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土贝母苷甲对人鼻咽癌上皮细胞丝裂原活化蛋白激酶活性的影响
目的 研究土贝母苷甲(tubeimoside 1,苷甲)对人低分化鼻咽癌上皮细胞株(CNE-2Z)丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase, MAPK)活性的影响.方法 采用放射自显影、液闪和蛋白质免疫印迹法检测MAPK的活性.结果 三种实验方法得到的结果一致表明,苷甲有快速激活MAPK的效果.结论 激活MAPK信号转导通路可能是苷甲诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一.
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HPLC法测定甲肿消及大鼠血清中土贝母苷甲的含量
目的 建立甲肿消制剂及灌胃给予甲肿消后大鼠血清中土贝母苷甲的含量测定方法.方法 采用RP-HPLC法,甲肿消制剂用甲醇萃取,血清样品采用C18SPE固相萃取柱(3 mL,200 mg,60μm)处理,甲醇洗脱;色谱柱:DiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)和Easyguard保护柱;流动相:甲醇-水(65:35),检测波长:214 nm,流速:1 mL/min.结果 甲肿消制剂及大鼠血清中土贝母苷甲的回收率分别为(103.49±3.49)%、(104.70±4.69)%,土贝母苷甲在1.18-88.5 μg/mL浓度范围内线性良好.每1 g制剂舍土贝母苷甲995.3μg,灌胃给予甲肿消后大鼠血清中土贝母苷甲浓度为3.19μg/mL.结论 本方法快速、简便、准确,可用于测定制荆及其血清中土贝母苷甲的含量.
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土贝母苷甲在人宫颈癌HeLa细胞内对线粒体的影响
目的:探讨线粒体在土贝母苷甲(TBMS1)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中的作用.方法:流式细胞仪测定线粒体膜电位(△ψm)、琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂片和蛋白质免疫印迹法检测细胞色素c(cyt c)的表达.结果:TBMS1引起人宫颈癌HeLa细胞凋亡,使得△ψm下降,释放入胞质的cyt c增加,并具有时间、剂量依赖性;TBMS1还可直接作用于分离的鼠肝脏线粒体,使之释放cyt c;TBMS1的这种作用部分能够被线粒体膜保护剂环孢菌素A(CsA)阻断.结论:线粒体途径是TBMS1诱导的HeLa细胞凋亡的途径之一.
关键词： 土贝母苷甲 线粒体 细胞色素C 细胞凋亡 人宫颈癌HeLa细胞 -
土贝母苷甲和苷乙的抗肿瘤作用
土贝母[Bolbosteemma paniculatum(Maxim)Franquet(Cucurbitaceae)]是一种传统中药.土贝母苷甲和苷乙都是从土贝母中分离、纯化出来的抗肿瘤活性成分,属齐墩果烷型三萜皂苷,苷甲和苷乙在结构上的惟一区别是苷乙16位碳上的羟基.苷甲和苷乙的构效关系研究表明,苷乙的抗肿瘤活性较苷甲更强,毒性更低.苷甲和苷乙都能诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡.
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以类平均聚类法分析不同产地土贝母中土贝母苷甲含量及影响因素
目的 测定16批不同产地土贝母中土贝母苷甲含量,确定土贝母含量高的产区,分析影响含量的因素.方法 采用《中国药典》2015版土贝母药材含量方法测定土贝母苷甲;以土贝母苷甲含量为指标用类平均聚类分析法将产地来源进行分类.结果 不同产地土贝母中苷甲含量在1. 234%~3.174%范围内,符合药典要求;聚类分析可将16个产地分为4类,来自商洛、汉中的一类药材苷甲含量高.结论 温度和湿度可影响土贝母药材质量.温度、湿度偏高地区的土贝母药材中土贝母苷甲含量更高.
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土贝母不同加工炮制方法的比较
目的 探讨土贝母适宜而科学的加工炮制方法.方法 采用4种不同的炮制方法对土贝母进行加工,并在外观性状、折干率、含水量、乙醇出膏率、总皂苷含量、土贝母苷甲含量等方面进行了比较.结果 煮制品与蒸制品在外观性状方面相似,在折干率、含水量、乙醇出膏率及总皂苷含量方面也处于较高水平；烘干品折干率相对较低,但乙醇出膏率、总皂苷含量及土贝母苷甲含量与煮制品、蒸制品相近或高出；阴干品不仅耗时长,而且乙醇出膏率和总皂苷含量是这4种炮制品中低的.结论 传统的煮制法和蒸制法是适宜的,烘干法也可作为产地的一种加工炮制方法,阴干法既耗时又不利于药材质量的保证,是不可取的.
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土贝母苷甲对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的抑制作用
[目的]探讨土贝母苷甲对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的抑制作用.[方法]Transwell小室法测定HepG2细胞的迁移力和侵袭力、明胶酶谱实验检测其MMP-2和MMP-9的活性、Western blotting检测细胞MMP-2和MMP-9的表达.[结果]与对照组相比,随着土贝母苷甲浓度的增加,明显抑制了HepG2细胞的迁移和侵袭(P＜0.05);明胶酶谱实验结果显示,土贝母苷甲降低了MMP-2和MMP-9降解明胶的能力;Western blotting检测结果显示,土贝母苷甲降低了HepG2细胞MMP-2和MMP-9蛋白的表达.[结论]土贝母苷甲能够抑制HepG2细胞迁移和侵袭,其机制可能与抑制MMP-2和MMP-9的蛋白表达及活性有关.
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土贝母苷甲在非小细胞肺癌异种移植鼠模型中抑制肿瘤血管生成的研究
目的 研究土贝母苷甲对肿瘤血管生成的影响及相应的分子机制.方法 将20只CD-1裸鼠随机分为对照组(生理盐水)和土贝母苷甲组(TBMS-I),每组各10只;皮下注射接种非小细胞肺癌(NSCLC)浓度为l×107/ml的NCI-H460单细胞悬液100μl,接种1d后开始腹腔给药,TBMS-I给药浓度为5 mg/kg,1/d,绘制肿瘤生长曲线,并对瘤体积和瘤重进行统计学分析;观察瘤内微血管密度;采用WST-1检测TBMS-I对内皮细胞、肿瘤细胞的抑制作用;Western blot检测TBMS-I对裸鼠内皮细胞eEND2的VEGFR-2 (KDR)和Tie2的表达的影响.结果 TBMS-I可显著抑制NSCLC的形成,减少瘤内血管密度,诱导内皮细胞凋亡且不减弱肿瘤细胞的活性,降低裸鼠内皮细胞eEND2膜上VEGFR-2(KDR)和Tie2的表达,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TBMS-I能够抑制肿瘤血管的生成,其作用机制可能与下调VEGF/VEGFR2和Ang2/Tie2信号传导途径相关.
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土贝母苷甲经miR-21/PDCD4途径诱导胶质瘤U251细胞凋亡
目的:研究土贝母苷甲(TBMSI)对胶质瘤U251细胞的抗肿瘤作用以及探究土贝母苷甲对miR-21及其靶基因PDCD4基因表达的影响.方法:U251细胞在体外进行培养,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的土贝母苷甲对细胞增殖的影响;Hoechst33258染色观察细胞核形态的变化;实时荧光定量PCR检测miR-21和PDCD4基因的表达情况;Western blot检测PDCD4蛋白的表达情况.结果:土贝母苷甲能够显著抑制U251细胞的增殖,其抑制作用呈剂量和时间依赖性.Hoechst33258染色观察到土贝母苷甲处理组细胞的细胞核形态表现出典型的凋亡特征.PCR结果显示:随着土贝母苷甲浓度增加,miR-21的表达逐渐降低(P＜0.05),PDCD4基因表达显著增加(P＜0.05).Western blot结果提示:与阴性对照组相比,15、30 μg/mL土贝母苷甲显著上调了PDCD4蛋白的表达(P＜0.05).结论:土贝母苷甲能够显著抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并诱导细胞发生凋亡,其机制可能与下调miR-21的表达和上调PDCD4的表达有关.
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乳增宁片的质量标准研究
乳增宁片由艾叶、淫羊藿、土贝母、天冬、柴胡等中药组成,具有疏肝解郁,调理冲任等功效,用于治疗肝郁气滞、冲任失调引起的乳痛症及乳腺增生等症[1].
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土贝母苷甲通过上调FADD/caspase-8/caspase-3的表达促进人胶质瘤 U251细胞凋亡
目的：研究土贝母苷甲（ TBMS Ⅰ）诱导人胶质瘤U251细胞凋亡及其可能的内在机制。方法四甲基偶氮唑蓝比色法（ MTT法）检测不同浓度的土贝母苷甲对U251细胞增殖的影响。 Hoechst 33258荧光染色观察不同浓度土贝母苷甲处理 U251细胞后细胞核形态的变化。流式细胞仪检测细胞的凋亡率。Western blot 分析土贝母苷甲对FADD、caspase-8和caspase-3蛋白表达水平的影响。结果土贝母苷甲以剂量依赖方式抑制U251细胞的增殖。土贝母苷甲处理后，U251细胞的细胞核表现出固缩浓染等凋亡特征，且随着药物浓度的增加，细胞数目逐渐减少。与对照组相比较，土贝母处理组（10、20、25μg／ml）的早期和晚期凋亡率均显著增加，差异有统计学意义（P﹤0．05）。10、20、25μg／ml 土贝母苷甲处理组上调了FADD、caspase-8和caspase-3蛋白的表达水平，差异有统计学意义（P﹤0．05）。结论土贝母苷甲在体外能够明显的抑制U251细胞的增殖，其机制可能与上调FADD、caspase-8和caspase-3蛋白表达从而诱导细胞凋亡有关。
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土贝母苷甲对人红白血病细胞K562的诱导分化作用
目的:研究土贝母苷甲对人红白血病细胞K562分化的影响.方法:采用台盼蓝拒染法检测土贝母苷甲对K562细胞增殖的影响;采用细胞形态学、细胞化学方法检测土贝母苷甲对K562细胞分化的影响; 采用Western blotting法检测土贝母苷甲对K562细胞早期原癌基因c-myc、c-fos表达的影响.结果:土贝母苷甲下调K562细胞c-myc的表达, 上调c-fos的表达, 诱导K562细胞产生血红蛋白, 诱导K562细胞向成熟红系细胞方向分化.结论:土贝母苷甲对人红白血病细胞K562具有诱导分化作用.
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土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的抑制作用
目的:本研究旨在探讨土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的影响.方法:采用裸BALB/c小鼠B16黑色素瘤实验转移和裸BALB/c小鼠Lewis肺癌自发转移模型研究土贝母苷甲对肿瘤转移的影响;采用免疫组织化学法检测土贝母苷甲对转移相关基因CD44v6、ErbB-2和nm23-H1表达的影响.结果:腹腔注射低于全身中毒水平剂量的土贝母苷甲明显减少接种B16黑色素瘤细胞小鼠的肺重和肺转移灶数量,而对小鼠的健康和活力无明显影响;土贝母苷甲(2、3 mg·kg-1·d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg·kg-1·wk-1×2 d)对B16黑色素瘤细胞肺转移的抑制率分别为 68.8%、82.8%和 49.1%.土贝母苷甲治疗组小鼠Lewis肺癌原发肿瘤的平均瘤重明显低于对照组(P＜0.05).土贝母苷甲(2、3 mg·kg-1·d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg·kg-1·w-1×2 d)治疗组小鼠的肝转移抑制率分别为 46.3%、52.0%和 54.7%.土贝母苷甲显著下调促转移基因CD44v6和ErbB-2的表达,上调抑转移基因nm23-H1的表达.结论:土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤的实验性转移和Lewis肺癌的自发性转移都有显著的抑制作用.土贝母苷甲对肿瘤转移的这种抑制作用与其抑制原发肿瘤生长、下调促转移基因CD44v6和ErbB-2及上调抑转移基因nm23-H1的表达有关,提示土贝母苷甲是一个阻止癌扩散和转移的候补化合物.
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土贝母苷甲诱导HeLa细胞周期阻滞和凋亡
目的:研究土贝母苷甲(下称苷甲)抗肿瘤作用的机制,探索它对细胞周期和细胞凋亡的影响.方法:采用MTT法检测苷甲对细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术,光学、荧光和电子显微镜,以及DNA琼脂糖凝胶电泳检查和分析苷甲对细胞周期和细胞凋亡的影响;采用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl-2和bax表达的变化.结果:苷甲对HeLa细胞的生长有强抑制作用,其24、48和 72 h 的IC50值分别为 35.7, 23.6, 17.4 μmol*L-1.在苷甲的作用下,细胞周期阻滞在G2/M期,细胞在形态学和生物化学上都出现了细胞凋亡的典型证据.蛋白免疫印迹结果揭示bcl-2下调,bax过表达.结论:苷甲诱导的细胞周期阻滞和凋亡在苷甲的抗肿瘤效果中可能起着重要作用,而苷甲诱导的细胞凋亡与bcl-2的下调及bax的过表达密切相关.
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土贝母苷甲抑制血管生成
土贝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim.)Franquet (Cucurbitaceae)],为传统中药,载于清代赵学敏氏编著的<本草纲目拾遗>.我们从1978年开始从生药土贝母中分离、纯化抗癌活性成分,并对其中得率高(1.9%)的土贝母苷甲(苷甲)进行了系统的研究[1,2].
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双贝胶囊的质量标准
目的 建立双贝胶囊的质量标准.方法 采用薄层色谱法对双贝胶囊中土贝母、浙贝母、连翘进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对双贝胶囊中土贝母苷甲进行定量分析.结果 薄层色谱鉴别分离效果好,专属性强;土贝母苷甲含量在0.182～0.912 mg·mL-1范围内线性关系良好,r=0.9997;平均加样回收率99.31％,RSD 0.49％.结论 该方法简单、准确、专属性强、重复性好,可有效控制双贝胶囊的质量.
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贝马喷膜剂的质量控制
目的 研究贝马喷膜剂的质量控制方法.方法 采用薄层层析(TLC)法对贝马喷膜剂中的马鞭草进行定性鉴别,高效液相色谱法对土贝母苷甲进行定量测定.色谱柱为Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(65:35);流速为1.0 mL·min-1;检测波长214 nm;柱温为室温.结果 薄层色谱法中,供试品与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,斑点清晰、分离效果好、阴性对照无干扰.土贝母苷甲在5～80 mg·L-1范围内线性关系良好,平均回收率为100.20%(RSD＝1.92%,n＝6).结论 该方法操作简便、准确可控,可用于贝马喷膜剂的质量控制.
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土贝母苷甲诱导人鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡
背景和目的:土贝母[Bolbostemmapaniculatum(Maxim.)Franquet]是一种传统中药,我们以前的研究结果已证实从中药土贝母块茎中分离得到的土贝母苷甲(下称苷甲)有强抗肿瘤效果.本研究旨在探讨苷甲对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞凋亡的影响.方法:MTT法检测苷甲对肿瘤细胞生长的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期,荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA电泳图谱的变化,蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl-2和bax表达的变化.结果:苷甲抑制CNE-2Z细胞的生长,其24、48、72 h的IC5o分别为32.5、20.7、16.7μmol/L.苷甲诱导CNE-2Z细胞发生程序性死亡:流式细胞分析发现Sub-G1峰,50 μmol/L苷甲作用CNE-2Z细胞12 h,凋亡指数为72.8%;CNE-2Z细胞经苷甲作用(10 μmol/L,24、48、72 h;30、40、50、60 μmol/L,12 h)后,其DNA电泳图中出现典型的梯形条带.苷甲诱导bcl-2表达下调且磷酸化,并伴有bax高表达.结论:苷甲诱导CNE-2Z细胞发生形态学和生化学上典型的程序性死亡,其诱导的CNE-2Z细胞凋亡与bcl-2失活和bax激活有关.
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土贝母苷甲诱导的人宫颈癌HeLa细胞凋亡的超微结构变化及环孢菌素A的保护作用
目的 观察土贝母苷甲(TBMS1)诱导的人宫颈癌HeLa细胞凋亡的超微结构变化及环孢菌素A的保护效果,探讨以线粒体为中心的内源性凋亡途径在TBMS1诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡时的作用.方法 利用透射电镜观察不同浓度TBMS1作用不同时间引起的细胞超微结构的变化,以及环孢菌素A预处理对TBMS1作用的影响.结果 随着土贝母TBMS1浓度的增高和作用时间的延长,人HeLa细胞的结构发生了连续性变化.肿瘤细胞逐渐减小,细胞间隙逐渐增大,线粒体逐渐肿胀、退化,粗面内质网逐渐扩张,核逐渐变小、核碎裂.在TBMS1低浓度时,环孢菌素A能够在一定程度上保护细胞免受TBMS1的损伤.环孢菌素A对TBMS1的损伤有保护效果.但当TBMS1浓度增大时,环孢菌素A的这种保护就不起作用了.结论 TBMS1诱导HeLa细胞发生一系列凋亡特征的超微结构变化,线粒体肿胀、退化为其特征之一,从形态学角度提供了以线粒体为中心的内源性凋亡途径起一定作用.
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高效液相色谱法同时测定土贝母中土贝母苷甲、乙和丙的含量
目的：建立同时测定土贝母中土贝母苷甲、土贝母苷乙和土贝母苷丙3种皂苷类成分含量的高效液相色谱( HPLC )法。方法色谱柱采用Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5μm），流动相为乙腈－水(31：69)，流速为1.0 mL/min，柱温为30℃，检测波长为214 nm。结果土贝母苷甲、乙、丙进样量分别在1.28~12.8μg，0.241~2.41μg，0.515~5.15μg范围内与峰面积线性关系良好，平均加样回收率分别为99.10%，98.95%和98.78%，RSD分别为0.43%，0.62%，0.46%( n=6)。结论该法简便、准确，可为土贝母的质量评价提供参考。
