b+Gr-I+MDSC增高与肿瘤组织中HMGB1的高表达呈正相关.结论 官颈癌肿瘤微环境中HMGB1可能通过调控MDSC参与官颈癌的发生、发展.
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侵袭性白假丝酵母菌感染小鼠模型中HMGB1的表达及意义
目的 研究高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)在侵袭性白假丝酵母菌感染小鼠模型中的表达及意义.方法 Balb/c小鼠腹腔注射环磷酰胺100 mg/(kg·d),连续3d,检测小鼠血液中白细胞数量的变化.然后,通过尾静脉注射不同浓度的白假丝酵母菌悬液,选取合适的感染浓度并鉴定该浓度造模成功.将20只免疫抑制小鼠尾静脉注射白假丝酵母菌悬液,分别于感染后1、3、5和7d处死小鼠,检测小鼠肝、肾功、C-反应蛋白等指标来明确小鼠病情严重程度,同时用Westem blot检测小鼠肝、肺、肾组织中HMGB1的表达水平.结果 本实验选取的侵袭性白假丝酵母菌感染的浓度为2×105/ml,组织培养和组织病理学方法均确定该浓度造模成功.生化结果显示,实验小鼠肝、肾功明显受损(总蛋白、球蛋白、谷草转氨酶、尿素、肌酐明显升高,胆碱酯酶明显降低)及C-反应蛋白明显升高.Western blot结果显示,实验组小鼠肝、肺、肾组织HMGB1的表达量均增加.肝组织HMGB1的表达量在第1天开始增加,第5天明显(P＜0.01);肺和肾组织第5天开始明显增加(P＜0.01).结论 HMGB1很可能在侵袭性白假丝酵母菌感染中起着重要作用.
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HMGB1参与HBSS诱导的Lewis细胞凋亡及其相关机制研究
目的 探讨HBSS饥饿缓冲液能否诱导肺癌细胞(Lewis)凋亡及可能的机制.方法 Hank's平衡溶液(HBSS)饥饿缓冲液作用于Lewis细胞12h后采用Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡.Lewis细胞在HBSS处理30 min后流式检测ROS的产生,4、8、12h后通过免疫印迹检测HMGB1蛋白的表达.另外,HBSS刺激Lewis细胞12h后采用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的表达.结果 HBSS饥饿缓冲液作用于Lewis细胞12h后与对照组相比凋亡百分比明显增多.流式结果表明Lewis细胞在HBSS处理30 min后ROS表达量明显上升,免疫印迹检测发现HBSS作用Lewis细胞3h后HMGB1表达增加,6h后在细胞培养上清中检测到HMGB1的分泌.另外,HBSS刺激12h后Caspase-3表达也显著增加,且有统计学意义.结论 HBSS饥饿缓冲液能诱导肺癌细胞(Lewis)凋亡,且凋亡可能依赖于ROS-HMGB 1-Caspase-3通路.
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HMGB1促进外源DNA诱导细胞产生Ⅰ型干扰素
目的 探讨HMGB1在外源DNA-poly(dA-dT)刺激细胞Ⅰ型干扰素IFN-β中的作用.方法 荧光素酶分析方法 检测经poly(dA-dT)刺激后细胞IFN-β的表达差异,同时PCR法检测了胞内重要DNA结合蛋白—高迁移率族蛋白-1(HMGB1)的表达改变；构建携带HMGB1特异性shRNA的慢病毒载体,获得HMGB1稳定下调(HMGB1KD)细胞,经poly(dA-dT)刺激后检测IFN-β表达,分析HMGB1在外源DNA刺激IFN-β产生中的作用.结果 poly(dA-dT)刺激293T细胞后,IFN-β表达显著上调,同时,HMGB1的表达在不同细胞中也明显上升,当下调HMGB1后,poly(dA-dT)刺激IFN-β产生的能力大幅削弱,表达水平降至对照组的1/8 (P＜ 0.05).结论 HMGB1在促进外源DNA诱导Ⅰ型干扰素产生中发挥了关键作用.
关键词： poly(dA-dT) Ⅰ型干扰素 HMGB1 -
高表达HMGB1肺癌细胞系的筛选及意义
背景与目的 在人肺鳞癌细胞株YTMLC-9、人肺腺癌细胞株A549、人大细胞肺癌细胞株L9981及人小细胞癌细胞株NCI-H446中筛选高表达HMGB1的细胞株,作为人肺癌细胞HMGB1基因研究的理想材料.方法 采用实时荧光定量PCR和Western blot方法对人肺癌细胞HMGB1基因在4株细胞中的mRNA和蛋白水平的表达进行检测,筛选出高表达HMGB1基因的人肺癌细胞株.结果 人肺鳞癌细胞株YTMLC-9、人肺腺癌细胞株A549、人大细胞肺癌细胞株L9981及人小细胞癌细胞株NCI-H446中均有HMGB1基因表达,其中人大细胞肺癌细胞株L9981表达水平高,mRNA是表达量低的人肺腺癌细胞株A549mRNA表达量的10.3倍;人大细胞肺癌细胞株L9981 HMGB1蛋白表达水平高,与其它3种人肺癌细胞株相比有统计学差异(P<0.001).结论 人大细胞肺癌L9981细胞株为HMGB1高表达细胞株,可作为进行肺癌细胞中研究HMGB1的实验材料.
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RNA干扰抑制HMGB1基因表达对肺癌细胞L9981增殖和侵袭的影响
背景与目的 研究小干扰RNA抑制高迁移族蛋白B1基因表达对肺癌细胞L9981增值和侵袭能力的影响.方法 设计合成靶向HMGB1基因的siRNA,采用阳离子脂质体试剂瞬时转染肺癌细胞株L9981,利用实时荧光定量PCR和Western blot检测RNA干扰后HMGB1基因的沉默效果,评价siRNA设计的合理性及RNA干扰抑制HMGB1表达的有效性;用细胞活力计数仪测定3组细胞活力;分别在RNA干扰后24、48、72和96小时应用MTF实验检测细胞生存状态,计算生长抑制率并绘制生长曲线;应用boyden chamber法检测侵袭能力的差异.结果 靶向HMGB1的stRNA成功抑制肺癌细胞株L9981中HMGB1基因及蛋白表达,细胞活力检测仪测定RNA干扰48小时后,细胞活力显著下降;MTT测定肺癌细胞生长受到明显抑制;boyden chamber小室细胞侵袭实验结果肺癌穿膜细胞数明显减少.结论 应用siRNA技术能有效的抑制HMGB1基因的表达,同时有效抑制L9981细胞的体外增值和侵袭,为肺癌的生物学治疗提供了新思路.
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下调HMGB1基因对人肺癌细胞株L9981基因表达谱的影响
背景与目的 应用RNA干扰联合基因芯片技术检测HMGB1表达下调后肺癌细胞L9981基因表达谱的差异情况,筛选与HMGB1相互作用的基因.方法 采用阳离子脂质体试剂向人肺癌细胞L9981转染靶向HMGB1基因的siRNA,下调HMGB1的表达.应用Affymetrix HU133 plus 2基因芯片检测人肺癌细胞L9981 HMGB1基因表达下调后,全基因表达谱的变化,并应用GCOS(Gene-Chip Operation Software)软件分析筛查数据,对相关基因进行综合分析.结果 RNA干扰抑制人大细胞肺癌细胞株L9981 HMGB1基因表达后,GCOS软件分析基因芯片分析其表达谱的变化.结果 发现1433个探针表达明显改变,对应有明确名称的基因为879个,其中上调的基因有295个,下调的有584个;EST序列216个,其中上调96个,下调120个.结论 肺癌细胞L9981 HMGBI基因下调后,其细胞基因表达谱发生明显变化,确定表达差异基因879个,表明HMGB1基因表达受很多相关基因及信号通路的调控,与肺癌的侵袭、转移及肺癌形成等生物学过程密切相关.
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HMGB1与动脉粥样硬化炎症机制的研究进展
动脉粥样硬化初主要影响内皮细胞，但一旦激活，动脉粥样硬化便可不依赖于原始损伤因素而在损伤部位持续发展［1］。研究证明，高迁移率族蛋白1（high mobility group box-1 protein，HMGB1）参与多种心血管疾病的发病和进展，如系统性血管炎、动脉粥样硬化、急性冠脉综合症和脑血管意外等；而HMGB1诱发的无菌性炎症在动脉粥样硬化的整个发生和进展过程中处于十分重要的地位。
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子宫内膜异位症患者血清及组织OPN、CA125、HMGB1、VEGF及其受体的变化研究
目的 观察及探究子宫内膜异位症患者血清及组织OPN、CA125、HMGB1、VEGF及其受体的变化状态.方法 选取2011年7月～2013年12月本院收治的75例子宫内膜异位症患者为观察组,并以同期的75例外伤手术患者为对照组,将两组OPN、CA125、HMGB1、VEGF及其受体的血清水平和组织阳性率进行比较,并比较观察组中不同r-AFS分期和分型者的血清水平及组织阳性率.结果 观察组OPN、CA125、HMGB1、VEGF及其受体的血清水平和组织阳性率均高于对照组,且分期较高及存在深部浸润病灶者的血清水平和组织阳性率高于分期较低及未伴有深部浸润病灶者(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 子宫内膜异位症患者血清及组织OPN、CA125、HMGB1、VEGF及其受体均呈现较高状态,且分期及是否存在深部浸润病灶对其有较大影响.
