095 尿中马尿酸和邻-甲酚作为甲苯接触的生物标志物的可行性研究

芍药苷对血管紧张素转化酶活性的抑制作用

目的:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定了芍药苷对血管紧张素转化酶活性的影响.方法:采用Brava BDS C18色谱柱(4.6mm×250mm,5 μm),流动相为乙腈-0.01%甲酸水溶液(25:75),柱温为30 ℃,流速为1.0 mL·min-1,检测坡长为228nm.结果:马尿酸在1.17～149μg·mL-1(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)为100.4%(RSD=0.88%);日内、日间精密度的RSD分别为1.32%和1.96%.芍药苷的IC50值为37.47μmol·L-1.结论:该法分离效果和重复性均良好,结果准确可靠,可用于马尿酸的检测,也为血管紧张素转化酶抑制剂活性测定提供了可靠的方法.

尿多酸肽在血液病中的临床应用研究

尿多酸肽(Uroacitides),又名CDA-Ⅱ(cell differentiation agentⅡ),是我国自主开发的一种抗肿瘤新药,它是从健康人尿中经酸化、吸附、洗脱、真空干燥等过程制成的含有多种有机酸和多肽成分的非细胞毒性药物[1].其主要成分为苯乙酰谷氨酰胺(占41%),马尿酸(占35%),分子量在400~2800 D的多肽(占17%),还有少量4-羟基苯乙酸和5-羟基吲哚乙酸,这些成分共同发挥抗肿瘤作用[2].

肾脏功能试验及其临床评价(下)

2 肾小管和集合管功能试验肾小管和集合管功能试验主要包括肾近曲小管重吸收试验,肾小管排泌试验,肾小管和集合管水、电解质功能试验,肾小管和集合管酸碱调节功能试验.肾小管排泌试验包括肾小管对酚红及氨基马尿酸大排泌量(Tmpah)试验.

适用于代谢组学研究的人体尿液保存与气相色谱-质谱联用分析方法

目的 建立适用于代谢组学研究的人体尿液保存方法及其代谢物气相色谱-质谱(GC-MS)联用分析方法.方法 向尿样中分别加入1％ HNO3、1％ HCl、2％抗坏血酸作为保存剂,并设空白对照,置于-80℃保存0、5、39 d后连续3次反复冻融,每次取样100μl,加入20 g/L尿素酶50μl,于37℃酶解2h,加入去氧保护剂甲氧基胺盐处理后,再加入衍生剂(MSTFA)于37℃反应过夜,取上清液进行GC-MS测定,并以马尿酸为指标测定方法学参数.结果 以原尿在-80℃保存,在39 d内测得所选8个不同保留时间色谱峰面积的RSD均小于10％.以马尿酸为指标,在0.005～1.75 g/L的线性范围内,所得线性方程为y=0.127 4x+0.473 8,r=0.999 2;该方法的检出限为1.26 mg/L,加标回收率为75％～125％,RSD为1.1％～8.5％.对22名膳食镉暴露人群与12名对照人群尿样进行检测发现,两组人群尿液中代谢产物的种类和含量均有较大变化.结论 该方法具有尿样稳定性良好,尿液分析方法学参数优良的优点,适用于膳食重金属暴露人群尿样中内源性代谢物的检测.

尿中马尿酸、甲基马尿酸测定的乙腈萃取-高效液相色谱法

目的 建立乙腈萃取前处理方法和高效液相色谱(HPLC)法测定尿中马尿酸(HA)、甲基马尿酸(MHA).方法 尿中HA、MHA在酸性条件下用乙腈萃取,高效液相-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)检测,色谱条件:C18柱(150 mm× 4.6 mm,5μm),以甲醇:0.20％乙酸水溶液(含6.5 mmol/L磷酸二氢钾)(25:75,V/V)为流动相,流速为1 ml/min,波长为254 nm.结果 HA、2-甲基马尿酸(2-MHA)、3-甲基马尿酸(3-MHA)[4-甲基马尿酸(4-MHA)]分别在9.91～2 974.20 μg/ml、1.91～573.60μg/ml、2.00～598.65μg/ml线性关系良好,相关系数分别为0.999 98、0.999 84、0.999 85;HA、2-MHA、3-MHA (4-MHA)回收率分别为96.38％～98.01％、83.17％～94.05％、103.22％～ 104.45％,批内精密度相对标准偏差(RSD)分别为0.50％～1.20％、0.51％～ 1.59％、0.49％～0.95％,批间精密度RSD分别为1.70％～3.20％、1.30％～2.67％、0.86％～2.74％,检出限分别为0.18、0.46、0.12 μg/ml,低检出浓度分别为0.36、0.92、0.24 μg/ml(以尿样1 ml计);样品在4℃冰箱中可保存15d.结论 乙腈萃取尿中HA、MHA前处理方法简单易行,符合GBZ/T 210.5-2008《职业卫生标准制定指南第5部分:生物材料中化学物质测定方法》的相关要求,可用于职业接触甲苯、二甲苯人群尿中HA、MHA的测定.

人体尿液中马尿酸和甲基马尿酸固相萃取-离子色谱-电导同时测定法

目的 建立人体尿液中马尿酸(HA)和甲基马尿酸(MHA)的离子色谱测定方法.方法 采用C18固相萃取小柱萃取尿液中的HA和MHA,并用离子色谱-电导检测法检测.结果 利用C18固相萃取小柱萃取尿液中的HA和MHA,去除杂质效果良好,回收率高,HA、2-MHA、3-MHA、和4-MHA 4种待测物在Metrosep A5 150阴离子交换柱(150 mm×4.0 mm i.d.,粒径5 μm)中14 min之内达到基线分离,且HA和MHA的峰高与其浓度呈现良好的线性,4种待测物的检出限分别为0.02、0.02、0.02和0.04 μg/ml,平均回收率为90.1％～103.8％,RSD在1.7％～4.9％之间,建立的方法用于鞋厂工人班末尿中HA和MHA的测定,均检出HA.结论 该方法简单、快速、灵敏并且准确性高且绿色环保,适用于尿液中HA和MHA的测定.

习惯与保健

起床先叠被人体自身是个污染源.从生理学的角度来讲,在大约8小时的睡眠过程中,人的呼吸过程和分布全身的皮肤毛孔可排出多种气体和汗液,据测定,从呼吸和皮肤毛孔排出的水分约400毫升.从呼吸道排出的废气含二氧化碳等化学物质140余种.从汗腺中分泌蒸发出来的化学物质约150种,如肌酸、马尿酸、尿素等.

易被忽视的家居污染源

被子据测定,人在一夜的睡眠中,从人体呼吸道排出的废气中,含二氧化碳等化学物质149种;从汗液中分泌蒸发出来的物质约150种,如肌酸、马尿酸、尿素等,都被盖在身上的被子所容纳和吸收,时间长了就会变潮湿,人再接着盖,它上面所依附的有害物质就循环到人身上,给健康带来影响.

高效液相色谱法测定尿中马尿酸的方法探讨

马尿酸是甲苯在体内的代谢产物,经肾随尿排出.测定尿中马尿酸的浓度,对诊断甲苯中毒有一定的卫生学价值.测定方法有化学法、HPLC法.WS/T53-1996方法采用样品提取、挥干、溶解、进液相色谱分析,效果较好,但较繁琐费时.本文采用样品直接稀释法测定,结果令人满意,且简便、快速.现报告如下.

高效液相色谱法测定尿中甲苯代谢产物的实验研究

建立高效液相色谱/二极管阵列检测法同时测定尿样中马尿酸含量的方法,并确定了该方法佳样品预处理条件,优化了色谱分离及检测条件,灵敏、准确,能够满足有害物质代谢产物的监测要求.

建立大鼠原位肠-肝灌流模型评价绿原酸的代谢

目的:建立大鼠原位肠-肝灌流模型,运用该模型研究绿原酸在大鼠肠、肝中的代谢转化.方法:采用液相色谱质谱联用(HPLC-MS)法测定大鼠原位肠-肝灌流模型灌流液中绿原酸及其代谢产物咖啡酸、阿魏酸和马尿酸.结果:绿原酸十二指肠给药后,灌流液中主要活性代谢产物为阿魏酸, 同时在灌流液中也检测到少量活性代谢产物咖啡酸和大量代谢终产物马尿酸.结论:大鼠原位肠-肝灌流模型适用于绿原酸生物转化和代谢动力学的研究;绿原酸在肠中存在广泛的代谢.

HPLC法测定尿多酸肽注射液中马尿酸及苯乙酰谷氨酰胺的含量

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定尿多酸肽注射液中马尿酸、苯乙酰谷氨酰胺含量的方法 .方法 采用Luna C18柱,流动相为甲醇-水-冰醋酸(180:820:4.5),流速1.0 ml·min-1,柱温40℃,检测波长225 nm.结果 马尿酸、苯乙酰谷氨酰胺回收率分别为100.4%、101.1%,RSD分别为0.82%、1.69%.结论 该方法 简便、准确、可靠,可作为尿多酸肽注射液的质量控制方法 .

食源性ACE抑制肽体外活性检测方法的改进及应用

目的 建立一种快速、准确地测定食源性ACE押制肽体外活性的检测方法.方法 通过在不同时间对ACE酶解液中马尿酸含量的测定,确定ACE酶与底物HHL的反应时间;以海参肽为ACE抑制剂,反应液中生成的马尿酸为检测指标,Zorbax SB-C18分析柱为固定相,乙腈/超纯水为流动相,建立一种测定食源性ACE抑制肽体外活性的RP-HPLC法.结果 ACE酶与底物HHL的反应时间确定为60min;RP-HPLC的洗脱务件为柱温25℃,流动相乙腈/超纯水的体积比为1∶1(各含0.1%三氟乙酸),流速0.4 mL·min-1,检测波长228 nm.应用该方法对马尿酸浓度与峰面积的相关性进行分析.结果 表明马尿酸浓度在0～200μg·mL-1和200～800 μg·mL-1范围内与峰面积呈现良好的相关性;经卡托普利、牡蛎酶解液、鲤鱼酶解液验证,表明该方法不仅适用于食源性ACE抑制肽体外活性的测定,而且也适用于化学合成的降压药物.结论 该方法操作简便、重复性好、准确性高,可作为食源性ACE抑制肽体外活性的检测方法.

高效液相色谱法测定尿中马尿酸的规范化研究

目的:进一步完善和规范化甲苯接触者尿中马尿酸的高效液相色谱测定法.方法:采用ODS C18柱,流动相为甲醇-0.01 mol/L磷酸(40 +60),流量为1.0 ml/min,检测波长228 nm.结果:马尿酸在10 μg/ml～ 500 μg/ml范围内线性良好,相关系数r为0.9999,平均加标回收率为99％,平均相对标准偏差RSD为1.1％,低检测浓度0.41 mg/L.结论:该方法快速、准确、灵敏度高,有良好的重现性和稳定性,可用于职业接触甲苯人群尿中马尿酸的测定.

HPLC法同时测定尿样中苯、甲苯的4种代谢产物

目的 建立高效液相色谱/二极管阵列检测法同时测定尿样中马尿酸、(邻,间,对)-甲基马尿酸含量的方法.方法 以0.5ml乙酸乙酯为萃取溶剂,样品用量0.5 ml,NaCl加入量75 mg,萃取时间3 min,以1000 r/min速度离心5 min,取0.4 ml萃取剂于具塞试管在低于70℃水浴中挥发至干,用1.0ml流动相溶解残留物,分析条件:柱温35℃,流动相(甲醇∶水∶冰乙酸=30∶70∶0.1)波长235 nm,实现了4种代谢物的有效分离.结果 在优化条件下,4种待测组分在20 mg/L～ 500 mg/L范围内呈线性,相关系数(r)均不低于0.9997,检出限(S/N=3)为21 μg/L～200 μg/L;样品的平均加标回收率为97％ ～ 104％,相对标准偏差(RSD)小于5％.结论 该方法确定了佳样品预处理条件,优化了色谱分离及检测条件,灵敏、准确,能够满足有害物质代谢产物的监测要求.

高效液相色谱法测定血管紧张素转换酶Ⅰ抑制剂活性的方法学及其应用研究

目的:建立高效液相色谱快速测定血管紧张素转换酶Ⅰ抑制剂活性的方法.方法:以马尿酰-组胺酰-亮氨酸为底物,血管紧张素转换酶Ⅰ为催化剂,酶促反应产物马尿酸为检测指标,卡托普利为抑制剂的代表进行方法学研究.采用Phenomenex Tuna C(18)色谱柱,流动相为甲醇和乙酸溶液,等度洗脱,检测波长为228 nm.根据保留时间定性,外标峰面积法定量.结果:马尿酸低检测限为0.01 μmol/L,加标回收率为93.8%～103%.应用该方法测得实验室制备的鳕鱼寡肽浓度与其ACE抑制率呈自然对数关系,计算得鳕鱼寡肽对ACE的IC(50)为4.56 mg/ml.结论:该方法可作为体外测定血管紧张素转换酶抑制剂活性的方法,具有操作简便快捷、精密度和准确性高的特点.

超高效液相色谱-质谱检测尿液中马尿酸和甲基马尿酸

目的 建立超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)检测尿液中马尿酸和甲基马尿酸的新方法. 方法 实验采用反相T3色谱柱,以乙腈-甲醇-0.1％甲酸水溶液为流动相,等度洗脱,通过电喷雾三重四级杆质谱检测. 结果 该方法实现了马尿酸和甲基马尿酸的三个同分异构体的基线分离和检测,方法检出限低(马尿酸0.07 μg/L,甲基马尿酸0.1 μg/L),线性范围广(1～10 000 μg/L均具有良好的线性关系). 结论 超高效液相色谱-质谱检测尿液中马尿酸和甲基马尿酸具有较好的应用前景.

某大型石化企业职业人群混苯暴露水平监测

[目的]通过测定某大型石化企业车间环境中混苯(苯、甲苯、二甲苯)及工人尿液中混苯的代谢产物,评价工人的接触水平.[方法]选择该公司有混苯暴露的芳烃、烯烃等六个厂以及无混苯暴露的职工医院,用气相色谱法(GC)测定空气中混苯,并用高效液相色谱法(HPLC)法测定工人尿液中反,反-粘糠酸(t,t-MA)以及马尿酸(HA).[结果]车间空气中苯的平均浓度波动在0.73～26.91 mg/m3之间,大超标率为7.41%,大超标倍数为20.91;混苯暴露厂工人尿液中t,t-MA,工后明显高于工前,差值波动在1.14～3.78 ug/mg.Cr,明显高于对照单位的0.33 ug/mg.Cr,且暴露工人尿液的变化值与空气苯浓度呈等级相关性(Rs=0.64,P=0.03);甲苯、二甲苯检出率较低,HA工后、工前无明显差异.[结论]该公司存在混苯暴露,但以低浓度苯暴露为主,t,t-MA可作为苯暴露的生物学监测指标.

新型弱阴离子交换色谱柱-高效液相色谱法同时测定苯代谢产物的方法

目的:建立了苯及其同系物体内代谢产物粘糠酸、苯乙醛酸、马尿酸的弱阴离子交换-HPLC测定方法,并进行了方法学研究.方法:采用Acclaim Mixed-Mode WAX-1(150 mm×2.1 mm,5 μm)弱阴离子交换色谱柱,以甲醇-50 mmol/L磷酸氢二钾(18∶82)为基础流动相,以波长时间程序分别在254 nm下检测粘糠酸、苯乙醛酸,224nm下检测马尿酸,探讨了弱阴离子交换色谱柱分离粘糠酸、苯乙醛酸及马尿酸的影响因素.结果:流动相的pH值、离子强度、有机相比例对上述三种代谢物产生的分离产生明显影响.结论:在确定的色谱条件下,从分离度、对称性、重复性、线性4个方面来评价,弱阴离子交换色谱柱分析酸性可离子化化合物要优于常规C18色谱柱.