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TLR7激动剂Gardiquimod上调BxPC-3细胞中IL-15 mRNA表达
目的：研究TLR7在胰腺癌BxPC-3细胞中表达,并探讨TLR7激动剂激活TLR7后细胞因子白介素15( IL-15)的表达。方法通过 Western blot 和 Real-time PCR 分析TLR7在细胞内的表达水平；BxPC-3细胞经过不同时间点Gardiquimod(3μg/ml)的处理后,Real-time PCR 分析 TLR7激活后 IL-15 mRNA 水平表达变化；Western blot 分析Gardiquimod刺激细胞后,磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶( PI3K-AKT)信号通路的变化。结果 Western blot和 Real-time PCR结果显示：与外周血单核细胞( PBMC)相比, TLR7在 BxPC-3中弱表达；Real-time PCR分析显示：Gardiquimod处理细胞后能刺激细胞中IL-15的表达；TLR7激动剂能够激活 PI3K-AKT信号通路。结论 Gardiquimod激活TLR7后能够上调 IL-15的表达,并且其激活与 PI3K-AKT信号途径相关。
关键词： TLR7 gardiquimod IL-15 PI3K-Akt BxPC-3 -
IL-15对HaCaT细胞增殖的影响及机制研究
目的 观察白介素-15(IL-15)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)增殖的影响及其可能机制.方法 培养HaCaT细胞,不同剂量IL-15刺激不同时间后,MTT法分析IL-15对HaCaT细胞增殖的影响.Western blot分析IL-15在HaCaT细胞中激活的信号通路:丝裂原蛋白活化激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)和磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-AKT).在IL-15刺激HaCaT细胞前1 h,分别加入MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT信号传导特异性抑制剂(PD98059和LY294002)以阻断IL-15激活的相关信号通路,分析阻断剂对IL-15调控HaCaT细胞增殖的影响.结果 MTT分析结果显示:IL-15显著促进HaCaT细胞增殖,且具有时间及剂量依赖性;信号通路分析揭示IL-15能够增加pERK1/2及pAKT的水平;使用阻断剂的研究显示IL-15部分依赖MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT途径发挥其促进增殖作用.结论 IL-15部分依赖MAPKs-ERK1/2 和PI3K-AKT信号途径促进HaCaT细胞增殖.
关键词： HaCaT细胞 IL-15 MAPKs-ERK1/2 PI3K-Akt 细胞增殖 -
IGF-1诱导PI3K-Akt通路磷酸化对平滑肌细胞的作用
目的 比较胰岛素生长因子-1(IGF-1)对人脐静脉平滑肌细胞(HUVSMC)和脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)增殖的影响并探讨其机制.方法 采用人源HUVSMC和HUASMC进行研究,噻唑蓝(MTT)法检测IGF-1对两种细胞增殖的影响,并通过Western blotting技术检测IGF-1对两种细胞中PI3K-Akt信号通路的影响.结果 不同浓度的IGF-1对HUVSMC和HUASMC的增殖都有明显的促进作用,但对HUVSMC的促增殖作用明显高于对HUASMC.进一步检测PI3K-Akt信号通路,IGF-1可激活PI3K-Akt信号通路,并且IGF-1对HUVSMC的激活明显强于HUASMC.IGF-1R抗体或wortmannin(渥曼青霉素)明显抑制IGF-1对细胞增殖的促进作用.结论 IGF-1可明显促进SMC增殖,并且在HUVSMC更为明显;IGF-1主要通过激活PI3K-Akt信号通路来促进平滑肌细胞的增殖.冠状动脉搭桥术(CABG)后静脉移植物比动脉移植物更容易发生内膜增生的原因可能就在于此.
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基于PI3K/PTEN/VEGF的菟丝子总黄酮抗肝癌作用机制研究
目的:基于PI3K/PTEN/VEGF通路探讨菟丝子总黄酮(TF)体外抗肿瘤作用机制,考察合适的给药浓度,为菟丝子药材的临床合理应用提供参考.方法:以人肝癌细胞HepG2为实验对象,CCK-8法检测TF给药后的细胞活性,计算其IC 50值;Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡坏死比例;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、人类第十号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、血管内皮细胞生长因子(VEGF) mRNA的相对表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子受体2、3(VEGFR-2、VEGFR-3)表达变化趋势.结果:相对阴性对照组,给药组细胞抑制率和凋亡率均具有良好的量-效正相关;qPCR结果显示TF给药可以显著的上调PTENmRNA,下调PI3K、VEGF mRNA;ELISA结果显示HIF-1α、VEGFR-2、VEGFR-3蛋白的表达在给药后均有下降(P＜0.01).结论:菟丝子总黄酮有较好的体外抗肝癌药效,其作用可能与上调PTEN的表达对PI3K-Akt通路进行负调控诱导细胞发生凋亡、下调HIF-1α以及VEGF相关基因和受体蛋白的表达等作用机制共同发挥抗肿瘤作用.
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Akt信号通路与细胞存活的研究进展
Akt/PKB是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,由三个高度同源的Akt1、Akt2和Akt3组成.在对Akt/PKB的上游机制中不断了解的同时,我们也认识到Akt的下游途径与协调信号的特异性有关,通过影响下游多种效应分子的活化状态,发挥着调节细胞存活、代谢、增殖的作用.Akt/PKB信号通路在与肿瘤、心血管疾病、神经系统疾病的发生发展密切相关而受到重视.本文主要对Akt/ PKB信号通路的组成与功能,调节及抗凋亡方面的研究进展作一综述,期待为以Akt/PKB为作用靶点的治疗研究提供参考.
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GPI-PLD通过下调PI3K-Akt信号通路活性抑制肝癌细胞的生长
目的:明确糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D (glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase D,GPI-PLD)对肝癌细胞HepG2的影响以及可能的调控分子机制.方法:通过转染构建高表达GPI-PLD模型,利用MTT、荧光染色以及Western印迹检测高表达GPI-PLD对肝癌细胞的影响,同时接种于裸鼠模型中,进一步明确GPI-PLD在体内对肝癌细胞的影响.结果:与空白组和对照组相比,GPI-PLD组PI3K-Akt信号通路活性明显受到抑制,肝癌细胞增殖活性明显受到抑制并呈现典型的凋亡形态.肝癌裸鼠模型结果显示GPI-PLD组肿瘤的生长速度、肿瘤质量[(1.87±0.09)g]小于空白组[(2.20±0.17)g]和对照组[(2.15±0.09)g],GPI-PLD组AST,ALT,AFP血清浓度显著低于空白组和对照组(P＜0.05).结论:GPI-PLD可通过下调PI3K-Akt信号通路活性,抑制肝癌细胞的增殖及体内生长,促进肝癌细胞的凋亡.
关键词： 糖基化磷脂酰肌醇特异性磷酯酶D 肝癌细胞 PI3K-Akt 凋亡 -
RISK信号通路在心肌预处理及后处理中的作用
促生存激酶磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3-OH kinase,PI3K)和细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extra-cellular signal-regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)均为丝氨酸/苏氨酸激酶.缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)是1986年Murry等发现的一种内源性心肌保护现象,即预先反复短暂缺血/再灌注可以提高心肌组织对随后持续缺血/再灌注损伤的耐受性.2003年,Zhao等[1]相对于IPC首次提出缺血后处理(ischemic postconditioning),方法是在持续再灌注开始前进行反复短暂缺血/再灌注,与IPC一样,可以缩小心肌梗死面积.此后许多研究均证实了缺血后处理的心脏保护作用[2-4],而且还发现,心肌缺血后处理和缺血预处理以及模拟上述两者的药物后处理和药物预处理都于再灌注早期阶段通过磷酸化激活PI3K和ERK1/2减轻心肌缺血/再灌注损伤.Hausenloy等[5]首次将PI3K和ERK1/2两者合称为再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路,本文就RISK信号通路在心肌预处理及后处理中的作用进行综述.
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CIP4对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响
目的 观察骨架调节蛋白CIP4(Cdc42 interacting protein 4)对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞-间充质转分化(EMT)的影响,并探讨其产生的机制.方法 10 μg/TGF-β1刺激72 h诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)向间充质转分化.Western 印迹法检测各组细胞内E-cadherin和α-SMA蛋白的表达.倒置显微镜观察细胞形态的变化.根据GenBank人CIP4的完全cDNA序列,设计1条特异性干扰CIP4表达的RNA片段(CIP4-siRNA)和含野生型CIP4的重组真核表达质粒(pcDNA3.1-hCIP4),利用lipofactamine 2000将其转染HK-2细胞.Western 印迹法检测埘照组、TGF-β1刺激组、CIP4-siRNA转染组、pcDNA3.1-CIP4转染组细胞内CIP4、E-cadherin和α-SMA蛋白的表达,共聚焦显微镜观察E-cadherin和α-SMA蛋白的分布改变;用PI3K-Akt特异性抑制剂渥曼青霉素(wortmannin)1μmol/L干预TGF-β1刺激的HK-2细胞48 h,Western印迹法检测对照组和干预组CIP4表达的变化.结果 TGF-β1干预后HK-2细胞E-cadherin蛋白表达显著减少(P＜0.05),α-SMA 蛋白表达显著增多(P＜0.05),细胞形态由典型的上皮细胞向肌成纤维细胞转变,表明TGF-β1诱导肾小管上皮细胞EMT模型成功.CIP4-siRNA抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞表达CIP4后,E-cadherin蛋白表达显著增多(P＜0.05＝,α-SMA蛋白表达显著减少(P＜0.05),部分逆转了上述TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT.pcDNA3.1-hCIP4转染使CIP4高表达后,HK-2细胞E-cadherin蛋白表达显著减少(P＜0.05),α-SMA蛋白表达显著增多(P＜0.05),诱导了肾小管上皮细胞EMT.用渥曼青霉素干预TGF-β1刺激的HK-2细胞48 h,CIP4可能蛋白表达显著减少(P＜0.05).结论 TGF-β1通过PI3K-Akt途径上调CIP4表达,CIP4可能进一步参与TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT过程.
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PI3K-Akt信号通路与肿瘤细胞凋亡关系的研究进展
PI3K-Akt信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用,它与人类多种肿瘤的发生发展密切相关.本文综述了PI3K-Akt信号通路的组成与功能、调节以及其抗肿瘤细胞凋亡作用机理等方面的研究进展,并就其抗细胞凋亡作用在肿瘤治疗中的应用作了评述,期待为以PI3K-Akt信号通路中关键分子为靶点的肿瘤治疗研究提供参考.
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金属镉促进甲状腺未分化癌FRO细胞增殖的作用及机制
目的 探讨金属镉对甲状腺未分化癌FRO细胞增殖的影响及其作用机制.方法 Western blot法检测FRO、MCF-7和MAD-MB-231细胞中G蛋白偶联受体1(G protein-coupled estrogen receptor,GPER1)表达水平.不同浓度(0、0.25、0.50、0.75、1.00 mmol/L)镉(CdC12)处理FRO、MCF-7及MAD-MB-231细胞48 h后,MTF法检测细胞增殖率.0.5 mmol/L镉分别处理FRO细胞0、5、10、15、30 min,Western blot法检测ERK1/2和Akt的磷酸化水平.GPER1抑制剂G15处理FRO细胞后,设计合成针对GPER1的小干扰RNA(GPER-siRNA)并转染FRO细胞,采用Western blot再次检测ERK1/2和Akt磷酸化水平.分别用GPER1抑制剂G15、ERK1/2抑制剂(PD98059)和PI3 K-Akt抑制剂(LY294002)、GPER-siRNA处理FRO细胞,MTT法检测细胞增殖率.结果 GPER1在MAD-MB-231细胞中表达水平明显低于MCF-7、FRO细胞.不同浓度CdC12处理FRO、MCF-7及MAD-MB-231细胞48 h后,低浓度CdCl2促进FRO、MCF-7细胞增殖,对MAD-MB-231细胞增殖无显著影响;高浓度CdC12对细胞均具有抑制作用.0.5 mmol/L CdC12处理FRO细胞不同时间后,ERK1/2与Akt的磷酸化水平在15 min达大值.GPER1抑制剂G15处理FRO细胞,ERK1/2与Akt的磷酸化水平显著降低(P＜0.05).GPER1的小干扰RNA干扰后,ERK1/2与Akt的磷酸化水平明显降低(P＜0.05).G15、PD、LY和GPER-siRNA处理FRO细胞,细胞增殖率均显著下降.结论 金属镉通过GPER1-ERK/Akt信号通路促进FRO细胞的增殖.
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下调PI3K/Akt信号通路对抑制喉癌细胞生长的影响
目的 探讨钾通道阻断剂四乙胺(TEA)通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对人喉癌上皮细胞(Hep-2)增殖与凋亡的影响.方法 将TEA作用于Hep-2,用噻唑蓝(MTT)法测定Hep-2细胞活性,计算出TEA对Hep-2的增殖抑制率;采用Hoechest33258染色检测细胞凋亡,用流式细胞仪(FCM)法测定Hep-2凋亡率.结果 5、10、20 mmol/L TEA接种后,Hep-2细胞增殖抑制率分别达到12.573%、31.385%和56.132%,Hep-2作用96 h后细胞凋亡率分别为(41.64±2.67)%、(58.76±4.32)%和(72.65±6.54)%,TEA处理组抑制率和凋亡率都高于未用TEA处理的对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 TEA可抑制Hep-2的增殖及体内生长,促进Hep-2的凋亡.
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PI3K-Akt信号通路与胃癌的研究进展
细胞内信号传导通路PI3K-Akt与胃癌的发生、生长及化疗耐药关系密切.本文概述了PI3K-Akt的分类结构、PI3K-Akt信号转导通路的调节、与胃癌细胞凋亡及血管生成的关系及化疗耐药和放疗的机制.
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电针干预脑缺血再灌注损伤相关信号转导通路研究进展
介绍电针干预CIRI相关信号转导通路的研究进展,提出从不同信号转导通路来探讨电针干预CIRI的新思路.总结参与电针干预CIRI的信号通路有NF-κB、PI3K-Akt、MAPK、JAK-STAT等,其中,电针对CIRI的良性调节作用可表现为增强,也可表现为抑制.这将为缺血性脑血管疾病寻求新的治疗靶点提供可靠的依据,并从信号转导通路水平阐释针刺作用机制,为针刺治疗CIRI的临床应用和发展提供理论依据.
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miR-199a-3p 靶基因预测及生物信息学分析
目的：为深入研究 miR-199a-3p 在膀胱癌形成和发展中的作用提供理论依据。方法分析 miR-199a-3p 序列,预测其靶基因和转录因子,并对靶基因进行 GO 富集和 KEGG Pathway 分析；构建 TF-miR-199a-3p-靶基因网络调控图。结果miR-199a-3p 序列在多物种间具有高度保守性；GO 分析发现 miR-199a-3p 的靶基因参与细胞调节、代谢调节、细胞大分子生物合成等生物过程(P <0.01)；KEGG Pathway 分析发现 miR-199a-3p 的靶基因显著富集在上皮细胞的细菌入侵通路、ECM 受体的相互作用通路、PI3K-Akt 信号通路、MAPK 信号通路、小细胞肺癌通路、癌症中的蛋白聚糖通路等；根据构建的 TF-miR-199a-3p-靶基因网络调控图,挖掘出可能受 miR-199a-3p 调控的重要基因有MYC、SP1、mTOR、NFκB、NFκB1等。结论miR-199a-3p 可能通过直接靶向作用 mTOR,调节 PI3K-Akt-mTOR 信号通路,从而参与膀胱癌的形成和发展。
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ARID1A和GPR30与子宫内膜异位症恶变的分析研究
子宫内膜异位症（Endometriosis,Ems)是育龄妇女的常见的病，近年来发病率有逐年增加的趋势,其组织病理学虽为良性,但具有恶性肿瘤的生物学特征,如远处转移、广泛粘连及易复发等，严重影响妇女的健康及生活质量。AT丰富结构Ⅱ1A(ARID1A)是新近发现的抑癌基因，主要参与细胞周期的负向调节和肿瘤细胞的抑制。ARID1A在全身多种组织中均有表达，它与肿瘤细胞的异常增殖、黏附、血管生成、转移等方面密切相关。G蛋白偶联受体30(GPR30)是一种新型的雌激素受体，它可参与介导雌激素的非基因组效应，迅速激活细胞内磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号转导通路和细胞外信号调节激酶(ERK)通路，发挥促进细胞生长增殖的生物学效应。故本文探讨二者在在EMs发生发展中的作用及其相关性。
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PI3K-AKT信号通路对急性胰腺炎合并肺损伤的影响
急性肺损伤(Acute Lung Injury, ALI)是急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)临床常见并发症,治疗效果及预后欠佳,严重可引起急性呼吸窘迫综合征(Acute Respiratory Distress Syndrome,ARDS),危及患者的生命安全.AP引起ALI的实质是全身炎症反应失控, AP患者肺组织中含有众多的炎症细胞及介质参与到炎症反应中来,通过PI3K-Akt信号通路传导,肺组织内存在的主要炎症细胞:巨噬细胞、中性粒细胞等被激活,活性明显增加,并释放大量的炎症介质,如IL-1、IL-6、TNF-α.炎症细胞及炎症介质互相激活,形成瀑布样效应,对肺泡及间质产生严重的破坏作用,患者出现呼吸困难、咯血、低氧血症等肺损伤表现.本文主要介绍了PI3K-Akt信号通路对AP合并ALI的作用,提出一种新的治疗模式:通过阻断相关信号通路的传导,减轻ALI,改善预后,降低死亡率.
