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健脾化瘀方对肝癌bel-7402/5-FU细胞表面耐药蛋白影响的研究
目的 初步明确健脾化瘀方对肝癌细胞表面多药耐药蛋白表达的影响,并探讨可能机制.方法 选择肝癌细胞bel-7402、肝癌耐药细胞bel-7402/5-FU做为实验细胞,以流式细胞仪(FCM)检测细胞表面P-糖蛋白(P-gp)、MDR相关蛋白(MRP1)的表达率及细胞内罗丹明123(Rho 123)的蓄积浓度.以MTT比色法测定不同浓度健脾化瘀方对bel-7402/5-FU细胞增殖的抑制.FCM检测复方作用后bel-7402/5-FU细胞表面P-gp的表达率及Rho 123的蓄积浓度.结果 bel-7402/5-FU细胞表面P-gp的表达高于亲本bel-7402细胞,细胞内Rho 123蓄积浓度低于亲本细胞.健脾化瘀方可显著抑制细胞生长,并呈量效关系.浓度0.5 mg·mL-1的健脾化瘀方作用bel-7402/5-FU细胞48 h后,细胞表面P-gp的表达率明显下降,细胞内Rho 123蓄积浓度升高.结论 健脾化瘀方可能具有逆转肝癌耐药细胞多药耐药的作用,途径可能是通过降低P-gp的表达而实现的.
关键词： 肝癌 健脾化瘀方 多药耐药 P-糖蛋白(P-gp) 逆转 -
ATP-TCA药敏试验测定的胃癌耐药性与MDR1 mRNA和P-gp表达的关系
目的 评价三磷酸腺苷-肿瘤体外药敏试验(ATP-TCA)测定的原发性胃癌耐药性与耐药基因以及蛋白表达的关系.方法 选择2009-2011年间收治的胃癌患者52例,采用ATP-TCA检测胃癌患者对5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、顺铂、5-氟尿嘧啶+阿霉素+丝裂霉素、奥沙利铂+20倍5-氟尿嘧啶5种方案的体外药物敏感性,采用逆转录PCR以及荧光定量PCR检测胃癌患者组织中耐药基因MDR1的表达,采用流式细胞仪检测胃癌患者血中p-糖蛋白(P-gp)表达,采用,检验分析ATP-TCA检测结果与MDR1和P-gp表达之间的相关性.结果 ①5-氟尿嘧啶、丝裂霉素、顺铂、5-氟尿嘧啶+阿霉素+丝裂霉素、奥沙利铂+20倍5-氟尿嘧啶5种方案与临床疗效明显相关(P＜0.01),其中奥沙利铂+20倍5-氟尿嘧啶方案的ATP-TCA检测结果与临床疗效的符合率高,达84.6％(44/52).②ATP-TCA检测化疗敏感和耐药患者MDR1 mRNA的表达水平分别为(0.673±0.143)和(1.436±0.594),两者比较差异有统计学意义(P=0.008).③用流式细胞仪检测52例胃癌患者P-gp表达量,其中阳性20例,阳性率达38.4％,P-gp的表达与ATP-TCA药敏试验有明显相关(P＜0.01).结论 ATP-TCA检测耐药结果与MDR1 mRNA和P-gp表达之间存在明显的相关性,临床检测MDR1 mRNA和P-gp表达可有效预测临床化疗敏感性,指导胃癌的个体化治疗.
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血脑/血瘤屏障体外模型的构建、形态与功能特性
目的构建并观测血脑/血瘤屏障体外模型的形态与功能特性,为中枢神经系统药物跨血脑和(或)血瘤屏障研究提供体外实验模型.方法将分离的Balb/C小鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)在铺有明胶的微孔膜上单层培养或与大鼠胶质瘤细胞C6双室共培养,分别建立血脑屏障(BBB)和血瘤屏障(BTB)模型,采用光镜和扫描电镜观察BMEC形态,采用Millicell-ERS系统检测屏障中的跨内皮电阻(TEERs),免疫细胞化学检测P-糖蛋白(P-gp)表达,并比较BBB和BTB中BMEC的形态和功能特征.结果两组模型中的BMEC均形成单层生长和良好的细胞间紧密连接,产生较高的TEERs值,并检测到P-gp表达.瘤细胞诱导使BMEC间出现间隙,同时相点TEERs值降低,P-gp表达减弱.结论两种体外模型可用于研究药物跨血脑和(或)血瘤屏障特性,其中BTB模型可能更适合抗肿瘤药物的研究.
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P-糖蛋白对槲皮苷跨膜吸收及代谢的影响
目的 研究P-糖蛋白(P-gp)对槲皮苷肠道吸收过程中跨膜转运和代谢转化的影响.方法 采用Caco-2细胞摄取模型和单层细胞转运模型,按LC-MS法测定槲皮苷、槲皮素、异鼠李亭和柽柳黄素,研究P-gp对槲皮苷在肠道吸收过程中的作用及作用机制.结果 胞内摄取:在不同孵育浓度槲皮苷组(3.0、9.0和27.0 mg/L)和P-gp抑制剂环孢素A(CysA)共孵育组,胞内槲皮苷均呈现150 min内随时间先升后降,60 min达峰,120 min达较低水平稳态的趋势特征,两组之间有显著差异(P<0.05);各组均检测到槲皮素,但仅27.0 mg/L浓度组胞内槲皮素呈现与其原形糖苷相似的趋势特征,其余各组均未呈现浓度和时间依赖性;同时槲皮苷27.0 mg/L时,槲皮苷组和共孵育组均检到异鼠李亭和柽柳黄素,表现出与原型糖苷相似的趋势特征,但差异无显著性(P>0.05),3.0和9.0 mg/L浓度组未测到.跨膜转运:在跨膜转运过程中,槲皮苷组和CysA组,150 min内基底侧槲皮苷含量均呈现持续上升的趋势特征,两组之间无显著差异;槲皮素、异鼠李亭和柽柳黄素均未达检测限.结论 槲皮苷原型可被Caco-2细胞吸收并透过Caco-2细胞单层,在Caco-2细胞内和Caco-2单层细胞基底侧均可发生脱糖基作用和进一步的代谢转化,导致跨膜转运和胞内摄取动态特征的不同;P-gp对槲皮苷有外排作用,但对其代谢转化无影响.
关键词： 槲皮苷 液相色谱-质谱 Caco-2细胞 P-糖蛋白(P-gp) -
石菖蒲不同部位对戊四唑点燃大鼠皮质P-糖蛋白表达的影响
目的研究石菖蒲不同部位对戊四唑点燃癫痫模型大鼠皮质多药耐药基因(MDR)表达产物P-糖蛋白表达强度的影响.方法 SD大鼠80只,腹腔注射戊四唑(PTZ)溶液35mg/kg体质量,隔天1次,共14次.点燃成功的大鼠,分8组,每天灌胃1次,分别给予石菖蒲挥发油50mg/kg体质量、石菖蒲去油水提液高剂量28g/kg体质量、中剂量14g/kg体质量、低剂量7g/kg体质量、β-细辛醚100mg/kg体质量、α-细辛醚70mg/kg体质量,阳性对照组给予丙戊酸钠(VPA)126mg/kg体质量,模型组给予等体积生理盐水.另设正常组5只,正常喂养,不作任何处理.治疗36d后注射同剂量戊四唑点燃测试药效,取大脑皮质制成蜡块,免疫组织化学染色,200 倍镜下观察神经元中多药耐药基因表达产物P-糖蛋白的表达强度.结果与正常组及阳性对照组(VPA)比较,石菖蒲去油水提液中、低剂量组大鼠皮质P-糖蛋白(P-gp)表达强度降低(P＜0.05),β-细辛醚组大鼠皮质P-糖蛋白表达强度降低(P＜0.01);与模型组比较,β-细辛醚组大鼠皮质P-gp表达强度降低(P＜0.05);与α-细辛醚组、石菖蒲挥发油组、石菖蒲去挥发油水提液组高剂量组相比,β-细辛醚组P-gp表达强度降低(P＜0.05).结论β-细辛醚和石菖蒲去挥发油水提液中、低剂量组能降低戊四唑点燃大鼠皮质P-gp表达强度,以β-细辛醚作用强.
关键词： 石菖蒲 β-细辛醚 戊四唑 癫痫 多药耐药基因(MDR) P-糖蛋白(P-gp) -
外排转运体和代谢酶与黄酮的相互作用及其对黄酮肠吸收影响的研究进展
黄酮类化合物大量存在于植物界中,具有广泛的药理作用,可预防及治疗癌症、心脑血管疾病、骨质疏松等.口服给药后,大量黄酮类化合物存在生物利用度低的现象.国内外诸多学者对其吸收代谢机制进行了研究.研究表明,肠上皮细胞的ATP-依赖性外排转运体如P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白-2(MRP2)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和细胞内的Ⅱ相代谢酶(UGT等)是影响黄酮肠吸收的主要因素.综述近年来外排转运体和代谢酶对黄酮类化合物肠吸收影响的研究概况,包括ATP-依赖性外排转运体与代谢酶的协同作用,黄酮类化合物对二者功能的调节作用等,以期为提高黄酮的生物利用度和临床合理利用提供理论依据.
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ER、C-erbB-2、P-gp在乳腺癌中的表达及相互关系
目的:探讨雌激素受体(ER)、C-erbB-2、p-糖蛋白(P-gp)在乳癌的表达与腋淋巴结转移之问的相互关系.方法:利用免疫组织化学方法,检测了107例乳腺癌根治标本中ER、C-erbB-2、P-gp的表达.结果:ER、C-erbB-2、P-gp阳性表达率分别为55.14%(59/107)、87.13%(87/107)、20.56%/0(22/107);ER表达与淋巴结转移呈负相关,与G-erbD-2表达呈正相关,与P-gp表达无相关性;C-erbB-2与淋巴结转移呈正相关,与P-gp表达无相关性P-gp与淋巴结转移无明显相关性.结论:乳腺癌组织中ER、C-erbB-2与淋巴结转移有关,P-gp与耐药有关.
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葛根芩连汤配伍对黄连生物碱肠吸收特性的影响
目的 采用大鼠肠外翻模型研究葛根芩连汤不同配伍对黄连中生物碱的肠吸收特性.方法 以大鼠肠道P-糖蛋白(P-gp)抑制剂维拉帕米为判断依据,比较葛根芩连汤中黄芩和葛根对黄连生物碱吸收参数Ka.结果 在维拉帕米的作用下,各生物碱在各肠段的吸收均有显著性增加(P＜0.05)；葛根在十二指肠、空肠段可以使各生物碱成分的吸收增加(P＜0.05)；黄芩在回肠和结肠段能使黄连碱、小檗碱和巴马汀成分的吸收增加(P＜0.05)；而配伍甘草后基本无显著性增加.结论 研究表明,葛根、黄芩可能通过对P-gp抑制,可以显著增加黄连生物碱类成分的吸收.
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食管癌P-gp和P27表达水平及对生存的影响
目的:研究食管癌细胞多药耐药性和细胞周期调控因子表达水平及对患者生存期的影响.方法:用免疫组化方法检测了104例有随访资料的食管癌手术标本中癌细胞P-糖蛋白(P-gp)和细胞周期调控因子(P27)表达水平,并进行临床病理分析.结果:104例食管癌P-gp表达阴性70例(67.3%);阳性表达34例,其中轻度表达6例(5.7%)、中度表达18例(17.3%)、重度表达10例(9.6%).P27表达阴性34例(32.7%);阳性表达70例,其中轻度表达7例(6.7%)、中度表达42例(40.4%)、重度表达21例(20.2%).在生存3年以上组P-gp表达阳性占17.5%(10例),而3年内死亡组P-gp表达阳性占53.3%(24例),两组比较差异有非常显著性(P＜0.0001).P-gp过表达与癌细胞恶性生物学行为和死亡率成正相关.生存3年以上组P27表达阳性占75.8%(44例),而在3年内死亡组P27表达阳性占56.5%(26例),两组比较差异有显著性(P＜0.05).P27过表达与癌细胞恶性生物学行为和死亡率呈负相关.肿瘤的分化程度在生存组与死亡组比较差异有显著性(P＜0.05).肿瘤的浸润深度在生存3年以上组浸润全层仅占53.4%(31例),而在3年内死亡组浸润全层占82.6%(38例),两组比较差异有非常显著性(P＜0.01).淋巴结有无转移的生存组与死亡组比较差异有显著性(P＜0.05).临床分期在生存组与死亡组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:P-gp过表达与癌细胞恶性生物学行为和死亡率成正相关.P27过表达与癌细胞恶性生物学行为和死亡率呈负相关.检测P-gp和P27表达水平可为临床提供选择化疗方案的参考依据.肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期是影响食管癌患者生存的重要因素.
关键词： 食管癌 P-糖蛋白(P-gp) 细胞周期调控因子(P27) 免疫组化 -
siRNA干扰Caco-2细胞鞘磷脂合酶2(SMS2)基因对药物转运体的影响
目的 研究鞘磷脂合酶2 (sphingomyelin synthase 2,SMS2)缺损对人结肠癌细胞(colon cancer cell,Caco-2)中药物转运体P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的表达与功能的影响.方法 SMS2特异性siRNA转染至Caco 2细胞.采用RT-PCR和real-time PCR检测SMS2特异性siRNA的干扰效率;采用Western blot法检测siRNA转染后P-gp和MRP2蛋白表达的变化;采用胞内蓄积试验,通过HPLC检测P-gp及MRP2专一性底物罗丹明123及普伐他汀的蓄积含量,分析下调SMS2水平对Caco 2细胞中P-gp及MRP2功能的影响.结果 应用siRNA下调SMS2水平后,P-gp和MRP2的蛋白质水平均显著下调;胞内蓄积实验结果显示罗丹明123及普伐他汀的蓄积量明显增加,说明P-gp和MRP2的外排功能减弱.结论 SMS2基因表达下调对Caco 2细胞中P-gp和MRP2的表达以及功能均有显著影响.
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阿尔兹海默病(AD)小鼠脑内P-糖蛋白(P-gp)的表达与功能分析
目的 研究P糖蛋白(P glycoprotein,P-gp)在APP/PS1双转基因阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠脑中的表达与功能情况.方法 采用RT-PCR、real-time PCR和Western blot方法分析不同月龄的AD小鼠和野生型(wild type,WT)小鼠脑中P gp表达的差异;采用尾静脉注射罗丹明123 (Rhodamine 123,Rh123),HPLC检测脑及血清中Rh123的含量,计算脑血分配系数,分析不同月龄的AD小鼠和WT小鼠脑中P gp功能的差异.结果 3月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达与功能均明显低于WT小鼠;6月龄时,AD小鼠与WT小鼠无明显差异;9月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达与功能均明显高于WT小鼠;12月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达高于WT小鼠,功能却低于WT小鼠.结论 AD小鼠脑内P-gp的表达与功能与WT小鼠明显不同,并随月龄而变化.
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胃癌组织中c-erbB-2与P-gp表达的相关性研究
目的 了解胃癌组织中c-erbB-2表达与多药耐药的相关性及其临床意义.方法 采用免疫组化方法检测了98例胃癌组织中c-erbB-2表达,应用流式细胞术(FCM)检测癌细胞P-糖蛋白(P-gp)水平,并对其进行相关性分析.结果 胃癌组织中c-erbB-2阳性表达33例,阳性率33.67%;P-gp阳性表达58例,阳性率59.18%.在c-erbB-2表达阴性的病例累及2～3个部位的癌比累及1个部位癌的P-gp表达增多,两组比较有显著性差异(P=0.035).当c-erbB-2和P-gp表达双阳性时,P-gp表达增多与双阴性组比较有非常显著性差异(P＜0.001);当c-erbB-2或P-gp表达单阳性时,P-g表达增多与双阴性组比较有非常显著性差异(P＜0.001);胃癌c-erbB-2和P-gp表达与患者年龄、性别、临床分期、胃癌分化程度和3年生存情况分析,均无统计学意义.结论同时检测胃癌c-erbB-2和P-gp表达水平,可为胃癌的综合治疗及化疗药物选择提供临床参考依据.但是不能用来判断胃癌患者预后.
关键词： 胃癌 C-erbB-2蛋白 P-糖蛋白(P-gp) -
胃癌细胞增殖与P-gp表达的相关性研究
目的 了解胃癌细胞增殖和P-糖蛋白(P-gp) 表达水平的临床意义.方法 采用流式细胞术(FCM)检测95例胃癌手术标本P-gp、DNA指数(DI)、S期细胞百分率(SPF) 和细胞增殖指数(PI),结合临床病理资料进行相关性分析.结果 胃癌P-gp表达阴性39例(41.1%);P-gp表达阳性有56例(58.9%),其中轻、中度表达有29例(30.5%),重度表达有27例(28.4%).95例胃癌中非整倍体肿瘤48例(50.5%),非整倍体肿瘤SPF和PI显著高于二倍体肿瘤(P＜0.0 1),非整倍体肿瘤P-gp表达低于二倍体肿瘤,但差异无统计学意义.胃癌低分化组与中分化组的肿瘤倍体例数比较有非常显著性差异(P＜0.0 1);胃癌中-低分化组与中分化组的肿瘤倍体例数比较有非常显著性差异(P＜0.0 1).以胃癌发生部位、肿瘤大小、临床分期和有无淋巴结转移进行分组比较SPF、PI、P-gp和倍体关系,均无显著性差异.结论 用FCM检测胃癌P-gp表达水平和DNA倍体可为临床选择适当的化疗方案提供参考依据.
关键词： 胃癌 细胞增殖 P-糖蛋白(P-gp) 流式细胞术 -
MDRI的siRNA干扰口腔Tca8ll3/DDP细胞表达的研究
目的 探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对口腔鳞癌多药耐药基因mdr1(MDRI)及其表达产物P-糖蛋白(permeability-glyco-protein,P-gp)的干扰作用. 方法 体外构建针对MDR1的小干扰RNA,将其转染至人舌癌耐药细胞系Tca8113/DDP, 采用RT-PCR法检测转染前后MDR1 mRNA的表达; 采用免疫细胞化学技术比较转染前后P-gp的表达; 采用MTT法检测转染前后肿瘤耐药细胞对顺铂的敏感性. 结果 Tca8113/DDP细胞经MDR1-siRNA转染后48 h的转染率达高,为71.3%;转染后mdr1 mRNA表达较对照组显著降低,降低率为68.32%, 转染48 h后P-gp的表达较对照组明显降低;siRNA可显著提高Tca8113/DDP细胞对DDP的敏感性,逆转其耐药性,耐药倍数为2.05. 结论 siRNA可以明显干扰口腔鳞癌MDR1及相应蛋白P-gp的表达.
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体外试验评价甘草对肠黏膜P-糖蛋白的影响
目的:观察甘草对P-糖蛋白(P-gp)底物经大鼠不同区段肠黏膜透过性的差异,以评价其对肠黏膜P-gp功能的影响.方法:通过对大鼠口服甘草煎液、生理盐水一周后,使用体外扩散池(Ussing Chamber)技术评价罗丹明123 (R123)和荧光素钠(CF)经大鼠空肠回肠结肠黏膜的经时吸收方向和分泌方向的透过量和表观渗透系数.R123和CF在接受室的浓度用荧光分光光度计检测.结果:R123的透过性比较中,甘草组与生理盐水组组内比较,差异有统计学意义(F=5.602,P=0.000).CF的透过性比较中,甘草组组内比较,差异有统计学意义(F=20.140,P=0.000).结论:甘草对底物药物R123的影响可能与存在于肠黏膜的P-gp有关,这可能是甘草与药物产生协同作用的机制之一.
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P-gp基因突变与乳腺癌多药耐药分子机制的研究
目的 探讨P-糖蛋白(P-gp)基因突变与乳腺癌多药耐药的关系.方法 本组自2004年3月至2006年4月采用MTT法检测52例乳腺癌标本对四种化疗药物的敏感性,PCR扩增P-gp基因中常发生突变的250个碱基进行单链构象多态性(SSCP)分析,将其核苷酸序列与野生型P-gp基因进行比较.结果 52例乳腺癌组织中8例对四种抗癌药物均敏感,无P-gp基因突变;19例对一种抗癌药物耐受,其中仅一例P-gp基因发生点突变;16例对两种抗癌药物耐受,其中两例发生P-gp基因点突变;7例和2例分别对三种抗癌药物耐受和四种抗癌药物耐受,它们的P-gp基因都发生了点突变.P-gp基因突变位点分别为891gly位(GGC→GAC)asp和1145位his(CAC→TAC)tyr.结论 P-gp基因突变介导乳腺癌多药耐药,P-gp基因产物891位gly(GGC→GAC)asp和1145位his(CAC→TAC)tyr的突变与乳腺癌多药耐药密切相关.
关键词： 乳腺癌 多药耐药 P-糖蛋白(P-gp) 突变 -
肿瘤多药耐药逆转剂Tariquidar的开发
目前化疗失败的主要原因是肿瘤细胞产生了对化疗药物的多药耐药性,因而开发抗肿瘤细胞多药耐药性的药物成为化疗的辅助治疗手段.本文就英国Xenova生物公司研制的此类药物Tariquidar的情况作简单介绍.
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miR-130a对卵巢癌A2780细胞顺铂耐药性的影响及其机制的研究
目的 探讨miR-130a表达的改变对卵巢癌A2780细胞(包括顺铂敏感细胞株A2780s和耐药株A2780/DDP)顺铂耐药性的影响及其机制.方法 将A2780s、A2780/DDP细胞各分为4组,分别予以单纯脂质体处理、转染阴性对照小RNA、miR-130a模拟物(可使miR-130a表达增加)、miR-130a抑制物(降低miR-130a表达)处理,MTS法检测各组细胞增殖情况和对顺铂的耐药性,RT-PCR、Western blot法检测未处理和处理后细胞多耐药基因1 (MDR1)、抑癌基因(PTEN) mRNA和蛋白的表达.结果 A2780/DDP细胞MDR1 mRNA和MDR1的表达产物P-糖蛋白(P-gp)的表达高于A2780s细胞(P＜0.05),而PTEN mRNA及蛋白的表达在两者间差异无统计学意义.上调miR-130a的表达对A2780s和A2780/DDP细胞的增殖无直接影响,但能增强其对顺铂的耐药性,且提高MDR1 mRNA和P-gp表达水平;下调miR-130a的表达,同样不影响细胞的增殖,但增强其对顺铂的敏感性,并可降低MDR1 mRNA和P-gp的表达,提高PTEN蛋白的表达.结论 miR-130a抑制物通过上调PTEN蛋白和下调P-gp的表达来逆转卵巢癌A2780细胞系对顺铂的耐药性.miR-130a有望成为耐药性卵巢癌基因治疗的新靶点.
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低频重复经颅磁刺激对难治性癫(疒间)大鼠模型脑内P-gp表达的影响
摘要:目的:观察低频重复经颅磁刺激(rTMS)对难治性癫(疒间)大鼠模型脑内P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:24只大鼠海仁酸注射以建立难治性癫(疒间)模型,随机分为4个造模组:单纯rTMS组、假性rTMS组、丙戊酸钠组和丙戊酸钠+rTMS联合治疗组,每组6只;另有6只不造模作对照组,只注射等容量生理盐水以作对照.用免疫组织化学方法观察和比较各组动物脑内P-gp的表达.结果:单纯rTMS组大鼠脑内梨状皮层和丘脑区P-gp的表达与假性rTMS组相比明显下降,差异有统计学意义(P=0.003,P=0.005);丙戊酸钠组大鼠脑内P-gp表达在海马CA3区、梨状皮层和丘脑区明显升高,与联合治疗组比较差异有统计学意义(P=0.008,P=0.003,P=0.001).结论:低频rTMS可以降低难治性癫(疒间)大鼠脑内P-gp的高表达.
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孕烷受体X及其下游目的基因编码蛋白在小鼠慢性颞叶癫痫模型的表达
目的:探究孕烷受体X(pregnane X receptor,PXR)及其下游目的基因编码蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P gp)和细胞色素P450 3A4(cytochrome P450 3A4,CYP3A4)在小鼠慢性颞叶癫痫模型中的表达情况及对脑内卡马西平浓度的影响.方法:雄性C57/BL小鼠(n=30)随机分为模型组(n=20)和对照组(n=10).模型组使用海人酸(kainic acid,KA)海马原位注射构建海人酸点燃模型,对照组同一位置注射等体积生理盐水.通过行为学及脑电图监测筛选慢性颞叶癫痫模型.Western blot检测PXR、P-gp及CYP3A4在海马内的表达水平.使用免疫荧光技术对P-gp和CYP3A4进行双标,检测其共表达;卡马西平连续给药7d后,通过高效液相色谱法(HPLC)检测脑组织内卡马西平浓度.结果:模型组小鼠中55％出现反复自发性发作行为及脑电图上典型的痫样放电,确认为慢性颞叶癫痫模型.模型组小鼠海马PXR表达水平较对照组显著增高(P＜0.0001).P-gp(P＜0.001)和CYP3A4 (P＜0.001)的表达水平也较对照组显著增高,而且在模型组小鼠脑组织内存在显著共表达.模型组小鼠脑内卡马西平浓度显著低于对照组(P＜0.05).结论:PXR表达上调后可能通过同时激活下游目的基因编码蛋白P-gp和CYP3A4使二者发挥协同作用从而介导癫痫耐药.
