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中药金莲花的质量标准及其总黄酮成分的提取工艺研究
目的 探讨中药金莲花的质量标准及其总黄酮类成分的佳提取工艺.方法 采用性状描述及有效成分定量定性分析方法对中药金莲花进行质量控制,采用正交试验法,以乙醇浓度、回流时间、回流次数、液料比为因素,以出膏率及总黄酮得率为指标,对金莲花中总黄酮类成分进行提取.结果 金莲花粉末性状特征性明显,采用高效液相包谱法(HPLC)进行定量分析,测定荭草苷的加样回收率为99.45％(n=5,RSD=0.91％).以总黄酮类作为参照物,金莲花的佳提取工艺为50％乙醇溶液,回流时间为2 h,回流次数为3次,液料比为8∶1时所得到的出膏率及总黄酮得率高,其中高出膏率为46.21％,总黄酮高含量15.73％.结论 此提取工艺操作简单,简便易行,稳定性好,准确率高,可以有效控制金莲花药材的质量及大限度提取总黄酮类成分.
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HPLC测定金莲花制剂中荭草苷和牡荆苷的含量
目的:建立金莲花制剂中荭草苷和牡荆苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,使用Hypersil C18 ODS色谱柱,流动相乙腈-1%醋酸溶液(15∶85),流速1.0 mLmin-1,检测波长340 nm.结果:荭草苷在8.42～84.2 μgmL-1呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为98.3%,RSD=0.8%;牡荆苷在8.07～80.7 μgmL-1呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为102.4%,RSD=1.7%.结论:本法灵敏、准确、专属性强,重现性好,可作为金莲花制剂的质量控制方法.
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金莲花傅里叶红外光谱鉴别及药效组分表征分析
金莲花是毛茛科植物金莲花Trollius chinensis Bunge的干燥花[1],金莲花药效组分为黄酮及有机酸类成分,主要有荭草苷、牡荆苷和藜芦酸等[2].为了能够科学地评价金莲花品质,为中药鉴定提供适用的方法和技术,作者采用傅里叶红外光谱(FT-IR)及其二阶导数红外光谱法对20个药材供试品进行了测定,并采用基团组分特征鉴定法对其水提取物和主要组分牡荆苷(vitexin)、荭草苷(orientin)、藜芦酸(veratric acid)的FT-IR表征进行了分析.
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荭草苷对脑缺血再灌大鼠的神经保护作用
目的 研究荭草苷对脑缺血再灌大鼠的神经保护作用及其作用机制.方法 按照体重将大鼠随机分为5组,每组15只:假手术组、模型组、对照组和实验Ⅰ、Ⅱ组.除了假手术组以外,其余各组用线栓法建立大鼠局灶性脑中动脉阻断(MCAO)模型.术后0,12 h,对照组和2个实验组均腹腔注射荭草苷溶液2.9 mg·mL-1,假手术组和模型组给予等剂量0.9％ NaCl.此外,术前0.5,24h,实验Ⅰ组给予西罗莫司2.24 mg·mL-1,实验Ⅱ组给予3-甲基腺嘌呤(3-MA)3.0 mg· mL-1,其余各组给予相同剂量0.9％ NaCl.脑缺血再灌24h,进行神经功能评分,以2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法观察大鼠脑梗死体积,以蛋白免疫印迹观察缺血侧脑内自噬相关蛋白Beclin1与微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况.结果 模型组的脑梗死体积为(36.63 ±2.06)％,高于假手术组(0.67±0.12)％,差异有统计学意义(P＜0.01);对照组和实验Ⅰ、Ⅱ组的脑梗死体积分别为(14.71±1.63)％,(25.22±1.58)％,(6.45±1.07)％,给药组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).自噬相关蛋白Beclinl的相对表达:模型组、假手术组、对照组和实验Ⅰ、Ⅱ组分别为3.16 ±0.17,1.00±0.06,1.67±0.15,2.24±0.13,1.21±0.09;自噬相关蛋白LC3的相对表达,这5组分别为2.98±0.12,1.00±0.05,1.54 ±0.13,2.24±0.12,1.49 ±0.17.模型组与假手术组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P＜0.01);对照组和实验组与模型组比较,给药后差异均有统计学意义(均P＜ 0.05);实验Ⅰ组与对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 荭草苷对脑缺血再灌大鼠的神经保护作用可能是通过抑制自噬作用来实现的.
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高效液相色谱质谱联用法同时测定金莲清热颗粒中荭草苷、知母皂苷等7种成分的含量
目的 建立HPLC-MS测定金莲清热颗粒中荭草苷、牡荆苷、金丝桃苷、新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BⅡ和知母皂苷A Ⅲ7种成分含量的方法.方法 采用Diamonsil C18柱(4.6mm×150 mm,5μm)；柱温30℃；乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相,以800 μL·min-1梯度洗脱；质谱条件:采用电喷雾离子源正负离子模式同时进行检测,多反应监测模式(MRM)用于定量测定.结果 金莲清热颗粒中7种成分峰面积与浓度呈良好的线性关系,r＞0.9992；加样回收率分别为99.34％,99.28％,101.6％,101.3％,100.5％,101.9％和98.86％ (n =3).RSD值分别为1.12％,1.36％,1.57％,1.74％,1.52％,1.43％和0.92％.结论 该方法简便,准确,重现性好,专属性高,可用于金莲清热颗粒的质量控制.
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荭草苷的药理作用机制研究
荭草苷是一种黄酮类单体化合物,主要存在于竹叶、圣罗勒、乌蕨、金莲花等多种药用植物中.本文全面综述了荭草苷的现代药理研究作用,包括保护心血管、抗衰老、抗肿瘤、抗炎、镇痛、抗病毒、抗菌等,为荭草苷的进一步开发应用提供理论依据.
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金莲花多苷片中四种黄酮类化合物的含量测定
目的 测定金莲花多苷片中四种黄酮类成分的含量.方法采用高效液相色谱法,以乙腈-0.2％磷酸溶液为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为室温,在360nm波长处,同时测定金莲花中四种黄酮类成分的含量.结果荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷、荭草苷、牡荆苷及槲皮素进样量分别在0.1976～1.9760μg、0.1010～1.0100μg、0.0604～0.6040μg、0.0608～0.6080μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.17％、98.09％、99.15％、98.54％,RSD分别为1.05％、0.90％、0.54％.0.73％.结论本方法简单准确,重复性良好,适用于金莲花多苷片的含量测定.
关键词： 金莲花多苷片 荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷 荭草苷 牡荆苷 槲皮素 -
乌韭的化学成分研究
目的 研究乌韭Stenoloma chusanum全草的化学成分.方法 用硅胶、聚酰胺、Lichroprep RP-18、Sephadex LH20等对乌韭的乙醇提取物进行分离,根据化学方法和波谱数据(ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC)对分离所得的化合物进行结构鉴定.结果 分离并鉴定了7个化合物,分别为荭草苷(orientin,Ⅰ)、荭草苷-2"-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(orientin-2"-O-β-D-glucopyranoside,Ⅱ)、牡荆素(vitexin,Ⅲ)、芹菜素(apigenin,Ⅳ)、丁香酸(syringic acid,Ⅴ)、香草酸(vanillic acid,Ⅵ)和龙胆酸(gentisic acid,Ⅶ).结论 化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ为首次从该植物中分离得到.
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木豆叶的化学成分研究
目的 研究木豆Cajanus cajan叶的化学成分.方法 通过正相硅胶色谱、中压反相硅胶色谱(ODS)、反相大孔树脂(MCI)、Sephadex LH-20凝胶等多种技术进行分离纯化,并通过核磁共振谱、质谱等波谱数据鉴定其结构.结果 从木豆叶醇提物中分离得到23个化合物,分别鉴定为木豆素(1)、木豆素A(2)、木豆素C(3)、木豆内酯A(4)、球松素(5)、荭草苷(6)、异牡荆苷(7)、牡荆苷(8)、cajanol (9)、cajanin (10)、樱黄素(11)、红车轴草素(12)、(2R,3R)-2,3-二氢-5-7,4 '-二甲氧基黄酮(13)、10′,16′-二羟基棕榈酸乙酯(14)、香草酸(15)、十七烷酸乙酯(16)、2-O-甲基肌醇(17)、2,3,4-三羟基异戊酸(18)、豆甾醇(19)、桦木酸(20)、十七烷酸(21)、β-谷甾醇(22)和β-胡萝卜苷(23).结论 化合物10～19均为首次从该属植物中分离得到.
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金莲花化学成分的HPLC-MS表征分析与鉴定
目的 探讨金莲花Trollius chinensis 成分的化学表征,为完善其质量标准和鉴定特征提供科学依据.方法 采取HPLC-MS分析法.Hypersil ODS2 (250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.6％磷酸水,梯度洗脱,体积流量为1.2 mL/min,检测波长为345 nm,离子源为ESI(-).结果 中药金莲花化学组分的保留时间、分子离子峰(m/z)和碎片信息表征明显,重要化学成分为荭草苷(m/z446.7[M-H]-)、牡荆苷(m/z 430.8[M-H]-)和荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷(m/z608.9[M-H]-)等.结论 金莲花化学成分的HPLC-MS表征可以作为其鉴定特征.
关键词： 金莲花 HPLC-MS 荭草苷 牡荆苷 荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷 -
短瓣金莲花化学成分的UPLC-Q-TOF-MS分析
目的 应用超高效液相色谱仪联用四级杆串联飞行时间质谱仪(UPLC-Q-TOF-MS)在正负离子模式下分离分析短瓣金莲花药材甲醇提取物成分.方法 采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),以0.1％甲酸水(A)-0.1％甲酸甲醇(B)溶液为流动相,梯度洗脱0～5 min,95％～60％A, 5～13 min,60％～45％A;13～20 min,45％～0％A;20.1～25min,95％A;体积流量0.3 mL/min,进样量2μL.通过正、负离子质谱信息及元素组成,与相关文献数据对照,分析化合物信息.结果 结合UPLC-Q-TOF-MS提供的化合物准确相对分子质量,鉴定短瓣金莲花提取物中14个化合物,分别为藜芦酸、香草酸、荭草苷、荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷、荭草苷-2"-O-β-D-吡喃木糖苷、槲皮素、金丝桃苷、牡荆苷、芹菜素、木犀草素、刺槐素-7-O-新橙皮糖苷、刺槐素、柳穿鱼黄素、鼠尾草素.结论 该法为短瓣金莲花饮片的质量控制、后期临床应用提供技术支持,并为阐明其药效物质基础提供参考.
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金莲花中荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖致衰老小鼠脑损伤的保护作用
目的 研究金莲花中黄酮碳苷单体荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖致衰老小鼠脑损伤的保护作用.方法 小鼠ip给予D-半乳糖8周制备亚急性衰老模型,造模成功后将小鼠分成模型组,维生素E(20 mg/kg)阳性对照组,荭草苷和牡荆苷高、中、低剂量(40、20、10 mg/kg)组,各组每日上午ig给予相应药物1次.连续给药8周后小鼠断头取脑,测脑质量,制备脑组织匀浆上清液,检测脑组织中抗氧化酶系、丙二醛( MDA)、脂褐素,并观察脑组织形态学变化.结果 荭草苷和牡荆苷可改善衰老小鼠一般状态,延缓脑组织萎缩,提高脑组织中抗氧化酶的活性和降低MDA、脂褐素的量,改善海马区神经细胞结构的功能.荭草苷中、低剂量的抗氧化活性强于同剂量的牡荆苷,差异显著(P＜0.05、0.01)；而荭草苷和牡荆苷高剂量的抗氧化活性与维生素E的相当.结论 荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖致衰老小鼠脑损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与提高脑组织内抗氧化酶系活性,降低MDA、脂褐素的量,改善海马区神经细胞结构功能相关.
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基于线粒体质量控制的荭草苷抗心肌缺血/再灌注损伤的机制研究
目的 探讨荭草苷对心肌缺血/再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞内线粒体质量的调控作用.方法 75只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、不同剂量(1.0、2.0、4.0 mg/kg)荭草苷预处理组.除假手术组外,其余各组大鼠均通过结扎冠状动脉左前降支致缺血30 min,再灌注120 min,制备MIRI模型.酶标仪检测线粒体膜电位(MMP)和线粒体通透性转换孔(mPTP)开放程度,分光光度法测定线粒体呼吸链酶复合物Ⅰ～Ⅳ活性,TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平,Western blotting法检测心肌细胞内凋亡与线粒体自噬相关蛋白的表达水平,免疫共沉淀法检测心肌细胞内Parkin与p62结合程度.结果 荭草苷可显著恢复MIRI诱导的MMP、mPTP开放阈值和粒体呼吸链酶复合物Ⅰ～Ⅳ活性降低,减少心肌细胞凋亡;并能抑制心肌细胞内凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达水平,减弱Parkin与p62的结合程度.结论 荭草苷对MIRI大鼠心肌细胞内线粒体具有明显保护作用,其机制可能通过Parkin依赖性和Parkin非依赖性信号通路抑制心肌细胞内线粒体自噬过度激活有关.
关键词： 荭草苷 心肌缺血/再灌注损伤 线粒体自噬 凋亡 线粒体质量控制 -
金莲花茎叶的HPLC指纹图谱研究
目的 建立金莲花茎叶HPLC指纹图谱分析方法.方法 以荭草苷为对照品,采用Welch Materials Ultimate TMXB-C18( 250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A) -0.35％磷酸(B)梯度洗脱,0～25 min,15％A; 25～60 min,15％～25％A; 60～90 min,25％～30％ A；90～110 min,30％～100％ A; 110～120 min,100％A;检测波长340 nm,体积流量为1.0 mL/min,柱温30℃；采用SPSS 19.0进行系统聚类分析.结果 建立金莲花茎叶的HPLC指纹图谱,标定22个共有峰,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求；相似度和聚类分析结果表明,药材质量主要与其产地有关,同时与采集时间也有一定关系.结论 此研究方法稳定、可靠、重现性好,可用来控制金莲花茎叶的质量.
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不同采收期金莲花茎叶中总黄酮和荭草苷的动态变化研究
目的 研究不同采收期金莲花茎叶中总黄酮和荭草苷量的变化规律,为合理开发利用金莲花药用资源提供实验依据.方法 采用UV法和HPLC法,分别以芦丁和荭草苷为对照品,测定不同采收期金莲花茎叶中总黄酮和荭草苷量,并绘制动态曲线.结果 从5月下旬至6月下旬,总黄酮量呈现不断升高的趋势,从4.597％上升到5.125％;从7月上旬至8月中旬,总黄酮量持续下降,从4.264％下降至1.181％.而荭草苷量从5月下旬至7月中旬一直呈上升趋势(0.095～0.332 mg/g);从7月下旬至8月中旬,呈下降趋势(0.306～0.092 mg/g).结论 结合花的产量,并综合总黄酮和荭草苷量的动态变化,采收期以7月上旬至中旬为佳.本实验方法稳定、可行,结果可靠,为合理采收金莲花茎叶提供了理论依据.
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制备色谱分离竹叶黄酮中异荭草苷和荭草苷
目的 建立制备型高效液相色谱(PHPLC)分离竹叶黄酮中异荭草苷和荭草苷的方法.方法 竹叶黄酮经AB-8树脂吸附洗脱纯化后,采用PHPLC分离异荭草苷和荭草苷,制备色谱条件:流动相为甲醇-0.3％乙酸水溶液(32:68),体积流量为5 mL/min,柱温为20℃,检测波长330 nm,进样体积为400 μL,上样质量浓度为15.3 mg/mL.结果 HPLC检测表明,异荭草苷的质量分数＞99％,荭草苷的质量分数＞93％,加样回收率分别为(92.7±2.92)％和(85.1±3.45)％.单体结构通过核磁共振碳谱和氢谱鉴定,确定为异荭草苷和荭草苷.结论 该法分离效果较好,低毒,回收率高,可用于竹叶黄酮中2种黄酮苷的分离制备.
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木豆叶中黄酮微波提取工艺研究
目的 选取适合提取木豆叶中黄酮的方法,并优化提取工艺参数.方法 以木豆叶中荭草苷、木犀草素和总黄酮的提取率及提取物抗氧化活性为指标,将微波辅助提取与热回流、超声波及浸泡提取方法相比较,并采用中心组合设计对影响荭草苷和木犀草素提取效果的微波辅助提取工艺参数进行了优化.结果 通过比较确定微波辅助提取法较为适合木豆叶中黄酮的提取；优化得到荭草苷和木犀草素佳微波提取工艺参数为:木豆叶粒径为50目,乙醇体积分数为80％,料液比1∶20,提取温度60℃,提取次数4次,提取时间10 min,微波功率500 W;荭草苷和木犀草素的提取率分别为(4.42±0.01)、(0.10±0.01)mg/g.结论 采用微波辅助提取木豆叶中的黄酮具有提取时间短、提取率高、产物抗氧化效果好的特点,优化的工艺参数具有可行性和实际应用价值.
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逆向连续循环低温提取金莲花口服液工艺研究
目的 探讨金莲花口服液提取工艺.方法 采用HPLC法测定金莲花口服液提取液中的荭草苷和牡荆苷,以二者提取质量浓度为考察指标,L18(37)正交试验法逆向连续循环低温提取金莲花,确定佳提取工艺,并与现行金莲花口服液制备标准中的提取工艺比较.结果 逆向连续循环低温提取佳提取工艺条件:提取温度90℃,提取时间2h,药材粒径10目,加水倍数20倍.荭草苷的线性范围18.46～295.37 μg/mL (r=0.999 9),牡荆苷的线性范围5.84～93.44 μg/mL (r=0.999 9),荭草苷平均回收率为96.07％,RSD为0.74％(n=6),牡荆苷平均回收率97.73％,RSD为1.42％(n=6).结论 逆向连续循环低温提取方法稳定可行,提取率高;测定方法准确、灵敏、简便、稳定性和重复性良好,该提取工艺和测定方法可作为金莲花口服液生产工艺及质量控制的参考.
关键词： 金莲花口服液 逆向连续循环低温提取 正交试验 荭草苷 牡荆苷 -
金莲花露中总黄酮和荭草苷的测定
金莲花露是由金莲花提取液、蔗糖、山梨酸钾、稳定剂、纯净水制成的功能性饮品,具有清咽润喉、清热解毒的功效.金莲花主要含有黄酮类化合物,其中荭草苷和牡荆苷量较高.
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正交设计优选金莲花的提取工艺
金莲花的有效成分为黄酮类化合物,具有抗菌和抗病毒的作用,其中含有较多的荭草苷和牡荆苷.民间有用金莲花沏水饮用的习俗,有清咽润喉、清热解毒的功效.开发药食兼用的金莲花饮品,可以为市场提供卫生、饮用方便和具有保健功能的产品.金莲花露的生产关键是金莲花的有效成分黄酮类化合物的提取.目前常用的提取溶剂有甲醇、乙醇或水[1,2],其具有抑菌作用的成分总黄酮类化合物均以金莲花的水提取液优于醇提取液[3,4].金莲花经过长时间的加热提取和浓缩,总黄酮明显降低.为此本实验以水为提取溶剂、冰冻法对提取液进行浓缩,采用正交试验设计优选佳提取条件,确定金莲花水提取液的生产工艺.
