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靶向人PDE5A3基因的shRNA对人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP的影响
目的:观察腺病毒载体介导特异性短发夹RNA(shRNA)对人阴茎海绵体平滑肌细胞环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,为应用RNA干扰(RNAi)技术治疗阴茎勃起功能障碍(ED)提供实验依据. 方法:成功构建携带3条针对人PDESA3基因位点特异性shRNA的重组腺病毒(rAd5-shRNA-PDE5A3),并设立阴性对照病毒组和空白对照组,分别转染人阴茎海绵体平滑肌细胞.以放射免疫法分别检测转染重组腺病毒24、48、72 h后细胞内cGMP浓度变化,观察rAd5-shRNA-PDE5A3对海绵体平滑肌细胞内cGMP的影响. 结果:实验组rAd5-shRNA-PDESA3转染人阴茎海绵体平滑肌细胞后胞内cGMP水平显著高于阴性对照组和空白对照组,在转染后72 h为显著. 结论:3条特异性针对人PDE5A3 mRNA靶位点的shRNA可有效地增加海绵体平滑肌细胞内cGMP的水平,增强对PDE5基因的阻抑效果.
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CO释放抑制剂ZnPP Ⅸ和NO释放抑制剂L-NAME对大鼠阴茎组织cGMP含量影响的研究
目的:探讨CO释放抑制剂锌卟啉Ⅸ(ZnPP Ⅸ)和NO释放抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠阴茎组织中cGMP含量的影响. 方法:180～220 g Wistar大鼠30只,随机均分为3组(正常对照组,ZnPPⅨ组,L-NAME组),ZnPP Ⅸ组给予ZnPP Ⅸ[45μmol/(kg·d)],L-NAME组给予L-NAME[50 mg/(kg·d)],正常对照组给予生理盐水[1 ml/(kg·d)].用药7 d后断头处死大鼠.取阴茎制成匀浆.测定匀浆液中NOS、NO、CO、cGMP含量. 结果:与对照组比较,应用CO释放抑制剂ZnPPⅨ后,大鼠阴茎组织中CO、NOS、NO、cGMP含量有一定程度的下降(P<0.05);应用NO释放抑制剂L-NAME后,大鼠阴茎组织中CO、NOS、NO、cGMP含量也较对照组有一定程度的下降(P<0.05). 结论:ZnPPⅨ与L-NAME能够降低大鼠阴茎组织中CO与NO的浓度,同时cGMP的含量也降低.
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不同月龄大鼠阴茎组织中内源性一氧化碳与环磷酸鸟苷和环磷酸腺苷的关系
目的:探讨增龄对大鼠阴茎组织中内源性一氧化碳(CO)与环磷酸鸟苷(cGMP)、环磷酸腺苷(cAMP)含量的变化. 方法:8、16、24个月大鼠各8只,分别注射阿朴吗啡(APO)进行大鼠阴茎勃起功能实验;麻醉后取阴茎海绵体,用改良双波长分光光度法测量其CO浓度,并测量其cAPM、cGMP含量. 结果:随月龄增加,CO含量降低,各月龄组间差异有显著性(P均<0.01);cGMP、cAMP含量均随月龄增加而逐渐下降,各月龄组间差异有显著性(P均<0.01). 结论:随月龄的增加,大鼠阴茎组织中CO、cAMP、cGMP含量下降,提示衰老对大鼠阴茎组织中CO、cAMP、cGMP含量影响显著.
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腺苷酸环化酶和磷酸二酯酶在人成熟精子的表达及临床意义
目的: 比较腺苷酸环化酶(AC)和磷酸二酯酶(PDE)在活动力正常和活动力低下的人精子表达的差异.方法: 收集活动力正常的人精子和a、b级精子低于20%的弱精子症患者的精子,提取总RNA,采用反转录-多聚酶链式反应 (RT-PCR)的方法检测AC和PDE亚型mRNA的表达水平;采用酶联免疫吸附法测定两组样本环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)的含量. 结果: 与活动力正常的精子比较,可溶性腺苷酸环化酶(sAC)表达和cAMP含量在活动力低下的患者精子显著降低(P均<0.01),而磷酸二酯酶4C(PDE4C)的表达显著增加(P<0.01);腺苷酸环化酶3(ACIII)的表达和cGMP的含量在活动力正常和活动力低下的精子差异无显著性(P>0.05).结论: 精子sAC的表达减少和PDE4C的表达增加是精子活动力低下的原因之一.
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PDE5基因siRNA对人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP的影响
目的:观察PDE5基因小干扰RNA(siRNA)对人阴茎海绵体平滑肌细胞环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,为阴茎勃起功能障碍(ED)的基因治疗提供实验依据.方法:使用美国Ambion公司提供的设计软件设计并合成人PDE5基因的siRNA序列,合成3对PDE5 siRNA和1对阴性对照siRNA,转染人阴茎海绵体平滑肌细胞,同时设定空白转染组为对照组.以酶联免疫法分别检测转染后不同时间(24、48、72、96 h)点海绵体平滑肌细胞内cGMP浓度变化,观察PDE5 siRNA对海绵体平滑肌细胞内cGMP的影响.结果:siRNA1、siRNA2和siRNA3转染后人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP水平显著高于阴性对照siRNA组和空白对照组(P＜0.05),在转染后72 h为显著,siRNA1、siRNA2、siRNA3、阴性对照siRNA和空白对照组cGMP测定值分别为:5.89±0.19、3.52±0.16、2.88±0.08、0.72±0.12、0.60±0.16 pmol/ml,siRNA1组明显高于siRNA2、siRNA3组(P＜0.05).结论:体外化学合成的PDE5 siRNA能有效地增加海绵体平滑肌细胞内cGMP的水平,不同序列siRNA增加cGMP水平的能力不同,为ED的基因治疗提供了新思路.
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小檗碱对离体家兔阴茎海绵体cGMP和cAMP水平的影响
目的:观察小檗碱(berberine,Ber)对离体家兔阴茎海绵体平滑肌组织中环磷酸鸟苷(cGMP)和环磷酸腺苷(cAMP)水平的影响.方法:采用125I放射免疫测定法,以西地那非(sildenafil,Sil)为阳性对照,测定不同浓度的Ber对离体家兔阴茎海绵体平滑肌组织中cGMP和cAMP水平的影响.结果:Ber能直接升高cGMP的含量(P＜0.05),EC50为1.75μmol/L,但对cAMP含量无显著影响.在cGMP激发剂硝普钠(SNP)存在下,Ber和Sil均能浓度依赖性地提高海绵体组织中cGMP浓度(P＜0.01),促进cGMP生成的EC50分别为1.32、0.67 μmol/L.同样的条件下,Ber和Sil对cAMP的浓度均无显著影响(P＞0.05).在cAMP激发剂前列腺素E1(PGE1)刺激下,Ber和Sil也能够提高海绵体组织中cAMP的浓度(P＜0.01),表现出浓度依赖性,促进cAMP生成的EC50分别为4.90、6.53μmoL/L.结论:Ber可提高阴茎海绵体平滑肌中cGMP、cAMP的浓度,此效应可能为其舒张阴茎海绵体的潜在机制.
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5型磷酸二酯酶抑制剂促进雄性大鼠的非接触性勃起:其大脑内的作用部位和作用机制
将具有口服活性的5型磷酸二酯酶抑制剂(PDE5i)用于治疗勃起功能障碍,可通过减少环磷酸鸟苷的降解促进阴茎海绵体平滑肌组织的松弛.为了确定PDE5i是否同时通过中枢神经系统作用促进阴茎勃起和改善男性性行为,并研究其中枢水平的作用机制,研究者给雄性sprague-Dawley大鼠经腹腔注射(i.p.,5 mg/kg和10 mg/kg)、脑室注射(i.c.v.,10μg和50μg)或中脑腹侧被盖区注射(VTA,10μg)各种PDE5i(西地那非、伐地那非和他达拉非),通过非接触性勃起试验筛选受试动物的性行为反应性.
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鱼棉平喘方对哮喘豚鼠的平喘作用及血浆cAMP、cGMP水平的影响
目的探讨鱼棉平喘方对哮喘豚鼠的作用机理.方法通过平喘实验观察引喘潜伏期及放射免疫分析法测定哮喘豚鼠分组治疗后血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)水平.结果测定各组豚鼠给药1周前、后的引喘潜伏期,结果显示本方治疗各组与正常组以及与治疗前各组比较,均显著延长引喘时间(P＜0.01),与阳性药组比较无显著性差异(P＞0.05).将豚鼠造模和复制引喘后分组给药治疗1周后取血测定各组豚鼠血浆中cAMP、cGMP水平及cAMP/cGMP比值,结果显示本方治疗各组与模型组比较均显著升高血浆cAMP水平及cAMP/cGMP比值、降低血浆cGMP水平(P＜0.01～0.05).与阳性药组、正常组比较均无显著性差异(P＞0.05).结论本方有明显的平喘作用,其作用机理与其调节机体cAMP、cGMP水平及稳定cAMP/cGMP比值有关.
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正常小鼠血液中环核苷酸信使的昼夜生理节律
目的从时间生理学的角度,探讨血液中环核苷酸系统的生理节律.方法将实验动物置人工光照周期的稳定环境中饲养2周后,在昼夜6个不同时点分别取样测定.结果小鼠血液中cAMP和cGMP含量变化呈现明显的昼夜节律特征,中值分别为104.34和64.70nmol/L,两者相差1.64倍;相位分别位于12∶56和19∶58时,相差近7h.结论正常小鼠血液中的环核苷酸信使含量具有昼夜变化的特征.
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心钠素对哮喘豚鼠内皮素水平影响的实验研究
目的:探讨外源性心钠素(ANF)对哮喘豚鼠内皮素-1(ET-1)水平的影响.方法:采用放射免疫分析法测定哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和血浆ET-1、环磷酸鸟苷(cGMP)含量及给哮喘豚鼠输注不同剂量rANF(大鼠ANF)后BALF及血浆ET-1含量.结果:实验组哮喘豚鼠停止输注rANF后30分钟,血浆及BALF中ET-1水平均明显下降,并呈剂量依赖性;cGMP水平显著升高,也呈剂量依赖性.结论:ANF具有抑制哮喘豚鼠ET-1合成及分泌的作用,拮抗其生物效应,外源性ANF的使用可望成为哮喘病治疗的新方法.
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17-β雌二醇对大鼠胸主动脉的舒张作用及其机制的研究
目的:研究17-β雌二醇(E2)对大鼠胸主动脉(TA)的舒张作用及其机制. 方法:采用体外血管灌流的方法,观察E2对血管内皮完整和去内皮TA的舒张作用,以及雌激素受体(ER)调节药他莫昔芬(Tamoxifen)、左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、亚甲蓝(MB)、四乙铵(TEA)和格列本脲对这一过程的影响. 结果:E2(5×10-8～5×10-5 mol/L)可引起急性血管舒张,此作用具有剂量依赖性,而去内皮的血管舒张效应不明显(P<0.01).他莫昔芬(10-6 mol/L)几乎能完全抑制E2的舒张效应.一氧化氮(NO)合成酶抑制剂L-NAME(10-5mol/L)部分抑制E2舒张TA的作用.MB是鸟苷酸环化酶(GC)的抑制剂,10-5mol/L的MB不仅有抑制E2舒张TA的作用,而且有增强去甲肾上腺素(NE)产生的收缩反应.钙激活钾通道(KCa)的阻断药TEA(10-4mol/L)和ATP敏感钾通道(KATP)的阻断药格列本脲(10-5mol/L)可减弱E2的舒血管作用. 结论:E2对TA的急性舒张作用具有内皮依赖性.此作用是E2通过非基因组方式使血管内皮细胞分泌NO,进而引起血管平滑肌细胞(VSMC)内的环磷酸鸟苷(cGMP)水平升高实现的,并且与KCa和KATP有关.
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淫羊藿总黄酮对慢性心力衰竭大鼠肿瘤坏死因子-α、一氧化氮、环磷酸鸟苷通路的影响
目的:观察淫羊藿总黄酮(TFE)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠左心室重量指数(LVWI)及血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、左心室心肌一氧化氮(NO)、左心室心肌环磷酸鸟苷(cGMP)改变的影响.方法:用异丙基肾上腺素(ISO) (170mg/kg)对SD大鼠皮下注射2次,6周后依据超声心动图检测左心室短轴缩短率(FS)<45%确定CHF造模成功,按照FS顺序将48只大鼠随机分为4组:TFE低剂量组(TFE-L)、TFE中剂量组(TFE-M)、TFE高剂量组(TFE-H)、CHF组.空白对照(CON)组10只. 结果:与CON组相比,CHF组大鼠出现心率(HR)、左心室舒张末压力(LVEDP)、大鼠LVWI显著升高(P<0.01),左心室内压峰值(LVSP)和左心室压力上升/下降大速率(±dp/dtmax)明显降低(P<0.01),血浆TNF-α及左心室心肌NO浓度显著增高(P<0.01),左心室心肌cGMP浓度显著降低(P<0.01).与CHF组相比,TFE各剂量组LVEDP和TNF-α显著降低(P<0.01),左心室±dp/dtmax 显著增加(P<0.01);TFE-H组HR降低(P<0.01)、LVSP升高(P<0.05),左心室心肌cGMP浓度明显增高(P<0.01) ,LVWI明显减低(P<0.01);TFE-M、TFE-H组左心室心肌NO明显降低(P<0.01).结论:TFE具有减轻CHF大鼠左心室重塑的作用,能改善大鼠的心功能,其机制与降低TNF-α、NO、升高左心室心肌cGMP浓度有关.
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三七总皂苷对大鼠左心室构型重建的影响
目的 探讨三七总皂苷(total saponins of Panax notoginseng,PNS)对大鼠左室重构中一氧化氮(NO)和环磷酸鸟苷(cGMP)含量的影响及其相关机制.方法 异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)5 mg·kg-1·d-1,sc,连续7 d,建立大鼠心肌肥厚模型.造模第二天开始大鼠腹腔注射PNS 25和50 mg· kg-1· d-1,连续14 d,测定心脏重量参数;分光光度法检测左心室心肌组织中NO含量和一氧化氮合酶(NOS)活力;放免分析法检测左心室心肌组织中环磷酸鸟苷(cGMP)和环磷酸腺苷(cAMP)含量.结果 ISO模型组大鼠心脏重量参数明显增大;左心室诱生型NOS(iNOS)活力和cAMP含量显著升高;NO、cGMP含量和结构型NOS(cNOS)活力显著降低.PNS能明显提高心肌组织NO水平、cNOS活力和cGMP的含量;降低iNOS活力和cAMP含量;减轻心脏重量;抑制左室重构.结论 PNS改善大鼠左心室构型重建的作用与其提高NO和 cGMP含量有关.
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环磷酸鸟苷与心脏应激状态的关系
目的:探讨环磷酸鸟苷(cGMP)与心脏应激状态的关系. 方法:放免法测定16例低温麻醉体外循环心脏直视手术患者围手术期7个时段的血浆cGMP值,并同期测定30例健康献血员的cGMP值作为对照. 结果:各时段cGMP值间的差异有极显著意义(P＜0.01). 结论:心脏承受手术操作和体外循环的刺激,cGMP也同步发生变化,提示cGMP作为心钠素的第二信使实质上反映了心脏应激强度的变化.
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肺缺血再灌注损伤时一氧化碳的变化及葛根素对其影响
目的:观察兔肺缺血再灌注损伤时一氧化碳的变化及葛根素对其的影响.方法:30只健康日本大耳白兔随机分成假手术对照组(C组)、肺缺血再灌注组(IR组)和葛根素组(Pur组).复制兔单侧肺缺血再灌注损伤模型,各组在缺血前、缺血1 h、再灌注1 h、3 h和5 h分别抽血,检测一氧化碳血红蛋白(COHb)浓度、环磷酸鸟苷(cGMP)含量.实验结束时取肺组织检测cGMP含量,电镜观察肺组织超微结构的改变.结果:血浆COHb浓度、cGMP含量和肺组织cGMP含量IR组、Pur组明显高于C组,以Pur组为著(P＜0.01).电镜显示IR组有明显的肺超微结构损伤,而Pur组损伤较轻.结论:葛根素可通过提高内源性C0水平,对缺血再灌注损伤肺组织发挥保护作用.
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慢性低O2高CO2时NO-sGC-cGMP细胞信号转导通路变化及与肺动脉高压的关系
目的:探讨慢性低O2高CO2性肺动脉高压发生与发展中NO-sGC-cGMP细胞信号转导通路的变化和作用.方法:雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组与低O2高CO2肺动脉高压1 w、2 w及4 w组.用比色法测定血浆NO含量,酶动力学法测定肺组织sGC活性,125 I-放射免疫法检测肺组织cGMP含量.结果:低O2高CO2 1 w、2 w、4 w组mPAP较对照组均明显升高(P均＜0.01).而血浆NO含量、肺组织sGC活性和肺组织cGMP含量均显著降低(分别P＜0.05,P＜0.01或P＜0.001).mPAP与血浆NO含量(r=-0.807, P＜0.01)、与肺组织sGC活性(r=-0.754,P＜0.01)、与肺组织cGMP含量(r=-0.621,P＜0.01)之间均存在显著负相关.结论:低O2高CO2引起的NO-sGC-cGMP转导通路的遏制性变化导致肺动脉舒张性降低是形成肺动脉高压的重要机制.
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拟炎症高NO大鼠原代培养肝细胞的信号转导途径研究
目的:通过对信号分子NO在原代培养大鼠肝细胞所经由的信号转导途径研究,探索炎症急性期肝细胞高NO的生物学意义,及药物可能作用的新靶点.方法:采用NO供体硝普钠(SNP)模拟肝脏急性炎症期高NO环境,Griess法测定NO的特异氧化终产物NO2-/NO3-.测定肝细胞中cGMP的浓度和肝细胞培养液中GSNO的浓度,由此分别了解在原代培养大鼠肝细胞模型,NO经由cGMP通路信号转导,还是经由非cGMP通路信号转导的途径.结果:1.543 mmol/L SNP释放NO达峰值分别为,以25 mmol/L GSH为NO释放通路,30 min时为(0.63±0.06)mmol/L;以25 mmol/L L-Cys为活性巯基通路,25 min时为(0.98±0.11)mmol/L.SNP与原代培养大鼠肝细胞共孵育过程中,随着孵育时间的延长及SNP浓度的增高,细胞内cGMP含量与对照组相比有显著性差异(P<0.05);培养液中GSNO浓度也有增高.与对照组比均有显著差异(P<0.05).结论:NO供体SNP在含有巯基(GSH和Cys)的肝细胞培养液中可持续释放NO,通过cGMP依赖性通路和cGMP非依赖性通路--GSNO通路进行信号转导,影响下游生物学效应靶点.
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电针对大鼠不同脑区cAMP和cGMP含量的影响
目的:探讨针刺镇痛与中枢cAMP和cGMP含量变化之间的关系.方法:运用放射免疫分析法(RIA)测定大鼠电针前后不同脑区cAMP和cGMP含量的变化.结果:电针30min提高大鼠痛阈的同时,使间脑cAMP、端脑cGMP含量显著降低(P＜0.05).脑干cGMP含量显著升高(P＜0.05).结论:中枢环核苷酸可能参与针刺镇痛.
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AngⅡ反馈性调节肾素分泌机制的研究进展
肾脏局部肾素-血管紧张素系统(RAS)的激活在慢性肾脏病的发展过程中起着重要作用,但肾脏局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与肾素之间存在的复杂的反馈调节信号传导途径并不是很清楚.近年来大量研究发现,AngⅡ可以将环磷酸腺苷(cAMP)、钙离子(Ca2+)和环磷酸鸟苷(cGMP)三大信号途径联系起来,直接、间接调节肾素分泌.笔者结合相关文献对AngⅡ反馈性调节肾素分泌机制分析如下.
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冠心病患者血浆D型利钠肽水平变化
目的:研究冠心病患者血浆D型利钠肽(DNP)浓度的变化,探讨其在冠心病发生发展中的可能作用.方法:选取2013年7月至2014年4月福建医科大学附属协和医院因胸痛住院并行冠脉造影的患者,所有病例按照冠脉造影结果分为冠心病组和对照组,每个病例根据冠脉造影结果计算Gensini评分代表冠脉病变严重程度.ELISA测血浆DNP、环磷酸鸟苷(cGMP)及中性内肽酶(NEP)浓度.结果:共收集符合纳入标准的冠心病患者48例,冠脉造影冠脉正常者45例作为对照组.冠心病组血浆DNP水平高于对照组[(5060±1 870) pg/mL vs (4250±1 270) pg/mL,P＜0.05];而冠心病组血浆cGMP、NEP浓度与对照组比较无统计学差异(P＞0.05);不同类型冠心病组间DNP浓度没有统计学差异(P＞0.05).冠心病组血浆DNP浓度与Gensini评分进行Pearson相关性检验,二者间没有明显相关(r =0.105).以是否冠心病为因变量,DNP、N端脑钠肽前体(NT-proBNP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及左室射血分数(LVEF)值为自变量,进行Logistic回归分析示:DNP、NT-proB-NP及hs-CRP与冠心病阳性率存在正相关,而LVEF值与冠心病阳性率存在负相关.结论:冠心病患者血浆DNP浓度升高,可能在冠心病发生与发展过程中起一定作用.
