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南京地区食品中单核细胞增生李斯特菌分离鉴定
目的 了解南京地区食品中单核细胞增生李斯特菌在市售食品中污染状况,为食源性疾病的监测和预警提供科学依据.方法 采集11大类食品共计286份样品,按照GB/T4789.30-2003食品微生物检验标准进行单核细胞增生李斯特菌分离培养,然后应用常规方法、ATB细菌鉴定仪和荧光定量PCR方法进行菌株鉴定.结果 2007-2009年食品中单核细胞增生李斯特菌总检出率为12.9％,2007年检出率为16.8％,2008年为16.9％,2009年为7.0％,生肉检出率高达52.4％,2007年生猪肉的检出率为62.5％,2007和2008年鸡肉中的检出率均为60.0％;生速食米面2007年检出率高达30.0％.结论 南京地区单核细胞增生性李斯特菌污染较为严重,可能是近年食物中毒发生的潜在危险因素,须引起足够重视.
关键词： 食源性疾病 单核细胞增生李斯特菌 分离 鉴定 -
快速检测单核细胞增生李斯特菌LAMP方法的建立
目的:建立一种检测单核细胞增生李斯特菌核酸的快速、特异的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法.方法:针对单核细胞增生李斯特菌的李斯特菌溶血素hlyA基因设计4条LAMP引物,在水浴箱内65 ℃保温约60 min,完成对单核细胞增生李斯特菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBR Green I染色和电泳鉴定.利用LAMP和PCR方法同时检测1株单核细胞增生李斯特菌和10株非单核细胞增生李斯特菌(对照组)来验证LAMP方法的特异性.用LAMP和PCR方法分别检测一系列稀释后的单核细胞增生李斯特菌菌液,比较两者的敏感性.结果:经肉眼、加染料和电泳均能观察到1株单核细胞增生李斯特菌LAMP扩增阳性反应,10株非单核细胞增生李斯特菌没有出现LAMP扩增.LAMP敏感度比PCR高,LAMP检测单核细胞增生李斯特菌的检测下限为3 cfu/ml,PCR检测下限>300 cfu/ml.LAMP检测速度比PCR更快,只需要60 min.结论:建立了一种检测单核细胞增生李斯特菌的快速、特异的LAMP方法.
关键词： 环介导等温扩增 单核细胞增生李斯特菌 溶血素基因 -
单核细胞增生李斯特菌PCR鉴定技术的研究
目的建立单核细胞增生李斯特菌PCR鉴定技术.方法选择Hly Inl基因设计扩展片段分别为300～400bp、600～700bp的二对特异性引物,进行PCR扩增.结果单增李斯特菌标准菌株及本实验室分离保存的单增李斯特菌均扩增出两条明显条带,其它食品中常见致病菌及非单核细胞增生李斯特菌均不见扩增条带.52株李斯特菌生化符合菌中,有30株菌同时扩增出两条明显条带,与Mini-VIDSA测定法比较,两者符合率达92.31%.结论本实验建立的PCR鉴定技术为一种简便、快速、敏感、特异的单增李斯特菌鉴定方法.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 聚合酶链反应 全自动荧光酶标分析仪 -
南平市2012-2014年部分食品李斯特菌监测结果
目的 了解南平市部分食品单核细胞增生李斯特菌(李斯特菌)污染状况.方法 据GB 4789.30-2010[1]方法,对市售熟肉制品、熟制米面制品、冷冻饮品、调理肉制品、冷冻肉糜制品、外卖配送餐及学生餐进行李斯特菌检测.结果 7类食品268份样品检出李斯特菌17株,检出率6.3％;其中调理肉制品检出率高(55.6％),其次为冷冻肉糜制品(20.0％)、熟肉制品(5.0％)和冷冻饮品(3.3％),熟制米面制品、学生餐和外卖配送餐均未检出.结论 南平市售食品中李斯特菌污染较严重,应对食品加工生产和销售的各环节加强监管.
关键词： 食品安全 食源性疾病 单核细胞增生李斯特菌 -
福建省2000-2001年度食源性致病菌监测分析
[目的] 了解福建省各类食品中致病菌污染状况.[方法] 监测4个市县市售的生禽畜肉、熟肉制品、生牛乳、冰激凌、酸奶、水产品.[结果] 2000年监测的200件样品中,检出沙门菌3株,O157:H7 1株,单核细胞增生李斯特菌2株.2001年监测的420件样品中,检出沙门菌20株,O157:H7 1株,单核细胞增生李斯特菌13株,副溶血弧菌8株.[结论] 福建省生畜禽肉、熟肉制品、生食水产品中存在着不同程度的致病菌污染,应加强监测、预报,提请有关部门实现从畜牧业到餐桌的综合治理,以防食源性疾病的发生.
关键词： 食品卫生 食源性致病菌 沙门菌 大肠杆菌O157:H7 副溶血弧菌 单核细胞增生李斯特菌 -
2016年福建省单核细胞增生李斯特菌临床病例及食品来源菌株的分子特征分析
目的 研究福建省单核细胞增生李斯特菌感染病例的临床特征及分离菌株的分子型别,为食源性疾病溯源和防控提供参考依据.方法 通过监测网报告的感染病例进行个案访谈调查;对2016年临床病例和即食食品来源的单核细胞增生李斯特菌分离株进行血清分型和PFGE分子分型.结果 感染病例均为免疫力低下的孕妇和新生儿,3株病例分离株血清型为2株1/2a和1株4b.8株食品分离株血清型为5株1/2a、2株4b和1株1/2b.11株PFGE分为10个型别.结论 2016年福建存在散发的单核细胞增生李斯特菌病例,PT型各异,无同源性.应加强监测、流行病学调查和饮食卫生宣教,保护孕妇和新生儿等高危人群.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 临床特征 血清分型 PFGE -
杭州地区单核细胞增生李斯特菌食品分离株分子型别研究
目的 研究杭州地区单核细胞增生李斯特菌(Listeria monoc ytogenes)食品分离株的分子分型情况,了解当地流行株的型别特征.方法 用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)的方法对单核细胞增生李斯特菌进行分子分型.PFGE结果进行聚类分析,并绘制MLST数据的小生成树.结果 6个血清型组成的133株杭州食品分离株共获得19个MLST型别,并发现1个新的ST型ST767.ST9和ST121是数量多的型别.用AscⅠ和ApaⅠ酶切分别获得33和45个PFGE带型.结论 杭州地区单核细胞增生李斯特菌食品分离株分子型别分布广泛,大部分菌株是可引起人李斯特菌病的Lineage Ⅰ和Lineage Ⅱ菌株.食品中单核细胞增生李斯特菌的污染比较严重,应加强监测与管理以防食源性疾病的发生.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 多位点序列分型 脉冲场凝胶电泳 -
4b型单核细胞增生李斯特菌内化素基因NTSN_0462的功能初探
目的 单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monoc ytogenes,Lm)对宿主的粘附、侵袭作用与其多种内化素蛋白密切相关.本研究以4b型菌株LmNTSN的内化素基因NTSN_ 0462为研究对象,初步探究其致病作用.方法 利用同源重组技术构建该基因缺失的突变株,研究0462基因对NTSN在生长、细胞侵袭和体内定植中的作用.人结肠腺癌细胞Caco-2、人肝癌细胞HepG2的侵袭率,以及BALB/c小鼠体内肝、脾脏中定植能力的差异.结果 缺失株的生长曲线结果显示,NTSN0462基因对Lm在BHI培养基中的生长及代谢未造成明显影响.以人结肠腺癌细胞Caco-2、人肝癌细胞HepG2进行的体外试验表明,缺失株的侵袭能力低于野生株(P＜0.001).以BALB/c小鼠进行的体内试验显示,缺失株在肝脏中定殖的能力显著低于野生株(P＜0.001),在脾脏中无统计学差异.结论 NTSN_0462基因在LmNTSN入侵肝脏和定植中发挥重要作用,是侵袭相关的重要毒力因子.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 NTSN_0462 血清型4b 内化素 -
市售熟食单核细胞增生李斯特菌流行病学分析
目的了解市售散装熟食中Lm污染状况,探索Lm在熟食中流行特征,确定控制Lm的关键控制点.方法采集市售熟食、宾馆饭店熟食、生产熟食用原料、生产场所环境及用具、熟食销售场所环境及用具、宾馆饭店熟食间环境及用具样品共883份检测Lm,用统计学处理分析结果.结果市售散装熟食Lm检出率为13.06%,宾馆饭店熟食Lm检出率为1.02%,二者间有极显著差异(P＜0.01).生产原料Lm检出率为3.00%,生产环境及用具Lm检出率为22.22%.销售环境及用具Lm检出率11.02%,宾馆饭店熟食间环境及用具未检出Lm,二者间有显著差异(P＜0.05).结论市售熟食Lm与宾馆饭店熟食有极显著差异;销售环境及用具Lm与宾馆饭店熟食间环境及用具有显著差异.Lm关键控制点:建立相对封闭的销售环境,加强熟食冰箱、柜台内外、销售用具的消毒措施.
关键词： 市售熟食 单核细胞增生李斯特菌 关键控制点 -
利用商品DNA探针对食品中单核细胞增生李斯特菌的快速检测评估
用商品核酸探针(AccuProbe)对100份市售食品中单核细胞增生李斯特菌进行检测和验证,并以酶联免疫荧光分析技术(VIDAS)和常规培养分离物做生化鉴定(API)做平行测试比较,终证实基因探针(AccuProbe)对食品中单增李氏菌的检测具备正确、灵敏、快速、简便等优点,适于推广应用.
关键词： 核酸探针 单核细胞增生李斯特菌 -
29种毒力基因在91株食源性单核细胞增生李斯特氏菌中的分布
目的 了解河北省食源性单核细胞增生李斯特菌(Listeria monoc ytogenes,Lm)毒力基因分布特征.方法 采用普通PCR方法对Lm的29个毒力基因(包括毒力岛I在内的6个位点:prfA、plcA 、plcB、hlyA、mpl和actA;内化素家族的10个位点:inlA、inlB、inlC、inlD、inlE、inlF、inlG、inlH /C2、inlI和inlJ;其他13个毒力相关位点:bsh、srtA、iap、sigB、virR、mprF、dltA、dltB、dltC、dltD、srtB、fbpA和hpt)进行检测.结果 在91株Lm中,有23个毒力基因的检出率为100％.26株Lm的29种毒力基因全部检出,65株Lm存在inlD、inlF、inlG、inlH/C2、inlJ和mpl等6个毒力基因的不同缺失.缺失严重的为inlG和inlF,缺失率分别为60.44％和54.95％;其次为mpl基因,缺失率为19.78％.根据毒力基因缺失情况,91株菌可分为10个基因型,优势毒力基因型为具有全部23种毒力基因的Ⅰ型.石家庄地区的毒力菌株缺失率(41/52)高于河北北部地区(11/22).结论 河北省食源性Lm的毒力基因携带率高,毒力基因缺失具有多样性且存在地域差异.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 毒力基因 分布特征 -
表达绿色荧光蛋白的单核细胞增生李斯特菌重组菌株的构建及其生物学特性
目的 为了对单核细胞增生李斯特菌运送外源抗原所诱导免疫应答特性进行评价,开展了以原核方式运送模式蛋白GFP的研究.方法 利用SOEing PCR的方法把LLO的启动子与GFP融合在一起,通过同源重组的方式整合到yzuLM1-2 actA和plcB基因片段之后,在LLO启动子的作用下实现GFP的表达.结果 PCR扩增证实目的 基因gfp融合到李斯特菌基基因组中,重组菌对小鼠的LD50为4.31×108,毒力比yzuLM1-2显著降低.以重组菌株免疫小鼠后获得的血清进行Western blot显示在27kD处出现特异印迹带;ELISA测定结果显示能诱导小鼠产生较高的抗GFP的抗体水平.结论 研究结果表明减毒LM所运送的GFP能诱导小鼠产生较强的免疫应答的特性,这为减毒株yzuLM1-2运送外源保护性抗原的研究奠定了基础,也为开展减毒重组菌与抗原递呈细胞之间的相互作用及其诱导的免疫应答分析提供了必要条件.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 绿色荧光蛋白 重组菌株 生物学特性 -
单核细胞增生李斯特菌的耐药特征及机制
食源性疾病已成为当今世界重大的公共卫生问题,由单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)等病原细菌引起的食源性疾病是影响食品安全的主要因素之一.近年来Lm耐药率呈上升趋势,多重耐药菌株不断出现,给世界公共卫生和人类健康带来了严重威胁.Lm的耐药机制十分复杂,包括可移动元件介导的耐药基因转移、药物作用靶点的改变、抗生素的外排作用、灭活酶的产生、生物被膜的形成等多种机制.本文就近年来国内外食品及临床来源Lm的耐药特征及机制进行综述,为李斯特菌病的合理用药,耐药菌株的监测以及公共卫生策略的制定提供科学依据.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 耐药性 多重耐药 耐药机制 -
温州海产贝类单核细胞增生李斯特菌的污染检查
目的 了解温州市海洋贝类单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)的污染状况.方法 2009年7月在温州沿海地区抽取贝类样品进行微生物检测.结果 在100份样品中,Lm阳性3份,占总数的3.00%.结论 温州市海洋贝类已受到Lm的污染,应加强卫生监督.
关键词： 海洋污染 贝类 单核细胞增生李斯特菌 -
2015～2017年河南省预包装熟肉制品生产加工过程单核细胞增生李斯特菌监测
目的 了解河南省某预包装熟肉制品生产加工过程的各个环节中单核细胞增生李斯特菌的污染及分布情况.方法 按照国家食品污染和有害因素风险监测工作手册方法,于2015～2017年的第二、三季度在河南省某熟肉制品厂的生制品车间、熟制品车间和包装灭菌间分别采集原辅料、中间产品、成品、终成品及环境涂抹物样品430份,依据国标方法进行单核细胞增生李斯特菌的检验.结果 430份样品中单核细胞增生李斯特菌的检出率为16.98％,2015年的检出率(27.67％)高于2016年(7.64％)和2017年(18.18％)(P＜0.01),第二季度检出率(22.74％)高于第三季度(11.41％)(P＞0.05),生制品车间的检出率(41.91％)较高,且不同车间的检出率差异有统计学意义(P ＜0.01).结论 该熟肉制品加工厂单核细胞增生李斯特菌的检出率出现逐年降低的趋势,生制品车间采集的样品污染率高.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 熟肉制品 生产加工过程 污染 -
2000～2004年龙岩市部分市售食品中单核细胞增生李斯特菌监测
[目的]了解龙岩市部分市售食品中单核细胞增生李斯特菌的污染状况.[方法]2000～2004年在龙岩市新罗区北市场和韭菜园市场采集市售生肉、熟肉制品、生牛乳、冰激凌、水产品及生食蔬菜进行检测.[结果]检测6类410份食品,检出14株LM,检出率为3.4%.其中生肉中检出13株,阳性率为6.5%;水产品中检出1株,阳性率为3.3%.大多数被污染食品的MPN值在150/100 g左右,个别生肉达270/100g.14株均对庆大霉素、氯霉素、四环素、环丙沙星、呋喃妥因、氨苄青霉素敏感,8株对复方新诺明耐药,4株对红霉素、5株对氟哌酸、3株对万古霉素耐药,有2株对青霉素G、利福平、麦迪霉素耐药.[结论]龙岩市生肉、水产品存在LM的污染.
关键词： 食品 单核细胞增生李斯特菌 污染 -
山东省食品中单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型
目的 了解山东省2007～2009年不同食品来源的单核细胞增生李斯特菌(LM)各菌株之间的遗传相关性和流行病学意义,建立分子分型数据库.方法 采用PulseNet标准方法 对分离到的100株单核细胞增生李斯特菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),不同菌株产生的电泳图谱经BioNumerics软件进行比对,分析菌株间的相关性.结果 单核细胞增生李斯特菌DNA用AscⅠ酶切后,经PFGE得到10 ～ 15个条带,可将100株菌分为31个PFGE型别,其中以4型为主.结论 山东省食品中的LM来源于不同的克隆株,但部分LM有不同程度的相关性；PFGE是分析LM同源性的有效方法,对LM的流行趋势、分布特点和分子流行病学研究具有重要的意义.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 脉冲场凝胶电泳 分子分型 -
单核细胞增生李斯特菌PFGE分型与血清学分型的联合分析
目的:采用国际标准化的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析方法对单核细胞增生李斯特菌(Lm)进行基因分型,同时进行血清学分型,比较分析两种分型方法的优劣和之间的关系.方法:按照标准化的Lm-PFGE方法对17株Lm进行PFGE分型,分别用限制性内切酶ApaI和AscI酶对菌株进行酶切,通过脉冲场凝胶电泳获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析.同时对上述菌株进行血清学分型.结果:17株Lm被内切酶ApaI分为13种带型,被内切酶AseI分为14种PFGE型.17株Lm分为5种血清型.结论:Lm-PFGE分型方法是一种高分辨力、稳定可靠的技术.PFGE的分辨力高于血清学分型,两种分型方法密切相关.聚类分析结果显示ApaI酶切分型与H抗原密切相关.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 脉冲场凝胶电泳 分子分析 血清学分型 -
食品中单核细胞增生李斯特菌特异性二重PCR检测方法的研究
目的:建立二重PCR方法特异检测食品中的单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM).方法:以编码内化素B的inlB基因和以编码LM溶血素O的hly基因为靶基因,设计筛选引物,建立二重PCR体系.对5株LM和35株非LM进行特异性检测.梯度稀释LM基因组DNA,以不同稀释度DNA作PCR扩增.在黑椒烤鸡样品中以不同菌量人工污染,增菌培养10 h,提取DNA进行PCR扩增.应用该方法对实际样品进行检测.结果:以inlB、hly为靶基因的2对引物对LM的检出有很好的特异性.PCR检测的灵敏度在DNA水平上达到0.8769 ng.人工污染样品,当起始污染量为2.7×102 cfu/g时,37℃增菌培养10 h即可检出.一共检测了55份食品样品,检出1份阳性样品,与传统方法一致.结论:建立了适用于食品中LM检测的特异二重PCR方法.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 二重PCR 食品 -
前增菌培养方法对热损伤单核细胞增生李斯特菌复苏效果观察及应用研究
目的:观察前增菌培养方法对热损伤LM的复苏/恢复情况以及在市售熟肉制品LM污染调查检测中的运用效果,探索受损伤LM的增菌培养方法,提高食品LM检出率.方法:LM参考菌株经61℃5 min处理,制备热损伤菌液,采用Alanin Martin等推荐的LM前增菌液和LM国标方法LB1、EB增菌液对热损伤细菌进行复苏/恢复,记录、分析细菌增殖、恢复情况.将LM前增菌培养方法与国标法结合(改良法),用于熟肉制品LM污染调查检测,并与单纯国标法检测结果进行比较,得出结论.结果:热损伤LM经前增菌液培养4～5 h后,基本完成复苏/恢复过程,并开始明显增殖,24 h培养后,菌数较直接使用LB1、EB增菌液培养的菌数增长明显(约增加102倍);热损伤I朋在LB1、EB增菌液培养早期,菌数一度减少,机理尚需进一步研究.前增菌培养方法与LM国标法结合(改良法)用于熟肉制品LM污染调查,较单纯使用国标法的检出率明显提高(X2=4.68,P<0.05).结论:热损伤LM在LB1、EB增菌液中复苏/恢复比较缓慢,Alanin Martin等提出的LM前增菌方法对热损伤LM有明显的复苏/恢复效果,建议对加工食品进行LM检测时,在现行LM国标检测方法的基础上,适当增加前增菌培养过程,以提高LM的检出率.
关键词： 单核细胞增生李斯特菌 前增菌 复苏 损伤
